益气化瘀补肾法对退变颈椎间盘II型胶原mRNA表达的影响

目的：益气化瘀补肾法对爱变颈椎间盘II型胶原mRNA表达的影响。方法：健康成年新西兰大白兔42只,随机分均分为益气化瘀补肾组,益气化瘀组,补肾组,消炎组,模型对照组,正常对照组。建立颈椎闰椎间盘退变模型,原位杂交后病理图像分析,结果：正常对照组髓核组中II型胶原m RNA表达的量显著高于模型对照组和湖炎痛治疗组（P＜0．01）,与益气化瘀化,补肾组相比较也有显著差异（P＜0．05）,益气化阏补肾法与举气化瘀法,单纯补肾法比较有显显著差异（P＜0．05）,与消炎痛组,模型组比较有非常显著差异（P＜0．01）,益气化瘀法,补肾法对髓核组织中II型胶原mRNAR的表达有一定的增强作用,结论：颈椎病家兔椎间盘的II型胶原mRNA表达比正常组显著降低,益气化瘀化法可以上调II型胶原mRNA基因的表达,使之维持在正常范围,说明益气化瘀补肾法对延缓椎间盘的退变有积极作用。     

大鼠中药血清对骨关节炎患者膝关节软骨细胞胶原和金属蛋白酶mRNA表达的影响

目的:观察祛痰除湿剂对原代培养骨关节炎(OA)患者的膝关节软骨细胞中Ⅱ型胶原、X型胶原和相关代谢酶MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA表达的影响,探讨祛痰除湿剂治疗骨关节炎的作用及其机制.方法:原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验.关节软骨细胞经含药血清作用72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)、Ⅹ型胶原(Col Ⅹ)、基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13的mRNA表达.结果:OA患者膝关节软骨细胞经祛痰除湿剂含药血清作用后Col Ⅱ mRNA表达明显高于仅使用胎牛血清培养的空白对照组,经10％祛痰除湿剂含药血清作用后Col Ⅹ及MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA表达均明显低于空白对照组.结论:祛痰除湿剂可调节OA患者关节软骨中胶原及相关金属蛋白酶(MMPs)的mRNA表达,从而对退变的软骨细胞有一定的修复作用并可延缓关节软骨细胞的进一步退变.     

益气化瘀补肾法对退变颈椎间盘Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的益气化瘀补肾法对退变颈椎间盘Ⅱ型胶原mRNA表达的影响。方法健康成年新西兰大白兔42只,随机平均分为益气化瘀补肾组、益气化瘀组、补肾组、消炎组、模型对照组、正常对照组。建立颈椎病椎间盘退变模型,原位杂交后病理图像分析。结果正常对照组髓核组织中Ⅱ型胶原mRNA表达的量显著高于模型对照组和消炎痛治疗组（P<0.01）,与益气化瘀组、补肾组相比较也有显著差异(P<0.05);益气化瘀补肾法与益气化瘀法、单纯补肾法比较有较显著差异(P<0.05),与消炎痛组、模型组比较有非常显著差异(P<0.01);益气化瘀法、补肾法对髓核组织中Ⅱ型胶原mRNA的表达有一定的增强作用。结论颈椎病家兔椎间盘的Ⅱ型胶原mRNA表达比正常组显著降低,益气化瘀补肾法可以上调Ⅱ型胶原mRNA基因的表达,使之维持在正常范围,说明益气化瘀补肾法对延缓椎间盘的退变有积极作用。     

益气化瘀补肾法对颈椎病动物椎间盘病理变化与Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的 :观察益气化瘀补肾法对颈椎病动物退变椎间盘病理变化及髓核Ⅱ型胶原mRNA表达的影响。方法 :把健康成年新西兰大白兔随机分为益气化瘀补肾组、消炎痛组、模型对照组和正常对照组 ,运用静力平衡失调颈椎病动物模型 ,造成动物椎间盘的退变 ,然后分别喂以相应药物或医用淀粉胶囊 ,观察24周后 ,取颈6/7椎间盘 ,用HE染色法观测椎间盘组织病理变化 ,用生物素标记原位杂交法观测椎间盘髓核组织内细胞Ⅱ型胶原mRNA的表达 ,并运用图像分析仪对其进行数据转换 ,采用SPSS统计软件分析。结果 :益气化瘀补肾法对退变椎间盘病理变化的影响不显著 ,但对椎间盘髓核组织内Ⅱ型胶原mRNA表达的影响有显著作用。结论 :益气化瘀补肾法对颈椎病动物退变椎间盘髓核组织胶原的形成过程的环节有正面影响。     

