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相似文献
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1.
目的:研究不同浓度的陇中损伤散含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法:取三月龄wistar大鼠骨髓,分离BMSCs进行原代培养,在第一次换液后分别加入2%,5%,10%的陇中损伤散含药血清,通过倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测量骨髓间充质干细胞增殖情况;偶氮偶合法进行碱性磷酸酶阳性克隆(CFU-FALP)组织化学染色,vonKossa染色法测定钙化结节数目,免疫细胞化学技术检测Ⅰ型胶原表达;于不同时间进行ALP活性及钙盐沉积量的测定。结果:陇中损伤散含药血清对BMSCs的影响呈剂量依赖性,其中以浓度为10%时作用最强。MTT结果显示陇中损伤散含药血清能明显促进BMSCs增殖;损伤散含药血清还能显著促进其成骨性分化。结论::陇中损伤散活性代谢产物能促进BMSCs的增殖和成骨性分化;陇中损伤散对骨髓间充质干细胞的这种作用可能是其促进骨折愈合、防治骨质疏松的细胞学机制之一。  相似文献   

2.
《中药材》2010,(12)
目的:研究淫羊藿苷与其主要代谢产物——淫羊藿次苷Ⅱ对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bonemarrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响。方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以5×10-5mol/L的淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对rBMSCs的成骨性分化进行药物干预,比较淫羊藿苷组、淫羊藿次苷Ⅱ组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,RTReal-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的基因表达情况。结果:淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ均可显著增强rBMSCs的ALP活性,促进钙盐沉积和骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA水平,但淫羊藿次苷Ⅱ的活性明显高于淫羊藿苷。结论:淫羊藿次苷Ⅱ促进rBMSCs成骨性分化的活性高于淫羊藿苷,提示淫羊藿苷可以通过口服途径给药,其代谢物是发挥抗骨质疏松活性的主要成分。  相似文献   

3.
目的:研究淫羊藿苷含药血清(SI)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法:以每0.25g/kg质量淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠,制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清。分别以2.5%,5%和10%3种血清浓度干预rBMSCs,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养9d后的碱性磷酸酶(ALP)活性,筛选出最佳血清浓度。以最佳血清浓度干预rBMSCs的成骨性分化,比较SI组和对照组之间的钙盐沉积量、骨钙素分泌量;提取Total RNA,RT-PCR检测IGF-1,Runx-2与Osterix mRNA的表达情况。结果:所有浓度的含药血清均能抑制rBMSCs的增殖,但可提高ALP活性。5%的SI浓度为最佳干预浓度,该浓度的含药血清可显著促进骨钙素的分泌和钙盐沉积,提高ALP活性,增强IGF-1,Runx-2与Osterix mRNA的表达。结论:淫羊藿苷经口服后的代谢产物抑制rBMSCs增殖,但可促进成骨性分化,提示淫羊藿苷可以通过口服途径给药,其代谢物是发挥抗骨质疏松活性的主要成分。  相似文献   

4.
目的:研究淫羊藿苷对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响.方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5mol·L-1的淫羊藿苷进行药物干预,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)及钙化结节数量,提取总RNA,RT Real-time PCR检测bFGF,IGF-1,Osterix(OSX),Runx-2 mRNA的表达情况.结果:1×10-5mol·L-1淫羊藿苷可提高碱性磷酸酶(ALP)活性,增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与成骨性分化相关因子bFGF,IGF-1,OSX,Runx-2 mRNA的表达.结论:淫羊藿苷可显著促进rBMSCs的成骨性分化,提示淫羊藿苷具有开发为抗骨质疏松或促进骨折愈合新药的潜力.  相似文献   

