姜黄素抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的研究姜黄素对人乳腺癌细胞株BT549细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法取对数生长期BT549细胞,制成单细胞悬液,计数并接种于96孔培养板,每孔约5 000个细胞,24 h后加浓度分别为0,10,20,40,80μmol/L的姜黄素,培养12,24,48 h后采用MTT实验检测BT549细胞增殖抑制率;分别用0,10,20,40,80μmol/L姜黄素处理细胞,48h后采用TUNEL染色法检测细胞凋亡指数;分别用0,10,20,40,80μmol/L姜黄素处理细胞,48 h后采用Western blot实验检测细胞增殖、凋亡相关蛋白的表达量。结果 MTT结果显示,随培养时间延长,姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组BT549细胞增殖抑制率逐渐增高(P均0.05),且同时间点内姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组细胞增殖抑制率随剂量增加逐渐增高(P均0.05)。TUNEL染色结果显示,姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组BT549细胞凋亡指数随剂量增加逐渐增加(P均0.05)。Western blot实验结果显示,随着姜黄素浓度的增加,总蛋白中β-catenin的表达不受影响(P0.05),而细胞核中β-catenin的表达逐渐减少(P0.05)。结论姜黄素通过Wnt/β-catenin信号传导通路抑制乳腺癌细胞株BT549细胞的增殖和诱导其凋亡,并呈现时间、剂量依赖性。     

山柰酚对人口腔癌KB细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨山柰酚对人口腔癌KB细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:将对数生长期的人口腔癌KB细胞分为对照组及25、50、100、200μmol/L山柰酚处理组;采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,real-time q PCR法检测Bcl-2及Bax基因表达,Caspase-3试剂盒检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达。结果:山柰酚对人口腔癌KB细胞的增殖有明显的抑制作用;与对照组比较,山柰酚各浓度组细胞凋亡率、Bax mRNA表达、Caspase-3活性均显著升高,Bcl-2 mRNA及β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达均显著降低(P0.05或P0.01)。结论:山柰酚具有抑制人口腔癌KB细胞增殖及诱导凋亡作用,该作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

清胰化积方下调Ski表达抗胰腺癌生长实验研究

目的探讨清胰化积方(Qingyi Huaji Formula,QYHJ)是否通过下调Ski表达抑制胰腺肿瘤的生长。方法采用Real-time PCR和Western blot对QYHJ治疗后21天人胰腺癌裸小鼠皮下移植瘤Ski mRNA和蛋白表达进行检测;通过慢病毒介导的RNA干扰技术建立Ski低表达人胰腺癌细胞系,并通过建立裸小鼠皮下移植瘤,评价Ski不同表达肿瘤对QYHJ治疗反应性是否存在差异。结果 QYHJ治疗后,人胰腺癌SW1990皮下移植瘤Ski mRNA和蛋白表达与未用QYHJ治疗组比较分别下降了39.6%和41.3%(均P0.05);建立了Ski低表达SW1990细胞系(SW1990/Ski RNAi)和阴性干扰细胞系(SW1990/con RNAi),其Ski mRNA和蛋白表达量分别是亲代细胞的105%、123%和46%、30%(均P0.05);SW1990细胞和SW1990/con RNAi细胞皮下移植瘤应用QYHJ治疗后其瘤重抑制率分别为29.6%和32.2%,但SW1990/RNAi细胞组其瘤重抑制率为16.0%～17.8%(均P0.05)。结论 Ski下调增加了人胰腺癌细胞对QYHJ治疗的敏感性,Ski为QYHJ治疗胰腺癌一个重要作用靶点,其不同表达介导了胰腺癌细胞对QYHJ治疗的反应性差异。     

