左归丸对MSG-大鼠胸腺及淋巴细胞增殖反应的影响

新生期大鼠给予左旋谷氨酸单钠（ＭＳＧ）损害下丘脑弓状核（ＡＲＣ），成年后大鼠除表现生长发育迟缓外，还可见到胸腺体积缩小、重量减轻，脾脏Ｔ淋巴细胞对Ｃｏｎ－Ａ诱导的增殖反应减弱。滋补肾阴代表名方左归丸能明显改善ＭＳＧ－大鼠的胸腺与淋巴细胞增殖反应的异常。提示：１．下丘脑弓状核参与细胞免疫功能的调节；２．左归丸能明显改善ＭＳＧ－大鼠的胸腺与淋巴细胞增殖反应的异常     

补肾中药对老年大鼠胸腺作用的光镜和电镜观察

应用光镜和电镜技术观察青年组，老年组，中药组，维生素Ｅ组大鼠胸腺的组织形态和超微结构的变化。结果显示：老年组胸腺中脂肪比青年组明显增加，胸腺细胞与上皮性网状细胞皆明显减少，整个组织结构疏松，超微结构中可看到线粒体肿胀，嵴缺失，内质网腔扩张，脱颗粒，脂褐素颗粒和溶酶体增加等变化；而中药组的胸腺组织形态和超微结构均接近青年组正常形态；维生素Ｅ组与中药组相似。从而提示，补肾中药能延缓胸腺的衰老变化。     

补肾益气方对皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡相关基因表达的影响

目的:研究补肾益气方对皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2、Bax、IL-2表达的影响。方法:1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞制作病理细胞模型,分组:正常组;模型组;补肾益气组。Annexin V-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡;Real-time PCR和Western blotting法检测Bcl-2、Bax、IL-2的表达。结果:皮质酮诱导胸腺细胞凋亡率显著升高(P0.01);bax表达显著升高,bcl-2/bax比值、IL-2表达降低(P0.05)。与模型组比较,补肾益气组凋亡率降低(P0.05);Bax mRNA表达降低,bcl-2/bax比值、IL-2表达升高(P0.05)。结论:补肾益气方含药鼠血清能通过改善模型细胞bcl-2/bax的异常变化,抑制胸腺细胞过度凋亡,提高胸腺依赖性免疫功能。     

左归丸对自然衰老大鼠海马乙酰胆碱含量及学习记忆功能的影响

目的观察自然衰老大鼠海马组织乙酰胆碱(ACh)含有量、学习记忆功能和海马组织形态学的变化及左归丸(熟地、山药、枸杞子等)的作用,探索衰老的机理及左归丸延缓衰老的作用机制。方法 SD大鼠随机分为老年组和左归丸组,另设青年组(5月龄),共3组。老年组大鼠常规喂养至24月龄;左归丸组大鼠自20月龄始,喂以含有左归丸生药0.675 g/(100 g·d)的饲料,连续4个月。采用高效液相电化学法检测各组大鼠海马组织ACh含有量,水迷宫测试各组大鼠学习记忆功能,苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织形态。结果与青年组比较,老年组大鼠海马组织ACh含有量显著下降,水迷宫测试潜伏期延长(P0.05);与老年组比较,左归丸组大鼠海马组织ACh含有量显著升高,水迷宫测试潜伏期显著缩短(P0.05)。结论左归丸可通过提高海马组织ACh含有量水平、增强学习记忆功能、改善海马组织形态的衰老性变化来延缓衰老。     

左归丸对肾虚大鼠MSCs增殖的影响

目的探讨补肾益精代表方左归丸对肾虚大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。方法 SD雌性大鼠双侧卵巢切除增龄3月法复制肾虚模型,用左归丸给予部分模型大鼠灌胃。分离、培养正常组、模型组、左归丸组大鼠MSCs。观察各组大鼠MSCs细胞形态,生长周期,P3、P5代细胞生长曲线,β-半乳糖苷酶衰老细胞染色结果。结果模型组大鼠P3、P5代MSCsOD值明显低于正常组、左归丸组(P<0.05)。各组大鼠MSCs细胞周期无明显差异(P>0.05)。模型组衰老细胞阳性率最高,明显高于正常组(P<0.01),但与左归丸组间差异不明显(P>0.05)。结论去卵巢大鼠MSCs增殖能力减弱,左归丸一定程度上改善肾虚大鼠MSCs增殖能力。     