5.
目的研究3种新型红芪多糖(HPS-1、HPS-2、HPS-3)对大鼠骨髓间充质干细胞rBMSCs和颅骨成骨细胞ROBs成骨性分化的影响。方法采用MTT法检测rBMSCs细胞和ROBs细胞增殖;采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测rBMSCs细胞和ROBs细胞的ALP活性;采用茜素红染法检测rBMSCs和ROBs细胞矿化结节的形成情况。结果HPS-1(20、50μg/mL)作用48 h显著促进rBMSCs细胞增殖(P<0.05、0.01),HPS-1(20μg/mL)作用48 h显著促进ROBs细胞增殖(P<0.01);HPS-2和HPS-3对2种细胞的增殖无促进作用。HPS-1(50、100μg/mL)显著升高rBMSCs细胞的ALP活性(P<0.01),HPS-1(10、20、50μg/mL)显著升高ROBs细胞的ALP活性(P<0.05、0.01);HPS-3(50μg/mL)显著升高rBMSCs细胞的ALP活性(P<0.05),HPS-2对2种细胞ALP活性没有促进作用。HPS-1显著增加rBMSCs和ROBs细胞中钙化结节面积和数量(P<0.01),HPS-2和HPS-3对rBMSCs和ROBs细胞钙化结节的形成没有促进作用。结论HPS-1可增强rBMSCs和ROBs细胞ALP活性和成骨相关因子表达,并显著促进rBMSCs和ROBs细胞分化、矿化。  相似文献   

6.
目的:研究左归丸含药血清对间充质干细胞骨向分化过程中碱性磷酸酶含量变化的影响。方法:采用全骨髓贴壁法培养间充质干细胞,连续进行3次差速贴壁法纯化间充质干细胞。常规诱导组以β-甘油磷酸钠、地塞米松、维生素C诱导间充质干细胞骨向分化,实验组在常规诱导组基础上加以左归丸含药血清。使用茜素红染色钙结节、碱性磷酸酶染色鉴定诱导成功。分别在0,7,14,21 d用比色法检测细胞中碱性磷酸酶含量。结果:全骨髓贴壁法和差速贴壁法联合使用可得到较为均一间充质干细胞。用比色法测得碱性磷酸酶含量随着诱导时间延长而增加。结论:大鼠间充质干细胞经药物诱导后可以分化为成骨细胞。左归丸含药血清能够促使诱导过程中碱性磷酸酶含量表达增加。  相似文献   

7.
 目的 比较研究淫羊藿素和脱水淫羊藿素对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs成骨性分化的影响。方法 贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以1×10-5 mol·L-1的淫羊藿素和脱水淫羊藿素对rBMSCs的成骨性分化进行药物干预,比较淫羊藿素组、脱水淫羊藿素组以及不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP活性、ALP阳性克隆数(colonies stained positive for alkaline phosphatase,CFU-FALP、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real Time RT-PCR法检测IGF-1、Osterix和Runx-2的基因表达情况。Western-blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果 淫羊藿素可显著增强rBMSCs的ALP活性,促进钙盐沉积和骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA水平,同时也可增强Ⅰ型胶原蛋白的分泌,而脱水淫羊藿素并未表现出类似效应。结论 淫羊藿素促进rBMSCs成骨性分化的活性显著高于脱水淫羊藿素,可能是二者异戊烷链上的构型差异,导致淫羊藿素的生物活性强于脱水淫羊藿素,提示我们可以通过对药物进行化学结构的改造,增强药效,降低毒性,从而研究开发出新型抗骨质疏松药物。  相似文献   

8.
目的研究红芪中毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、异甘草素和美迪紫檀素5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)和颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROBs)成骨性分化的影响。方法贴壁分离法培养rBMSCs;酶消解法分离培养ROBs;MTT法检测rBMSCs和ROBs细胞的增殖情况;试剂盒检测rBMSCs和ROBs的碱性磷酸酶(ALP)活性和Ca~(2+)含量;茜素红染色法检测矿化结节形成。结果 5种成分均能不同程度促进rBMSCs和ROBs的增殖,提高ALP活性,增加Ca~(2+)含量,增加钙化结节面积和数量(P0.05)。其中毛蕊异黄酮促进rBMSCs的成骨分化作用最佳,美迪紫檀素促进ROBs的成骨分化作用最佳,毛蕊异黄酮次之。结论这5种黄酮类成分对rBMSCs和ROBs的成骨功能均有一定程度地改善作用,而毛蕊异黄酮对2种细胞表现的成骨活性均较佳,可发展作为良好的骨诱导活性因子。  相似文献   