扶正化瘀胶囊对心肌梗死后心肌纤维化大鼠细胞外基质代谢的影响

目的探讨扶正化瘀胶囊治疗心肌梗死后心肌纤维化的可能作用机制。方法 24只大鼠随机分为模型组、扶正化瘀组、卡托普利组、假手术组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎术制备大鼠心肌梗死模型。造模后扶正化瘀组给予扶正化瘀胶囊0.4 g/(kg·d)灌胃,卡托普利组给予卡托普利2.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组均给予等体积的去离子水灌胃,各组均每日1次,连续8周。采用天狼星红染色检测心肌胶原分数(CVF),免疫组化、实时荧光定量PCR法分别检测Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)蛋白及mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠CVF、MMP-2/TIMP-2及Ⅰ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,扶正化瘀胶囊组、卡托普利组CVF、MMP-2/TIMP-2及Ⅰ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白及mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。与卡托普利组比较,扶正化瘀组CVF、TIMP-1蛋白表达升高,TIMP-1 mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论扶正化瘀胶囊能改善大鼠心肌梗死后心肌纤维化,其机制可能与调控MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白和mRNA表达及MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1有关。     

祛瘀生肌中药对大鼠正常创面肉芽组织中Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶表达的影响

目的探讨祛瘀生肌中药对大鼠正常创面肉芽组织影响的差异。方法以120只大鼠皮肤全层缺损创面为模型,采用免疫组化和图像分析相结合的方法,观察生肌化瘀方及其拆方生肌方和化瘀方对创面修复不同时期肉芽组织中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase-1,MMP-1）和Ⅰ型胶原变化的影响。结果正常组工型胶原表达水平明显延迟,MMP-1水平在创伤后3～11天里呈阶梯式增高;生肌方早期可以促进创面Ⅰ型胶原及MMP-1分泌,从创伤后3～11天一直维持在较高水平;化瘀方组MMP-1表达在前7天保持较高水平,与生肌方组比较差异有显著性（P〈0．05）,创伤后11天降低,显著低于正常组和生肌方组（P〈0．05）;生肌化瘀方小剂量组促进I型胶原分泌有两个高峰时期,即创伤后7天和15天,与正常组比较差异有显著性（P〈0．05）;生肌化瘀方大剂量组在11天时MMP-1表达显著降低,明显低于正常组（P〈0．05）。结论祛瘀生肌中药对实验性创面新生肉芽组织中I型胶原及MMP-1表达的影响,可能是在创面愈合的过程中,通过抑制MMP-1的分泌,从而使创面I型胶原的分泌增加,起到促进创面愈合的作用。     

补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1/TIMP-1活性的影响

目的:研究补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1/TIMP-1活性的影响,探讨其防治肝纤维化的作用机制。方法:建立Wistar大鼠CCL4损伤性肝纤维化模型,通过免疫组化及图像分析等方法,观察补肾化瘀方对肝组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及MMP-1/TIMP-1表达的影响。结果:经补肾化瘀方治疗后,用药组肝细胞变性程度和纤维化程度明显减轻;Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达明显降低(P<0.05);MMP-1含量明显增加,TIMP-1含量降低,MMP-1/TIMP-1比值显著增加,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:补肾化瘀方可能通过增加MMP-1的产生、减少TIMP-1的分泌而使其对MMP-1的抑制作用减弱,促进了Ⅰ型及Ⅲ型胶原的降解,起到抗纤维化的作用。     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏MMP-1mRNA及TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响,探讨其防治肝纤维化的作用.方法采用250mL/L四氯化碳给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型,并同时给与秋水仙碱及抗纤软肝颗粒小、大剂量治疗,免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、ⅢⅡ型胶原,原位杂交的方法检测MMP-lmRNA、TIMP-1mRNA.结果抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P＜0.05),抑制TIMP-1的表达(P＜0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P＜0.01).结论抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用.     