左归丸对衰老大鼠骨髓MSC形态学影响的研究

目的研究补肾益精代表方左归丸对衰老大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)形态学方面的影响。方法通过腹腔注射D-半乳糖造模,制备衰老大鼠模型,分离培养骨髓MSC。光镜观察各组大鼠MSC一般形态学特征,电镜观察其超微结构特点。结果光镜观察模型组P3代大鼠骨髓MSCs呈现衰老细胞形态学特征,左归丸组大鼠BMSCs的细胞形态与正常组相近。透射电镜观察显示,模型组大鼠P3代骨髓MSCs细胞内结构改变呈现衰老特征,左归丸中剂量组大鼠的骨髓MSCs电镜下的超微结构与正常组最相近。结论衰老大鼠骨髓MSCs的细胞形态各方面表现有明显改变,左归丸水提液在一定浓度范围内能延缓大鼠骨髓MSCs的衰老。     

左归丸及右归丸对卵巢早衰小鼠卵巢衰老的预防作用

目的研究左归丸及右归丸对卵巢早衰小鼠卵巢功能及卵巢沉默调节蛋白(SIRTs)表达的影响。方法 48只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组(给予生理盐水)、左归丸及右归丸4组,除正常组外,其余3组动物腹腔注射环磷酰胺建立卵巢早衰模型。给药8周后,采用卵泡计数和血清黄体生成素(LH)、基础卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒管激素(AMH)、基础抑制素B(INHB)评价卵巢功能。RT-PCR法和Western blot法测定卵巢组织SIRTs mRNA和蛋白的表达。结果模型组小鼠卵巢卵泡计数、SIRT1、SIRT3及血清AMH、INHB显著低于正常组;血清LH、FSH显著高于正常组。左归丸和右归丸组卵泡计数、SIRT1及血清AMH、INHB显著高于模型组;血清LH、FSH显著低于模型组。右归丸组原始卵泡数显著高于左归丸组。结论左归丸和右归丸具有显著的抗卵巢衰老作用,其作用机制与对卵巢SIRT1表达的上调作用有关。     

针刺足三里、关元穴对脓毒症大鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的 观察电针足三里、关元穴对脓毒症大鼠胸腺细胞凋亡的影响.方法 将大鼠随机分成正常对照组、模型组、针刺组.采用盲肠结扎穿孔(CLP)致腹腔感染脓毒症模型,应用流式细胞仪以Annexin-PI双染色法及光镜、透射电镜观察CLP致腹腔感染后36h胸腺淋巴细胞的凋亡情况,应用放射免疫法测定脑垂体和外周血血管活性肠肽(VIP)含量的变化.结果 CLP致腹腔感染可导致胸腺细胞凋亡增多,电镜和光镜显示其典型的形态学特征,模型组、针刺组的胸腺细胞凋亡率高于正常对照组;而针刺组的胸腺细胞凋亡率低于模型组.CLP致腹腔感染后脑垂体和外周血中VIP含量下降,模型组、针刺组脑垂体VIP含量低于正常对照组;而针刺组脑垂体VIF-含量高于模型组.模型组、针刺组外周血中VIP含量低于正常对照组;而针刺组外周血中VIP含量高于模型组.结论 电针足三里、关元穴可以减轻CLP致腹腔感染脓毒症大鼠胸腺细胞凋亡,其机理可能与VIP的合成和释放增多有关,并通过这些免疫递质对神经-内分泌-免疫调节网络发挥作用.     

