大柴胡汤含药血清通过Sirt3线粒体途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的:探讨大柴胡汤含药血清抑制人肝癌Hep G2细胞增殖的作用机制。方法:采用血清药理学方法制备大柴胡汤含药血清。以Hep G2人肝癌细胞为对象,采用噻唑蓝法测定其对生长抑制的影响,倒置相差显微镜观察含药血清对Hep G2细胞作用后形态改变,罗丹明123荧光染色观察细胞线粒体膜电位的变化,免疫印迹实验探讨其作用机制。结果:与空白血清组比较,大柴胡汤组(8.1 g/kg)5%、10%和20%含药血清能够抑制Hep G2人肝癌细胞增殖并呈时间-浓度依赖性特点。5%、10%和20%大柴胡汤含药血清作用24 h后,能够显著降低细胞线粒体膜电位并下调Sirt3、PI3K、Akt、NF-κB和Bcl-2蛋白表达,上调Bax和Caspase3蛋白表达。结论:大柴胡汤含药血清能够显著抑制人肝癌Hep G2细胞增殖并通过线粒体依赖的Sirt3/PI3K途径发挥作用。     

杨梅树皮素诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡机制的研究

目的:探讨杨梅树皮素(myricetin,MYR)对人肝癌HeptG-2抑制生长和诱导凋亡作用及其机制.方法:MTT法研究MYR对人肝癌HepG-2的抑制生长;荧光染色和电子透射电镜观察HepG-2细胞形态;流式细胞仪研究MYR对HepG-2细胞周期的影响及诱导凋亡作用,罗丹明123单染观察MYR对线粒体膜电位的改变;caspase 3,9试剂盒检测MYR对人肝癌HepG-2细胞内caspase3,9活性的影响.结果:MYR对人肝癌HepG-2细胞生长具有明显的抑制作用,并具有剂量依赖性,IC_(50)为58.6617 mg·L~(-1);MYR作用72 h后,HepG-2细胞呈现典型细胞凋亡特征,细胞周期阻滞于G_2/M期,凋亡率最高为64.73%.同时线粒体膜电位明显下降,caspase3,9活性增加.结论:MYR对人肝癌HepG-2细胞有明显的抑制生长和诱导凋亡作用,其机制可能与线粒体凋亡途径有关.     

野西瓜挥发油对HepG-2细胞线粒体膜电位和Ca2+浓度的影响

目的:探讨野西瓜挥发油(Canpoparis spinosa L.essential oil,CSEO)对人肝癌HepG-2抑制生长和诱导凋亡作用及其机制.方法:MTT法研究CSEO对入肝癌HepG-2的抑制生长;荧光显微镜观察HepG-2细胞形态:流式细胞仪研究CSEO对HepC-2细胞周期的影响及诱导凋亡作用,罗丹明123单染观察CSEO对线粒体膜电位的改变;激光共聚焦显微镜检测CSEO对HepG-2细胞内Ca2 浓度的影响.结果:CSEO对人肝癌HepG-2细胞生长具有明显的抑制作用,并且有剂量依赖性,IC50为127.5μg·mL-1;CSEO作用48 h后,HepG-2细胞在出现特征性凋亡形态特征,300 μg·mL-1组的凋亡细胞比率高达44.447%;75和150 μg·mL-1下出现G1期细胞阻滞,S期细胞比例下降,G2期细胞比例下降的趋势;CSEO各组线粒体膜电位(△Ψm)有所降低,表现为曲线相左移行,此外,中、高浓度的CSEO还可以显著增加细胞内Ca2 浓度.结论;CSEO对人肝癌HepG-2有明显的抑制生长和诱导凋亡作用,其机制可能与线粒体膜电位降低和钙超载有关.     