扶正化瘀方对大鼠肾间质纤维化肾组织基质金属蛋白酶活性调节的作用

目的:探讨扶正化瘀方影响肾间质纤维化大鼠肾组织基质金属蛋白酶(MMPs)活性调节的抗肾纤维化作用机制。方法:大鼠分为正常组、模型组与扶正化瘀方组,以氯化汞灌胃诱导大鼠肾间质纤维化模型,扶正化瘀方组以4g/kg扶正化瘀方灌胃。生化检测血清肾功能、肾组织羟脯氨酸(Hyp)含量;病理染色观察肾组织病理形态改变;蛋白印迹法分析肾组织MMP-13、MMP-2、膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1/2)蛋白表达;明胶酶谱法测定MMP-2活性;荧光底物反应法检测MMP-13活性。结果:与模型组比较,扶正化瘀方组明显改善大鼠血清肾功能指标,降低肾组织Hyp含量,减轻肾组织胶原沉积,降低大鼠肾组织的MMP-2、MT1-MMP、TIMP-1/2蛋白表达,降低MMP-2活性,但增加MMP-13活性。结论:扶正化瘀方抗肾间质纤维化的作用机制在于:抑制MMP-2活性,保护肾组织基底膜;抑制TIMP-1表达,提高MMP-13活性与促进病理沉积间质性胶原的降解。     

枳棋子提取物对实验大鼠肝组织中TIMP-1与MMP-13表达的影响

目的：探讨枳棋子提取物对实验大鼠肝组织基质金属蛋白酶-13（MMP-13）与金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。方法：SD大鼠48只，随机分为2组：正常对照组（16只）与模型组（32只），用四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型，共造模6周，6周末各组分别处死大鼠8只，取肝脏进行HE染色；模型组大鼠随机分为3组：自然恢复组、对照组和给药组，于12周末处死各组大鼠，取肝脏，运用半定量逆转录聚合酶链反应（砌：PCR）检测肝组织中MMP-13 mRNA与TIMP-1 mRNA的表达。结果：MMP-13 mRNA的表达在各组之间并无显著性差异，而TIMP-1 mRNA在各组之间有显著性差异，与正常组相比，自然恢复组大鼠肝组织TIMP-1 mRNA显著升高（P〈0．05），而与自然恢复组相比，对照组和给药组大鼠肝组织TIMP-1 mRNA的表达显著降低（P〈0．05），其中给药组TIMP-1 mRNA比对照组显著降低（P〈0．05）。结论：枳棋子提取物逆转肝纤维化的机制可能是减少肝纤维化大鼠肝脏中TIMP-1 mRNA的表达．逐渐恢复肝脏胶原降解系统。从而逆转肝纤维化。     

电针对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞外基质胶原和代谢酶活动的影响

目的:观察电针"大椎"穴对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞外基质(ECM)及胞内Ⅱ型胶原(COL-Ⅱ)、V型胶原(COL-V)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)的影响,探讨电针治疗颈椎间盘退变的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和莫比可组,每组7只。建立动静力失衡性颈椎间盘退变大鼠模型。电针组取"大椎"穴,每次治疗30min,每天1次,14d为1个疗程,疗程之间间隔2d,共治疗2个疗程;莫比可组给予莫比可片每日0.75mg/kg灌胃治疗,共治30d。采用免疫组化法检测椎间盘中ECM、COL-Ⅱ、COL-V、MMP-13、TIMP-1的表达。结果:模型组ECM、COL-Ⅱ较假手术组明显减少(P<0.01),COL-V、MMP-13较假手术组明显增多(P<0.01,P<0.05);电针组、莫比可组ECM、COL-Ⅱ较模型组增多(P<0.01),COL-V、MMP-13较模型组减少(P<0.01,P<0.05);各组TIMP-1均无明显变化(P>0.05)。结论:电针"大椎"穴治疗颈椎间盘退变的机制可能与调控椎间盘细胞外基质系统有关。     

