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1.
目的:探索野生全蝎粉水溶性蛋白质SDS-PAGE电泳的最佳分离条件,测定各蛋白质的大体分子量。方法:采用55%乙醇提取,75%以上乙醇沉淀的方法获得全蝎粉水溶性蛋白质,考马斯亮蓝法测定其蛋白质含量,SDS-PAGE法和Quantity one软件测定全蝎粉水溶性蛋白质的相对分子量。结果:全蝎粉水溶性蛋白质的含量为4.649 mg/mL;得到较好全蝎粉可溶性蛋白质的7条电泳谱带,相对分子质量分别为70.447,64.730,54.139,40.832,29.939,26.494,19.172 kDa。结论:这7条全蝎粉水溶性蛋白质的特征谱带可用于全蝎粉水溶性蛋白质的种类鉴别。  相似文献   

2.
目的:探索四种产地野生全蝎粉中可溶性蛋白质SDS-PAGE法所获得电泳图谱条带的一致性,并确定其大致分子量。方法:采用55%乙醇提取、75%以上乙醇沉淀的方法获得全蝎粉可溶性蛋白质,考马斯亮蓝法测定其蛋白质含量,SDS-PAGE法和Quantity one软件测定全蝎粉可溶性蛋白质的相对分子量。结果:山东平邑、山东龙口、山东长清、山东沂源四种产地全蝎粉的水溶性蛋白饱和溶液中的蛋白含量分别为4.006,2.894,3.795,4.649 mg/mL;四种产地全蝎粉可溶性蛋白质通过SDS-PAGE法均获得了7条较清晰的电泳谱带,对应的相对分子量分别为42.563,33.938,27.060,22.354,19.402,3.422,1.929 KDa。结论:这7条全蝎可溶性蛋白质的特征谱带可用于中药全蝎粉的真伪鉴别。  相似文献   

3.
目的:建立适用于刺五加和短梗五加种子的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴别方法,为二者种子的鉴别及质量评价提供参考。方法:采用15%分离胶的SDS-PAGE电泳对15个产地的刺五加种子和2个产地的短梗五加种子中可溶性蛋白进行电泳分析,利用Band Scan 5.0软件对蛋白谱带蛋数目、谱带强度和相对分子质量等方面的差异进行比较。结果:17个种子样品共分离出31条清晰的蛋白谱带,其中2种种子的10条共有特征谱带和各自的1条标准特征谱带可作为刺五加和短梗五加种子的标准蛋白图谱。不同产地的刺五加种子蛋白电泳图谱具有一定的种内差异性。结论:该电泳方法和标准蛋白图谱可作为刺五加及短梗五加种子的鉴别依据。  相似文献   

4.
目的:探索全蝎可溶性蛋白质电泳法分离的最佳体系。方法:用TRICINE-SDS-PAGE法对全蝎蛋白提取液所含混合蛋白进行分离,用Quantity One软件确定各蛋白谱带分子量。结果:用该法可获得11条较高分辨率的蛋白谱带,其对应分子量分别为42.000,33.515,27.509,25.524,21.615,17.640,15.839,13.994,11.318,10.000,8.357 kDa。结论:TRICINE-SDS-PAGE电泳法可用于全蝎可溶性蛋白的分离。  相似文献   

5.
全蝎蛋白药效组分对Bel7402肿瘤细胞凋亡的影响   总被引:3,自引:2,他引:1  
目的:研究全蝎(Scorpio)蛋白药效组分对Bel7402肿瘤细胞凋亡的影响,为建立全蝎与临床疗效对应的生物效应质量评价方法奠定基础。方法:蛋白质提取和冷冻干燥的方法获得全蝎蛋白药效组分,采用改良MTT法、流式细胞法研究全蝎蛋白药效组分对Bel7402细胞毒和细胞周期抑制的作用。结果:抑制癌细胞生长的浓度大于或等于37 g.L-1,剂量与效应呈正比,相关系数为0.912 5,IC50为241 g.L-1,显效时间0~48 h;全蝎蛋白药效组分浓度大于或等于9.25 g.L-1时,能显著提高Bel7402细胞的凋亡率。结论:全蝎蛋白药效组分具有促进Bel7402细胞凋亡、抑制增殖的作用,其生物效应指标为:9.25~175 g.L-1,可作为全蝎生物效应质量评价的指标之一。  相似文献   

