多叶重楼不同部位四种重楼皂苷积累研究

目的:探讨多叶重楼不同部位重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的积累情况,为多叶重楼的开发利用提供依据。方法:采用HPLC法测定不同产地多叶重楼根茎、茎、叶中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量,并运用单因素方差分析、聚类分析及HPLC图谱分析方法。结果:多叶重楼根茎、茎、叶中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量具有极显著性(P0.01)或显著(P0.05)性差异,重楼皂苷Ⅰ、Ⅶ分别在根茎、叶中含量较高。聚类结果分别将多叶重楼不同部位分为3~4类。不同部位HPLC图谱,茎相似度最高,叶和茎中部分产地相似度较高。结论:大部分多叶重楼样品不同部位重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量未能达到重楼国家限量标准,但可以选择性对多叶重楼中某一重楼皂苷含量较高的部位进行开发利用。     

多茎滇重楼不同部位甾体皂苷活性成分积累的研究

目的:探讨不同居群多茎滇重楼不同部位中甾体皂苷活性成分的积累。方法:采用HPLC法测定不同居群多茎滇重楼根茎,茎,叶中主要活性成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量,建立HPLC图谱,运用单因素方差分析、聚类分析和HPLC图谱分析探讨多茎滇重楼不同部位甾体皂苷活性成分积累的差异。结果:不同居群多茎滇重楼不同部位中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量及其总含量具有极显著(P0.01)或显著(P0.05)性差异,根茎中只有一个居群重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量未达到《中华人民共和国药典》(2015年版)0.60%的限量标准;根茎中重楼皂苷主要以Ⅰ、Ⅶ的形式存在,茎中只检测到重楼皂苷Ⅶ,叶中皂苷活性成分分布不规律;不同居群多茎滇重楼不同部位HPLC色谱图相似度均较高。结论:不同居群多茎滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量除一个居群外均达到国家限量标准,且不同居群多茎滇重楼不同部位中甾体皂苷活性成分差异较小。该研究为多茎滇重楼是否能够替代滇重楼入药提供了一定科学依据。     

基于HPLC指纹图谱鉴别云南重楼和长柱重楼

目的通过HPLC指纹图谱鉴定云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz和长柱重楼Paris forrestii(Takht.)H.Li.。方法建立20批样品的HPLC指纹图谱,SPSS19.0软件进行聚类分析和主成分分析。结果云南重楼与长柱重楼HPLC指纹图谱的相似度分别为0.905~0.998和0.905~0.986,聚类分析与主成分分析均可将两者明显区分开。结论该方法专属性强、准确度高,可用于重楼属植物的品种鉴定及质量控制。     

七叶一枝花中4种重楼皂苷同时测定与聚类分析

目的建立HPLC法同时测定七叶一枝花Paris polyphylla Smith.var chinensis(Franch.)Hara中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含有量,并进行聚类分析。方法该植物甲醇提取液的分析采用Waters XBridge C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长203 nm;柱温25℃;进样量20μL。考察样品农艺性状(株高、茎粗、叶长、叶宽、叶长宽比)。DPS7.05软件进行聚类分析。结果 7个产地(浙江、云南、江西、湖北、湖南、广西、四川)18批样品的农艺性状与重楼皂苷含有量有所差异,其中浙江、云南、广西产者含有量较高,江西、湖北产者较低。重楼总皂苷含有量与茎粗和叶长宽比呈显著正相关,与叶宽呈负相关,与经纬度相关性较低。各种质可划分为4个类群,其中类群Ⅰ农艺性状良好,重楼总皂苷含有量较高。结论以重楼总皂苷含有量为目标筛选七叶一枝花时,应优先考虑浙江泰顺、磐安、庆元、湖南永顺种源。     