紫草素对宫颈癌细胞株Caski侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨紫草素对宫颈癌细胞株Caski细胞侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制情况;采用Transwell小室侵袭迁移实验检测Caski细胞侵袭迁移情况;采用qPCR方法检测Caski细胞GSK-3β、Wnt2B表达情况;采用Western bloting方法检测Caski细胞β-Catenin、p-β-Catenin蛋白含量。结果:紫草素可抑制Caski细胞的增殖,具有时间-浓度依赖性,并可抑制细胞的侵袭迁移,增加Caski细胞GSK-3β mRNA和p-β-Catenin蛋白的表达量,减少Caski细胞Wnt mRNA和β-Catenin蛋白的表达量。结论:紫草素可能通过抑制Caski细胞Wnt/β-Catenin信号通路抑制Caski细胞的侵袭迁移。     

姜黄素对人口腔黏膜上皮细胞系增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探究姜黄素对人口腔黏膜上皮细胞系增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:取生长至对数期的人口腔上皮癌Ca9-22细胞,分为对照组及5 μmol/L姜黄素处理组、10 μmol/L姜黄素处理组、20 μmol/L姜黄素处理组、40 μmol/L姜黄素处理组,分别于处理24、48、72 h后采用MTT法检测细胞存活率,采用流式细胞仪检测不同浓度姜黄素对Ca9-22细胞凋亡的影响,Caspase-3、Caspase-9活性检测试剂盒检测Caspase-3、Caspase-9活性,免疫印迹法检测β-catenin、C-myc、Wnt1、Bcl-2及Bax表达。结果:与对照组比较,不同浓度姜黄素均对人口腔上皮癌Ca9-22细胞的增殖有一定抑制作用,且与浓度、时间有关。5 μmol/L姜黄素处理组、10 μmol/L姜黄素处理组、20 μmol/L姜黄素处理组、40 μmol/L姜黄素组处理48 h后,细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9活性及Bax mRNA表达均高于对照组,Bcl-2 mRNA及β-catenin、C-myc、Wnt1表达低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:姜黄素可抑制人口腔上皮癌Ca9-22细胞增殖并诱导Ca9-22细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路的表达有关。     

冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响。方法:培养人肝癌SMMC-7721细胞,实验分为阴性对照组,冬凌草甲素低剂量组(10μmol/L),冬凌草甲素中剂量组(20μmol/L),冬凌草甲素高剂量组(40μmol/L)。MTT检测肝癌细胞存活率;流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡;RT-PCR检测肝癌细胞Wnt2、β-catenin mRNA的表达;Western Blot检测肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果:冬凌草甲素进行剂量干预后,肝癌细胞存活率显著降低(P0.05)。冬凌草甲素以20μmol/L的浓度进行干预后,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡高于阴性对照组(P0.05),冬凌草甲素浓度40μmol/L时,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡显著高于阴性对照组(P0.01)。冬凌草甲素干预肝癌细胞后,显著降低肝癌细胞内Wnt2、β-catenin mRNA的表达(P0.05)。同时,冬凌草甲素干预后,肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达也得到显著降低(P0.05)。结论:冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2/β-catenin经典通路上的Wnt2、β-catenin的表达有关。     

鳖甲-莪术药对含药血清对MCF-7人乳腺癌细胞的影响

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨鳖甲-莪术药对含药血清对乳腺癌细胞增殖的抑制作用。方法细胞悬液加入不同剂量的鳖甲含药血清、莪术含药血清、鳖甲-莪术药对含药血清孵育48、72 h后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测β-Catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白表达。结果与空白血清组比较,各含药血清组处理48、72 h均可抑制细胞增殖(P0.05,P0.01);处理48 h后,其G0/G1期细胞比例增加(P0.05,P0.01)、S期细胞比例降低(P0.05,P0.01),β-Catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白表达均降低(P0.05,P0.01)。结论各组含药血清对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用。此外,鳖甲-莪术药对抑制作用高于单独用药,其抗乳腺癌的机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的表达,下调β-catenin以及β-catenin下游靶基因cyclin D1,c-Myc蛋白表达有关。     