甘草酸对人肺癌细胞A549凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨甘草酸诱导人肺癌细胞A549凋亡作用及机制研究。方法 :采用噻唑蓝(MTT)法测定甘草酸对A549的生长抑制作用,倒置显微镜观察甘草酸对A549细胞作用后的形态改变,TUNEL实验检测细胞凋亡情况,罗丹明123(Rh123)荧光染色观察线粒体膜电位的改变,免疫印迹实验探讨甘草酸的作用机制。结果:与空白组相比较,不同浓度甘草酸(0.5⁴mmol/L)能够抑制A549肺癌细胞增殖并呈时间-浓度依赖性,确定甘草酸最佳作用时间为24 h,最佳作用浓度为1 mmol L。甘草酸(1 mmol/L)作用24 h后能够显著降低细胞线粒体膜电位并能够下调Bcl-2蛋白表达,上调促凋亡蛋白Bax和cytochrome c蛋白表达。结论:甘草酸能够显著抑制A549肺癌细胞增殖并通过线粒体依赖的凋亡途径发挥作用。     

土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用

目的研究土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡和细胞周期的影响,探讨土鳖虫抗肿瘤效应。方法以土鳖虫乳剂给SD大鼠灌胃,采血并制备血清。四氮唑盐法(MTT法)检测含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡。结果土鳖虫含药血清可明显抑制肝癌HepG-2细胞体外增殖,20%土鳖虫含药血清作用72h后抑制率高达56.728%,抑制率呈浓度依赖关系。流式细胞仪检测细胞凋亡发现肝癌HepG-2细胞以坏死居多,细胞周期多阻滞于G0-G1期。结论土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞体外增殖有明显的抑制作用。     

双去甲氧基姜黄素通过降低线粒体膜电位诱导人白血病K562细胞凋亡

目的:探讨双去甲氧基姜黄素对K562细胞增殖的影响及其机制。方法:以1,10,30,50,100μmol·L~(~(-1))的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用48 h或72 h后MTT法检测细胞增殖;以10,30,50μmol·L~(-1)的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用24 h或48 h实验,另设空白组,AO/EB双染法倒置荧光显微镜观察凋亡形态,Rh123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Annxin V/PI染色流式细胞仪检测凋亡率,Westren blot方法检测Bcl-2,Bax的表达活性。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可剂量依赖性抑制K562细胞的增殖,在30,50μmol·L~(-1)浓度下,双去甲氧基姜黄素可诱导细胞凋亡,下调Bcl-2/Bax,并可降低线粒体的膜电位(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可抑制K562细胞的增殖,作用机制可能与改变线粒体膜电位诱导的细胞凋亡有关。     

左归丸通过线粒体途径抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡

目的:观察左归丸对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的保护效应,探讨其作用机制是否与其干预线粒体途径有关。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)成骨细胞MC3T3-E1氧化应激模型,实验分为空白组,t-BHP组,左归丸+t-BHP组,补佳乐+t-BHP组。孵育24,48,72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对t-BHP诱导MC3T3-E1细胞存活的影响;孵育48 h后,采用吖啶橙溴乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡,采用Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化,采用罗丹明123荧光染色法观察线粒体膜电位的改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法分析线粒体蛋白家族B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,t-BHP组显著抑制细胞增殖(P0.05,P0.01),细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显下调(P0.01);与t-BHP组比较,左归丸加t-BHP组促进暴露于t-BHP诱导的MC3T3-E1氧化损伤细胞的存活(P0.01),48 h者尤佳,逆转细胞凋亡情况,提高细胞线粒体膜电位,上调Bcl-2蛋白表达(P0.05),抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:左归丸含药血清能够抗t-BHP诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,其作用机制可能与其干预线粒体途径有关。     

荔枝核含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨荔枝核含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用血清药理学方法制备荔枝核、环磷酰胺含药血清以及对照血清,作用于HepG2细胞,MTT法检测各种血清对HepG2细胞增殖的影响,Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:荔枝核含药血清处理HepG2细胞后,呈剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖活性;并出现细胞核浓染与核碎裂;流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率明显高于对照组。结论:荔枝核含药血清能抑制人肝癌HepG2细胞增殖,其机制可能与诱导HepG2细胞凋亡有关。     

