基于抗病毒活性检测的板蓝根质量生物评价方法及优化研究

目的建立基于抗病毒活性检测的板蓝根质量生物评价方法并进行优化研究。方法分别采用红细胞凝集活性检测法和流感病毒神经氨酸酶(NA)活性检测法,建立板蓝根抗病毒活性生物测定方法,并对所建立的两种方法进行对比分析与优选。结果两种方法可用于对不同样品进行活性检测和区分,结果重复性较好(RSD=7.0%、5.78%);Pearson相关性分析表明板蓝根凝集活性与NA抑制活性之间具有显著相关性(P<0.01,r=?0.81),进一步印证了凝集活性测定法与抗病毒药理作用的关联性;在安全性、经济性、简便性和实用性等方面凝集活性检测法优势明显,可作为板蓝根质量生物测定的优选方法。结论本研究优选凝集活性检测法用于板蓝根质量的生物测定,与抗流感病毒药效相关,提高了其现行质量控制水平,并为中药质量生物测定方法的研究提供参考。     

清开灵注射液生物热活性指纹图谱的初步研究

 目的研究清开灵注射液作用于金黄色葡萄球菌的生物热活性指纹图谱,探索清开灵注射液质量的生物活性评价新方法。方法采用微量量热法,在合适测试浓度下,分别测定各清开灵注射液样品生物热活性指纹图谱,并进行定性、定量分析。结果不同厂家及同厂家不同批次清开灵注射液样品的生物热活性指纹图谱相似度及热动力学参数存在不同程度差异,一个过期样品亦可被区分。结论该方法简便可靠,可为清开灵注射液的质量控制提供参考,为从活性角度研究中药注射液的质量一致性和稳定性提供了一种很好的思路。     

板蓝根不同提取部位抑菌活性的生物热动力学研究

为研究并分析板蓝根不同提取部位的抗菌作用,本研究取板蓝根粗粉500 g,水煎煮2次,合并煎煮液并浓缩成浸膏,并以不同极性溶剂萃取,得水煎液总提取物（G.E.156.6g）、石油醚提取物（P.E.0.19 g）、乙酸乙酯提取物（EtOAc 0.49g）、氯仿提取物（CHCl3 0.55 g）、正丁醇提取物（nBuOH 5.12 g）及萃取后物质（R.E.116.25 g）等不同极性部位.G.E.和R.E.以培养基LB溶解为8 mg/ml,P.E.、EtOAc、CHCl3、nBuOH先以DMSO溶解,然后溶于LB培养基中.以60Co辐射灭菌,贮存于4℃,备用.采用金黄色葡萄球菌为试验对象,以生物热力学方法观察板蓝根不同提取部位的抗菌作用,辅以常规琼脂二倍稀释法进行药效学验证.根据生物热动力学的热谱图,热动力学参数比较板蓝根不同提取部位的抗菌作用.实验结果显示板蓝根水提部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、氯仿部位及石油醚部位均具有一定的抗菌作用,而萃后部位没有抗菌作用.其活性比较：正丁醇部位＞乙酸乙酯部位＞氯仿部位＞水提部位＞石油醚部位.本结果表明板蓝根抗菌作用并不局限于一个部位,它是通过多种有效成分、多环节、多途径地发挥协同作用而表现出抗菌功效.     

基于抗菌效价检测的板蓝根药材品质评价方法的研究

目的：建立板蓝根抗菌效价生物测定的方法，为探索建立基于抗菌效价检测的板蓝根品质评价方法提供技术支持。方法：以管碟法的抑菌圈直径的大小为指标，通过单因素考察菌浓度、培养时间、细菌传代数对板蓝根抗菌效价的影响，选择适宜条件建立板蓝根抗菌效价的测定方法，并采用该方法检测定来自GAP种植基地不同批次、其他不同产地不同来源板蓝根药材的抗菌效价。结果：管碟法测定板蓝根药材抗菌生物效价的适宜条件为：以药典规定的管碟法条件基础上，菌浓度为0．38MCF，培养时间为15h，细菌传代数为3代或4代金黄色葡萄球菌；测定的同一GAP种植基地不同批次板蓝根药材的抗菌效价差别不大（3.80U左右），其他不同产地的则差别明显（从0．83U到6．77U不等）。结论：所建立了板蓝根抗菌效价生物测定方法，该方法可用于板蓝根的品质评价和质量控制。     

