淫羊藿激活内源性干细胞及其机制研究

干细胞是具有自我更新与增殖分化能力的细胞,通过激活内源性的干细胞而改善再生反应为治疗退行性疾病提供了一个新的思路。笔者在皮质酮大鼠（肾阳虚证模型）观察到淫羊藿总黄酮（EF）能促进肾上腺皮质干细胞的增殖、迁移,采用基因芯片技术发现EF对皮质酮大鼠生长激素（GH）、生长激素释放激素（GHRH）及各类促生长因子如胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）、神经生长因子（NGF）等具有显著上调作用。在自然衰老大鼠（肾虚证模型）发现EF能使多个组织的基因表达年轻化,也使老年大鼠下调的GH、GHRH及IGFBP、NGF等的表达上调。采用体外分离的胚鼠神经干细胞进一步证明淫羊藿及其提取物对干细胞具有直接促增殖作用。上述一系列的研究提示淫羊藿及其提取物对干细胞的作用可能是其拮抗糖皮质激素对下丘脑－垂体－肾上腺轴的抑制和延缓衰老的细胞学基础;也表明中医药可通过动员与提高激素、细胞因子水平激活内源性干细胞,发挥机体储备的潜力而治疗疾病。     

补肾阳方拮抗外源性糖皮质激素HPA轴抑制及分解代谢效应研究

目的:观察补肾阳方拮抗外源性糖皮质激素HPA轴抑制及分解代谢的效果及机制。方法:将SD大鼠分为对照组,模型组,模型+补肾阳复方低、中、高剂量组。采用皮质酮注射造成肾阳虚模型。采用ELISA法检测血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮浓度;取肾上腺,进行全基因组表达谱芯片检测及分析。结果:糖皮质激素造模导致大鼠体重降低,补肾阳方在第7、14天均能保护体重。补肾阳方治疗使造模组下降的肾上腺重量、ACTH、皮质酮水平升高。基因芯片结果筛选出了模型组上调或下调且能被补肾阳复方逆转的基因828个,功能分析显示涉及类固醇合成酶和细胞增殖通路。结论:补肾阳方保护糖皮质激素肾阳虚证模型的HPA轴功能,并能拮抗糖皮质激素分解效应,保护动物体重。     

以药测证绘制肾虚证两大基因网络调控路线图谱

目的 研究肾虚证基因网络调控的路线和规律.方法 选择青年组（4月龄）、老年组（24月龄）、淫羊藿总黄酮（Epimedium Flavonoids,EF）治疗组SD大鼠,取全面反映肾虚的7个组织下丘脑、垂体、肾上腺、淋巴细胞、骨骼、肝脏、肾脏,采用Affymetrix公司的大鼠全基因组芯片再次重复肾虚证基因表达谱差异研究.结果 老年大鼠下丘脑、垂体、肾上腺（HPA轴）显示神经递质γ氨基丁酸（GABA）,促性腺激素释放激素（GnRH）,促甲状腺激素释放激素（TRH）与促甲状腺激素（TSH）,生长激素释放激素受体（GHRH）、胰岛素样生长因子及结合蛋白（IGF、IGFBP）;淋巴细胞显示与细胞生长相关的生长因子相关蛋白（GFRP）,与免疫调节相关的IFNγ、IL-4、IL-6等;骨骼显示甲状旁腺（PTH）、降钙素（calcitonin）与骨基质相关的前胶原、胶原、结缔组织生长因子等;肝脏显示氧化磷酸化相关的细胞色素Cytochrome P450、NADH脱氢酶,与蛋白质代谢相关的谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase）,与糖代谢相关的葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Phosphatase）均为低表达.EF作用后,可见老年大鼠7个标本低表达的基因几乎全部上调,此外还有大量与衰老机理相关的基因明显上调.包括HPA轴的神经递质如GABA,激素如GnRH,细胞周期相关基因如CyclinB,免疫调节相关基因如NF-κB105;淋巴细胞与生长调节相关的基因如GFRP,免疫调节相关的基因如IFNγ;骨骼的甲状旁腺、降钙素、IGF、前胶原、胶原、GnRH、Progesterone等;肝脏的大量代谢相关的基因如Cytochrome P450、NADH脱氢酶;肾脏的代谢相关基因及钠、氯通道等基因.结论 通过以药测证,发现肾虚证大鼠模型存在神经-内分泌-免疫以及神经-内分泌-骨代谢两大基因调控路线的紊乱,补肾能纠正该网络功能低下.     