9.
淫羊藿苷对rBMSCs成骨和成脂分化的影响   总被引:2,自引:2,他引:0  
目的:研究淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)成骨和成脂方向分化的影响。方法:在37℃5%CO2和饱和湿度的条件下贴壁筛选法体外培养rBMSCs。采用1×10-5mol.L-1的淫羊藿苷干预rBMSCs的成骨性分化,第3,6,9,12天进行碱性磷酸酶(ALP)活性测定,第15天进行钙化结节染色,第12,24,48,72 h提取总RNA,采用实时聚合酶链反应(Real time PCR)方法分析检测骨成型蛋白2(BMP-2)和骨特异性转录因子(Runx-2)mRNA表达水平。采用1×10-5mol.L-1的淫羊藿苷干预rBMSCs的成脂性分化,第5,10,15,20天进行甘油三酯含量的测定,第21天进行油红O染色,于12,24,48,72 h提取总RNA,采用Real Time PCR方法分析检测PPARγ和C/EBPα的mRNA表达水平。结果:淫羊藿苷显著提高了细胞中ALP的活性,增加了钙化结节数,并且升高了成骨性相关因子BMP-2和Runx-2的基因表达量。淫羊藿苷降低了细胞中甘油三酯的含量,减少了脂滴的形成,并且减弱了成脂转录因子过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和增强子结合蛋白(C/EBPα)的基因表达量。结论:淫羊藿苷对rBMSCs分化的调节有双向性,即它在促进rBMSCs成骨性分化的同时又抑制rBMSCs成脂分化。  相似文献   

10.
郭峰  王坤  张翠改 《现代中西医结合杂志》2010,19(20):2489-2490,2493
目的观察缺氧刺激对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)骨向诱导分化过程中碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法 rBMSCs骨向诱导后按不同氧浓度及不同作用时间分组,检测不同作用时间的缺氧对rBMSCs骨向诱导分化过程中ALP活性的影响。结果缺氧培养对rBMSCs骨向诱导分化中ALP活性的影响除12 h略有降低但无显著性差异外,其余各时间段均有明显抑制作用且有显著性差异(P均<0.05)。结论缺氧培养对rBMSCs骨向诱导分化过程中ALP活性有明显抑制作用,提示2%缺氧对rBMSCs骨向分化的成骨效应有抑制作用,进而促使骨改建平衡向破骨方向倾斜。  相似文献   

11.
目的:观察单味中药黄芪、丹参、淫羊藿及复方右归饮药物血清和煎剂以及雪莲花药物血清及其醇提液对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用。方法:雪莲花乙醇浸泡后定容,其他单味和复方中药水煎定容,高压灭菌。按10倍于任用剂量进行SD大鼠灌胃,心脏采血,制备血清。取大鼠股骨和肱骨,分离骨髓间充质干细胞,常规培养传代3次后,加入含药血清、煎剂及雪莲花醇提液。药物血清分为15%1、0%5、%和1%浓度,其煎剂及雪莲花醇提液浓度分为10-2、10-3、10-4、10-5,作用3天后用MTT法测定细胞活力。结果:雪莲花含药血清及其醇提液在4个浓度组均显示促进细胞增殖。结论:雪莲花具有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用。  相似文献   

