白藜芦醇对α-萘异硫氰酸酯所致大鼠黄疸模型的作用

白藜芦醇是中药虎杖中的有效成分,虎杖为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.etzuc C的干燥根茎和根,古书中记载具有利湿退黄、清热解毒、活血通经等功效[1],特别在传统中医肝病的治疗中有独到的疗效.现已证实,白藜芦醇具有心血管保护、抗氧化、抗自由基等广泛的药理作用[2、3],但其对肝病的防治作用尚研究甚少.本文采用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)造成肝内胆汁淤积大鼠黄疸模型,观察白藜芦醇对血清肝功能指标、SOD、MDA以及肝脏组织病理学变化的影响.以期为虎杖利湿退黄的功效提供现代药理学依据.     

消黄方对α-萘异硫氰酸酯大鼠黄疸模型肝组织氧化应激的影响

目的:探讨消黄方对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)大鼠黄疸模型的治疗作用及抗氧化应激效应。方法:Wistar雄性大鼠40只,随机分为正常组(10只)和ANIT处理组(30只)。ANIT按照2mL/kg一次性经口灌胃,48h后,ANIT处理组随机分为模型组,消黄方组及熊去氧胆酸(UDCA)组(各10只),各组每天分别给予生理盐水、消黄方、UDCA治疗1周,实验结束处死全部大鼠。观测大鼠死亡率、检测肝功能及肝组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:肝功能结果发现:与正常组比较,模型组大鼠肝ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL显著升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,UDCA和消黄方显著降低血清TBIL和DBIL含量(P0.01),消黄方显著降低ALT、AST及ALP活性(P0.05,P0.01)。肝组织氧化应激结果显示:与正常组比较,模型组肝组织GST活性及MDA含量显著升高(P0.01),T-SOD活性显著下降(P0.01),而消黄方显著降低GST活性及MDA含量(P0.01),升高肝组织SOD活性(P0.01)。结论:消黄方具有保肝退黄作用;氧化应激是ANIT大鼠黄疸模型的重要病理环节,抗氧化应激效应是消黄方退黄主要机制之一。     

α-萘异硫氰酸酯实验性黄疸模型及其在中药研究中的应用

作者根据α-萘异硫氰酸酯(简称ANIT)使小白鼠和大白鼠产生显著的高胆红素血症和胆汁郁积的报导,用ANIT造成了实验性黄胆模型。文中详细地介绍了其实验方法和作用机制。作者认为,这一模型重复性好、稳定、方法简单、易于掌握。在肝病的药物筛选和研究中,将有助于全面地认识和评价中药的药理作用,为中药的理论研究和临床应用提供实验依据。     

消黄方对异硫氰酸-α-萘酯诱导大鼠急性肝损伤的干预作用研究

目的:观察消黄方对异硫氰酸-α-萘酯(α-naphthyl isothiocyanate,ANIT)诱导大鼠急性肝损伤的干预作用。方法:SD大鼠68只,随机分为正常组、模型对照组、消黄方低、中、高剂量组和熊去氧胆酸(UDCA)阳性对照组。造模前分别以消黄方低、中、高剂量5g/kg、10g/kg、20g/kg和熊去氧胆酸15mg/kg体质量灌胃7天,正常组及模型对照组以同体积的生理盐水灌胃,第8天以2%ANIT色拉油溶液6mL/kg体质量一次性灌胃诱导急性肝损伤模型,48小时后模型大鼠随机处死6只观察成模情况,其余各组大鼠继续以相应药物及生理盐水灌胃7天,处死所有大鼠,观察模型大鼠血清肝生化指标及肝脏组织病理学改变及消黄方对其影响。结果:造模48小时时模型大鼠肝组织广泛点片状坏死和大量炎性细胞浸润,血清ALT、AST、TBil、TBA、LDH显著升高(P<0.01),造模7天后模型大鼠肝组织病理改变及血清ALT、AST、TBil、TBA、LDH虽然明显恢复,但仍然显著高于正常大鼠,与模型对照组比较,消黄方中、高剂量组肝组织病理明显改善,血清ALT、AST、TBil、TBA、LDH显著降低(P<0.01或P<0....     

