黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡的影响

目的：研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)、Th1/Th2细胞平衡的影响。方法：60只雄性C57BL/6J小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.2 g·kg^-1),黄芩汤低、中、高剂量组(4.55、9.1、18.2 g·kg^-1),除正常组外均予以2.5%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水5 d诱导UC,连续灌胃给药7 d后处死小鼠,取肠系膜淋巴结(MLNs)和结肠组织,流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结Th17/Treg、Th1/Th2,流式细胞微球芯片捕获技术检测结肠组织白细胞介素(IL)-2、IL-17A、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-10等细胞因子含量,对结肠组织样本进行病理切片观察,并采用免疫组化法检测结肠组织中T细胞表达的T-box(T-bet)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)、IL-17A、叉头蛋白P3(FoxP3)的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠结肠组织中转化生长因子-β(TGF-...     

黄芩汤对湿热型溃疡性结肠炎大鼠调节性T细胞功能的影响

目的:观察不同剂量黄芩汤对湿热型溃疡性结肠炎大鼠调节性T细胞(Tr细胞)功能的影响,从而探讨该方治疗该病的免疫学机制。方法:采用高脂高糖辛辣饮食干预加2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法造出湿热型溃疡性结肠炎的大鼠模型;造模成功后,分别采用大中小剂量黄芩汤、白头翁汤、柳氮磺吡啶(SASP)及生理盐水对模型进行干预;用ELISA法检测大鼠血清白介素10(IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1),用实时PCR(Real-tim e PCR)法检测大鼠结肠组织Foxp3 mRNA含量。结果:模型组大鼠血清IL-10、TGF-β1及结肠组织Foxp3 mRNA含量均较正常对照组明显下降(P<0.01);经干预后以上指标有不同程度回升,尤以黄芩汤中剂量组最为明显,疗效优于阳性对照药白头翁汤及SASP(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩汤可能通过上调以上指标而调节Tr细胞的功能,从而实现自身免疫调节的。     

清热去湿汤对急性湿疹(湿热证)患者外周血Th1/Th2细胞因子水平的影响

目的 观察清热去湿汤对急性湿疹(湿热证)患者外周血Th1/Th2细胞因子水平的影响.方法 将90例急性湿疹(湿热证)患者随机分为两组各45例,对照组予盐酸西替利嗪片口服治疗,观察组在对照组治疗基础上给予清热去湿汤治疗,连续治疗10 d;评估两组临床疗效,并比较两组治疗前后单项症状积分(皮损面积、瘙痒程度、皮损形态、皮损...     

黄芩汤对湿热型溃疡性结肠炎大鼠CD4+ T细胞 及其共刺激分子的影响

目的:观察CD4+T细胞及其共刺激分子(CSF)在湿热型溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜中的表达及分布,探讨黄芩汤治疗该病可能的免疫学机制。方法:采用高脂、高糖饲料联合人工气候箱法造出湿热型体质,结合三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法建立湿热型UC模型;造模成功后将大鼠分为模型组、黄芩汤组及美沙拉嗪组,用免疫组化SP法检测大鼠结肠黏膜CD4+T细胞,CD28,CD152,OX40T细胞亚型的表达及分布,通过图像数码采集系统及Image pro plus 6.0软件分析平均光密度,以检测各分子表达含量。结果:与正常对照组比较,造模大鼠结肠中CD4+T细胞、CD28,CD152,OX40等T细胞亚型升高(P<0.05),主要分布于黏膜下层及固有肌层;治疗后,黄芩汤和美沙拉嗪组大鼠结肠中CD4+T细胞,CD28,OX40T细胞亚型表达均下降(P<0.05),但CD152的表达无明显变化且维持在模型组水平;黄芩汤组及美沙拉嗪组以上各分子的表达均无统计学差异。结论:黄芩汤可能通过调节CD4+T细胞的CSF的表达含量从而发挥对溃疡性结肠炎的免疫调节作用。     