12.
目的:该研究观察骨髓间充质干细胞对肝纤维化的逆转作用,了解一贯煎对该过程的作用,阐释一贯煎逆转肝纤维化的机制。方法60只雄性Sprague-Dawlay大鼠随机分为5组,即正常对照组、模型组、阳性对照组、骨髓间充质干细胞组、一贯煎加骨髓间充质干细胞组,每组12只。除正常对照组外,均建立肝纤维化恢复模型,分离、培养和标记骨髓间充质干细胞,在CCl4停止注射后3天,骨髓间充质干细胞组每只动物经尾静脉注射5×10^6 mmol/L浓度1 mol骨髓间充质干细胞;一贯煎加骨髓间充质干细胞组每只大鼠尾静脉注射等量的骨髓间充质干细胞外,给予一贯煎浓缩液2 ml/200 g灌胃,每天1次。阳性对照组给予秋水仙碱灌胃,0.25 mg/kg,每天1次。正常对照组和模型组按相同方法灌服等量生理盐水。阳性对照组、正常对照组和模型组经尾静脉注射等量生理盐水。4周后,检测各组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶等肝功能指标;通过HE染色评价肝脏炎症活动度(G)和纤维化程度(S);荧光显微镜下示踪肝组织中骨髓间充质干细胞。结果(1)骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组较模型组和阳性组在改善肝功能、减轻炎症、逆转肝纤维化的作用较好,P〈0.05。一贯煎加骨髓间充质干细胞组较骨髓间充质干细胞组在改善肝功能、逆转纤维化的作用更明显,P〈0.05。(2)骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组骨髓间充质干细胞在肝脏分布面积较模型组增大,P〈0.05;一贯煎加骨髓间充质干细胞组较其他组差异显著,P〈0.05。结论骨髓间充质干细胞具有逆转肝纤维化的作用,一贯煎对该过程具有促进作用;一贯煎能够促进骨髓间充质干细胞募集到肝脏,从而发挥逆转肝纤维化的作用。  相似文献   

13.
目的:研究金匮肾气丸含药血清对体外兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)增殖,细胞周期及凋亡的影响。方法:使用全骨髓贴壁法分离兔BMSCs,通过MTT法检测金匮肾气丸含药血清对BMSCs活性的影响,通过流式细胞仪(Fow Cytometry FCM)检测金匮肾气丸含药血清对地塞米松(dexamethasone DEX)诱导的BMSCs的凋亡率和细胞周期的影响。结果:金匮肾气丸各组光吸收值(OD)高于空白对照组。金匮肾气丸各组与模型组比较,Go/G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例升高,凋亡率降低,并呈一定的量效依赖关系。结论:金匮肾气丸含药血清体外能够提高兔BMSCs的活性,促进G0/G1期的BMSCs向S期和G2/M期转化,促进BMSCs的增殖,降低地塞米松所致的兔BMSCs的凋亡率。  相似文献   

14.
探讨松果菊苷含药血清促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用及可能的机制。采用全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分为3组:空白对照组、经典成骨诱导组、10%松果菊苷含药血清组。ELISA测定碱性磷酸酶和骨钙素的表达;免疫荧光和Western blot检测ZHX3蛋白的表达,RT-PCR检测ZHX3 mRNA的表达。结果显示,经典成骨诱导组和10%松果菊苷含药血清组的碱性磷酸酶和骨钙素表达明显增强,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);10%松果菊苷含药血清组的碱性磷酸酶和骨钙素表达与经典成骨诱导组比较明显增强,有显著性差异(P<0.01)。经典成骨诱导组和10%松果菊苷含药血清组的ZHX3蛋白及mRNA表达明显增强,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);10%松果菊苷含药血清组的ZHX3蛋白及mRNA表达与经典成骨诱导组比较明显增强,有显著性差异(P<0.01)。10%松果菊苷含药血清可以促进体外培养的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,其作用机制与ZHX3表达增加有关。  相似文献   

15.
目的:通过研究生脉成骨胶囊对激素性股骨头缺血性坏死的股骨和髂骨的间充质细胞的碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)的变化,探讨其对髂、股骨骨髓干细胞成骨能力的影响。方法:将60只SD雄性大鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、生脉成骨预防用药组、阿仑磷酸钠治疗组、丹郁骨康治疗组、生脉成骨治疗纽,除空白对照纽外,其余大鼠腹腔注射醋酸泼尼松龙,建立激素性股骨头坏死动物模型。造模成功后,各组给予相应的药物或生理盐水进行灌胃。取其股骨及髂骨,收集骨髓细胞悬液进行成骨细胞诱导培养,分别用ELISA法测定ALP、BGP的含量。结果:空白对照组、生脉成骨预防用药组、阿仑磷酸钠治疗组、丹郁骨康治疗组、生脉成骨治疗组股骨髂骨的ALP、BGP,含量均显著高于模型组(P〈0.05),丹郁骨康治疗组的股骨和髂骨,以及生脉成骨治疗组的股骨ALP含量显著高于阿仑磷酸钠治疗组(P〈0.05)。结论:生脉成骨胶囊可以促进激素性股骨头坏死大鼠模型的股骨、髂骨间充质细胞碱性磷酸酶和骨钙素合成,在促进成骨细胞分化成熟方面上显著高于阿仑磷酸钠片。初步认为生脉成骨胶囊治疗激素性股骨头缺血性坏死的作用机理与促进成骨细胞的分化成熟程度以及提高成骨细胞骨蛋白的分泌速度有关。  相似文献   