肾阳虚小鼠肺及气道组织糖皮质激素受体β-防御素-2及其mRNA的表达

目的：探讨糖皮质激素受体（GR）、β-防御素-2（BD-2）及其mRNA在肾阳虚小鼠气道及肺组织中的表达及其意义。方法：45只清洁级KM小鼠随机分为对照组（NS）、肾阳虚组（RYA）及药物干预组（SIR）,用腺嘌呤灌胃复制小鼠肾阳虚模型,通过免疫组化SP法测定肺及气道组织GR和BD-2的表达水平,原位杂交（ISH）法对GR和BD-2mRNA表达进行定位定量分析。结果：与正常组比较,肾阳虚组肺和气道组织GR及其mRNA表达下调（P〈0.05）,BD-2及其mRNA表达上调（P〈0.05）伴肺组织炎症,与肾阳虚组比较,金匮肾气丸组GR及其mRNA表达上调（P〈0.05）,BD-2无统计学差异（P〉0.05）,但肺组织炎症程度减轻。结论：肾阳虚小鼠气道及肺组织GR及其mRNA表达下调,BD-2及其mRNA表达上调伴肺组织炎症,这是肾阳虚证本质研究在分子水平的进一步深入,在此状态下气道局部防御功能因BD-2等表达上调而增强,这可能是动用了气道-肺组织局部免疫储备功能的结果。     

肾阴虚、肾阳虚模型大鼠股骨皮质骨差异蛋白质表达的分析

目的研究肾阴虚、肾阳虚模型大鼠股骨皮质骨差异表达的蛋白质,从功能蛋白质组角度探讨肾阴虚、肾阳虚证的实质。方法将90只大鼠按随机数字表法分为正常组、肾阴虚组和肾阳虚组,每组30只,获取造模成功且表现稳定大鼠的股骨皮质骨,分别进行皮质骨总蛋白的提取制备、双向电泳(2-DE)、凝胶图谱的获取与分析、差异蛋白的质谱分析及相关功能的生物信息学检索。结果 3组大鼠股骨皮质骨总蛋白2-DE凝胶图谱可辨识蛋白点数目均为470个,与正常组比较,肾阴虚、肾阳虚组各有12个差异蛋白,其中有6个是肾阴虚、肾阳虚组共有的差异蛋白,4个表达趋势一致,分别为表达上调的载脂蛋白A-1、α烯醇化酶,表达下调的GDP解离抑制因子β、原肌球蛋白异构体2α-3链;有2个蛋白表达趋势相反,Ⅰ型胶原α-1链在肾阴虚组中表达上调,在肾阳虚组中表达下调;线粒体热休克蛋白60在肾阴虚组中表达下调,在肾阳虚组中表达上调;肾阴虚、肾阳虚组各有6个独自的差异蛋白,其中肾阴虚组有3个蛋白表达上调,3个蛋白表达下调;肾阳虚组6个蛋白表达均下调。结论大鼠股骨皮质骨中,4个共同且表达趋势一致的差异蛋白可以视为肾阴虚、肾阳虚证的共性功能蛋白质组;2个表达趋势相反及12个肾阴虚、肾阳虚组独自的差异蛋白可归为相应证型的差异功能蛋白质组。     

淫羊藿和熟地煎剂对糖皮质激素受体下调模型大鼠糖皮质激素受体的影响

目的 观察温阳、滋阴代表中药淫羊藿、熟地水煎剂对糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）下调模型大鼠GR的影响。方法 皮下注射氢化可的松法,建立GR下调模型。72只SD大鼠随机分为正常组、模型组、淫羊藿组、熟地组,每组再分别分为3个不同时间点组（给药第3、7、14天）,每组6只大鼠。采用放免法和流式细胞术检测给药后不同时间点（第3、7、14天）各组大鼠血浆皮质酮水平及脾淋巴细胞GR的蛋白表达和结合力的变化。结果 不同时间点模型组血浆皮质酮水平与正常对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）,灌胃给药14天后,熟地组血浆皮质酮水平较模型组降低（P＜0.05）。GR蛋白表达和结合力模型组较正常组明显下降(P＜0.01）,熟地给药7天和14天组较模型组均明显上调（P＜0.01）,淫羊藿给药14天组较模型组也升高（P＜0.01）。结论 淫羊藿、熟地水煎剂均能不同程度改善GR下调模型大鼠GR的蛋白表达和结合力,但其作用时间点不一致。     