UPLC法测定云南省不同地区云南重楼及多芽品系中7种甾体皂苷量及其指纹图谱建立

目的以云南省不同地区云南重楼及多芽品系为材料,采用UPLC-ELSD法同时测定7种甾体皂苷量并建立高黎贡山地区样品UPLC指纹图谱,评价其质量。方法采用UPLC-ELSD法,ACQUITY UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,体积流量0.2 m L/min,漂移管温度55℃,氮气压力275.8 k Pa,增益500,以乙腈-水为流动相梯度洗脱。结果样品在23 min内能完全被分离,方法学考察均符合要求;23份样品中19份符合《中国药典》2015年版要求,《中国药典》项下4个皂苷平均质量分数为1.42%,其中高黎贡山地区的样品平均质量分数高达1.660%;10批次高黎贡山地区云南重楼(多芽品系)样品间相似度小于0.9,标定了8个共有特征峰,并对4个特征峰进行了归属;样品中7个皂苷的种类和量经PCA分析和系统聚类分析均不能明显分类。结论该方法简便、快速、灵敏度高,可用于云南重楼的质量快速评价;云南重楼及其多芽品系在化学成分种类和量上并无明显区别;高黎贡山地区的云南重楼(多芽品系)是一个值得推广栽培和深入研究的品种。     

滇重楼腐烂程度与4种皂苷含量的关系

目的:测定滇重楼健康、病健交界部分、完全腐烂部分、药材及人工种植滇重楼1级到6级腐烂的样品中4种皂苷的含量。方法:采集云南白药集团武定滇重楼种植基地样品,腐烂等级分类参照植病研究方法,采用HPLC测定其4种重楼皂苷VI、VII、PA和H。结果:不同腐烂程度重楼皂苷含量差异较大。结论:腐烂部分占整个重楼根茎的21%⁴0%的样品重楼皂苷Ⅶ、PA和H含量最高,完全健康和完全腐烂的滇重楼根茎重楼皂苷含量较低。     

云南重楼与球药隔重楼皂苷含量差异及光合特性研究

目的 了解云南重楼与球药隔重楼皂苷含量差异及光合特性,为重楼人工栽培及药用资源开发利用奠定理论基础。方法 以6年生云南重楼和球药隔重楼为材料,使用HPLC测定皂苷含量,LI-6800光合测定仪测定光合参数,紫外吸收法测定生化参数,石蜡包埋法测定叶片显微结构。结果 云南重楼与球药隔重楼皂苷含量及光合特性具有较大差异：(1)球药隔重楼总皂苷含量较云南重楼高118.97%,云南重楼中薯蓣皂苷类含量占总皂苷的95.86%;(2)球药隔重楼光补偿点仅为7.20μmol·m^-2·s^-1,且净光合速率、蒸腾速率、气孔导度、胞间CO₂浓度/环境CO₂浓度均显著低于云南重楼;(3)球药隔重楼叶绿素b含量显著高于云南重楼,且叶绿素a/b含量显著低于云南重楼;(4)云南重楼可溶性糖、可溶性蛋白及脯氨酸含量显著高于球药隔重楼,MDA含量显著低于球药隔重楼;(5)球药隔重楼叶片厚度、栅海比显著高于云南重楼。结论 球药隔重楼具有较高的皂苷含量且具有更好的抗寒性及耐阴性,可以考虑将球药隔重楼作为云南重楼的替代品进行深入研究与开发...     