针刀松解颈周腧穴对大鼠退变颈椎间盘细胞外基质金属蛋白酶-1、3及其抑制因子-1基因表达的影响与髓核超微结构观察

目的:通过观察针刀松解颈周腧穴对大鼠退变颈椎间盘细胞外基质金属蛋白酶-1、3(MMP-1、MMP-3)及其抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的影响及髓核超微结构,探讨其缓解颈椎间盘退变的作用机制。方法:参照动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变造模方法,将造模成功大鼠随机分为模型组、颈周腧穴组、夹脊穴组、药物组,并设空白对照组,每组15只。夹脊穴组取C2-7椎旁夹脊穴,颈周腧穴组取颈周的双"脑空"穴、"脑户"穴、"大椎"穴、双"曲垣"穴、双"天宗"穴,进行针刀干预,每5d治疗1次,各治疗3次;药物组采用布洛芬胶囊+颈复康颗粒灌胃,每天1次,治疗10d。各组继续喂养20d后处死采集标本,用定量多聚酶链反应检测大鼠颈椎间盘MMP-1、MMP-3及TIMP-1的基因表达,并在电镜下行髓核超微结构观察。结果:MMP-1、MMP-3的基因表达检测,模型组高于空白组(P0.05),颈周腧穴组、夹脊穴组、药物组低于模型组(P0.05),颈周腧穴组、夹脊穴组低于药物组(P0.05);TIMP-1的基因表达检测,模型组低于空白组(P0.05),颈周腧穴组、夹脊穴组高于模型组及药物组(P0.05)。髓核超微结构观察:椎间盘髓核退变程度为空白组颈周腧穴组/夹脊穴组药物组模型组。结论:针刀松解颈周腧穴可通过调控MMP-1、MMP-3及TIMP-1的基因表达,影响椎间盘细胞外基质的合成和降解,从而延缓椎间盘退变。     

针刺颈夹脊穴对大鼠退变颈椎间盘细胞外基质金属蛋白酶1、3和金属蛋白酶抑制因子1的影响

目的:观察针刺颈夹脊穴对大鼠退变颈椎间盘细胞外基质金属蛋白酶1、3(MMP-1、MMP-3)和金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)的影响,探讨针刺治疗椎间盘退变的作用机制。方法:建立大鼠动静力失衡性颈椎间盘退变模型,随机分为模型组、针刺组、药物组,并设空白对照组。针刺组取颈部夹脊穴,药物组采用布洛芬加颈复康灌胃。治疗30d后,采用ELISA技术检测颈椎间盘MMP-1、MMP-3、TIMP-1的含量,并以光镜下椎间盘组织形态学退变为对比依据。结果:针刺和药物治疗组椎间盘较模型组形态稍规则,纤维环排列稍整齐,髓核皱缩轻;促进椎间盘胶原分解的MMP-1、MMP-3组间比较,各造模组较空白对照组明显增多(P<0.05),针刺组和药物组比模型组减少(P<0.05);TIMP-1组间比较,各造模组较空白对照组明显减少(P<0.05),针刺组比模型组增多(P<0.05),其它组间比较的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺颈夹脊穴可能通过调控椎间盘细胞外基质系统而达到治疗椎间盘退变性颈椎病的作用。     

Effect of electro-acupuncture on matrix metalloproteinase in degenerated cervical intervertebral disc of rats

To observe the effect of electro-acupuncture on matrix metalloproteinase in degenerated cervical intervertebral disc rats.MethodsThe rat model of cervical intervertebral disc degeneration was induced by unbalanced dynamic and static forces,then the rats were randomly allocated to model group,electro-acupuncture groupⅠ(acupoints Dazhu(BL 11) and Tianzhu(BL 10) were electro-acupunctured),and electro-acupuncture group Ⅱ(acupoints Dazhu (BL 11),Tianzhu(BL 10)and Shenshu(BL 23) were electro-acupunctured),with the normal rats as control.then the HE staining method was adopted to observe the morphological change of cervical intervertebral disc and the immunohistochemical staining method was used to detect the marx metalloproteinases-1(MMP-1) and matrix metalloproteinases-3(MMP-3) in cervical intervertebral disc.ResultsThe morphological observation showed that after electro-acupuncture treatment,the degrees of cervical intervertebral disc degeneration in electro-acupuncture groupⅠand electro-acupuncture group Ⅱ were alleviated,and the electro-acupuncture group Ⅱ was superior to electro-acupuncture group Ⅰ.The expressions of MMP-1 and MMP-3 in degenerated cervical intervertebral disc were increased(P＜0.01),and after electro-acupuncture treatment,the expressions of MMP-1 and MMP-3 in degenerated cervical intervertebral disc were decreased,especially the electro-acupuncture group Ⅱpresented the better effect as compared with electro-acupuncture group Ⅰ(P＜0.05).ConclusionsElectro-acupuncture at acupoints Dazhu (BL 11) and Tianzhu (BL 10) had a certain therapeutic effect on cervical intervertebral disc degeneration,and in combination with acupoint Shenshu(BL 23),this therapeutic effect could be enhanced,its action mechanism might be that electro-acupuncture can reduce the expressions of MMP-l and MMP-3 in degenerated cervical intervertebral disc,inhibit the degradation of matrix in intervertebral disc.so as to relieve cervical intervertebral disc degeneration.     

