检测原代肥大细胞组胺释放分析中药注射剂致类过敏性

目的: 通过检测组胺释放考察19种临床常用中药注射剂致大鼠腹腔原代肥大细胞脱颗粒情况,为评价中药注射剂致类过敏性提供参考。 方法: 应用荧光法检测组胺,并进行条件优化以适用于中药注射剂所致肥大细胞释放组胺的检测。分离大鼠腹腔肥大细胞,分别将19种中药注射剂、阳性药C48/80和肥大细胞混合孵育1h,采用优化的荧光法检测组胺,再计算组胺释放率并进行统计学分析。 结果: 荧光法检测组胺最佳缩合反应时间为3 min,终止反应后7.5~30 min缩合物稳定性好;采用间接检测组胺释放率与直接检测组胺释放率两方法结果间无显著差异。痰热清、清开灵、参麦、丹参、血塞通、参附、双黄连、生脉、香丹、热毒宁、复方当归等11种中药注射剂致肥大细胞释放组胺作用明显。脉络宁、黄芪、艾迪、醒脑静、黄芪多糖、红花、盐酸川芎嗪、参芪等8种注射剂未见明显致肥大细胞释放组胺作用。 结论: 中药注射剂引发的过敏样反应可能大多为类过敏,检测组胺释放分析原代肥大细胞脱颗粒试验可以为评价中药注射剂的致类过敏性提供参考。     

痛泻要方抑制致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的研究

目的观察痛泻要方对化合物48/80(C48/80)诱导的大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的影响,探讨痛泻要方对肠易激综合征的作用机制。方法应用钙离子荧光指示剂Fluo-3,通过光学显微镜和激光共聚焦荧光显微镜,观察痛泻要方对致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒百分数及肥大细胞内游离钙浓度和组胺释放的影响。结果实验组(痛泻要方组)致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒百分数为13%,对照组为41%,2组有显著性差异(P<0.05);对照组和实验组致敏大鼠腹腔肥大细胞内游离钙浓度分别为(436.16±12.30)nmol/L和(78.31±3.28)nmol/L,2组相比有显著性差异(P<0.05);对照组和实验组大鼠腹腔肥大细胞上清液组胺浓度分别为(98.41±7.23)nmol/L和(33.23±21.50)nmol/L,2组相比有显著性差异(P<0.05)。结论痛泻要方对C48/80诱导的大鼠腹腔肥大细胞的脱颗粒过程有明显的抑制作用,表明痛泻要方是通过抑制肠道肥大细胞活化,从而减少其释放组胺等递质实现治疗作用的。     

麻杏石甘汤对肥大细胞脱颗粒的影响

目的:探讨麻杏石甘汤(麻黄、杏仁、甘草、石膏)抗Ⅰ型变态反应的作用机制。方法:通过大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)实验,用比色测定法检测麻杏石甘汤在体内对Ⅰ型变态反应的影响;体外实验先制备麻杏石甘汤的含药血清,然后将其加入致敏的RBL-2H3细胞中,观察麻杏石甘汤对RBL-2H3细胞脱颗粒及其他炎性物质的影响。结果:麻杏石甘汤药物血清能明显抑制RBL-2H3细胞脱颗粒,并能抑制RBL-2H3细胞释放组胺、肿瘤坏死因子α及白细胞因子4。结论:麻杏石甘汤的抗过敏作用与抑制肥大细胞的脱颗粒及炎性物质释放有关。     

清开灵注射液诱导嗜碱性粒细胞脱颗粒致类过敏反应作用研究

目的:观察清开灵注射液诱导大鼠嗜碱性粒细胞白血病细胞株RBL-2H3细胞脱颗粒,释放组胺,探讨其诱发类过敏反应的可能机制。方法:清开灵注射液孵育RBL-2H3细胞30 min后,透射电镜观察细胞发生脱颗粒反应形态学变化,阿利新蓝染色试验、Annexin V结合试验、β-氨基己糖苷酶测定试验检测细胞脱颗粒率,ELISA检测细胞组胺释放率。结果:不同浓度清开灵注射液可诱导细胞发生典型的脱颗粒反应形态学变化,与对照组相比脱颗粒率及组胺释放率显著升高,且具有浓度依赖性。结论:清开灵注射液单次给药即可诱导RBL-2H3细胞脱颗粒,释放组胺,诱发类过敏反应,这可能是其临床首次用药即引起严重不良反应的机制之一。     