补肺健脾方对哮喘大鼠CORT及GRmRNA的影响

目的：观察补肺健脾方对哮喘大鼠肺组织中糖皮质激素受体（GR）mRNA、血清皮质酮（CORT）的影响,探讨健脾补肺方治疗哮喘的疗效机制。方法：将24只Wistar大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、补肺健脾方组,以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠哮喘模型,补肺健脾方组从首次激发开始同时给药治疗,治疗3周后处死大鼠,用荧光定量PCR法测定各组大鼠肺组织中GRmRNA的表达,酶联免疫法（ELISA）测定血清皮质酮的含量。结果：哮喘模型组大鼠肺组织GRmRNA的表达和血清皮质酮含量较正常组显著降低（P〈0.01）,经补肺健脾方治疗后,GRmRNA的表达和血清皮质酮含量均明显上调（P〈0.01）。结论：补肺健脾方能够上调哮喘大鼠肺组织GRmRNA的表达和血清皮质酮水平,可能为补肺健脾法治疗哮喘的疗效机理之一。     

益肾固本膏方对肾阳虚哮喘模型大鼠ACTH、CORT的影响

目的观察益肾固本膏方对肾阳虚哮喘模型大鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)水平的影响,进一步探讨益肾固本膏方改善肾阳虚哮喘患者肾阳虚状态的具体机制。方法将SD大鼠分为空白对照组、肾阳虚哮喘模型组、益肾固本膏方低、中、高剂量组。采用氢化可的松琥珀酸钠、Al(OH)3及吸入卵蛋白制备肾阳虚哮喘大鼠模型。观察动物一般状态及其体质量变化,采用Elisa法检测大鼠血中ACTH、CORT的含量。结果肾阳虚哮喘模型组大鼠体质量明显低于空白对照组(P 0.05)。益肾固本膏方各剂量组ACTH及CORT含量均比肾阳虚哮喘模型组显著升高(P 0.01)。结论肾阳虚哮喘模型大鼠HPA轴功能低下,益肾固本膏方能拮抗肾阳虚哮喘HPA功能之低下,有效改善哮喘患者"肾虚"的病理状态,增加内源性皮质酮含量,减少其哮喘急性发作的频率和严重程度。     

蛇床子素和蛇床子总香豆素对肾阳虚大鼠血清甲状腺激素和促甲状腺激素的影响

采用醋酸氢化可的松造成肾阳虚模型大鼠，以蛇床子素（ｏｓｔｈｏｌ，ＯＳＴ）和蛇床子总香豆素（ｔｏｔａｌ－ｃｏｕｍａｒｉｎｓ，ＴＣＲ）给药，测定大鼠血清促甲状腺激素（ＴＳＨ）和三种甲状腺激素Ｔ３、反Ｔ３（ｒＴ３）及Ｔ４的浓度。结果，肾阳虚模型大鼠与正常大鼠比较，ＴＳＨ、Ｔ３、ｒＴ３和Ｔ４都显著降低（Ｐ均＜０．０１）；用药大鼠与肾阳虚模型大鼠比较，上述４项指标都有显著性提高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。提示ＯＳＴ和ＴＣＲ可以提高肾阳虚模型大鼠的腺垂体－甲状腺轴功能。     