姬松茸多糖对大鼠胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的影响

目的:观察姬松茸多糖对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱发大鼠胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的影响.方法:Wistar大鼠随机分为4组:正常组,模型组,姬松茸多糖低、高剂量组,每组10只.正常组和模型组灌胃(ig)生理盐水,姬 松茸多糖低、高剂量组ig姬松茸多糖溶液(60,120 mg·kg-1),1次/d,连续7d.模型组和姬松茸多糖低、高剂量于第7日腹腔注射DEX(0.02 g·kg-1).3h后处死各组动物,迅速无菌取胸腺,采用显微观察、流式细胞技术观察胸腺细胞形态学改变,胸腺细胞凋亡、脱氧核糖核酸(DNA)断裂百分率及线粒体膜电位变化,胸腺组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化.结果:与模型组比较,姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞线粒体嵴肿胀明显减轻;姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞凋亡率[低、高剂量(5.96±1.14)％,(5.07±1.02)％],DNA断裂率[低、高剂量(3.67±0.49)％,(3.24±0.45)％]及胸腺组织MDA含量[低、高剂量(1.87±0.25),(1.72±0.23)μg·mg-1]均明显低于模型组[(7.14±1.62)％,(4.25±0.86)％,(2.16±0.38) μg·mg-1];姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞线粒体膜电位(荧光指数:低剂量38.57±6.29,高剂量41.36±7.18)及胸腺组织SOD活性量[低、高剂量(25.78±3.94),(27.36 ±4.21)U.mg-1]明显高于模型组(32.76 ±5.48)荧光指数,(21.45±3.52) i g· mg-1.结论:姬松茸多糖可阻断胸腺细胞DNA断裂和线粒体膜电位的下降,有效抑制DEX诱导的胸腺细胞凋亡,其作用机制与姬松茸多糖提高胸腺组织抗氧化功能有关.     

髓清丸对内皮细胞增殖影响的血清药理学研究

目的研究中药复方髓清丸是否对内皮细胞的增殖有影响。方法采用血清药理学方法,以含髓清丸药物兔血清,体外培养观察内皮细胞系 ECV304的增殖、细胞周期及 DNA 含量等细胞学指标变化。结果与正常胎牛血清对照组和兔血清对照组比较,含髓清丸低、高剂量组的活细胞百分率、活细胞浓度均降低(P<0.05,P<0.01);含髓清丸血清低、高剂量组的培养液孵育的内皮细胞 OD 值呈不同程度的降低(P<0.01),高剂量组细胞毒活性>20%;髓清丸高、低剂量组内皮细胞 G_1期百分率均明显高于胎牛血清和正常兔血清组(P<0.01),而 S 期和 G_2期百分率也均较胎牛血清组和正常兔血清组有减低趋势。结论髓清丸体外有一定的抑制内皮细胞增殖的活性。     

麻子仁丸对便秘型小鼠模型通便功能、胃蛋白酶活性和对淋巴细胞增殖的实验研究

目的:观察麻子仁丸对便秘型小鼠模型通便功能、胃蛋白酶活性和对淋巴细胞增值的实验研究。方法:72只小鼠随机分为空白组、模型组、观察组,每组24只,其中模型组和观察组建立便秘模型。空白对照组和模型组不采取任何干预,观察组10丸/d麻子仁丸溶水灌胃。1次/d,疗程7 d。通过墨汁推进法计算肠道推进率观察小鼠通便功能;采用苏木素-伊红染色(HE染色)在显微镜下观察肠道病理学情况;检测胃蛋白酶活性,并通过MTT和流式细胞仪检测淋巴细胞增殖表达情况。结果:1)观察组和模型组的粪便粒数、粪便重量、粒粪便重量和肠道推进率均较空表组减少(P0.05);与模型组比较,观察组中的通便功能明显改善(P0.05)。2)与空白组小鼠比较,模型组小鼠结肠黏膜炎性反应细胞浸涧,肌层变薄,经过药物治疗后,炎性反应有所改善,肌层有所增厚。3)与空白组比较,模型组和观察组2 h胃液量和胃蛋白酶活性明显下降(P0.05);与模型组比较,观察组中的2 h胃液量和胃蛋白酶活性明显提高(P0.05)。4)与空白组比较,模型组和观察组淋巴细胞增殖能力(P0.05),包括T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+百分数和CD4~+/CD8~+比例均下降(P0.05);与模型组比较,观察组中淋巴细胞增殖能力(P0.05),包括T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+百分数和CD4~+/CD8~+比例均身高(P0.05)。结论:麻子仁丸能有效改善便秘型小鼠通便功能,提高小鼠胃液蛋白酶活性,其疗效机制可能与提高了淋巴细胞增殖能力,尤其是T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+百分数和CD4~+/CD8~+比例有关。     

青娥丸提取物对成骨样细胞UMR106增殖分化作用的研究

目的 :研究青娥丸提取物对成骨样细胞UMR10 6增殖分化的作用 ,筛选青娥丸防治骨质疏松的有效部位。方法 :利用MTT法和对硝基磷酸盐法 ,考察青娥丸不同提取液对UMR10 6的增殖和分化作用。结果 :青娥丸乙醇提取物在 4.8× 10 -4mg/ml和 4.8× 10 -3 mg/ml浓度时 ,有最强的促细胞增殖和分化的活性 ,萃取后的各个部分均有显著地促细胞增殖作用 ,而只有乙酸乙酯层具有显著的促细胞分化作用。结论 :青娥丸乙醇提取物具有显著促细胞增殖和分化的活性 ,乙酸乙酯层是青娥丸促细胞增殖和分化的主要活性部位。     