黄芩甙、枳壳抗肥大细胞脱颗粒的实验研究

肥大细胞脱颗粒,释放组织胺、慢反应物质、肝素、嗜酸性粒细胞趋化因子,与荨麻疹、支气管哮喘等过敏性反应有关,阻止肥大细胞脱颗粒就可以抑制过敏反应的发生.中药黄芩甙、枳壳等有抗过敏作用,但机理尚不清楚,本实验应用微分干涉差及透射电镜技术,观察黄芩甙、枳壳对肥大细胞脱颗粒的影响,为临床选用中药治疗过敏性疾病提供依据.     

养血清脑颗粒对偏头痛大鼠硬脑膜肥大细胞脱颗粒的影响

目的 观察养血清脑颗粒对硝酸甘油致偏头痛大鼠硬脑膜肥大细胞（MC）脱颗粒的影响.方法 将108只健康雄性Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、治疗高剂量组、治疗低剂量组、预防高剂量组及预防低剂量组,各组再随机分为30 min、60 min、180 min亚组,通过皮下注射硝酸甘油（NTG）建立偏头痛实验动物模型,用改良的甲苯胺蓝染色法对硬脑膜肥大细胞进行特染,并进行组间比较.结果 治疗高、低剂量组大鼠各时间点硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率与正常对照组相比无统计学意义（P〉0.05）,预防高/低剂量组大鼠各时间点硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率与模型对照组相比有统计学意义（P〈0.05）.结论 预防性使用养血清脑颗粒可以明显降低硬脑膜肥大细胞脱颗粒阳性率,提示养血清脑颗粒对偏头痛的预防作用可能大于治疗作用,其预防作用可能与稳定肥大细胞膜减少其脱颗粒有关.     

一种药物注射剂类过敏反应高内涵检测方法的初步建立

类过敏反应是药物注射剂最常见的不良反应,但现有检测方法尚存在诸多不足。该研究采用荧光标记和高内涵筛选技术建立了一种类过敏反应体外检测方法,应用RBL-2H3细胞脱颗粒模型,以细胞膜特异荧光染料FM4-64标记细胞脱颗粒囊泡回收来确定阳性细胞数,以细胞核特异荧光染料Hochest 3334标记细胞核来确定细胞总数,从而计算药物刺激后的细胞脱颗粒率。为了考察高内涵检测方法可靠性,首先采用阳性药物Compound 48/80验证了高内涵检测方法与传统过敏介质β-氨基己糖苷酶释放和小鼠耳廓皮肤蓝染检测方法间一致性,结果显示高内涵检测方法与传统检测方法高度一致,且灵敏度高于传统检测方法;然后采用30批次临床报告过敏症状丹红注射液进一步验证高内涵检测方法的可靠性, 结果提示高内涵检测结果与临床报告高度一致,而且高内涵方法一定程度上能够克服注射液自身颜色干扰问题。可见,类过敏反应高内涵检测方法是一种灵敏、可靠、简便且可实现高通量筛选的新方法,适用于药物注射剂类过敏反应评价,能够为临床安全用药提供指导。     

仙蓟化斑胶囊对肥大细胞脱颗粒及组胺释放影响的研究

[目的]研究仙蓟化斑胶囊抗变态反应的作用机制,为后期实验及其临床治疗过敏性紫癜提供依据。[方法]制备致敏的大鼠及抗卵蛋白血清,给予不同浓度药物,采用大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)实验,测定大鼠皮肤蓝斑直径,同时采用大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒实验、大鼠肥大细胞释放组胺实验,测定脱颗粒百分率和组胺释放水平。[结果]仙蓟化斑胶囊可使蓝斑直径变小、可降低肥大细胞脱颗粒百分率、降低其组胺释放,并呈明显的剂量依赖关系。[结论]仙蓟化斑胶囊有抗变态反应的作用,明显抑制PCA、肥大细胞脱颗粒及组胺的释放。     

Neohesperidin suppresses IgE‐mediated anaphylactic reactions and mast cell activation via Lyn‐PLC‐Ca2+ pathway