基因表达谱揭示淫羊藿总黄酮对皮质酮大鼠肾上腺皮质再生的调控机制

目的观察淫羊藿总黄酮（epimedium flavonoids,EF）对皮质酮大鼠肾上腺皮质再生的调控作用.方法采用碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率;用末端转移酶介导的X-dUTP缺口末端标记（TUNEL）法原位显示凋亡细胞;用基因芯片技术检测mRNA表达.结果模型组与正常对照组比较,肾上腺细胞G0/G1期阻滞,凋亡率明显升高（P＜0.05）;EF干预后G0/G1期比例下降,G2/M期比例显著上升（P＜0.01）,凋亡率下降（P＜0.05）.TUNEL法原位细胞凋亡检测显示正常对照组、模型组、治疗组凋亡阳性细胞数分别为（4.67±1.53）、（70.67±9.29）、（18.67±7.64）个（n=3）.皮质酮主要抑制肾上腺的基因表达,其中7个促进细胞周期的基因如V-ras、V-jun均下调.EF治疗后,肾上腺基因表达以上调为主,其中有6个促进细胞周期基因、1个抗凋亡基因,与肾上腺皮质细胞再生密切相关的上游分子IGF-Ⅱ及其受体IGFR,FGF7及其受体FGFR基因,7个参与类固醇生物合成的基因均上调.结论EF通过促进肾上腺皮质细胞增殖、抑制其细胞凋亡、促进类固醇生物合成,从而促进肾上腺皮质再生是EF在激素撤除过程中发挥保护肾上腺皮质功能的机制.     

以药测证对肾虚证基因网络和信号转导的研究

总结了从细胞内的小的信号转导通路组成的网络到中等的下丘脑-垂体-肾上腺-胸腺（HPAT）轴网络和涵盖全身,联络多个重要系统的大的神经内分泌免疫（NEI）网络,提出人体受到外界干预而形成的“病”或“证”,亦都是以众多的分子网络变化为基础。描绘了信号转导通路的方式、能力、研究信号转导通路变化的方法,提出“以药测证”是按系统生物学方法研究证的干预手段。作者采用补肾复方以药测证发现肾阳虚证涵盖着NEI调节网络,而且直接作用于NEI网络的调控中枢-下丘脑。采用从补肾复方中提取的有效组分——淫羊藿总黄酮（EF）,发现它通过NEI网络的下行通路激活免疫系统,能激活生长激素轴、性腺轴、淋巴细胞凋亡3个方面的网络机制发挥分子网络效应;也观察到EF调控基因网络表现出多种多样的方式,在淋巴细胞凋亡和增殖的网络机制中重塑对立的凋亡相关基因及增殖相关基因平衡;能会聚与整合共刺激分子、转化生长因子及多个原癌基因,成为启动促增殖、抗凋亡的上游因子网络;使NIK／IKK／IκB／Rel／NFκB信号转导通路中对立的IκBα与NFκB同时升高,既维持NFκB适度升高,又保证NFκB呈强者态势发挥其分子调控网络中的枢纽作用,并由此观察到肾虚证HPAT轴上有序的基因网络调控路线图谱。     

从整体论到系统生物学进行肾虚和衰老的研究

中医学对世界医学的贡献之一就是整体观,我们从整体观出发研究了肾阳虚证与下丘脑－垂体－靶腺轴功能紊乱的联系;采用基因芯片技术研究老年大鼠（肾虚证）及中药干预后下丘脑－垂体－肾上腺－胸腺（HPAT）轴的分子网络调控规律;通过基因芯片也揭示存在于老年大鼠下丘脑、垂体、肾上腺、淋巴细胞、骨骼、肝脏、肾脏等与“肾”相关组织的神经－内分泌－免疫以及神经－内分泌－骨代谢两大基因网络路线,从而推进“证”的整体性研究。近年按照系统生物学的动态、干预、多层面整合的要求,在全基因组转录水平、代谢组和单个衰老相关信号通路3个不同层面揭示衰老在不同层面的共同规律;揭示出基因的时空关联随着衰老进程逐渐弱化;并且中药淫羊藿总黄酮能有效改善衰老在上述两方面的系统改变。因此从整体观到系统生物学的转变可能促进中医学进入现代生命科学领域。     