中药制剂工艺有无质的改变的早期快速检测——基于生物热动力学表征的板蓝根水提物不同干燥方式的抗菌效应差异

目的：从生物热活性变化的角度,考察不同干燥方式对板蓝根水提物质量的影响,为建立中药制剂工艺有无质的改变的早期快速检测方法体系提供依据。方法：板蓝根水提液分别采用冷冻干燥、减压干燥、常压干燥、喷雾干燥等4种不同方式进行干燥。通过测定各干燥样品作用于大肠杆菌的生物热活性图谱并拟合得到生物热动力参数,比较不同样品的抗菌生物活性的差异性。结果：不同干燥方式所得样品的生物热活性存在较大差异,喷雾干燥和冷冻干燥所得样品的作用明显强于减压干燥和常压干燥样品,提示干燥方式的改变对板蓝根水提物质量的影响不容忽视,当板蓝根制剂的干燥工艺从冷冻干燥、喷雾干燥转变成减压干燥或常压干燥时,须注意其生产工艺是否存在质的改变。结论：生物热活性检测具有普适性好、实时在线、灵敏准确、定性定量、经济高效等特点,可作为中药板蓝根水提物不同干燥工艺有无质的改变早期快速检测方法。     

中药制剂工艺有无质的改变的早期快速检测——基于生物热动力学表征的板蓝根水提物不同干燥方式的抗菌效应差异

目的：从生物热活性变化的角度,考察不同干燥方式对板蓝根水提物质量的影响,为建立中药制剂工艺有无质的改变的早期快速检测方法体系提供依据。方法：板蓝根水提液分别采用冷冻干燥、减压干燥、常压干燥、喷雾干燥等4种不同方式进行干燥。通过测定各干燥样品作用于大肠杆菌的生物热活性图谱并拟合得到生物热动力参数,比较不同样品的抗菌生物活性的差异性。结果：不同干燥方式所得样品的生物热活性存在较大差异,喷雾干燥和冷冻干燥所得样品的作用明显强于减压干燥和常压干燥样品,提示干燥方式的改变对板蓝根水提物质量的影响不容忽视,当板蓝根制剂的干燥工艺从冷冻干燥、喷雾干燥转变成减压干燥或常压干燥时,须注意其生产工艺是否存在质的改变。结论：生物热活性检测具有普适性好、实时在线、灵敏准确、定性定量、经济高效等特点,可作为中药板蓝根水提物不同干燥工艺有无质的改变早期快速检测方法。     

基于四膜虫生物热活性的大黄炮制减毒研究

目的探讨大黄不同炮制品对四膜虫毒性的差异。方法采用微量量热仪考察大黄不同炮制品对四膜虫生物热活性参数的影响。结果大黄不同炮制品对四膜虫生长有不同程度的抑制作用,其作用强度顺序为生大黄>酒大黄>熟大黄>大黄炭;对四膜虫生长的抑制毒性表现为:随着抑制率的增大,传代时间(tG)延长,最大热功率(Pmax)逐渐降低,达最大热功率时间(tmax)逐渐延后;四模虫整个生长过程的产热量不同程度地减少,以生大黄减少的最为明显。结论大黄经炮制后,有明显的减毒作用,四膜虫生物热活性研究可用于中药毒性的早期筛选。     

基于指纹图谱的生物体系中药内禀品质等级的数理理论判别

目的:提出并建立一种基于指纹峰频率的生物体系中药内禀品质等级数理理论。方法:根据相同品质中药的系统理论判别方法,精确鉴别不同中药品种;基于同品种样品集的每个指纹峰的频率建立了品质描述函数。确定样品集指纹峰品质发生显著变化的临界频率尺度f≧珋f+x Sf,x=-0.5,0,0.5,1,及不同品质等级的指纹峰和其数目。根据双指标信息理论方程确定的同品质生物系统的共有峰率标准P_g≥61%,依次确定每个样品指纹图谱中包含的各品质等级指纹峰数并计算其与该品质等级的指纹峰数之比,判定每个样品的所属品质等级。结果:对31个组成非常相似的十全大补丸及补中益气丸样品进行了指纹图谱分析及品种精确鉴别,判定了该22个十全大补丸样品的品质等级。优级品质分子性状构成该类生物体系的特征标记群。结论:生物内禀品质等级数理理论,初步实现了中药生物体系品质等级的严密理论判别,为科学判别中药材、中药复方或其他生物体系品质等级探索了一条可行的新途径。     

