龙血通络胶囊对血管内皮细胞氧糖剥夺/复氧损伤后细胞凋亡的改善作用

局灶性脑缺血及再灌注损伤是缺血性脑中风的重要发病过程,而缺血再灌注(I/R)损伤诱导的脑血管内皮细胞凋亡是局灶性脑缺血后脑组织损伤的重要诱因。龙血通络胶囊在临床上用于缺血性脑中风恢复期血瘀证的治疗,具有很好的治疗效果,然而其对大脑局灶性缺血后脑组织损伤的保护作用机制目前尚不清晰。该文采用体外氧糖剥夺/复氧(OGD/R)细胞模型模拟血管内皮细胞HUVEC缺血再灌注损伤,通过MTT实验、LDH实验、流式细胞术、AO/EB细胞染色以及Western blot等技术方法观察龙血通络胶囊对OGD/R诱导HUVEC细胞损伤的保护作用,并对其作用机制进行研究。MTT和LDH实验结果显示,龙血通络胶囊能剂量依赖性的提升HUVEC细胞OGD/R损伤后的细胞存活率并降低乳酸脱氢酶(LDH)的释放;流式细胞术与AO/EB细胞染色结果显示,龙血通络胶囊能浓度依赖性的抑制HUVEC细胞OGD/R损伤后的细胞凋亡;Western blot实验结果表明,龙血通络胶囊通过抑制HUVEC细胞caspase 3/9凋亡通路的激活进而抑制OGD/R损伤的细胞凋亡。总之,该研究表明龙血通络胶囊对OGD/R诱导的HUVEC细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制是通过抑制OGD/R诱导线粒体相关caspase 3/9通路的激活而实现的。     

补阳还五汤家兔含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集的影响

目的:探讨补阳还五汤家兔含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集的影响。方法:制备补阳还五汤家兔含药血清,用血小板聚集功能测定法观察补阳还五汤含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集的影响。结果:补阳还五汤含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集有明显的抑制作用,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01)。结论:补阳还五汤家兔含药血清中的某些有效活性成份对PAF诱导的家兔血小板聚集有抑制作用。     

银杏二萜内酯有效部位(GA,GB,GK)配伍活性研究

研究银杏二萜内酯(ginkgolide)A,B,K(GA,GB,GK)最佳活性配伍。比较化合物GA,GB,GK单用,两两配伍及三者配伍对PAF诱导的血小板聚集活性及大鼠脑缺血再灌注模型(tMCAO)的影响。GA,GB,GK不同配伍均可明显降低血小板活化因子(platelet-activating,PAF)诱导的血小板聚集的最大聚集率,其中三者联用抑制率最高;GA,GB,GK不同配伍对大鼠tMCAO模型的神经功能,脑梗死体积和脑水肿有不同程度的减轻,其作用强弱为三者组合大于两两配伍及单用。GA,GB,GK三者联用抗血小板聚集及改善tMCAO大鼠引起的神经损伤的作用最强。     

银杏黄酮和银杏内酯配比对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的考察银杏黄酮和银杏内酯配比对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法研究银杏黄酮和银杏内酯配比对局灶性脑缺血大鼠神经功能、脑梗塞率和脑含水量的影响、对血小板活化因子(PAF)诱导家兔血小板的聚集功能以及特异性拮抗PAF与PAF受体结合的作用。结果银杏黄酮和银杏内酯配比能够显著降低动物的神经行为学评分、脑梗塞率和脑水肿,并能通过拮抗PAF的功能而抑制缺血所致的损失作用,且对PAF受体表现出显著的竞争性拮抗。结论可能的作用机制是作为一种PAF受体的强拮抗剂,在脑缺血的病理情况下通过拮抗PAF的生物效应从而实现对缺血性脑卒中的保护作用。     