云南重楼的甾体皂苷类成分

目的：对重楼属（Paris）植物云南重楼（Pads polyphylla Smith vat. yurmanensis）的甾体皂苷类成分进行研究。方法：采用大孔树脂，硅胶柱色谱，Sephadex LH-20及RP-C18等技术分离纯化单体化合物，根据理化性质、波谱数据鉴定其结构。结果：从云南重楼乙醇提取物中分离并鉴定了9个甾体皂苷类化合物：（23S．25s） -3β3,23,27-trihydroxyspirost-5-en-3- O-β- D-glueopyranosyl- （1→6） -β- D-glueopyranoside （ 1 ）、重楼皂苷Ⅰ（2）、重楼皂苷Ⅱ （ 3 ）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-β- D-glueopyranoside （ 4 ）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-α- L-αrabinofuranosyl （ 1 → 4 ）-β- D- glueopyranoside （5）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-α- L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2） -β- D-glueopyranoside （6）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-β- D-glueopyranosyl （ 1 → 3 ） [ α- L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2 ） ]-β- D-glueopyranoside （ 7 ）, （ 25 R ） permogenin-3- O-α- L - arabinofuranosyl （ 1 → 4） [ a-L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2）-β-D-glueopyranoside （8）, （ 25R ） permogenin-3-O-α-L- rhamnopyranosyl （ 1→4）-α-L-rhamnopyranosyl （ 1→4）-[ α- L-rhamnopyranosyl（1→2） ]-β-D-glueopyranoside（9） 。结论：化合物1为新化合物。     

4种重楼不同部位4种重楼皂苷含量的分析

目的:研究评价不同品种重楼的不同组织部位的药用价值。方法:分别提取华重楼、七叶一枝花、球药隔重楼和狭叶重楼的地下根茎、地上茎、叶、种子、果皮和外种皮的重楼皂苷,采用HPLC检测其重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ含量。结果:4种重楼的地下根茎中重楼皂苷总含量均高于地上部分,其中,七叶一枝花的地下根茎的重楼皂苷总含量最高,为26.34 mg·g~(-1);对于地上不同组织部位而言,七叶一枝花果皮的重楼皂苷Ⅰ含量、种子的重楼皂苷Ⅵ含量、外种皮的重楼皂苷Ⅶ含量分别为10.18,0.84,8.61 mg·g~(-1);球药隔重楼种子的重楼皂苷Ⅱ含量最高,为1.1 mg·g~(-1)。结论:七叶一枝花地下根茎以及整株材料的重楼皂苷总含量最高,可作为后期人工栽培的优良品种;重楼地上茎、果皮和外种皮中的重楼皂苷Ⅰ含量与其地下根茎的含量具正相关性,可通过检测重楼地上部分的重楼皂苷Ⅰ含量初步评价其地下根茎的药用价值。     

滇重楼不同生长发育期化学成分的变化规律

目的:建立滇重楼HPLC指纹图谱,考察滇重楼不同生长期主要化学成分的变化。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agela Venusil XBP-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;检测波长210 nm;柱温35℃。结果:滇重楼中所含成分的各色谱峰均得到了有效的分离,在指纹图谱中共有峰20个,并指认了4个色谱峰。滇重楼化学成分随生长期的不同而各异。结论:该方法为滇重楼质量控制以及实现规范化种植提供了参考依据。     

不同生境滇重楼根际解磷菌的筛选与鉴定

二级濒危药用植物滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis野生资源严重匮乏,引种栽培可缓解市场需求,筛选滇重楼根际土壤解磷菌,为开发高效微生物菌肥提供数据支撑.该研究从云南、四川和贵州3个地区10个不同地点的野生和移栽品种的滇重楼根际土壤中分离筛选具有矿化有机磷能力的根际解磷菌,经分离纯化后...     

滇重楼GAox基因的克隆与生物信息学分析

目的:克隆编码滇重楼赤霉素合成代谢途径中关键酶GA氧化酶(Gibberellic oxidase,GAox)的全长cDNA序列,并进行生物信息学分析。方法:根据滇重楼转录组测序序列,设计特异性PCR引物,利用RT-PCR技术扩增目标基因编码区的全长序列连接至pMD18-T载体上,进行序列测定及序列同源性比较分子系统进化树构建、结构域搜索及蛋白质三维结构预测等生物信息学分析。结果:成功克隆了滇重楼的的6条GAox基因,大小在1000 bp左右,分别命名为PpGA2ox1、PpGA2ox2、PpGA2ox3、PpGA2ox4、PpGA20ox1和PpGA3ox1。6条基因分别属于GA氧化酶三个不同的亚家族。滇重楼GAox蛋白氨基酸数量均在300~400,理论等电点在4~7左右,带正电荷。PpGA2ox1、PpGA2ox2和PpGA2ox4为不稳定蛋白,PpGA2ox3、PpGA20ox1和PpGA3ox1为稳定蛋白,均为没有跨膜结构域和信号肽的亲水蛋白。除了PpGA2ox1亚细胞定位在叶绿体,其他蛋白均定位在细胞质。滇重楼GAox蛋白与不同物种同源序列的序列相似性较高,保守性比较强。结论:首次从滇重楼中克隆了6条GAox基因并对其进行了初步的生物信息学分析。     