三黄颗粒对α-萘异硫氰酸酯诱导胆汁淤积大鼠肝损伤保护作用的研究

目的:探究三黄颗粒对α-萘异硫氰酸酯诱导胆汁淤积性大鼠肝损伤的保护作用。方法:将72只SD大鼠随机分为6组,正常对照组、模型组、阳性对照组和三黄颗粒低、中、高剂量组,每组12只,隔日1次ANIT灌胃造模,各组连续灌胃给药4周,取血并采集肝脏标本。放射免疫法检测LA、HA、PC-Ⅲ、IV-C值;全自动生化分析仪检测大鼠血清肝功能生化指标;切取大鼠肝中叶,制作病理组织切片,光学显微镜下观察。结果:三黄颗粒组大鼠肝功能指标较模型组均不同程度的降低;肝脏纤维化指标有明显的改善;大鼠肝HE染色切片得出,高、中、低剂量组之间存在差异,肝脏形态改善明显。结论:三黄颗粒可减轻α-萘异硫氰酸酯诱导胆汁淤积性大鼠肝损伤病理变化,改善肝功能,减轻肝脏纤维化,中等剂量疗效较好。     

栀子柏皮汤对α-萘异硫氰酸酯致大鼠肝损伤的保护作用

目的 观察栀子柏皮汤对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致大鼠急性肝损伤的保护作用.方法 将Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,阳性对照组,栀子柏皮汤低、中、高剂量组,ig给药10 d.各组于实验第8天,ig ANIT造模,48h后取血,分离血清,以血清肝功能、SOD的活性以及肝脏病理组织学的改变为观察指标.结果 与模型组比较,栀子柏皮汤低、中剂量组的血清ALT、AST、ALP、GGT和TBIL均显著下降(P＜0.01或P＜0.05),血清SOD显著升高(P＜0.01或P＜0.05);肝脏病理组织学检查表明,栀子柏皮汤低、中剂量组能明显减轻肝细胞变性、坏死以及炎细胞浸润.结论 栀子柏皮汤低、中剂量组对ANIT所致大鼠急性肝损伤有明显的降酶保肝作用.     

威灵仙提取物对糖尿病肾病大鼠的作用

目的:研究威灵仙提取物对糖尿病肾病大鼠模型的治疗作用。方法:SD大鼠,随机分为正常组,模型组,卡托普利组(10 mg·kg-1),威灵仙提取物高、低剂量组(500,250 mg·kg-1),除正常组外,其余各组大鼠ip链脲佐菌素(STZ)制备成糖尿病大鼠模型,ig给药,1次/d,连续给药12周,观察威灵仙提取物对大鼠肾功能尿素氮(BUN),血清肌酸酐(SCr),肌酸酐清除率(CCr),尿白蛋白,尿白蛋白排泄率(UAER),肾肥大指数指标,空腹血糖(FBG),血脂甘油三酯(TG),总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和氧化指标白细胞介素-6(IL-6),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响,以及肾组织病理形态学的变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清BUN,SCr,CCr,IL-6,尿白蛋白,UAER,肾肥大指数和FBG的水平明显升高,TG,TC和LDL-C的水平明显升高,HDL-C的水平明显降低,肾脏MDA含量明显升高,SOD和GSH-Px的水平明显降低,均具有明显统计学差异(P0.05,P0.01),病理组织显示肾小球基膜和肾小管增厚和膨胀;与模型组比较,威灵仙提取物明显降低糖尿病模型大鼠血清BUN,SCr,CCr,IL-6,尿白蛋白,UAER,肾肥大指数和FBG的水平(P0.05),降低TG,TC和LDL-C的水平(P0.05),升高HDL-C的水平(P0.05),降低肾脏MDA的含量(P0.05),升高SOD和GSH-Px的水平(P0.05),同时显著减轻了糖尿病大鼠肾小球基膜和肾小管增厚和膨胀的程度。结论:威灵仙提取物对糖尿病肾病引起的肾损伤有显著的抑制作用。     