中风回语颗粒对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的:研究中风回语颗粒对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用,并初步探讨其相关机制。方法:采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察给药后各组大鼠神经功能学评分、脑梗死面积,血清中肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)的含量,脑组织病理形态学及细胞凋亡的变化情况。结果:与模型组比较,中风回语颗粒(6g/kg,3g/kg)与银杏叶分散片能改善大鼠神经行为症状,降低脑梗死体积,降低血清中TNF-α、NF-κB、IL-6、caspase-3的含量(P0.05,P0.01),明显改善脑组织病理损伤,降低脑组织细胞凋亡率。结论:中风回语颗粒对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有较好的保护作用,其机制可能与减少脑组织细胞凋亡,抑制脑组织中炎性因子的分泌和表达有关。     

胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血再灌注损伤Caspas-3表达的影响

目的 探讨胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达的影响.方法 线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型;经尾静脉注射胡黄连苷Ⅱ(10 mg/kg)干预治疗,Bederson's法评价动物神经行为功能,苏木精伊红(HE)染色观察脑组织结构,原位末端标记(TUNEL)法检测神经细胞凋亡,免疫组化和酶联免疫法检测Caspase-3的表达.结果 脑缺血2 h再灌注22 h后,大鼠出现神经行为功能障碍,脑组织Caspase-3表达增强,细胞凋亡数较假手术组明显增多(P＜0.01).胡黄连苷组大鼠Bederson's评分,Caspase-3表达以及细胞凋亡数量较阴性对照组显著降低(P＜0.01).结论 胡黄连苷Ⅱ可能通过下调Caspase-3表达,抑制脑缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡,改善动物的神经行为功能.     

中风膏对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及Caspase-3、Bcl-2表达的影响

目的探讨中风膏对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2蛋白表达的影响。方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。观察中风膏对大鼠脑缺血再灌注后大鼠神经功能缺损评分、脑组织细胞凋亡数、Caspase-3和Bcl-2蛋白表达的影响。结果中风膏可减少脑缺血再灌注后大鼠神经功能缺损评分(P<0.05)和凋亡细胞数(P<0.05),上调Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)、降低Caspase-3蛋白(P<0.05)的表达。结论中风膏对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用,其机理可能与上调Bcl-2蛋白表达、降低Caspase-3蛋白的表达,抑制神经细胞凋亡有关。     

银杏二萜内酯A,B,K抗血小板聚集作用机制研究

为研究银杏二萜内酯A,B,K(GA,GB,GK)对家兔血小板聚集功能的影响,比较三者作用机制的异同及强弱,该研究采用体外实验法,观察不同剂量GA,GB,GK对血小板活化因子(PAF)诱导家兔血小板聚集作用的影响。研究结果显示,3种银杏二萜内酯均可抑制PAF诱导的体外家兔血小板聚集,其强弱顺序为GKGBGA;三者还能够拮抗[~3H]PAF与PAF受体的特异性结合,拮抗能力同样为GKGBGA。进一步研究三者对于PAF诱导后血小板中胞内[Ca~(2+)]i动员及胞内c AMP水平的变化,发现三者均能够剂量依赖性的抑制胞内[Ca~(2+)]i动员并提高胞内c AMP水平,且它们的作用强弱与拮抗PAF受体能力的强弱一致。表明银杏二萜内酯GK对于PAF受体具有高度的选择性,并能够通过激活c AMP信号通路、抑制胞内[Ca~(2+)]i动员的方式达到抑制血小板聚集的目的,GB、GA对PAF受体也有较强的拮抗作用,但弱于GK。     

BQ注射液对动物血小板聚集的影响

目的观察BQ注射液对动物血小板聚集的影响。方法大鼠和家兔静脉给药后,分别测定其血小板聚集率。结果BQ注射液22mg/kg、44mg/kg组能有效抑制大鼠血小板最大聚集率,BQ注射液各剂量组均可以显著抑制ADP、AA和PAF诱导的离体家兔血小板聚集。结论BQ注射液能明显抑制血小板聚集,可能为其治疗脑梗死的机理之一。     