热瘀散对溃疡性结肠炎胃肠湿热型大鼠模型细胞因子影响的研究

目的 探讨热瘀散对溃疡性结肠炎胃肠湿热型作用机制.方法 选择雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、热瘀散低剂量组、热瘀散高剂量组.使用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)致敏法建立溃疡性结肠炎模型,采用复合因素(高脂、高糖饮食加湿热环境)复制胃肠湿热证模型;模型复制后各组大鼠给予相应药物治疗,检测相关细胞因子(包括NO、IL-6、SOD、MDA、IL-8、IL-10、IL-13、TNF-α)的变化.结果 与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清TNF-α、MDA、IL-6、NO、IL-8表达水平显著增高,IL-13、SOD、IL-10表达水平显著降低;与模型对照组相比较,各治疗组大鼠血清TNF-α、MDA、IL-6、NO、IL-8水平显著降低,IL-13、SOD、IL-10表达水平显著升高.结论 以上细胞因子变化表明,热瘀散通过抑制促炎细胞因子,促进抗炎细胞因子生成,从而发挥对溃疡性结肠炎的治疗作用.     

针灸对溃疡性结肠炎大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响

目的:探讨针灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠Th 1/Th 2免疫平衡的影响。方法:SD大鼠随机分为模型组、隔药灸组、电针组,每组10只,并另选10只正常大鼠作为对照组。采用免疫学方法并加局部刺激建立大鼠UC模型。隔药灸组、电针组选取"天枢"(双)和"气海"进行隔药灸或电针治疗,连续治疗14d。采用定量PCR法检测结肠组织中干扰素(INF)-γ、白介素(IL)-12、IL-4和IL-10mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附法检测结肠组织中INF-γ、IL-12、IL-4和IL-10的含量;采用流式细胞术分析结肠组织细胞中CD4~+INF-γ~+/CD 4~+IL-4~+的比值。结果:与对照组比较,模型组大鼠结肠组织中INF-γ、IL-12mRNA和含量显著升高(P0.05),IL-4、IL-10mRNA和含量显著下降(P0.05);隔药灸组和电针组大鼠结肠组织INF-γ、IL-12mRNA和含量显著低于模型组(P0.05),IL-4、IL-10mRNA和含量显著高于模型组(P0.05)。模型组结肠组织中CD 4~+INF-γ~+/CD 4~+IL-4~+的比值显著高于对照组(P0.05);与模型组比较,隔药灸组和电针组CD4~+INF-γ~+/CD 4~+IL-4~+比值显著下降(P0.05)。隔药灸组和电针组的各项指标比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:隔药灸和电针均能显著改善UC模型大鼠炎性反应,通过下调结肠组织中INF-γ和IL-12水平,上调IL-4和IL-10水平从而保持Th 1/Th 2细胞间平衡,进而改善免疫功能。     

湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型的建立与研究

目的 构建与人体最接近的湿热型溃疡性结肠炎大鼠模型,并探讨该模型的客观指标评价体系.方法 根据前期研究的方法即结合内因湿热和免疫复合法诱发湿热型溃疡性结肠炎,观察大鼠证候学、结肠病理学及免疫学指标的改变,判定造模是否成功.结果 模型组大鼠出现嗜睡懒动、蜷缩,饮少纳呆,精神萎靡,毛发疏松粗糙、晦暗无光泽,腹泻及血便明显.DAI、病理学评分、MTL、GAS、COX -2、IFN - γ、VCAM -1均升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 采用高脂高糖辛辣饮食加免疫复合法可以构建出理想的湿热性溃疡性结肠炎大鼠模型.     