6.
目的:研究党参种子真实性鉴别方法,为党参种子品种鉴定以及党参种子质量标准的制定提供依据。方法:对不同来源党参分别进行了种子蛋白的SDS-PAGE电泳,子叶蛋白的SDS-PAGE电泳,子叶蛋白的非变性凝胶电泳。结果:三种电泳结果显示,种子蛋白的SDS-PAGE电泳,谱带清晰,分离到的差异谱带多;子叶蛋白的SDS-PAGE电泳,谱带模糊;子叶蛋白的PAGE电泳,谱带虽然清晰但是没有分离到有差异的谱带。结论:党参种子真实性鉴定应选择种子蛋白的SDS-PAGE电泳,通过电泳分析得到陕西凤县,甘肃文县,四川野生的亲缘关系比较近,比其他地方的党参种子多出一条Rf值大约为0.060的谱带,根据Marker蛋白谱带可以初步推断这个差异蛋白的分子量为170 KDa。  相似文献   

7.
目的 :初步建立蝎毒素ITX(Immunotoxin)蛋白组分的电泳分离方法和蛋白质组表达谱。 方法 :阴极电泳(T=18%,C=6%)对蝎毒进行分离,Bio-Rad Quantity-one电泳软件分析条带;双向电泳技术:第一向为固相pH梯度等电聚焦,第二向电泳为垂直平板SDS-PAGE(T=18%)。在以上过程中分别对上样方式、等电聚焦程序等条件进行优化控制,利用PDQ7.1软件分析获得二维凝胶图像。 结果 :阴极电泳图谱显示蝎毒素ITX由7个蛋白组分组成;二维凝胶图谱显示蝎毒素ITX包含相对分子质量相同(约为5.8×103)而等电点不同9种蛋白组分,其中酸性蛋白质4种,碱性蛋白质5种。 结论 :通过各种条件的优化,初步建立了ITX的阴极电泳和双向电泳方法,获得了分辨率和重复性较好的阴极电泳图谱和二维凝胶图谱。  相似文献   

8.
道地产区不同产地厚朴种子的电泳指纹图谱研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:研究道地产区湖北恩施5个不同产地厚朴种子的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳图谱,以探索厚朴种子不同产地的鉴别方法,从而为厚朴的良种选育及种子质量评价提供依据.方法:应用SDS-PAGE方法比较不同产地厚朴种子的蛋白电泳图谱在谱带数目、谱带强度和相对分子质量等方面的差异.结果:5个产地的厚朴种子的电泳图谱存在明显产地差异.结论:该电泳方法可为厚朴种子的产地鉴别提供依据.  相似文献   

9.
人参水溶性蛋白的提取及SOD活性测定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的提取人参水溶性蛋白,测定其蛋白含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。方法采用缓冲溶液抽提及硫酸铵分级沉淀法制备人参水溶性总蛋白,采用Bradford蛋白含量试剂盒测定蛋白质含量、SDS-PAGE法进行蛋白鉴定、邻苯三酚自氧化法进行SOD活力测定,并采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行活力显示。结果通过Bradford蛋白含量试剂盒测定蛋白质含量达80%,蛋白收率达1%,SDS-PAGE电泳检测显示人参中主要含有8种蛋白亚基。邻苯三酚自氧化法测得SOD活力达16.048 U/mg蛋白,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条活性谱带。结论人参中具有较丰富的水溶性蛋白,且这些水溶性蛋白具有较高的SOD活性。  相似文献   

10.
目的 研究全蝎(Scorpio)蛋白药效组分对L1210肿瘤细胞凋亡的影响,为建立全蝎与临床疗效对应的生物效应质量评价方法奠定基础.方法 采用改良MTT法、流式细胞法研究全蝎蛋白药效组分对L1210细胞毒和细胞周期抑制的作用.结果 抑制癌细胞生长的浓度≥37 mg/ml,剂量与浓度呈正比,相关系数为0.9357,IC50为175 mg/ml,显效时间0~48 h;全蝎蛋白药效组分浓度≥9.25 mg/ml时,可显著提高L1210细胞的凋亡率.结论 全蝎蛋白药效组分具有促进L1210细胞凋亡、抑制增殖的作用,其抗肿瘤生物效应指标为:9.25~175 mg/ml,可作为全蝎生物效应质量评价的指标之一.  相似文献   

11.
目的:优选杏仁组织中蛋白质的实验室提取方法.方法:采用盐析法、分离蛋白法、反胶束法、碱溶酸沉法、盐碱法提取杏仁组织蛋白,通过凯氏定氮法测定杏仁组织蛋白含量,对比分析蛋白含量和蛋白提取率,应用一维SDS-PAGE电泳对提取蛋白的种类进行测定.结果:盐析法、分离蛋白法、反胶束法、碱溶酸沉法、盐碱法提取的组织蛋白提取率分别为39.41%,25.63%,0.326%,40.02%,41.85%,蛋白质量分数分别为75.667%,44.986%,5.372%,60.056%,51.379%,蛋白粉质量分别为8.6,9.1,0.823,9.8,6.259 g,盐析法提取杏仁组织中蛋白质含量和提取率最高.SDS-PAGE电泳图谱显示碱溶酸沉法、分离蛋白法、反胶束法的电泳条带均为4条,盐析法有5条,盐碱法只有3条,说明盐析法提取的蛋白质种类最多.结论:在实验室条件下采用盐析法从杏仁组织中提取蛋白质效果最佳.  相似文献   