玄参环烯醚萜苷对氧糖剥夺再灌注诱导的原代皮层神经元细胞内质网应激的作用研究

目的探讨玄参环烯醚萜苷通过内质网应激介导的细胞凋亡通路对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)诱导的原代皮层神经元细胞的作用及机制。方法分离SD大鼠原代皮层神经元,用玄参环烯醚萜苷(50、100、200μg/mL)对原代皮层神经元进行预处理24 h,采用OGD/R诱导制备脑缺血再灌注细胞模型,倒置显微镜下鉴定细胞纯度,观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞内乳酸脱氢酶(LDH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)和Caspase-12蛋白表达。结果培养的原代皮层神经元胞体饱满,状态良好,纯度较高。与对照组比较,经OGD/R处理后原代皮层神经元整体回缩变圆,胞体表面变粗糙;细胞存活率、SOD活性显著降低;LDH水平、细胞凋亡率显著升高;CHOP、Caspase-12和GRP78蛋白表达水平显著升高。与模型组比较,玄参环烯醚萜苷预处理能改善细胞损伤情况;提高细胞存活率、SOD活性;降低LDH水平和细胞凋亡率;降低CHOP、Caspase-12和GRP78蛋白表达水平。结论玄参环烯醚萜苷能拮抗OGD/R诱导的原代皮层神经元神经损伤,其作用机制与抑制内质网应激介导的细胞凋亡有关。     

迷迭香酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机理探讨

目的:探讨迷迭香酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机理。方法:采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,观察大鼠行为学改变。测定脑梗塞体积、血清MDA含量、SOD和GSH-Px的活性。结果:迷迭香酸能够显著改善脑缺血再灌注大鼠的行为障碍和减少脑梗塞体积,可以显著抑制脑缺血再灌注大鼠MDA的生成,明显升高SOD和GSH-Px的活性。结论:迷迭香酸对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,抗氧化作用是其发挥脑缺血保护作用的机制之一。     

脑梗饮对局性灶脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的观察脑梗饮对大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织损伤的保护作用,并进一步探讨其作用机制。方法采用大脑中动脉栓塞法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。分别运用免疫组化、TTC染色和Zea Longa 5分制评分法,观察脑梗饮治疗后脑组织中Bcl-2蛋白表达、梗塞体积以及神经行为变化。结果与模型组比较,治疗组神经功能损害症状明显减轻(P<0.05);脑梗塞体积缩小约40%;在各时点Bcl-2表达均高与模型组(P<0.05)。结论脑梗饮通过益气养阴、活血通络等综合调控措施不仅能上调凋亡抑制基因Bcl-2表达,缩小脑梗塞体积,而且能改善神经损伤症状,减轻脑组织结构损伤,对脑缺血再灌注引起损伤有明显保护作用。     

刺五加提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究刺五加提取物(ASE)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法将120只大鼠随机分为6组,每组20只,分别为假手术组、模型组、尼莫地平组(15 mg·kg^-1)及ASE高、中、低剂量组(200、100、50 mg·kg^-1),每日1次,连续灌胃给药15 d。采用改良Longa法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型。进行神经功能缺损评分;红四氮唑(TTC)染色后计算脑梗死面积百分比;采用HE染色及TUNEL染色法进行脑组织病理学观察,计算顶叶区皮层及杏仁核区域的细胞凋亡百分率;ELISA法测定脑组织中白介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;利用试剂盒检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠的神经功能缺损评分及脑梗死面积百分比显著升高(P<0.001);顶叶皮层和杏仁核处存在大量凋亡细胞;脑组织中的SOD、GSH-Px活性显著降低(P<0.001),MDA、IL-6、IL-1β及TNF-α水平显著升高(P<0.001)。与模型组比较,ASE各剂量组大鼠脑组织中的IL-6、IL-1β含量显著降低(P<0.05,P<0.01);ASE中、高剂量组的神经功能缺损评分、脑梗死面积百分比、脑组织细胞凋亡百分率、MDA水平及TNF-α含量均显著降低(P<0.05,P<0.01),SOD活性显著升高(P<0.05,P<0.01);ASE高剂量组的GSH-Px活性显著升高(P<0.01)。结论 ASE对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定保护作用,其作用机制可能与提高脑组织抗氧化能力,抑制炎症细胞因子过度分泌,以及抑制组织细胞凋亡有关。     