柴胡皂苷d对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞线粒体膜电位及细胞凋亡的影响

目的研究不同浓度的柴胡皂苷d(saikosaponin d,SSd)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞线粒体膜电位(mitochondrial transmembrane potential,△ψm)及凋亡水平的影响。方法体外常规培养SH-SY5Y细胞,将细胞置于分别含0~10μmol/L SSd的DMEM高糖培养基中,作用48 h;Rh123染色后流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位变化,Tunel法、吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)染色法检测细胞凋亡水平的变化。结果与对照组比较,8~10μmol/L SSd预处理的SH-SY5Y细胞TUNEL染色后凋亡指数明显升高(P0.01);AO/EB染色后可见明显的阳性细胞。此外,不同浓度的SSd作用后均可见SH-SY5Y细胞中Rh123荧光强度减弱,且细胞Rh123荧光强度降低有剂量依赖关系。结论一定浓度的SSd可引起SH-SY5Y细胞凋亡,其机制可能与影响线粒体膜电位有关。     

基于SIRT1/HO-1途径研究绿原酸诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的:探讨绿原酸诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定绿原酸对HepG2的生长抑制作用,倒置显微镜观察绿原酸对HepG2细胞作用后的形态改变,TUNEL实验和流式细胞术检测细胞凋亡情况,罗丹明123荧光染色实验观察线粒体膜电位的改变,免疫印迹实验探讨绿原酸的作用机制。结果:与空白组相比较,不同浓度绿原酸(1~10mmol/L)能够抑制HepG2肝癌细胞增殖并呈时间-浓度依赖性,绿原酸(1~10 mmol/L)作用24 h后能够显著降低SIRT1、HO-1、Bcl-2和NF-κB蛋白表达,同时上调p53和Bax蛋白表达。结论:绿原酸能够显著抑制HepG2肝癌细胞增殖并通过调控SIRT1/HO-1依赖的凋亡途径发挥作用。     

西黄丸含药血清对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:研究西黄丸含药血清对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移以及对环氧化酶2(COX-2)转录的影响,以期探讨西黄丸对三阴性乳腺癌细胞的作用。方法:大鼠灌胃给药制备西黄丸含药血清,实验设置大鼠空白血清组和西黄丸含药血清组,以含药血清干预三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕实验检测细胞迁移,RT-PCR法检测COX-2、TNF-αmRNA表达。结果:西黄丸含药血清可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,可以促进MDA-MB-231细胞凋亡,并且西黄丸含药血清可以降低MDA-MB-231细胞划痕愈合率,可以降低在炎性环境下MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA表达(P<0.05)。结论:西黄丸含药血清可以有效地抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进其细胞凋亡,可能抑制细胞迁移,并且可以减少炎性因子的转录。     

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??OBJECTIVE To investigate the mechanism of human liver cancer HepG-2 cells apoptosis induced by Undaria pinnatifida sulfated polysaccharides S-UPPS??B. METHODS The anti-proliferation effects of S-UPPS??B on HepG-2 cells was by MTT assay. [Ca²⁺]i in HepG-2 cells was detected by laser cofocal scaning microscopy (LCSM). The apoptosis rate and protein expression level of Bcl-2, Bax, Cyt-C and p53 were detected by flow cytometry (FCM). Caspase Assay Kit was used to detected the activities of Caspase-3 and -9. RESULTS S-UPPS??B could inhibit the proliferation of HepG-2 cells and the IC₅₀ was 50.09 ??gmL^-1. With the increase of drug delivery dosage, apoptosis rate also increased, and the significant regulating effects of S-UPPS??B on Ca²⁺ and its associated channel proteins were observed. The [Ca²⁺]i level, the protein expression level of Cyt-c, p53 and the activities of Caspase-3 and -9 were all increased remarkably (P<0.05). The ratio of Bcl-2 to Bax was reduced. CONCLUSION Undaria pinnatifida sulfated polysaccharides S-UPPS??B can effectively inhibit the proliferation of human liver cancer HepG-2 cells by inducing apoptosis of HepG-2 cells through mitochondrial pathway.     