益气护卫汤对哮喘小鼠Th1/Th2型细胞因子水平的影响

益气护卫汤是著名中医内科专家洪广祥教授根据哮喘的发病特点创制的用于哮喘防治的有效方剂[1] ,以往的实验研究表明益气护卫汤可以降低哮喘豚鼠的气道高反应性(ＡＨＲ) ,显著延长豚鼠卵蛋白雾化引喘潜伏期[2 ] ;降低豚鼠血浆可溶性细胞间粘附分子 1(ｓＩＣＡＭ 1)水平[3 ] ;调节Ｔ淋巴细胞亚群比例平衡 ,并能有效抑制Ｔ细胞活化[4] 。本研究通过观察益气护卫汤对哮喘小鼠肺泡灌洗液 (ＢＡＬＦ)中白介素 4 (ＩＬ 4 )、γ 干扰素 (ＩＦＮ γ)水平的变化 ,探讨其对Ｔｈ1/Ｔｈ2细胞亚群反应的影响及防治哮喘的作用机理。1　材料1.1　药物及试…     

花生四烯酸代谢物在湿热型溃疡性结肠炎大鼠的表达与调节

目的:探讨花生四烯酸(AA)代谢物在湿热型溃疡性结肠炎(UC)大鼠发病的作用以及黄芩汤的调节。方法:采用高脂高糖饲料结合人工气候箱法造成大鼠湿热,使用三硝基苯磺酸灌肠造成湿热型UC模型;将造模大鼠分为模型组(n=12)、黄芩汤治疗组(n=13)及美沙拉嗪组(n=12)。治疗两周后用ELISA法检测大鼠前列腺素E2(PGE2)、血小板活化因子(PAF)、白三烯B4(LTB4)及环氧合酶-2(COX-2)含量;检测甘油三酯(TG)及总胆固醇(CH)含量并计算粪便脂肪球数量从而反映湿热程度;对结肠进行肉眼组织学评分从而评价UC的严重程度;将AA代谢物与以上湿热型UC指标进行相关性分析。结果:与空白组(n=12)比较,造模组血清及结肠PGE2、PAF、LTB4及COX-2含量明显升高(P<0.05);治疗后黄芩汤组的PGE2及LTB4均显著低于美沙拉嗪组(P<0.05),但PAF及COX-2无组间差异。湿热指标方面,治疗后黄芩汤组血脂及粪便脂肪球数量均显著低于美沙拉嗪组(P<0.05);UC方面,黄芩汤及美沙拉嗪组的组织学评分无统计学差异。相关性分析显示组织评分与AA代谢物、血脂及粪便脂肪球均呈显著正相关性(r>0.930,P<0.01)。结论:AA代谢物在湿热型UC大鼠血清及结肠明显升高,且与反映湿热的血脂及粪便脂肪球、与反映UC程度的组织学评分均呈正相关性;黄芩汤对代谢物PGE2、LTB4及对湿热指标的调节作用优于美沙拉嗪。     

黄芩汤对溃疡性结肠炎模型小鼠NLRP3/Caspase-1通路的影响

探讨黄芩汤(HQT)对硫酸葡聚糖钠盐(dextran sulfate, DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)模型小鼠NLRP3/Caspase-1信号通路的影响。将C57BL/6J小鼠随机分为空白组,模型组(DSS组),黄芩汤低(HQT-L组)、中(HQT-M组)、高(HQT-H组)剂量组,西药美沙拉嗪组(西药组),建立小鼠UC模型。造模成功后,HQT-L组、HQT-M组、HQT-H组和西药组分别给予低、中、高剂量的黄芩汤和美沙拉嗪混悬液灌胃,空白组和DSS组分别给予等体积的蒸馏水灌胃,给药10 d后,测定各组小鼠体质量、疾病活动指数(DAI)评分、结肠组织病理学评分,采用ELISA法测定血清白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,实时荧光定量PCR(quantitative real-time, RT-qPCR)法测定结肠组织NLRP...     