16.
目的:观察不同浓度肾气丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。方法:应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,传代扩增,倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化法检测细胞表面抗原鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度肾气丸水提液干预组,采用MTT比色法观察其增殖情况。结果:采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态呈长梭形,呈集落样生长,免疫细胞化学鉴定,CD44、CD29阳性,CD34阴性。MTT检测结果显示,与空白对照组相比,肾气丸水提液干预24h后,4、2、1、0.5mg/ml浓度肾气丸干预组吸光度值均增高(P〈0.05),其中2mg/mL肾气丸干预组增高明显;0.25mg/mL浓度肾气丸水提液干预组吸光度与空白组相比无差异(P〉0.05)。结论:本实验采用全骨髓贴壁法培养的骨髓基质细胞符合BMSCs的生物特性,可以用于BMSCs相关研究。在一定浓度范围内,肾气丸水提液可以提高BMSCs的体外增殖能力。  相似文献   

17.
目的:探讨天麻对体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞的影响:方法:通过贴壁法分离大鼠MSC,体外扩增培养。中药天麻定向诱导分化为类神经元样细胞光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志物神经原烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)。结果:大鼠MSC可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。天麻诱导2h后大部分可分化为神经元样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色NSE、Nestin呈阳性,GFAP阴性。结论:大鼠MSC可诱导分化为神经元样细胞。  相似文献   

18.
菟丝子含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖的效应及机制   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探讨菟丝子含药血清体外对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及机制研究。方法:分离、培养大鼠MSCs,菟丝子含药血清诱导培养MSCs 72h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况;RT-PCR检测增殖过程中MSCs不同细胞因子mRNA的表达;Real-time PCR检测骨形态蛋白-2(BMP-2)mRNA表达;Western-blot检测BMP-2蛋白表达。结果:10%菟丝子含药血清具有显著促进MSCs增殖的作用(P<0.05),并显著促进BMP-2 mRNA的表达(P<0.05)。结论:10%菟丝子含药血清促进MSCs增殖的作用,可能与其促进BMP-2 mRNA表达有关。  相似文献   

19.
目的:探讨针刺血清配合丹参注射液对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和诱导其向软骨细胞分化的影响。方法:20只SD大鼠电针7d,颈总动脉取血制备血清。30只4周龄SD大鼠骨髓中分离BMSCs,取第3代BMSCs分为空白对照组!针刺血清组、丹参注射液组及针药组,给予相应的诱导条件。结果:MTT显示丹参组及针药组均能促进BMSCs增殖(P<0.05),尤以针药组最为明显,而针刺组与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。GAG含量及Ⅱ型胶原免疫组化均显示针药组有显著表达,且较丹参组明显,而针刺组与对照组相比不显著。结论:针刺血清配合复方丹参注射液能有效促进BMSCs增殖和诱导其向软骨细胞分化。  相似文献   

20.
归纳总结骨髓间充质干细胞的诱导方法和现代应用情况,为骨髓间充质干细胞诱导分化成骨细胞的深人研究提供参考。通过查阅、整理有关骨髓间充质干细胞的文献资料,从骨髓间充质干细胞的生物特性与制备、诱导成骨细胞的方法、在组织工程骨中的应用、所面临的问题以及未来的研究方向等方面进行总结和分析。结果显示骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,体外可诱导分化为成骨细胞,采用组织工程学技术可在体外构建骨组织工程支架。基于骨髓间充质干细胞的特性,使其在创伤修复、细胞替代治疗、支持造血、基因治疗等方面的应用前景也相当广阔。有必要开展骨髓间充质干细胞成骨诱导分化机制的研究,为其诱导分化成骨细胞提供指导意义和借鉴价值。  相似文献   

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