生物效价测定法用于活血化瘀中药三棱品质评价的研究

目的:建立三棱抗凝效价的检测方法,以对不同产地三棱药材的活血化瘀效应进行评价;并通过三棱抗凝效价与阿魏酸、总黄酮含量之间的相关性分析,探究三校抗凝活性的物质基础.方法:采用活化部分凝血活酶时间(APTT)测定不同产地三棱药材的抗凝血时间,运用“量反应平行线法”(3,3)法计算三棱抗凝效价;运用Pearson相关分析法计算三棱抗凝效价与化学成分之间的相关度.结果:三棱对照药材量效之间具有良好的线性关系(Y=172.76X-193.39,R2=0.995 5),该方法的精密度(RSD 4.7％)、重复性(RSD 2.3％)、中间精密度(RSD 5.4％)较好,测得不同产地三棱药材抗凝效价为52.33～238.58 U·g-1,并全部通过可靠性检验;相关性分析结果表明三棱抗凝效价与2种化学成分含量之间无显著性相关.结论:本实验所建立的生物效价检测方法可以作为三棱品质评价的方法之一.     

主要基于生物热动力学表征的中药注射剂(注射用益气复脉冻干)质量评控方法的研究

为建立包括生物指纹谱检测在内的中药注射剂质量波动性评价方法,该文以注射用益气复脉(冻干)为模式药,盲法记录样品的化学特征图谱、生物热活性指纹谱,选用Fischer判别对其进行辨识。结果表明化学特征图谱可较好辨识过期样品;生物热活性指纹谱可准确辨识特殊样品。初步建立了针对注射用益气复脉(冻干)质量波动性的评控方法,可作为现有质量控制方法的有益补充,并为其他中药注射剂质量波动性研究提供一定的技术参考。     

板蓝根正丁醇部位指纹图谱的聚类分析及抑菌活性相关分析

研究了临床常用中药板蓝根正丁醇部位的化学指纹图谱和抑菌活性,以系统聚类分析方法研究了不同来源样品的化学成分差异性,结合抑菌活性做相关分析,发现板蓝根正丁醇部位的抑菌活性有效成分.     

Quality Evaluation of Astragali Radix based on DPPH Radical Scavenging Activity and Chemical Analysis

Objective To assess the quality of Astragali Radix from different areas based on the biological evaluation and chemical analysis. Methods The bioassay method of 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl(DPPH) radical scavenging activity for Astragali Radix was established. The parameters of DPPH assay including sample extraction time, reaction time, repeatability, and stability were detected. Furthermore, a method of HPLC-MS was developed to simultaneously determine calycosin-7-O-glucoside, ononin, formononetin, and astragaloside IV in Astragali Radix samples. And the total flavonoids and total saponins were detected by spectrophotometry. The relationship between DPPH evaluation and chemical analysis was studied by Pearson correlation analysis. Results Twelvebatches of Astragali Radix from different origins showed a wide range of DPPH radical scavenging activities(IC50 = 1.395-9.894 μg/mL). Based on DPPH assay, Sample 10 derived from Inner Mongolia Autonomous Region(IC50 = 1.395 μg/mL) showed the best quality of all samples. Chemical analysis showed that different compounds selected as indices would cause different results for quality evaluation. Pearson correlation analysis revealed that the contents of total flavonoids(P = 0.032), calycosin-7-glucoside(P =0.035), and astragaloside IV(P = 0.010) were positively correlated with DPPH radical scavenging activity. Conclusion Except for chemical analysis, DPPH radical scavenging activity can be used as a good alternative to assess and control the quality of Astragali Radix.     