三七、绞股蓝对动脉粥样硬化模型家兔主动脉基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响

目的观察三七、绞股蓝及其总皂苷对动脉粥样硬化模型家兔主动脉基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响,并从基因水平探讨其作用机制。方法40只新西兰兔随机分为5组,即三七绞股蓝饮片组、三七绞股蓝总皂苷组、阳性药物组、模型组与正常对照组,以高脂饲料和免疫损伤联合复制动脉粥样硬化模型,各药物组在造模的同时预防给药,12周后检测各组实验兔血清脂质水平,观察兔主动脉病理学变化,RT-PCR检测主动脉壁基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）表达水平。结果模型组的血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量均明显高于正常对照组（P〈0.01）,三七绞股蓝饮片组的TC明显低于模型组（P〈0.05）,三七绞股蓝总皂苷组的TG明显低于模型组（P〈0.05）。各药物预防组的主动脉病理形态学变化与模型组比较有明显差异（P〈0.01,P〈0.05）。与正常对照组比较,模型组的主动脉组织MMP-9mRNA的表达明显增强,TIMP-1mRNA的表达明显减弱。与模型组比较,三七绞股蓝饮片组、皂苷组的MMP-9mRNA表达量水平均降低,TIMP-1mRNA的表达明显增加。结论三七绞股蓝配伍可调节MMP-9/TIMP-1mRNA的表达,降低血脂水平,具有抗动脉粥样硬化作用,下调主动脉组织MMP-9mRNA的表达,上调TIMP-1mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

猪血清肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响

目的:研究免疫性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响,探讨下瘀血汤抗肝纤维化的机制。方法:猪血清腹腔复制大鼠肝纤维化模型,造模8周后ig下瘀血汤的流浸膏,用药4周后和在造模过程中的1、24、、8周动态处死大鼠,获取标本,检测指标。结果:MMP-2/9的高活性和TIMP-1的高表达贯穿于本模型的始终。MMP-9/13蛋白表达在肝纤维化发生发展过程中有先抑制后升高,再次抑制而后升高的反复过程,并受TIMP-1/2表达影响;下瘀血汤可以提高MMP-9活性,促进MMP-9/13而抑制TIMP-1,2表达。结论:该模型有MMP-9/13和TIMP-1/2表达的失衡;下瘀血汤可通过调控MMp-9/13和TIMP-1/2的表达,降解过度沉积的细胞外基质而发挥抗肝纤维化的作用。     

三七总皂苷对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-13及其抑制因子-1表达的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶(MMP)-13、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1表达的影响,探讨PNS抗肝纤维化作用的可能机制.方法:将大鼠随机分成正常组、模型组、PNS低、中、高剂量(50,100,200 mg·kg-1)组和秋水仙碱(Col,0.1mg·kg-1)组.除正常组外其余各组采用CCl4皮下注射的方法诱导肝纤维化大鼠模型,每周2次,连续18周.于造模第9周起,给药组分别灌胃相应的受试药物,正常组和模型组灌胃等容量的生理盐水,疗程10周.实验结束后,计算肝脏、脾脏指数;比色法测定血清中ALT,AST含量;同时取固定部位肝脏组织,HE染色观察肝组织病理学改变,免疫组化技术测定肝组织中MMP-13,TIMP-1蛋白的表达,RT-PCR技术测定MMP-13,TIMP-1mRNA的表达.结果:与模型组相比,三七总皂苷(100,200 mg·kg-1)不仅可减轻大鼠肝纤维化程度,降低肝脏、脾脏指数及血清ALT,AST的含量,还可显著升高肝纤维化大鼠肝脏MMP-13的表达,降低TIMP-1的表达.结论:三七总皂苷对大鼠肝纤维化具有一定的保护作用,其机制可能与上调MMP-13,抑制TIMP-1的表达,促进胶原降解有关.     