Preconditioning with the traditional Chinese medicine Huang-Lian-Jie-Du-Tang initiates HIF-1α-dependent neuroprotection against cerebral ischemia in rats

Ethnopharmacological relevance

Huang-Lian-Jie-Du-Tang (HLJDT) is a classical heat-clearing and detoxicating formula of traditional Chinese medicine that is widely used to treat stroke. The present study was designed to investigate the effects of HLJDT preconditioning on neurons under oxygen and glucose deprivation (OGD) and rats subjected to middle cerebral artery occlusion (MCAO).

Materials and methods

A stroke model of rats was obtained through MCAO. Following HLJDT preconditioning, the cerebral infarction volume, cerebral water content, and neurological deficient score were determined. Cerebral cortical neurons cultured in vitro were preconditioned with HLJDT and then subjected to OGD treatment. The release of lactate dehydrogenase (LDH) from neurons was detected. The levels of hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) and PI3K/Akt signaling were analyzed by western blotting, and the levels of erythropoietin (EPO) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in the supernatant of the neurons and the plasma of MCAO rats were measured through a radioimmunological assay. The apoptosis and proliferation of neurons were analyzed by immunohistochemistry.

Results

HLJDT preconditioning significantly reduced the cerebral infarction volume and cerebral water content and ameliorated the neurological deficient score of MCAO rats. In addition, HLJDT preconditioning protected neurons against OGD. Increased HIF-1α, EPO, and VEGF levels and the activation of PI3K/Akt signaling were observed as a result of HLJDT preconditioning. Furthermore, HLJDT preconditioning was found to inhibit ischemia-induced neuron apoptosis and to promote neuron proliferation under conditions of ischemia/reperfusion.

Conclusion

Both rats and neurons subjected to HLJDT preconditioning were able to resist ischemia/reperfusion or hypoxia injury through the inhibition of apoptosis and the enhancement of proliferation, and these effects were primarily dependent on the activation of the PI3K/Akt signaling pathway and HIF-1α.     

丹皮酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护中HMGB1表达的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护中HMGB1表达的影响。方法:清洁SD大鼠40只随机分为4组(n=10):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、丹皮酚低剂量组(PaeLD组)及丹皮酚高剂量组(PaeHD组)。建立大鼠心肌缺血再灌注模型。TTC染色法检测大鼠梗死心肌体积,Tunnel法检测心肌缺血坏死区细胞凋亡;免疫印迹检测缺血坏死组织HMGB1的表达。结果:PaeLD及PaeHD组与I/R组相比,心肌梗死体积减小,凋亡细胞减少;心肌组织HMGB1水平明显减少。其中PaeHD组更明显。结论:丹皮酚能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与减轻大鼠HMGB1表达有关。     

复方沙棘1号颗粒对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机理探讨

目的：研究复方沙棘1号颗粒对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机理。方法：线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型，检测脑梗塞体积比、血清MDA含量、血清SOD和GSH-Px活性，并观察行为学改变。结果：大鼠脑缺血再灌注后血清MDA含量和脑梗塞体积比显增加，SOD和GSH-Px活力明显下降。复方沙棘1号可有效地防止上述改变，结论：复方沙棘1号颗粒对脑缺血再灌注损伤有显保护作用，这种保护作用可能与提高脑组织抗脂质氧化能力有关。     