西兰花中异硫氰酸盐诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡作用及其机制的研究

目的：探讨西兰花中异硫氰酸盐(isothiocyanates,ITCS)诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡过程中的作用及其可能机制。方法：不同浓度ITCS处理人肝癌细胞HepG-2,应用MTT法检测ITCS对HepG-2细胞增殖的影响；流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况。结果：ITCS可明显抑制HepG-2细胞增殖；15,30,60,120,240 μg·mL^-1的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内活性氧分别为(23.1±1.8)%,(53.3±3.3)%,(57.9±2.0)%,(79.9±3.4)%,(93.4±2.6)%；Δψm分别为(94.8±5.5)%,(91.8±5.4)%,(66.0±5.6)%,(65.5±6.6)%,(44.3±2.7)%；60,120,240 μg·mL^-1的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%,(21.9±4.4)%,(70.2±5.3)%。结论：ITCS能够通过刺激HepG-2细胞内活性氧的产生,损伤线粒体,使其膜电位下降,引起HepG-2细胞凋亡。     

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??OBJECTIVE To investigate the apoptosis effect of human hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721 induced by dihydroartemisinin in vitro and the possible mechanism. METHODS After treatment with 25, 50, 100, 200, and 400 ??mol??L^-1 dihydroartemisinin for 24 h. The proliferation inhibitory effect of dihydroartemisinin on SMMC-7721 cell was detected by MTT assay. Cell cycle and apoptosis were detected by flow cytometry. The change of apoptotic morphology was detected by confocal laser scanning microscopy. Rho 123 staining method was used to detect the changes of mitochondrial membrane potential. Western blot was used to detect expression of Bcl-2, Bax, Cleaved Caspase-3, Cleaved Caspase-9 and Cyto C. RESULTS MTT results showed that 25-400 ??mol??L^-1 dihydroartemisinin can inhibit the proliferation of SMMC-7721 cells obviously. The cell cycle detection results of flow cytometry showed that dihydroartemisinin could block SMMC-7721 cell cycle in G₂/M phase. The results of Hochest 333258 staining showed that the nuclei were heterogeneous, condensed and fragmented in the DHA treatment group. The cell apoptosis detection results of flow cytometry showed that the apoptosis rate of dihydroartemisinin treated groups were increased obviously (P<0.01). The results of Rho 123 staining showed that the mitochondrial membrane potential was decreased significantly (P<0.01). Western blot results showed that the expression of Bcl-2 was down-regulated, expression of Bax was up-regulated, the ration of Bax/Bcl-2 was increased and the expression of Cleaved Caspase-3, Cleaved Caspase-9 and Cyto C were up-regulated. CONCLUSION Dihydroartemisinin can induce apoptosis of SMMC-7721 cells, on the mechanism of apoptosis may be related to mitochondrial pathway.     

红花注射液对HepG-2细胞Bcl-2和Survivin表达的影响

目的: 研究红花注射液在体外对HepG-2细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Survivin基因转录和蛋白表达的影响,探讨红花注射液诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的机制。 方法: 采用不同剂量的红花注射液(0,50,100,150,200,250 g·L^-1)体外作用于HepG-2细胞,利用MTT法观察红花注射液对HepG-2细胞增殖的抑制作用;以流式细胞术观察细胞凋亡率的变化;通过实时荧光定量 PCR 技术 (real time-PCR) 以及蛋白免疫印迹 (Western blotting) 法检测细胞凋亡相关因子 Bcl-2和Survivin mRNA和蛋白的表达情况。 结果: 红花注射液对体外培养的人肝癌HepG-2细胞的增殖具有抑制作用(P<0.01),且具有剂量、时间相关性;细胞凋亡率随着红花注射液浓度的增加而逐步增高,细胞凋亡相关因子Bcl-2,Survivin的 mRNA 和蛋白表达均下调。 结论: 红花注射液能够抑制HepG-2人肝癌细胞增殖,诱导HepG-2细胞凋亡,可在翻译和转录水平下调Bcl-2,Survivin的表达,这可能是红花注射液诱导HepG-2细胞凋亡的主要机制之一。     