清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶的调控作用

目的 通过观察清肝活血方及其拆方对酒精性纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2、9( MMP-2,9)和1型基质金属蛋白酶抑制物( TIMP-1)的调控作用,探讨清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝纤维化的作用机制.方法 雄性SD大鼠随机分为空白对照组、CCl4组(各10只)和造模组(110只).造模组用白酒为主的复合因素进行干预.8周后造模组随机分为模型组(25只)、清肝活血方组、清肝方组及活血方组各15只,在实验第4、8、10周各取8只模型大鼠做病理分析以监测模型进展,余大鼠在造模中死亡.各治疗组分别加用相应药物灌胃,分别为4.75、1.50、3.25 g/kg.12周末处死大鼠,采用蛋白印迹法、荧光定量PCR、免疫荧光法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白及mRNA表达.结果 与空白对照组比较,模型组MMP-2、MMP-9、TIMP-1表达明显升高(1.81±0.28vs.0.53 ±0.04,1.60 ±0.16vs.0.45±0.05,1.20±0.02vs.0.35±0.07,P＜0.01).与模型组比较,清肝活血方及其拆方组TIMP-1表达均降低(0.56±0.05、0.67±0.02、0.70±0.02vs.1.20±0.02),MMP-2、MMP-9表达提高(4.18±0.53、2.70±0.40、2.38±0.22vs.1.81±0.28;3.31 ±0.06、2.56±0.20、1.87±0.05vs.1.60±0.16,P＜0.05,P＜0.01),全方组调控优于各拆方组(P＜0.05,P＜0.01).结论 清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝纤维化的作用机制可能与调控MMP-2、9有关.     

阿魏酸对血管内皮细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响

目的研究单体阿魏酸对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移的影响,并探讨相关机制。方法体外培养VSMCs,在血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导条件下,用单体阿魏酸进行干预,划痕实验、侵袭实验检测对VSMCs迁移的影响;PT-PCR检测对基质金属蛋白酶(matrix metal loproleinase,MMP)-2、MMP-9mRNA表达的影响;Western blot法检测对金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)-1、TIMP-2蛋白表达的影响。结果 (1)在VEGF诱导条件下,阿魏酸102、103ng/mL可抑制VSMCs的迁移;(2)阿魏酸102、103ng/mL可下调VEGF诱导的VSMCs MMP-9mRNA的表达;(3)阿魏酸102、103ng/mL均可上调VEGF诱导的VSMCs TIMP-2蛋白的表达。结论阿魏酸102、103ng/mL均可抑制VEGF诱导的VSMCs迁移,阿魏酸可通过抑制VEGF诱导的VSMCs MMP-9的表达,促进VEGF诱导的VSMCs TIMP-2的表达起到抑制VEGF诱导的VSMCs迁移的作用。     

“夹脊”电针对兔退变腰椎间盘组织中基质金属蛋白酶13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1表达的影响

目的:研究"夹脊"电针对兔退变的腰椎间盘中基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响,探讨夹脊电针治疗腰椎间盘退行性病变的作用机制。方法:36只清洁级成年新西兰大白兔随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组,每组9只。采用克氏针横穿椎体后椎体间加压法复制椎间盘退变模型。电针组针刺L 4、L 5"夹脊"穴28d。各组于第1、28、56天应用Western blot方法检测椎间盘组织中MMP-13蛋白的表达,免疫荧光技术检测椎间盘组织中TIMP-1蛋白的表达。结果:建立模型后,MMP-13蛋白表达增强(P0.01);电针进行干预后可降低MMP-13的表达(P0.01)。TIMP-1在荧光激发下,胞质清晰,可见红色荧光,其中各组第1天和正常组、假手术组的第28、56天均呈现强阳性,模型组第56天阳性细胞最少、红色荧光最弱(P0.01),而电针组在第56天阳性细胞升高(P0.01)。结论:电针"夹脊"穴可以通过降低椎间盘组织中MMP-13和增强TIMP-1的表达,纠正基质合成与分解代谢失衡,达到防治椎间盘退变的效果。