苗药结石草总生物碱对α-异硫氰酸萘酯所致肝损伤小鼠的保护作用及机制研究

目的研究苗药结石草总提物及总生物碱部位对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)所致黄疸型肝损伤小鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用灌胃ANIT(60 mg·kg-1)橄榄油溶液造成小鼠急性肝损伤模型,连续给药5 d,末次给药1 h后取血、肝脏,检测血清中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT),天门冬氨酸转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),总胆汁酸(TBA),总胆红素(TBIL)和游离胆红素(DBIL)的含量;检测肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,RT-PCR检测肝组织中FXR,CYP7A1,BSEP,MRP2 mRNA的表达量,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化。结果与模型组比较,结石草总提物及总生物碱各组均可显著降低肝损伤小鼠血清ALT,AST,ALP,TBIL,DBIL和TBA的水平和肝匀浆中MDA含量,且能显著升高小鼠肝匀浆中SOD和GSH-Px的含量,各组均能显著升高肝组织中FXR,MRP2 mRNA相对表达量,且高剂量组可显著升高BSEP mRNA相对表达量,并能显著降低CYP7A1的mRNA相对表达量。病理切片显示结石草总提物和总生物碱各组能显著改善肝组织的病理变化。结论结石草总提取物及总生物碱对ANIT所致小鼠黄疸型肝损伤有保护作用,生物碱部位为其抗肝损伤活性部位。     

蒙药金色诃子炮制品对α-萘异硫氰酸酯致大鼠肝损伤的保护作用及其急性毒性研究

目的:观察蒙药金色诃子不同炮制品对α-萘异硫氰酸酯致大鼠肝损伤的保护作用及其急性毒性。方法:采用a-萘异硫氰酸酯建立大鼠肝损伤模型,给予不同金色诃子炮制品,观察其降酶保肝作用。采用最大给药量方法进行急性毒性实验。结果:与模型组比较,烘制金色诃子能够明显降低a-萘异硫氰酸酯所致肝损伤大鼠血清AST和ALT水平(P0.05)。急性毒性实验小鼠未见异常反应,烘制金色诃子、煮制金色诃子、金色诃子肉最大给药剂量为临床用药量的500倍,生品最大给药剂量为临床用药量的375倍。结论:烘制金色诃子对a-萘异硫氰酸酯所致急性肝损伤具有降酶保肝作用,毒性较小,较为安全。     

威灵仙化学成分分离鉴定

目的:威灵仙作为临床常用的中药,具有祛风除湿、通络止痛、消骨哽的功效,常用于治疗风湿痹痛,为风湿痹痛要药,亦用于治疗诸骨哽咽,同时具有一定的副作用。近年来发现威灵仙提取物对白血病细胞增殖具有抑制作用,该文旨在研究其化学成分,揭示其治疗疾病的物质基础。方法:将威灵仙药材粉碎后,采用乙醇回流提取,得到粗提物,将其分散于水中后,依次使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取;利用D101大孔树脂,硅胶,LH-20羟丙基葡聚糖凝胶,MCI小孔树脂凝胶,RP-18柱色谱对各提取部位进行分离,并通过~1H-NMR,~(13)C-NMR,MS等波谱技术鉴定其结构。结果:从威灵仙药材中分离得到9个化合物,分别鉴定为升麻醇(1),升麻醇-3-O-β-D-木糖苷(2),cimigoside(3),木栓酮(4),(+)-3,3'-bisdemethylpinoresinol(5),5-O-feruloyl-2-deoxy-D-ribono-γ-lactone(6),阿魏酸(7),丁香酸(8),β-谷甾醇(9)。结论:化合物1~6均为首次从威灵仙中分到,其中化合物1~3为首次从铁线莲属中分离得到环菠萝蜜型三萜类化合物。分离得到的化合物进一步丰富了威灵仙的化学成分结构类型,为威灵仙的植物分类、质量控制和药理活性研究提供了新的依据。     