右归配方颗粒对肾阳虚型体外受精－胚胎移植患者卵巢颗粒细胞基因表达谱的影响

目的从基因组学角度探讨温肾阳中药对肾阳虚型体外受精-胚胎移植（in vitro fertilizationembryo transfer,IVF-ET）患者卵巢颗粒细胞基因表达谱的影响。方法 72例行IVF治疗的肾阳虚患者按照随机数字表法分为治疗组（36例）和对照组（36例）,治疗组服用右归配方颗粒联合促性腺激素（gonadotropin,Gn）,对照组服用安慰剂联合Gn,两组均在IVF治疗前连续用药3个周期。两组采用超排卵长方案治疗后,行穿刺取卵术。利用基因高通量测序技术对两组患者卵巢颗粒细胞基因表达谱进行分析,研究两组患者基因表达谱的差异,并对差异基因行基因本体（gene ontology,GO）分析和京东基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路分析。结果通过对两组患者卵巢颗粒细胞基因表达谱的分析,共筛选到391个差异表达基因,其中上调基因238个,下调基因153个。差异表达基因参与的富集的分子功能是：与细胞增殖、凋亡有关的细胞周期调节蛋白,蛋白质泛素化,微管、微丝等细胞骨架的构建,线粒体及能量相关功能的因子,激素合成调节因子等;参与的通路是能量代谢通路和转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）信号通路。结论两组患者卵巢颗粒细胞基因表达谱存在明显差异,差异表达基因所涉及的生物学过程与肾阳虚导致的生殖细胞增殖、凋亡紊乱,线粒体产生能量过程受阻等有相关性。     

复方玄驹胶囊联合克罗米芬治疗肾阳虚型排卵障碍性不孕症的临床观察

目的 观察复方玄驹胶囊联合克罗米芬对肾阳虚型排卵障碍性不孕症的临床疗效。 方法 将87例肾阳虚型排卵障碍性不孕症患者随机分为两组:观察组44例，给予复方玄驹胶囊联合克罗米芬治疗；对照组43例，单纯给予克罗米芬治疗。观察两组患者治疗后的临床症状、宫颈黏液、子宫内膜厚度、卵泡质量%排卵情况及妊娠率等指标。结果 在改善患者中医肾阳虚证候方面，观察组、对照组有效率分别为86.4%（37/44）、25.6%（11/43）,观察组明显优于对照组；治疗后观察组宫颈黏液、子宫内膜厚度和妊娠率均优于对照组（P<0.05）；两组排卵率、成熟卵泡数比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 复方玄驹胶囊联合克罗米芬治疗肾阳虚型排卵障碍性不孕症，可以减少克罗米芬抗雌激素样作用对子宫内膜的不良影响，增加内膜厚度，有利于妊娠。     

2型糖尿病肾阴虚证家族聚集性分析

目的分析2型糖尿病(type 2 diabetic mellitus,T2DM)肾阴虚证的家族聚集性和遗传倾向。方法收集南京地区T2DM阴虚证患者(先证者)32例,32个家系共141例,运用家系分析的方法对肾阴虚的患病特征进行遗传分析,包括计算先证者一级亲属患病率、遗传度;并运用多因素回归分析的方法评估肾阴虚家族史在肾阴虚发生中的作用。结果T2DM肾阴虚先证者一级亲属肾阴虚患病率为33．71％,运用Falconer公式计算肾阴虚证的遗传度为80．6％。多因素Logistic回归拟合结果显示肾阴虚家族史在肾阴虚的发病中占有重要地位(OR=5．61,P=0．001),而T2DM本身并非肾阴虚的独立发病危险因素。结论T2DM肾阴虚证具有家族聚集倾向和遗传倾向,遗传因素与肾阴虚的发生有一定的关系;家系研究的方法是开展中医证侯与遗传因素关系研究较好的工具。     

温肾助阳益气养血方配合人工周期疗法治疗肾阳虚型卵巢早衰疗效观察

目的 观察温肾助阳益气养血方配合人工周期疗法治疗肾阳虚型卵巢早衰的临床疗效。方法 将96例肾阳虚卵巢早衰患者随机分为治疗组和对照组,每组48例。治疗组采用温肾助阳益气养血法配合人工周期疗法治疗;对照组采用西药人工周期疗法进行治疗。1个月为1个疗程,共治疗3个疗程,观察患者治疗前后月经情况及主要症状,检测治疗前后血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E-2）水平。结果 治疗组总有效率（85.42%）高于对照组（66.67%,P〈0.05）。且治疗组在改善中医症状方面明显优于对照组（P〈0.05）。结论 温肾助阳益气养血方配合人工周期疗法对卵巢功能早衰患者血清激素水平和临床症状均有改善作用。     