Mast cells play an essential role in IgE‐FcεR1‐mediated allergic diseases. Citrus aurantium is a prolific source of flavonoids with various biological activities, including anti‐inflammatory, antioxidant, and anti‐tumor efficacies. Neohesperidin is a novel flavonoid isolated from the leaves of C. aurantium. In this study, the anti‐allergic and anti‐inflammatory potentials of neohesperidin were investigated along with its molecular mechanism. The anti‐anaphylactic activity of neohesperidin was evaluated through hind paw extravasation study in mice. Calcium imaging was used to assess intracellular Ca²⁺ mobilization. The levels of cytokines and chemokines were measured using enzyme immunoassay kits. Western blotting was used to explore the related molecular signaling pathways. Neohesperidin suppressed IgE‐induced mast cell activations, including degranulation and secretion of cytokines and eicosanoids through inhibiting phosphorylation of Lyn kinase. Neohesperidin inhibited the release of histamine and other proinflammatory cytokines through a mast cell‐dependent passive cutaneous anaphylaxis animal model. Histological studies demonstrated that neohesperidin substantially inhibited IgE‐induced cellular infiltration and attenuated mast cell activation in skin tissue. In conclusion, our study revealed that neohesperidin could inhibit allergic responses in vivo and in vitro, and the molecule may be regarded as a novel agent for preventing mast cell‐immediate and delayed allergic diseases.     

灵芝多糖引起小鼠腹腔巨噬细胞膜超极化

用激光扫描共聚焦显微 镜（ Ｌ Ｓ Ｃ Ｍ） 技 术,动态 监测了 灵芝多 糖 Ｇ Ｌ Ｐ 均 一体组 分 Ｇ Ｌ Ｂ７ 对小 鼠腹腔巨噬细胞（ ＭΦ） 膜电位（ Ｍ Ｐ） 的影 响,结 果 Ｇ Ｌ Ｂ７ 能 引起 小 鼠腹 腔 ＭΦ 膜快 速超 极化, 最 低降 低幅 度为 ３９ ±９ ％ ,之后慢慢复极,但在１０ ｍｉｎ 内未恢复至原来水平。提示灵芝多糖引起小鼠腹腔 ＭΦ 膜超极化是其信 号跨膜转导的重要机制。     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞[Ca2+]i和细胞膜电位的影响

目的研究甜菜碱对肝癌HepG2细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)和细胞膜电位的影响。方法Fluo-3/AM标记,激光扫描共聚焦显微镜观察HepG2细胞[Ca2 ]i,TMRE标记,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞膜电位的影响。结果甜菜碱能够升高HepG2细胞[Ca2 ]i,降低细胞膜电位。升高[Ca2 ]i的强度具一定的剂量依赖性,随甜菜碱剂量的增大而升高。甜菜碱50、25mg/mL组与对照组比较差异非常显著(P<0.01),甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较差异显著(P<0.05)。给药48h时间段内细胞内的[Ca2 ]i升高的幅度较大,72h升高幅度相对较小。而降低膜电位上,在48h时间段内,甜菜碱50、25、12.5mg/mL各组膜电位均显著高于对照组(P<0.05),但在72h时间段内甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论甜菜碱通过开放细胞膜上的通透性转换孔道(MPTP),从而升高HepG2细胞[Ca2 ]i,启动细胞凋亡机制,诱导HepG2细胞凋亡。     

葛根素对外周血内皮祖细胞数量和功能的影响

目的 :观察葛根素对外周血内皮祖细胞的影响。方法 :采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞 ,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板 ,培养 7d后 ,收集贴壁细胞 ,加入不同浓度葛根素 (分别为 0.1,0.5,1,3mmol·L^-1)培养一定的时间 (6,12,24 ,48h)。通过激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞被认为是正在分化的EPC ,并在倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管生成试剂盒观察EPC的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管生成能力。结果 :葛根素显著增加外周血EPC数量 ,并且EPC数量随葛根素浓度增加及作用时间延长而增加 ,3mmol·L^-1浓度葛根素作用 24h对EPC数量的影响最为显著 (较对照组增加了 1倍 ,P<0.01)。葛根素也显著改善了外周血EPC的黏附能力、迁移能力、增殖能力和体外血管生成能力。结论 :结果提示葛根素可增加EPC的数量且伴随着EPC功能的改善。