12.
隐丹参酮抑菌作用机制研究   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
目的研究隐丹参酮对金黄色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌(ESBLs-SA)3种金黄色葡萄球菌的抑菌活性及抑菌机制。方法采用纸片扩散法测定隐丹参酮的抑菌圈和最低抑菌浓度(MIC),液体培养法测定其半数抑菌浓度(IC50值),并通过测定隐丹参酮与3种金黄色葡萄球菌作用前后电导率变化、碱性磷酸酶(AKP)的含量变化、胞外蛋白含量变化和SDS-PAGE电泳蛋白谱带变化,初步阐明隐丹参酮对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌的抑菌机制。结果由抑菌圈、最低抑菌浓度和半数抑菌浓度可以看出,隐丹参酮对金黄色葡萄球菌的抑制作用略强于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌;经隐丹参酮作用后,3种金葡菌的电导率、碱性磷酸酶及胞外蛋白含量均增大,SDS-PAGE电泳显示蛋白谱带也明显发生变化。结论隐丹参酮对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌具有明显的抑制作用,隐丹参酮破坏细菌细胞壁和细胞膜的结构,导致细胞膜通透性增加,进而使细胞内容物外泄;同时隐丹参酮对细菌蛋白质的合成有一定影响,使菌体内蛋白质减少,影响和阻碍细胞内蛋白质的表达,最终导致细菌正常生理功能的丧失。  相似文献   

13.
目的比较蜥蜴Eremias argus Peters及其伪品石龙子Eumeces chinensis(Gray)的鉴别方法。方法采用薄层色谱法(TLC)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Native-PAGE)对不同来源的10批蜥蜴药材和3批石龙子药材进行对比研究。结果不同来源蜥蜴药材及其伪品石龙子薄层色谱在相同位置出现相同颜色的斑点,不能对两者进行区分;SDS-PAGE结果显示,不同来源的蜥蜴有3条共有谱带,其中1条是区别于石龙子的特征谱带,且3批石龙子样品在14.6 kDa处的蛋白条带染色程度明显高于蜥蜴;Native-PAGE结果显示,10批蜥蜴样品3条共有谱带中1条是区别于石龙子的特征谱带,3批石龙子样品7条共有谱带中有3条特征谱带,二者特征谱带位置差别很大,进行遗传距离聚类分析,SDS-PAGE法不能将蜥蜴和石龙子完全分开,Native-PAGE法可将2种药材聚为2类。结论 Native-PAGE法可作为中药蜥蜴与其伪品石龙子的快速鉴别方法。  相似文献   

14.
《山东中医杂志》2016,(3):244-246
目的:对全蝎粉发酵前后水溶性活性物质的含量进行比较。方法:全蝎粉、发酵全蝎粉经过超声水提,分别采用改良Lowry法测定蛋白质的含量、苯酚-硫酸法测定多糖的含量、磷测定法测定磷的含量进而计算出核酸的含量。结果 :全蝎粉发酵前蛋白含量为136.332 mg·g~(-1),发酵后33.885 mg·g~(-1);全蝎粉发酵前多糖含量为5.832 mg·g~(-1),发酵后为12.024 mg·g~(-1);而全蝎粉发酵前核酸含量为24.789 mg·g~(-1),发酵后为58.034 mg·g~(-1)。结论:全蝎发酵前的蛋白含量较高,而全蝎发酵后的多糖和核酸含量较高。  相似文献   

15.
中药牛骨髓中蛋白与多肽提取方法的比较研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究中药牛骨髓中蛋白、多肽类成分的提取方法、结构信息及其抗菌活性,提高药用价值。方法采用10种提取和3种制备方法,以蛋白含量、提取率、水解度、抗菌活性和相对分子质量等为考察指标,筛选牛骨髓蛋白与多肽的最佳提取和制备部位方法。结果水、NaCl溶液和Tris-HCl溶液提取法得到的蛋白综合指标较高,其蛋白量分别为(52.20±0.58)、(50.19±0.21)、(43.21±0.05)mg/m L,抗菌活性的强弱与蛋白量高低有一定的关系;电泳图谱显示,牛骨髓蛋白样品具有2级谱带,分别为蛋白谱带(66 000)与多肽谱带(4 100~10 000);LC/MS数据显示,水提、0.5 mol/L NaCl和30%(NH_4)_2SO_4部位多肽相对分子质量分别为1 027.84~9 916.32、1 131.17~4 989.95、1 150.46~9 917.00,与其电泳谱带基本吻合。结论水提法操作较简单、快速、成本低,适合于工业化生产;采用SDS-PAGE和LC/MS对牛骨髓蛋白进行分析,为构建其指纹图谱提供理论依据。  相似文献   