外感湿热证患者Th1／Th2细胞因子水平变化的研究

目的：通过观察外感湿热证患者外周血T细胞免疫水平的变化,探讨外感湿热证的部分发病机制。方法：30例均为外感发热患者,辨证属外感湿热证者。正常对照组15例,为同时期健康志愿者。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测患者与健康者血清白介素4（IL-4）、干扰素γ（IFN-γ）水平,运用蒿芩清胆汤治疗患者3天,复测上述指标,观察蒿芩清胆汤的干预作用。结果：经蒿芩清胆汤治疗后,外感湿热组血清IFN-γ水平显著降低（P〈0．01）,INF-γ,／IL-4比值明显降低（P〈0．01）。结论：提示Th1／Th2比值失衡可能是外感湿热证发病机制之一,调整Th1／Th2失衡是蒿芩清胆汤治疗外感湿热证的机制之一。     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠外周血Treg/Th17平衡的干预作用

目的从效应T细胞活化的源头Treg/Th17入手,探讨溃结灵调节Th17和Treg的平衡转化机制,揭示溃结灵治疗溃疡性结肠炎(UC)的深层次作用机理及作用靶点。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)(25 g·L-1TNBS+50%的乙醇)诱导复制UC大鼠模型,并随机分为模型组,溃结灵高、中、低剂量组,阳性药柳氮磺胺吡啶(SASP)组,另取12只SD大鼠设为正常组。流式细胞术检测大鼠外周血中Treg细胞和Th17细胞占总CD4+T细胞百分比及计算Treg/Th17之比。结果模型组Treg/Th17之比,较正常组显著降低(P0.01),溃结灵高、中、低剂量组以及柳氮磺胺吡啶组Treg/Th17之比与模型组比较均有显著升高(P0.05,P0.01)。结论溃结灵对TNBS诱导的实验性溃疡性结肠炎大鼠有明显的治疗作用,其作用机制可能与提高外周血CD4+Foxp3+Treg细胞比例和降低CD4+IL-17A+Th17细胞比例,进而恢复机体Treg/Th17平衡有关。     

通络止痛胶囊对佐剂性关节炎大鼠Th1/Th2的调节作用

目的从分子水平研究通络止痛胶囊对佐剂性关节炎大鼠Th1/Th2的调节作用。方法按随机原则将50只Wistar大鼠分为正常组、模型组,以及通络止痛胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组10只。用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测大鼠外周血细胞因子IFN-γ和IL-4的表达情况。结果与正常组比较,模型组Th1明显升高(P<0.01)、Th2明显降低(P<0.01),Th1/Th2显著升高(P<0.01);通络止痛胶囊治疗组Th1细胞数较模型组明显降低,Th2细胞数明显升高,Th1/Th2显著降低,均以高剂量组最为显著。结论通络止痛胶囊对佐剂性关节炎大鼠外周血Th1、Th2细胞数及其比值的调节保持Th1/Th2平衡,从而起到治疗佐剂性关节炎的作用。     

中医药防治哮喘与Th1/Th2的平衡调节

支气管哮喘(简称哮喘)属世界多发病,疑难病,其发病机制目前尚不十分明确。因此,对于哮喘的防治存在一定的困难。当今的研究表明:Th1/Th2的失衡与哮喘的发病有着密切的关系,但是西医对于这一失衡问题缺乏有效的解决方法,中医药运用多途径、多环节、多靶点的治疗特点能有效解决这一问题。回顾中医药防治哮喘的相关研究,结合中医理论与西医发病机理,探讨中医药防治哮喘与Th1/Th2的平衡调节关系,以期为哮喘的防治开辟新思路与方法。     

益肺调血汤对变应性鼻炎大鼠血清Th1/Th2水平的影响

目的:观察自拟益肺调血汤对实验性变应性鼻炎(AR)大鼠血清Th1/Th2水平的影响.方法:采用二异氰酸甲苯酯(TDI)对大鼠进行实验性AR造模,50只大鼠,随机分为正常组、模型(AR)组、辛芩颗粒对照组及中药复方高、低剂量治疗组5组,每组10只.灌胃治疗2周后,处死,腹主动脉取血,检测血清中IFN-γ、IL-4水平的变化.结果:用药各组,Th1/Th2水平明显高于AR组,与正常组无明显差异.结论:益肺调血汤通过调节Th1和Th2细胞因子的表达,可纠正失衡的Th1/Th2的细胞因子网络而对AR产生治疗作用.     