左归丸现代临床应用和实验研究进展

综合近10年公开发表的中西医药学术期刊，发现左归丸至少可治疗西医50种以上的疾病，尽管其适用于临床的病证复杂多变，但总以神经一内分泌一免疫网络功能的衰退和失调密切相关，辨证要点为“形衰精亏”。实验研究初步提示，左归丸对神经一内分泌一免疫网络具有多组分、多途径、多环节和多靶点的整合调节作用。     

左归丸治疗绝经期功能性子宫出血92例

目的：观察左归丸治疗围绝经期功能性子宫出血的临床疗效。方法：将184例患者随机分为观察组、对照组各92例。对照组给予单纯西医治疗,观察组在对照组药物治疗的基础上加用左归丸,1剂/d,水煎分服,连服2周为1个疗程,连用3个疗程。结果：痊愈率观察组为68.48%,对照组为50.00%,2组比较差异显著（P＜0.05）;总有效率治疗组为97.83%,对照组为81.52%,2组比较差异显著（P＜0.05）。控制止血时间、完全止血时间观察组均低于对照组,2组比较差异显著（P＜0.05）。结果：左归丸治疗围绝经期功能性子宫出血临床疗效显著,止血时间短。     

左归丸对小鼠自身免疫性卵巢损伤的保护作用

目的探讨补肾复方左归丸对卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）的影响。方法以SD雌性大鼠卵巢组织制备卵巢抗原,皮下多点注射免疫BALB／C雌性小鼠,建立卵巢早衰模型。于造模过程中不同时间点用左归丸处理小鼠,以泼尼松为阳性对照,放射免疫法检测外周血卵泡刺激素（FSH）、雌二醇水平（E2）,酶联免疫法检测外周血抗卵巢抗体（AoAb）,原位杂交法检测卵巢组织生长分化因子-9（GDF-9）mRNA的表达。结果POF小鼠卵巢间质可见淋巴细胞浸润,外周血FSH升高,E2下降,AoAb阳性,卵母细胞GDF-9 mRNA阳性细胞数减少,生长卵泡及成熟卵泡数减少。左归丸能减缓POF小鼠外周血FSH升高,提高体内E2水平,抑制AoAb产生,提高卵母细胞GDF-9 mRNA阳性细胞数,使生长卵泡及成熟卵泡数增加,早期用药比后期用药作用显著。结论左归丸能改善卵巢免疫性炎症的损伤,对免疫性卵巢早衰具有治疗作用。     

左归丸对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察不同浓度左归丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。方法:应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,并传代扩增,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化检测细胞表面抗原鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度左归丸干预组,采用MTT比色法观察不同浓度左归丸水提液干预后BMSCs增殖的情况。结果:采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态以长梭形为主,呈集落样生长。体外培养的BMSCs免疫组织化学鉴定显示CD44,CD29呈阳性表达,CD34呈阴性表达。MTT检测结果显示,与空白对照组相比,相当于生药质量浓度2.5～4 g·L-1的左归丸水提液干预24 h后,干预组吸光度均明显增高(P<0.01),而与其他浓度相比1 g·L-1时左归丸水提液促进BMSCs增殖的作用最强。结论:所培养的大鼠骨髓基质细胞在细胞表型表达和细胞形态上具备BMSC特征。左归丸水提液在一定浓度范围内可以提高BMSCs的体外增殖能力。     

高效液相色谱法测定左归丸中马钱苷的含量

目的:建立测定左归丸中马钱苷含量的反相高效液相色谱方法。方法:采用Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);以四氢呋喃-甲醇-乙腈-水(1∶4∶8∶87)为流动相;流速为1.0mL.min-1;柱温为40℃;检测波长236nm。结果:马钱苷进样浓度在0.0079～0.2530mg.mL-1(r=0.9993)范围内呈良好的线性关系,平均回收率(n=6)为101.6%;RSD为2.1%。结论:该方法简便、重现性好,结果准确可靠,可以用于左归丸中马钱苷的含量测定,为左归丸的质量控制提供一定的理论依据。