槲皮素通过G3BP1调控Wnt信号通路抑制宫颈癌细胞增殖

目的:探讨槲皮素通过G3BP1调控Wnt/β-Catenin通路抑制宫颈癌细胞增殖的作用机制。方法:建立SiHa细胞裸鼠皮下移植瘤模型,设置模型对照组、槲皮素25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg组,检测给药第7 d、14 d、21 d瘤体积变化,给药结束后取肿瘤组织称重,Western blot检测瘤组织中GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1(G3BP1)、β-连环蛋白(β-Catenin)水平。采用CCK-8法分析5μmol/L～320μmol/L槲皮素作用48 h对SiHa细胞增殖的抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC_(50));将25、50及100μmol/L槲皮素作用于SiHa细胞,绘制7 d生长曲线;观察细胞集落形成情况;采用Western blot法检测细胞G3BP1、β-Catenin、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、Myc原癌基因(c-Myc)蛋白表达水平;敲低或上调G3BP1的表达,观察其对抑制率以及G3BP1、β-Catenin、cyclinD1、c-Myc蛋白水平的影响。结果:槲皮素25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg组给药第14 d、21 d瘤体积明显小于模型对照组,与模型对照组比较,槲皮素50、100 mg/kg组能明显降低瘤体质量(P0.05)。25、50、100 mg/kg的槲皮素能明显下调瘤体G3BP1、β-Catenin蛋白的表达(P0.05或P0.01)。CCK-8结果显示,槲皮素对宫颈癌SiHa细胞的增殖均具有抑制作用,并伴随槲皮素浓度的增加,抑制作用明显增加,IC_(50)为(84.19±5.12)μmol/L;生长曲线提示槲皮素25、50、100μmol/L对SiHa细胞生长具有明显的抑制作用;显著抑制SiHa细胞的集落形成;与模型对照组比较,槲皮素25、50、100μmol/L可下调G3BP1、β-Catenin、cyclinD1、c-Myc蛋白表达;敲低G3BP1的表达,槲皮素50μmol/L显著增加抑制率,下调β-Catenin、cyclinD1、c-Myc蛋白表达,上调G3BP1的表达,槲皮素50μmol/L显著降低抑制率,上调β-Catenin、cyclinD1、c-Myc蛋白表达(P0.05或P0.01)。结论:槲皮素能抑制宫颈癌细胞增殖,其机制可能是通过靶向G3BP1调控Wnt/β-Catenin通路有关。     

姜黄素调控结肠癌SW480细胞skp2-p27kip通路的研究

目的：探讨姜黄素抑制结肠癌细胞增殖并促进其凋亡的分子机制。方法：通过MTT检测不同浓度姜黄素（0,7.5,15,30,60μmol/L）处理结肠癌细胞SW480后凋亡情况;通过蛋白免疫印迹方法检测不同浓度姜黄素（0,7.5,15,30,60μmol/L）处理结肠癌细胞后细胞中skp2、p27kip蛋白表达情况。结果：姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480增殖并促进其凋亡,有浓度和时间依赖;姜黄素降低了结肠癌细胞SW480中skp2蛋白的表达（P〈0.05）,而促进了p27kip蛋白的表达,有时间和剂量依赖,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480的增殖并促进其凋亡,有时间和剂量依赖,这种抗癌效应可能与干扰skp2-p27kip通路有关。     

辣椒素对胰腺癌SW1990细胞作用的研究

目的:探讨辣椒素对胰腺癌细胞株SW1990细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法:不同浓度的辣椒素(0,100,150,200,250,300μmol·L-1)作用胰腺癌SW1990细胞12,24,48 h后,CCK-8法检测胰腺癌细胞株SW1990细胞的增殖作用;辣椒素(0,150,200,250μmol·L-1)作用胰腺癌SW1990细胞24 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡细胞的比率,分光光度法检测Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3)酶活性,Western blot方法检测SW1990细胞中p38和p53蛋白水平表达。结果:辣椒素对胰腺癌细胞SW1990具有明显的生长抑制作用,并呈现时间、剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,细胞周期被阻滞在G1/G0期,细胞凋亡率随药物浓度的增加而增加;磷酸化的p38,p53蛋白的表达量增加。结论:辣椒素可通过阻滞G1/G0细胞周期和诱导凋亡抑制胰腺癌细胞SW1990的生长,其分子机制可能是通过上调p38及其下游p53的表达,并进一步激活Caspase-3,从而促进SW1990细胞发生凋亡。     