山豆根水煎液致大鼠亚急性肝脏毒性研究

目的:给予质量可控的山豆根(RRST)水煎液致大鼠肝脏毒性,并探讨其毒性作用机制.方法:采用代表性好、来源固定的药材,取山豆根饮片加6倍量水,浸泡30 min,武火煮沸,换文火煎煮60 min,共煎煮2次,合并2次的滤液浓缩至生药2 g·mL-1,得山豆根水煎液储备液,并对其苦参碱及氧化苦参碱进行测定,对其质量进行控制.动物实验:选用Wistar大鼠30只,随机分为空白对照组(灌胃给予蒸馏水)、阳性对照组(灌胃给予10％ CCl4)、低剂量组(灌胃给予1 g·kg-1山豆根水煎液)、中剂量组(灌胃给予4 g·kg-1山豆根水煎液)和高剂量组(灌胃给予16 g·kg-1山豆根水煎液),每组6只.连续给药14d,第15天ip 25％乌拉坦麻醉,腹主动脉取血,离心取血清测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBil)、总胆汁酸(TBA),采用酶联免疫吸附法(ELISA)法测定炎症因子白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α).摘取肝脏,称重,计算脏器指数,病理制片,进行组织病理学检查.取部分肝组织加冷生理盐水制成10％肝匀浆,离心,取上清波,测定肝组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)活性,丙二醛(MDA)含量.结果:大鼠连续给予不同剂量山豆根水煎液7d后,高剂量组出现活动减少,四肢无力;14 d后,与空白对照组相比,高剂量组ALT,ALP,TBA值升高(P＜0.05),病理组织学检查发现高剂量组的肝细胞肿大,并伴有炎症浸润.高剂量组及阳性对照组的IL-6,TNF-α含量升高(P＜0.05及P＜0.01),SOD活性降低,MDA含量升高(P＜0.05),SOD/MDA含量显著降低(P＜0.01).结论:山豆根具有肝脏毒性,给予大鼠16 g·kg-1山豆根水煎液可导致明显的肝损伤,且其损伤机制与炎症因子的作用和脂质过氧化有关,与四氯化碳的肝毒性具有一定的相似性.     

不同品种威灵仙药材的质量调查

对不同品种威灵仙药材进行质量调查.优化《中国药典》2010年版威灵仙含量测定项下方法,并测定威灵仙样品中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量.所测30批样品中仅有3批威灵仙Clematis chinensis药材中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量符合《中国药典》2010年版规定的标准;东北铁线莲C.manshurica药材中齐墩果酸质量分数大于0.30％,但常春藤皂苷元含量极微;棉团铁线莲C.hexapetala中未检测到常春藤皂苷元和齐墩果酸.     

利胆退黄汤对ANIT诱导的胆汁淤积型黄疸模型大鼠的治疗作用

目的:探讨利胆退黄汤对胆汁淤积型黄疸大鼠的疗效及其作用机制。方法:Wistar雄性大鼠48只,随机分成6组:对照组,模型组,阳性药组,利胆退黄汤低、中、高剂量组,每组8只。除对照组外,其余5组均一次性灌胃α-萘基异硫氰酸盐(alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT)溶液(5mL/kg)造模,诱发大鼠急性肝内胆汁淤积病变。造模48h后,利胆退黄汤低、中、高剂量组给药量分别是10、20、40g/(kg·d),阳性药组给予茵栀黄颗粒1.6g/kg灌胃,同时对照组和模型组每天给予生理盐水灌胃,连续给药7天,各组大鼠采集血液及肝脏组织,分析血清指标、肝脏组织中钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(Sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)、胆汁酸盐输出泵(Bile salt export Pump,BSEP)蛋白表达、mRNA表达和观察病理切片。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清中丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)、总胆红素(Total bilirubin,TBil)、直接胆红素(Direct bilirubin,DBil)、总胆汁酸(Total bile acid,TBA)水平均显著升高(P0.05);与模型组比较,利胆退黄汤低、中、高剂量组血清指标显著降低(P0.05)。与对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中NTCP、BSEP蛋白表达及mRNA表达均明显降低(P0.05)。与模型组比较,利胆退黄汤低、中、高剂量组大鼠肝组织中NTCP、BSEP蛋白表达及m RNA表达均明显升高(P0.05);病理切片观察可见模型组大鼠肝细胞肿大,排列无序不规整,显点状或灶性坏死,轮廓不清,胆管上皮细胞增生,肝窦变大,可见大量炎细胞浸润,利胆退黄汤低、中、高剂量组大鼠肝组织病理炎细胞浸润和脂肪细胞减少,肝细胞肿胀明显改善,肝细胞排列比较规整,细胞大小大致相等。与阳性药组比较,利胆退黄汤高剂量组大鼠肝组织病理改善较明显,血清中ALT、ALP、AST、γ-GT、TBA水平均显著升高(P0.05),NTCP蛋白表达及mRNA表达均显著升高(P0.05)。结论:利胆退黄汤可降低调节ANIT诱导的胆汁淤积型黄疸大鼠血清中ALT、AST、ALP、TBil、DBil、TBA的水平,且疗效优于茵栀黄颗粒。利胆退黄汤可能通过调节NTCP、BSEP mRNA的表达来改善胆汁淤积大鼠的肝胆功能。     