金匮肾气丸及其拆方对肾阳虚雌鼠卵巢功能的影响

目的探讨金匮肾气丸及其拆方（补。净阳、补肾阴、阴阳双补）对雌性肾阳虚大鼠卵巢功能的影响。方法将55只SD雌性大鼠随机分为正常组、模型组、补阳组、补阴组、双补组,每组各11只。除正常组外,在大腿内侧肌肉丰厚处消毒后注射氢化可的松25mg,（kg·d）,连续12天。成模后第13天起各干预组按1mL／100g灌胃给药,每天1次,补阳组（补阳方,2．75g／kg）、补阴组（补阴方,6．25g／kg）、阴阳双补组（金匮肾气丸,6．75g／kg）,正常组、模型组给予等体积生理盐水,连续干预20天。干预结束后第2天眼眶取血,ELISA法检测血清雌二醇（E2）、孕酮（P）含量。计算子宫、卵巢脏器指数（visceraindex,VI）,观察病理改变。结果双补组肾阳虚雌性大鼠一般状况改善,正常、模型、补阳、补阴、双补组体重增加分别为（35．0±12．5）、（16．7±7．4）、（20．2±6．9）、（18．3±3．6）、（29．4±12．2）g;子宫V1分别为（183．4±11．6）、（144．0±6．5）、（158．7±6．3）、（152．1±6．9）、（172．8±8．1）mg／100g;卵巢V1分另1为（32．9±2．4）、（22．6±1．1）、（25．0±1．4）、（23．0±0．4）、（31．4±3．3）mg／100g。与模型组比较,补阳组及双补组大鼠体重、卵巢VI增加（P〈0．05,P〈0．01）,各给药组子宫V1增加（P〈0．05,P〈0．01）。与两个拆方组比较,双补组各指标增加（P〈0．05,P〈0．01）。补阳组及双补组大鼠E。P水平提高（P〈0．05,P〈0．01）。正常、模型、补阳、补阴、双补组E,水平分别为（22．1±9．4）、（9．8±3．0）、（11．3±2．2）、（10．5±0．8）、（16．0±5．5）pg／mL;P水平分别为（14．6±7．5）、（4．3±1．8）、（8．3±2．8）、（5．9±2．9）、（9．5±3．4）ng／mL。与两个拆方组比较,双补组E：水平提高（P〈0．05,P〈0．01）。与补阴组比较,双补组P水平提高（P〈0．05）。与模型组比较,双补组各级卵泡数增多,病理性囊性卵泡数减少（P〈0．01）。补阳组及补阴组可见初级卵泡、次级卵泡,成熟卵泡较少。双补组各级卵泡总数明显多于补阳组及补阴组（P〈0．05）,病理性囊性卵泡明显少于补阴组（P〈0．05）。结论对于肾阳虚证,金匮肾气丸及其拆方所代表的不同补肾法均能不同程度改善受损的卵巢功能,但单一的补阳法或补阴法效果不佳,阴阳双补可提高疗效。     

模拟中医病因所致脾气虚、脾阳虚大鼠模型的证候比较研究

目的:以多因素复合法分别建立脾气虚证、脾阳虚证大鼠模型,对两组模型大鼠进行比较研究以探讨脾气虚、脾阳虚的证候实质与差异。方法:动物随机分为正常组、脾气虚组和脾阳虚组,以相应造模方法进行模型复制,并以四君子汤和理中汤进行药物反证。结果:脾气虚和脾阳虚大鼠宏观证候计分高于正常组(P0.01),且以脾阳虚组为著(P0.01);两组血清GAS均低于正常组(P0.01);脾气虚组的血浆MTL低于正常组(P0.01),而脾阳虚组高于正常组(P0.01);经健脾中药干预后,各项脾虚症状和体征逐渐缓解或消失;血清GAS、血浆MTL紊乱回复。结论:多因素复合法复制的脾气虚、脾阳虚证大鼠模型符合证候的生物学特征,稳定性良好,且经得起药物反证;脾气虚、脾阳虚大鼠的脾虚宏观证候呈递进关系;血浆MTL在脾气虚和脾阳虚中变化趋势不一致,可作为鉴别两证的微观指标。