菌根真菌对人工栽培滇重楼重金属元素的影响

目的比较接种和不接种丛枝菌根真菌对滇重楼根茎中重金属元素铅、镉、砷、铜、汞的影响。方法通过室温盆栽接种试验方法,采用微波消解-原子吸收光谱法测定并比较收获滇重楼根茎中重金属的差异。结果不同丛枝菌根真菌对滇重楼根茎中重金属量的影响存在差异。接种丛枝菌根真菌能部分地降低其根茎中重金属含有量,所测量值均低于《药用植物及制剂进出口绿色行业标准(WM2-2001)》和《中国药典》2010年版相应的重金属限量标准。结论人工接种丛枝菌根真菌可保证滇重楼临床用药的安全性。     

滇重楼种胚休眠和发育过程中内源激素变化的研究

目的:探讨滇重楼种胚休眠和发育过程中种子内源激素的动态变化。方法:用酶联免疫吸附法(ELISA)测定不同时期滇重楼种子内源激素GA3、IAA、ZR和ABA的动态变化。结果:低温层积初期,滇重楼种子ABA的含量呈下降趋势,且较明显;进入生理后熟期以后,GA3、IAA、ZR的含量持续升高。结论:滇重楼种胚休眠和发育过程中,ABA含量显著下降,与休眠解除有较大的相关性;而在滇重楼种胚的发育期,特别是滇重楼种胚的生理后熟期,GA3、IAA、ZR含量逐渐升高,其变化趋势与滇重楼种胚快速分化、发育相一致。抑制物质的减少及促萌物质的增加与积累,最终导致滇重楼种胚休眠的解除。     

滇重楼皂苷成分体内外抗肺癌活性研究

目的 研究滇重楼皂苷成分滇重楼总皂苷、滇重楼皂苷Ⅰ、薯蓣皂苷元的抗肺癌活性.方法 以小鼠肺腺癌细胞株LA795及其宿主近交系T739荷瘤小鼠为研究模型,采用MTT法检测滇重楼总皂苷、滇重楼皂苷Ⅰ和薯蓣皂苷元的细胞毒活性,荷瘤小鼠实验检测抑瘤率、组织病理形态变化及瘤细胞转移情况.结果 MTT结果显示滇重楼总皂苷、滇重楼皂苷Ⅰ和薯蓣皂苷元对LA795细胞牛长有很强的抑制作用,其IC50分别为24.33 μg/mL,1.85、149.75 μtmol/L;各受试药物高剂量组对T739荷瘤小鼠抑瘤率分别为41.82%、29.44%、33.94%;滇重楼总皂苷给药组可不同程度抑制肿瘤细胞的肺转移和肝转移.结论 滇重楼总皂苷成分在体外、体内皆有强的抗肺癌作用.     

变温层积对解除滇重楼种子休眠及其内源激素变化的研究

目的研究滇重楼种子破休眠的方法及其内源激素水平变化规律。方法以变温层积处理的滇重楼种子为材料,利用高效液相色谱法(HPLC)测定种胚发育过程中植物激素赤霉素(GA)、吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)量的变化与种子胚率的关系。结果变温层积处理可在3个月内打破滇重楼种子休眠,其GA量显著升高,ABA量显著下降。结论内源激素ABA和GA在滇重楼种子休眠与萌发过程中起着重要的作用。