草酸铵对僵蚕抗凝作用的影响

目的：研究草酸铵对僵蚕抗凝作用的影响。方法：以凝血酶时间(TT)为指标，用添加法比较不同浓度草酸铵对僵蚕提取液和凝胶分离液抗凝作用的影响。结果：添加草酸铵浓度在1．8～21．3mg／ml范围内，对固形物含量15．8～31．6mg／ml的提取液和14．6～29．1mg／ml的凝胶分离液的TT值增加成正相关。结论：草酸铵对僵蚕提取液、凝胶分离样品的抗凝作用均有增强作用，随提取液浓度降低影响增大，而随凝胶分离液浓度增大影响增大。     

蛇床子素抗凝血作用

目的:研究蛇床子素的抗凝血作用。方法:通过测定小鼠凝血时间(CT)、大鼠的凝血酶原时间(PT)和优球蛋白溶解时间(ELT),观测蛇床子素的抗凝作用。结果:蛇床子素能显著处长CT、PT,缩短ELT。结论:蛇床子素具有明确的抗凝血作用。     

《诸病源候论》对皮肤病学的贡献

对《诸病源候论》在皮肤病方面的成就进行了较为系统的整理总结 ,该书着重讨论了皮肤病的命名、分类、病因病机 ,并阐发了《内经》“邪之所凑 ,其气必虚”理论和预防为主的思想。     

蛇床子素抗凝血作用

目的：研究蛇床子素的抗凝血作用。方法：通过测定小鼠凝血时间（CT）、大鼠的凝血酶原时间（PT）和优球蛋白溶解时间（ELT），观测蛇床子素的抗凝作用。结果：蛇床子素能显著处长CT、PT，缩短ELT。结论：蛇床子素具有明确的抗凝血作用。     

苯唑青霉素对丁胺卡那毒素药动学的影响

 采用微量微生物法对丁胺卡那霉素（AMK）单用及AMK与苯唑青霉素（OXA）合用后，兔体内AMK血药浓度进行测定；药时数据用MCPKP软件经IBM计算机处理，并对两组药动学参数进行了统计学处理，结果表明OXA对AMK的药动学有显著的影响。     

基于细胞自噬探讨左归丸对肾虚仔鼠皮肤发育的影响

目的:研究左归丸对先天肾虚仔鼠发育过程中皮肤内细胞自噬的影响及其机制,探索补肾填精法在生长发育异常中的应用价值。方法:36只雌雄比例为2∶1的大鼠进行配对,复合应激法刺激孕鼠构建先天肾虚仔鼠模型,根据将孕鼠处理方式不同,分为正常组,肾虚组,左归丸低、高剂量组(2,8 g·kg^-1)。正常组不造模给予生理盐水灌胃,肾虚组造模给予生理盐水灌胃,左归丸低、高剂量组造模给予左归丸悬浊液灌胃。切取出生后21 d仔鼠的背部皮肤,苏木素-伊红(HE)染色观察仔鼠皮肤显微结构形态,测量真皮层和表皮层厚度,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测仔鼠皮肤分泌型糖蛋白3a(Wnt3a)和β-连环蛋白(β-catenin)mRNA和蛋白表达量,免疫双荧光检测皮肤内自噬指标微管相关蛋白轻链3(LC3)和人死骨片1-泛素结合蛋白p62(SQSTM1-p62)的表达。结果:正常组仔鼠皮肤层次清楚,结构正常,肾虚组真皮层胶原排列疏松,左归丸低、高剂量组皮肤组成基本正常;与正常组比较,肾虚组仔鼠在皮肤的表皮层增厚,真皮层变薄(P<0.05);与肾虚组比较,左归丸低、高剂量组皮肤的表皮层和真皮层厚度的改变明显恢复(P<0.05)。与正常组比较,肾虚组仔鼠Wnt3a和β-catenin蛋白和mRNA表达明显下降(P<0.05);与肾虚组比较,左归丸低、高剂量组Wnt3a和β-catenin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05)。同时免疫荧光法检测发现与正常组比较,肾虚组的LC3的表达上调,SQSTM1-p62表达下调;与肾虚组比较,左归丸可以逆转SQSTM1-p62和LC3的异常表达(P<0.05)。结论:左归丸可以通过增加仔鼠皮肤内Wnt3a和β-catenin蛋白和mRNA的表达,下调皮肤细胞自噬水平,改善先天肾虚仔鼠皮肤异常发育。     