中药骨康含药血清中类雌二醇样物质含量的测定

为探讨中药骨康含药血清中是否含有类雌二醇(E2)样物质并确定其理想采血时间，以及给药剂量与血药浓度之间的关系。采用放免法测定了不同采血时相及不同给药剂量的含药血清中类E2样物质的含量。结果显示各组大鼠在用药前和最后1次用药后的不同采血时相，其含药血清中均含有类E2样物质；最后1次用药后2小时采血的含药血清中类E2样物质含量最高，其中又以骨康中剂量组相对较高。说明中药骨康含药血清中含有类E2样物质，其理想采血时相可能是用骨康中剂量连续灌胃7天、最后1次用药后2小时时。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK蛋白的影响

目的:探讨补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠体内血小板活化信号通路中酪氨酸激酶(Src),蛋白激酶B(Akt)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白及其磷酸化表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、硫酸氢氯吡格雷组(7.81 mg·kg-1)和补阳还五汤高、中、低剂量组(29.69,14.84,7.42 g·kg~(-1))。连续灌胃ig给药14 d后,大脑中动脉线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型,并神经功能缺损评分;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测算脑梗死体积;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测血小板活化信号通路中Src,Akt和p38 MAPK蛋白及其磷酸化表达情况。结果:与模型组比较,补阳还五汤各组及硫酸氢氯吡格雷组能明显降低脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死体积比(P0.05);补阳还五汤不同剂量明显降低Src,Akt和p38 MAPK磷酸化水平(P0.05);硫酸氢氯吡格雷明显降低Src和Akt磷酸化水平(P0.05);各组大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK总蛋白表达水平无统计学差异。结论:补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织保护作用,一定程度上是发挥抗血小板活化的作用,且可能与抑制Src家族激酶,PI3K-Akt和p38 MAPK信号通路有关。     

丹参酚酸A对脑缺血大鼠神经功能及热休克蛋白基因表达的影响

目的:探讨丹参酚酸A对脑缺血大鼠神经功能及热休克蛋白基因表达的影响,为其脑保护机制研究提供参考。方法:选用80只健康成年雄性SD大鼠作为研究对象,通过线栓法对动脉缺血再灌注损伤模型进行制备,并采用随机数字表法将其分为假手术组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组各20只。比较各组大鼠实验后24 h脑梗死体积和实验72 h后胶质源性神经营养因子(GDNF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化物歧化酶(SOD)水平,分析实验24、48、72 h后神经行为学评分变化。在再灌注24、48、72 h后取大鼠脑组织,采用免疫组织化学染色和原位杂交法对大鼠脑组织HSP70蛋白和HSP70 mRNA水平进行测定。结果:低剂量组、高剂量组大鼠脑梗死面积均低于模型组,且高剂量组脑梗死体积明显更低。实验24、48、72 h后,低剂量组、高剂量组大鼠神经行为学评分均低于模型组,且高剂量组神经行为学评分明显更低。模型组、低剂量组、高剂量组大鼠脑组织BDNF、GDNF、MDA水平均明显高于假手术组,SOD、GSH-Px水平明显低于假手术组; 且模型组、低剂量组、高剂量组脑组织大鼠BDNF、GDNF、SOD、GSH-Px水平呈现升高的趋势,MDA水平呈现降低趋势。实验24、48、72 h后,模型组、低剂量组、高剂量组大鼠缺血皮层内HSP70 mRNA阳性细胞计数、HSP70蛋白表达OD值均明显高于假手术组,且模型组、低剂量组、高剂量组缺血皮层内HSP70 mRNA阳性细胞计数、HSP70蛋白表达OD值呈现升高的趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:丹参酚酸A可以有效地对脑缺血再灌注损伤大鼠的自由基进行清除,减少梗死面积,增加HSP70蛋白基因的表达,具有较好的缺血脑保护作用。     

莲心碱对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察莲心碱对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:线栓法阻塞大鼠大脑中动脉2h/再灌注24h,观察莲心碱3mg/kg对大鼠行为学改变、脑梗塞体积、血清中总过氧化物歧化酶(T-SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响。结果:莲心碱能显著改善大鼠的神经系统损伤症状,缩小脑梗死灶,降低LDH活性,提高SOD活性。结论:莲心碱对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤有保护作用。