溃结灵对UC大鼠结肠黏膜pERK1/2、pMEK1/2蛋白水平的影响

目的观察溃结灵对TNBS法UC大鼠模型结肠黏膜pERK1/2、pMEK1/2蛋白水平的影响,并对其作用机制进行探讨。方法采用溃结灵对TNBS法UC大鼠模型进行治疗,治疗结束后采集结肠黏膜标本并提取全细胞蛋白,运用蛋白免疫印迹(Western blot)方法对PERK1/2和PMEK1/2的蛋白表达水平进行检测,以β-actin作为内参,以目的蛋白与β-actin密度的比值作为目的蛋白的相对含量,进行组间比较分析。结果模型组pERK1/2、pMEK1/2蛋白相对表达量分别是0.3974±0.1017和0.6994±0.1372,均高于正常组(分别为0.2037±0.1234、0.4092±0.1177,P0.05,P0.01);溃结灵组相对表达量分别为0.7060±0.1607和0.8928±0.1801,明显高于模型组(P0.01,P0.05);SASP组相对表达量分别为0.7299±0.2710和0.9053±0.1591,明显高于模型组(P0.01,P0.05)。结论溃结灵对TNBS法UC大鼠模型结肠黏膜pERK1/2、pMEK1/2蛋白表达有上调作用,提示溃结灵治疗作用可能与激活ERK信号转导途径有关。     

流式微球技术检测参芪扶正注射液对化疗小鼠Th1/Th2平衡状态的影响

目的:研究参芪扶正注射液对化疗小鼠Th1/Th2平衡状态的影响。方法:57只荷瘤小鼠随机分成5组,分别为荷瘤对照组、环磷酰胺组、参芪扶正注射液高剂量组(8g·kg^-1组)、临床等效剂量组(4g·kg^-1组)和低剂量组(2g·kg^-1组)。后4组给予环磷酰胺ip2次造模。荷瘤对照组及环磷酰胺组ip生理盐水,1次/d,其他3组ip相应剂量参芪扶正注射液。9d后摘小鼠眼球取血约0.5mL进行流式微球(CBA)检测,再脱颈处死小鼠,称取肿瘤重量,计算肿瘤系数。结果:参芪扶正注射液临床等效剂量组(4g·kg^-1)可显著降低化疗小鼠的肿瘤重量和肿瘤系数(P<0.01),提高化疗小鼠的TNF-α及IL-2的浓度(P<0.01～0.05)。结论:参芪扶正注射液4g·kg^-1可诱导化疗小鼠的Th1/Th2平衡向Th1细胞占优势的方向转化。     

尖锐湿疣中医证型与Th1/Th2细胞因子水平的关系研究

目的探讨尖锐湿疣(CA)患者不同中医证型与Th1/Th2细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10mRNA表达的相关性,为CA的客观化、微观化中医辨证分型提供理论依据。方法将CA患者随机分为Ⅰ型-湿热蕴结型(24例)和Ⅱ型-正虚邪恋型(18例),采用RT-PCR法检测两组患者外周血单个核细胞IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10mRNA表达水平,并与20例正常健康者作对照。结果湿热蕴结型患者Th1型细胞因子IFN-γmRNA表达增强,正虚邪恋型患者Th2型细胞因子IL-4mRNA表达增强(P<0.05)。结论CA患者存在Th1/Th2型细胞因子失衡现象。正虚邪恋型患者存在Th2漂移现象。根据CA患者机体的Th细胞亚群漂移状况,结合辨证分型论治,也许疗效更好。