莪术瓜蒌汤含药血清抑制PGLH7细胞增殖的实验研究

目的:探讨莪术瓜蒌汤含药血清对体外培养的PGLH7细胞增生、细胞周期和凋亡的影响.方法:不同剂量莪术瓜蒌汤含药血清处理体外培养的PGLH7细胞后,采用MTT法观察血清对细胞增殖的作用;PI染色、流式细胞仪进行细胞周期时相分析;Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:高剂量莪术瓜蒌汤血清组能明显抑制PGLH7细胞增生;流式细胞仪分析表明:中、高剂量莪术瓜蒌汤血清组处理PGLH7细胞24h、48h后,S期细胞百分率下降;细胞凋亡率上升,呈剂量依赖性.结论:本实验提示莪术瓜蒌汤含药血清可能是通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制肺癌细胞的增殖.     

珍珠梅提取物抑制肝癌HepG-2细胞增殖的实验研究

目的:观察珍珠梅提取物对肝癌HepG-2细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法:采用MTT比色法观察珍珠梅提取物抑制肝癌HepG-2细胞增殖;采用流式细胞仪检测其对HepG-2细胞周期分布的影响,同时结合倒置显微镜、HE染色、透射电镜及免疫细胞化学方法检测凋亡相关基因bcl-2、p53的蛋白表达,观察其诱导肝癌HepG-2细胞凋亡的作用。结果:珍珠梅提取物可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,其作用具有时间和浓度依赖性;珍珠梅提取物可诱导细胞凋亡;同时改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于G2/M期,与对照组比较,细胞凋亡率差异有显著性(P<0.01);用药前后凋亡相关基因bcl-2、p53蛋白表达均有显著性改变(P<0.01)。结论:珍珠梅提取物可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,改变细胞周期分布,从而抑制细胞增殖。     

马齿苋提取物对肝癌细胞HepG-2抑制作用的实验研究

目的观察马齿苋提取物对肝癌HepG-2的抑制作用。方法采用MTT比色法观察马齿苋提取物抑制肝癌HepG-2细胞增殖;采用流式细胞仪检测马齿苋对HepG-2细胞周期分布的影响。结果马齿苋提取物可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,其作用具有时间和浓度依赖性;可改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于S期,与对照组比较,细胞凋亡率差异有显著性(P<0.01)。结论马齿苋提取物可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,改变细胞周期分布,从而抑制细胞增殖。     

八角莽草酸诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡及其机制研究

目的：研究八角莽草酸诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的作用和机制。方法：取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,用0.125,0.5,1 g·L^-1不同浓度八角莽草酸作用人肝癌HepG-2细胞,采用MTT法测定莽草酸对HepG-2细胞增殖的影响;通过流式细胞仪检测在以上浓度的莽草酸对肝癌HepG-2细胞周期的影响;通过免疫细胞化学检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤白血病2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax蛋白）表达的改变。结果：MTT实验结果表明,各质量浓度0.125,0.5,1 g·L^-1的莽草酸对人肝癌HepG-2的生长具有显著的抑制作用（P<0.05）,呈现时间依赖性和剂量依赖性;流式结果表明莽草酸将人肝癌HepG-2细胞阻滞在G₁期,使细胞不能顺利地进入细胞DNA合成期S期,从而抑制了该细胞的增殖。免疫细胞化学检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达明显减少、Bax表达明显增加;Bcl-2/Bax比例明显降低。结论：八角莽草酸在体外诱导人肝癌HepG-2细胞大量阻滞在G₁期,进入S期细胞减少,抑制细胞增殖,其作用可能通过降低Bcl-2/Bax比例来诱导细胞凋亡而实现的。