基于抗氧化效应的降脂宁质量评价方法研究

目的:建立降脂宁有效部位抗氧化生物效应质量评价方法。方法:采用DPPH法,以维生素C为阳性对照,测定降脂宁有效部位清除DPPH IC50值和抗氧化作用强度,以评价降脂宁质量。结果:阳性对照(维生素C)清除DPPH IC50为7.43mg·L-1,降脂宁有效部位清除DPPH IC50为11.50mg·L-1,抗氧化作用强度为0.646;不同批次药材制备的降脂宁有效部位抗氧化作用强度无明显差异。结论:该方法简便、准确,可用于降脂宁有效部位抗氧化效应测定和降脂宁质量评价。     

基于综合权重分析的西洋参药材等级质量标准研究

目的:建立基于数学模型的综合权重分析方法,评价西洋参的等级质量。方法:基于《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》) 2015年版西洋参质量标准,并参照道地产地加拿大、美国产西洋参,建立特征图谱、优化含量测定方法,考察西洋参16个定性、定量指标,包括产地,栽培年限,表面颜色,单支主根长度,单支主根质量,气味,醇溶性浸出物,水溶性浸出物,特征图谱相似度,人参皂苷Rg_1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_1、人参皂苷Rd、拟人参皂苷F_(11)含量,5个皂苷总量,《中国药典》 2015年版西洋参标准中规定的人参皂苷Rg_1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_13个皂苷总量;采用SPSSAU 20.0数学统计分析软件量化质量评分,筛选与质量显著相关的指标;采用CRITIC综合权赋值法进行权重赋值,各指标的评分与权重乘积之和的综合得分作为等级划分的标准。结果:7个指标与西洋参质量评价最为相关,分别为单支主根质量、栽培年限、表面颜色、气味、特征图谱相似度、醇溶性浸出物及人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1、人参皂苷Re 3个皂苷总量,数学分析模型综合得分将西洋参划分为3个等级,等级评价结果与实际样品情形一致性较高,适用于西洋参等级评价标准的建立。结论:建立的数学模型在西洋参等级质量评价中基本反映传统西洋参的等级质量状况,评价方法简便可行,评价结果较为客观,可为制定西洋参质量等级评价标准提供参考。     

基于灰色关联分析和功效组分的大黄药材质量评价

目的：本文通过灰色模式识别和功效组分对大黄药材质量进行综合评价,探索不同道地产区大黄药材的差异。方法：利用HPLC法测定大黄药材中大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酸苷、大黄素苷、大黄酚苷、芦荟大黄素苷、大黄素甲醚苷、番泻苷A、番泻苷B、儿茶素、没食子酸14种功效成分的含量;采用Python 2.7对与大黄传统功效密切相关的功效组分进行灰色关联分析。结果：不同产地大黄质量存在一定的差异,采集的25批大黄中甘肃天祝所产唐古特大黄“泻下攻积”质量最佳;四川雅江所产唐古特大黄“清热解毒”质量最佳;甘肃礼县所产掌叶大黄“逐瘀通经”的质量最佳。结论：模式识别在中药质量评价领域有着广阔的前景,且从中药的临床功效出发,在功效组分的层面上进行模式识别,能为建立更加完整和科学的中药质量评价体系提供一个新的思路。     

基于HPLC指纹图谱的当归不同干燥品质量研究

目的:建立当归HPLC指纹图谱,对当归不同干燥品进行质量评价。方法:对不同干燥方法得到的当归药材进行HPLC指纹图谱检测,采用TC-C_(18)(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-1%乙酸水溶液梯度洗脱,流速0.6 mL·min~(-1),检测波长280 nm,柱温30℃,采用相似度评价、主成分分析和聚类分析方法对当归不同干燥品的指纹图谱进行分析。结果:建立了当归药材HPLC指纹图谱,确定了24个共有峰,指认了4个峰,14种干燥方法得到的当归样品与对照图谱相似度为0.920～0.993;主成分分析排名靠前的样品有60℃微波干燥、减压干燥、60℃热泵干燥品;聚类分析将熏干品和其他干燥品分开。结论:所建立的HPLC指纹图谱方法准确、可靠,可为当归药材质量的综合评价提供参考依据。     