16.
李影  孙佳明  杜鹤  刘文丛  张辉 《吉林中医药》2013,(12):1250-1252
目的分析不同炮制方法对珍珠母蛋白质含量及其凝胶电泳特征谱带的影响。方法分别应用考马斯亮蓝法测定珍珠母蛋白质含量和应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术获得珍珠母总蛋白质凝胶电泳谱带。结果考马斯亮蓝法测定珍珠母超微粉的蛋白质含量最大,而烘烤品、生品的依次降低;SDS—PAGE凝胶电泳分析表明3种样品均主要含有4条条带,生品、烘烤品和超微粉各条带平行比较时颜色依次加深。结论生品、烘烤品和超微粉的蛋白质分子量分布基本相同,而蛋白质含量依次升高,其中超微粉样品含量最高,说明超微粉碎技术可以作为贝壳类药材新的炮制方法。  相似文献   

17.
目的:应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术筛选建立黄芪蛋白质指纹图谱及蛋白提取方法。方法:采用8种提取方法(稀释4倍的浓缩胶缓冲液,双蒸水,Tris-HCl法,柠檬酸盐法,PVP buffer,改良饱和酚法,TCA-丙酮法,植物蛋白提取试剂盒)提取黄芪药材的水溶性蛋白质,根据PAGE谱带的多少和清晰度优选建立黄芪药材蛋白质指纹图谱的蛋白提取条件。结果:植物蛋白质提取液、稀释4倍的浓缩胶缓冲液和Tris-HCl缓冲液提取的蛋白含量较高,但杂质较多,条带拖尾,部分特征峰不能得到有效分离。TCA-丙酮法、改良饱和酚法、柠檬酸盐缓冲液和PVP buffer提取的蛋白含量较低,谱带数目较少,辨识度低。以双蒸水为提取溶剂时可辨识谱带数目最多,清晰度较好,电泳指纹图谱中各峰的分离度较高。结论:双蒸水直接提取法更适用于建立黄芪药材的蛋白质指纹图谱。  相似文献   

18.
目的通过总蛋白含量、可溶性蛋白含量差异以及应用SDS-PAGE蛋白质电泳寻找差异蛋白质来鉴别僵蚕与伪品黑死蚕、空心僵蚕。方法采用SDS-PAGE法对僵蚕真品与伪品差异蛋白条带进行鉴别。结果发现僵蚕总蛋白含量不低于60.00%,可溶性蛋白含量不低于4.29%,伪品远低于上述指标,可作为僵蚕质量评价的检查项指标,辅助鉴别僵蚕与其伪品;僵蚕特有差异蛋白质(SP)的有无和含量差异,可有效鉴别上述两种新型伪品。结论本研究初步建立基于差异蛋白质的僵蚕真伪鉴别新方法,为下一步完善僵蚕质量标准,以及僵蚕的质量控制提供科学的依据。  相似文献   

19.
目的:探讨用盐酸小檗碱作为化学对照品评价多种中药质量时确定的质控标准的合理性,及指导临床用药的安全性和有效性,提出关注药效组分中单一组分质控指标的建立与其临床疗效的对应性.方法:采用HPLC法测定盐酸小檗碱的含量,通过饮片、药对和复方制剂3层次药效与含量的对照,探讨质量评价指标的合理性及临床用药的安全性和有效性.结果:盐酸小檗碱的含量:黄连及含有黄连的药对和成方中含量为(5.52%±0.065%)~(0.12%±0.007%),黄柏及含有黄柏的药对和成方中的含量为(3.39% ±0.065%) ~ (0.13% ±0.005%).结论:中药是一个药效组分,中药传承的标准物质是药效组分.黄连和黄柏及其药对、复方制剂中盐酸小檗碱的含量均低于现行临床用药标准.临床用药可能存在有效性和安全性的问题.关注药效组分中单一组分质控指标与其临床疗效的对应性.  相似文献   

20.
《山东中医杂志》2017,(2):155-157
目的:比较酸沉前后蛋白种类的差异,获取薏苡仁蛋白分子量的信息。方法:采用碱溶酸沉法制备薏苡仁蛋白,SDS-PAGE电泳分离蛋白,标准曲线法计算分子量信息。结果:得到了6种薏苡仁水溶性蛋白条带,确定了其分子量分别是91.598,77.169,39.839,28.977,23.822,16.100 k Da,对比了薏苡仁蛋白酸沉前后的变化,即酸沉后缺失了23.822 k Da和16.1 k Da两个条带。结论:该方法得到的谱图清晰,重现性好,对薏苡仁蛋白分离与分析的研究有着重要的指导意义。  相似文献   

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