姜黄素对血管生成影响的实验研究

目的：探讨姜黄素对血管生成的影响。方法：采用MTT法检测姜黄素对牛血清促进的牛内皮细胞、人肝癌细胞SGC-7901增殖的影响；观察姜黄素对肿瘤细胞条件培养液促进的牛内皮细胞增殖的影响；采用琼脂糖刮除法检测姜黄素对牛血清及肿瘤细胞条件培养液促进的牛内皮细胞迁移的影响。结果：姜黄素能明显抑制牛内皮细胞增殖，同肿瘤细胞相比，具有显著差异；姜黄素能抑制牛血清及肿瘤细胞条件培养液促进的牛内皮细胞迁移。结论：姜黄素具有抗血管生成作用；抑制内皮细胞增殖和迁移是姜黄素抗血管生成的机理之一；同时也说明姜黄素是一种特异性血管生成抑制剂。     

中医药治疗黄褐斑现状

综述了1995－2001年中药内治、外治疗法及针灸治疗黄褐斑的特色和优势。     

大黄素对急性胰腺炎胰腺组织TGFβ1表达的影响

目的通过分析中药大黄素对大鼠急性胰腺炎治疗前后胰腺组织细胞转化因子β1(TGFβ1)的表达、DNA合成及总蛋白含量的影响，从胰腺再生角度探讨大黄素治疗急性胰腺炎的作用机制。方法以雨蛙肽(caerulein)腹腔注射诱导大鼠急性胰腺炎模型，并于大黄素治疗前后6、24、48、72及96h处死大鼠。同时应用RT-PCR技术检测治疗前后胰腺组织TGFβ1mRNA表达，同位素体外掺入法测定胰腺组织DNA合成以及Lowry′s法测定胰腺组织总蛋白含量。结果大黄素治疗后血清淀粉酶显著下降。正常胰腺组织、胰腺炎诱导后6h未见TGFβ1mRNA表达。TGFβ124h后出现表达，72h时达高峰。大黄素治疗后6h即可检测到TGFβ1mRNA表达，且24、48h时表达均较非治疗组显著增强，并于48h时达最大值。同时胰腺炎诱导后72h，胰腺组织DNA合成显著下降，大黄素治疗后96hDNA合成明显增加，胰腺炎诱导后48h胰腺组织总蛋白含量下降，大黄素治疗后96h显著增加。结论大黄素治疗急性胰腺炎的作用机制可能是通过诱导细胞因子TGFβ1基因表达增强，调控细胞增殖和分化，刺激多种细胞外基质成分合成，增加胰组织DNA合成和蛋白含量，参与胰腺细胞修复、再塑过程。     

二氢杨梅素抗脂质过氧化作用的研究

目的 :研究二氢杨梅素 (DMY)抗脂质过氧化作用。方法 :采用分光光度法测定DMY对由Fe²⁺ 维生素C(Fe²⁺ VitC)体系、Fe²⁺ 过氧化氢 (Fe²⁺ H₂O₂ )体系、Fe-半胱氨酸 (Fe²⁺ Cys)体系诱导的脂质过氧化的抑制作用。结果 :DMY能抑制离体大鼠脑、心、肝匀浆及线粒体脂质过氧化并表现出剂量依赖关系。结论 :DMY具有较好的抗脂质过氧化作用 ,具有进一步研究与开发价值。