金果榄质量评价

目的: 建立评价金果榄药材质量的方法。 方法: 采用HPLC,Agilent ZORBX SB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相乙腈-0.5%磷酸水,梯度洗脱,流速1 mL ·min^-1,检测波长280 nm,进样量10 μL,建立不同产地、不同品种金果榄的HPLC指纹图谱,并测定其不同品种中盐酸药根碱与盐酸巴马汀的含量。 结果: 金果榄药材不同品种的HPLC指纹图谱和盐酸药根碱与盐酸巴马汀的含量存在差异,从金果榄生物碱类成分的指纹图谱中确定了8个共有峰,不同产地的金果榄在生物碱类成分上有差异。相似度大的指纹图谱,表征其含量的指标R不一定大;相似度低的,R不一定小。R的变化趋势与指标成分含量测定结果趋势基本一致。 结论: 本研究建立的指标成分含量测定方法和指纹图谱的精密度、稳定性、重复性好,可用于表征金果榄质量的差异性,为金果榄的质量研究提供参考依据。     

基于复合质量常数的北柴胡饮片等级评价

目的:建立北柴胡饮片等级评价标准,为根及根茎类规则形状中药饮片的等级标准构建提供理论依据。方法:复合质量常数是一种基于传统又优于传统的综合性中药饮片等级评价方法,该方法基于质量常数,通过考察中药饮片的外观性状、挥发油、浸出物、柴胡皂苷a和d含量等指标,将北柴胡饮片的内在指标和外观性状有效结合,构建复合质量常数,完善并建立北柴胡饮片等级标准。结果:该研究收集20批不同质量的北柴胡饮片,以检验合格的19批北柴胡饮片为研究对象,研究结果显示其复合质量常数为1.616~8.414,可以将北柴胡饮片划分成3个等级,一级北柴胡饮片复合质量常数≥7.871,二级北柴胡饮片复合质量常数7.871且≥5.602,三级北柴胡饮片复合质量常数5.602。结论:复合质量常数能够科学、客观、合理地划分饮片的等级,解决了相对质量常数评价方法存在的诸多问题,为多指标成分中药饮片等级划分提供了新方法、新模式,为进一步建立和健全北柴胡饮片综合质量评价体系提供有益参考。     

基于传统品质评价的移栽与仿野生黄芪比较

目的：以历代本草所总结的传统品质评价方法为依据，采用现代科技手段从性状、显微结构、化学成分3个层面对移栽和仿野生2种规格黄芪药材进行系统比较。方法：对收集的移栽和仿野生黄芪进行性状特征、横切面显微特征对比分析；对所含纤维素类、浸出物、糖类、总黄酮、总皂苷等的含量进行对比分析；采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）、解吸电喷雾电离质谱成像（DESI-MSI）对移栽及仿野生黄芪木质部与韧皮部所含次生代谢物及其空间分布进行对比分析。结果：在性状方面，移栽黄芪性状变异较大，而仿野生黄芪的外观性状与断面特征均与传统总结优质黄芪“直如箭干、肉白心黄”的特征相符。在显微结构方面，移栽黄芪木栓层薄，切面裂隙多贯穿形成层呈长条形放射状分布，无明显生长轮特征；仿野生黄芪木栓层厚，切面裂隙呈不规则腔状分布于木质部中心及韧皮部外缘，形成层紧密无裂隙，有明显生长轮特征。在化学成分方面，移栽黄芪的水溶性浸出物、80%乙醇浸出物、蔗糖含量明显高于仿野生黄芪，而总皂苷、木质素和半纤维素含量则明显低于仿野生黄芪，二者所含100%乙醇浸出物、总多糖、总黄酮含量总体相近，但仿野生黄芪稍高；...     

板蓝根中的抗病毒活性成分

目的：寻找板蓝根中的主要抗病毒成分。方法：利用色谱法和结晶法对成分进行分离，鸡胚法为抗病毒活性检验法。结果：分离得到3个化合物，2，4（1H，3H）喹唑二酮（Ⅰ）、表告依春（Ⅱ）、靛玉红（Ⅲ），其中Ⅱ显示出较强抗病毒活性？结论：表告依春为板蓝根抗流感病毒的主要有效成分之一。