山豆根致大鼠肝毒性研究

目的:观察山豆根长期大剂量给药后对大鼠产生的肝毒性反应。方法:SD大鼠,随机分为正常组、12 g.kg-1山豆根组、20 g.kg-1山豆根组,分别灌服蒸馏水、12 g.kg-1山豆根水煎液(0.6 g.mL-1)、20 g.kg-1山豆根水煎液(1 g.mL-1),连续给药26 d。观察给药期间的一般表现,体重变化等。末次给药后,用25℅乌拉坦腹腔麻醉,腹主动脉取血,离心,取血清,全自动生化仪检测ALT,AST,ALP,TbiL,TP,ALB,GLO等肝功能指标;摘取肝脏,称质量,计算脏器指数;按电镜要求,取肝脏组织,固定,透射电镜下观察超微结构。结果:大鼠连续灌胃山豆根水煎液10 d后,动物活动减少,四肢无力,粪便以及尿液增多;26d后,与正常组比较,ALT值及肝脏脏器指数升高(P0.01或P0.05),TP,ALB值降低(P0.01或P0.05);电镜显示,山豆根组动物肝脏细胞核变形、有肿胀趋势,核膜皱缩,毛细胆管扩张,滑面内质网略见扩张。结论:大鼠连续灌胃山豆根后,可对肝脏产生毒性,且随着剂量增加,毒性增强。     

威灵仙一种新伪品的生药学和分子生药学鉴别

目的:运用生药学和分子生药学研究思路和方法,对市场上一种威灵仙新伪品进行鉴别,为保障威灵仙药材的安全使用提供实验依据。方法:对威灵仙及其伪品进行性状、显微等生药学研究,描述威灵仙及其伪品的生药学鉴别特征。对威灵仙及其伪品的分子生药学研究,通过试剂盒提取样品的DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增及双向测序获得其内转录间隔区(ITS)序列,根据美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库中已收录的ITS序列进行相似度分析及DNA条形码溯源。结果:威灵仙及伪品的生药学鉴别特征主要有外皮颜色以及有无茎节等;横切面显微特征区别主要为有无髓。分子生药学研究表明,该伪品的基原植物为紫金牛科紫金牛Ardisia japonica。结论:该威灵仙伪品为紫金牛的茎及根茎,该伪品与威灵仙在成分、功能主治方面差别较大,在临床应用上应严格区分。     

威灵仙水提物对阿霉素耐药的人甲状腺未分化癌细胞株HTh74Rdox的作用机制

目的:探讨威灵仙水提物对阿霉素诱导耐药的人甲状腺未分化癌细胞株HTh74Rdox增殖的影响及机制。方法:用不同浓度威灵仙水提物处理HTh74Rdox后观察细胞形态;噻唑蓝(MTT)比色法检测威灵仙水提物对HTh74Rdox细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测HTh74Rdox细胞凋亡;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及其活性片段(cleaved-Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果:威灵仙水提物对HTh74Rdox细胞的增殖有明显抑制作用,联合阿霉素后可减少阿霉素剂量;威灵仙水提物可显著诱导细胞凋亡(P0.01);且能明显提高cleaved-Caspase-3/Caspase-3,Bax/Bcl-2(P0.05)。结论:威灵仙水提物可以抑制HTh74Rdox细胞的增殖,其机制可能与提高cleaved-Caspase-3/Caspase-3,Bax/Bcl-2有关;联合化疗药物使用具有减毒增效的作用。     

威灵仙类药材的紫外谱线组法鉴别研究

目的 利用紫外谱线组法对威灵仙类药材进行鉴别.方法 采用紫外谱线组法,分别对氯仿、无水乙醇、水3种溶剂的威灵仙类药材浸出液进行紫外光谱扫描,并测定其吸收峰数目和其峰位值.结果 威灵仙类药材的紫外谱线组图像、最大吸收峰数目及峰位值具有较大差异.结论 该法简便、准确、灵敏,可鉴别威灵仙类药材.