补气化痰方对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的抑制及凋亡保护作用

目的 研究补气化痰方对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤后的保护及可能的机制.方法 将经氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞分为5组:补气化痰方药物血清低、中、高剂量组,模型组和正常对照组.用MTT法观察补气化痰方药物血清对经氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞抑制作用的保护;采用westernblot检测法测定细胞Bax与Bcl-2蛋白水平探讨其可能的机制.结果 补气化痰方药物血清能减少经氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤生长的抑制,并通过上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白途径达到抑制氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞的损伤.结论 补气化痰方对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤具有一定的保护作用.     

氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对内皮细胞损伤的可能机制.方法 用不同质量浓度的ox-LDL处理体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24h,观察HUVECs的形态学变化,评价细胞增殖,观察PI染色后细胞核的形态改变.使用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比,100mg/L ox-LDL能够促进细胞增殖,200mg/L ox-LDL对细胞增殖无影响,400mg/L ox-LDL明显抑制细胞增殖并可明显引起细胞凋亡,与空白对照组比较差异有统计学意义.结论 ox-LDL能抑制内皮细胞增殖并引起细胞凋亡,这可能与其致动脉粥样硬化(AS)作用机制有关,可用ox-LDL刺激体外培养的内皮细胞进行AS研究.     

绿谷灵芝抑制低密度脂蛋白的氧化及单核细胞对内皮细胞的粘附作用

目的：采用血清药理学方法研究绿谷灵芝对代密度脂蛋白（LDL）氧化作用的影响，以及对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL)和晚期糖基化终末产物（AGE）诱导的单核细胞内皮细胞粘附作用的影响。方法：通过检测培养上清中硫代巴比妥酸反应物质（TBARS）的生成表示含药血清对LDL的氧化作用，用白细胞髓过氧化物酶法测定单核细胞对内皮细胞的粘附作用。结果：0．12g/kg绿谷灵芝一次给药组0．5h、1h、2h、3h，两次给药0．5h、1h取血分离得到的血清对LDL氧化作用无明显影响，两次给药2h、3h以及0．12g/kg、0.24g/kg、0.72g/kg绿谷灵芝连续给药10天后，取血分离得到的血清均可降低LDL的氧化作用（P＜0．05）；0．24g/kg、0．72g/kg绿谷灵芝连续给药10天后，取血分离得到的血清均可抑制由ox-LDL和AGE诱导的单核细胞对内皮细胞的粘附作用（P＜0．05）。结论：绿谷灵芝含药血清能显著降低LDL的氧化作用，减轻由ox-LDL和AGD诱导的单核细胞对内皮细胞的粘附作用。     

白花丹参水溶性部位抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:探明白花丹参对脂多糖处理的血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制。方法:内毒素处理培养的人脐静脉内皮细胞造成细胞凋亡。培养液中添加系列浓度的白花丹参水溶性成分培养细胞,倒置相差显微镜观测细胞形态变化。吖啶橙染色,共聚焦显微镜观测凋亡细胞核片段化状况;PI染色,流式细胞仪检测细胞周期分布。生化试剂盒检测细胞内脂质过氧化物(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果:脂多糖处理使血管内皮细胞形成大量凋亡小体,细胞核片段化严重,并明显降低了细胞存活率,改变了细胞周期的正常分布,阻止细胞由G1期进入S期,同时显著上调了细胞中的MDA含量,而下调了其中的SOD、GSH-PX活性明显。白花丹参水溶性部位在一定浓度范围内,剂量依赖性地逆转脂多糖引起的上述变化。结论:白花丹参水溶性部位可能通过调节细胞氧化应激状态抑制脂多糖导致的血管内皮细胞凋亡。     

黄芩苷对氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡的防护作用

目的：研究黄芩苷抑制氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的血管内皮细胞凋亡及其介导机制。方法：应用大鼠模型,以低密度脂蛋白（LDL）体内诱导血管内皮细胞凋亡,并以黄芩苷进行干预,观察其对LDL诱导血管内皮细胞凋亡的影响。原位末端标记技术（TUNEL）法检测凋亡细胞,比色法测半胱天冬蛋白酶3（Caspase-3）的活性。结果：LDL组与氯化钠对照组比较,血管内皮细胞凋亡数显著增加,caspase-3酶活性显著增高,黄芩苷干预组与LDL组比较,凋亡细胞数显著减少,caspase-3酶活性下降。结论：LDL可能通过激活caspase-3使大鼠血管内皮细胞凋亡;黄芩苷可通过抑制caspase-3酶活性抑制LDL诱导的细胞凋亡。     

红芪总黄酮对氧化低密度脂蛋白致内皮细胞损伤的保护作用

目的研究红芪总黄酮对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用.方法建立ox-LDL致脐静脉内皮细胞损伤模型,化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性.结果红芪总黄酮可显著降低ox-LDL损伤脐静脉内皮细胞的LDH释放,使细胞分泌的NO含量升高,提高细胞内SOD及NOS活性.结论红芪总黄酮对ox-LDL诱导脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关.     

3'-大豆苷元磺酸钠对氧化低密度脂蛋白致内皮细胞损伤的保护作用研究

目的 研究3'-大豆苷元磺酸钠(DSS)对氧化低密度脂蛋白诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制.方法 体外培养脐静脉内皮细胞,将细胞分为空白对照组、氧化损伤对照组(ox-LDL)、氧化损伤加入维生素E对照组(VE+ox-LDL)、氧化损伤加入DSS低、中、高浓度组(DSS-L、DSS-M及DSS-H组).将ox-LDL作用于预先加入VE及不同浓度DSS预处理24 h的内皮细胞,继续培养24h,MTT法检测细胞活力,比色法检测丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的含量,检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.结果 预先加入VE、中高浓度的DSS可提升损伤的内皮细胞的活力,可显著降低损伤内皮细胞的MDA及NO的释放,可显著提升损伤细胞的LDH、NOS、SOD和GSH-Px的活性,但低浓度的DSS对上述指标影响不大.结论 DSS可减轻ox-LDL对血管皮细胞的氧化损伤,起到一定的抗氧化保护作用.     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊血清对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞凋亡的影响。方法：复制氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导血管内皮细胞凋亡模型，采用流式细胞术、形态学观察、DNA片段琼脂糖凝胶电泳等方法，观察沥水调脂胶囊含药血清对氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的作用。结果：200μg/ml ox-LDL作用于培养的人脐静脉内皮细胞24h后，凋亡率明显升高，Hoechst33342染色，荧光显微镜上可观察到早、中、晚期各种典型的凋亡细胞，DNA电泳可见细胞凋亡特有的梯形条带。沥水调脂胶囊血清使内皮细胞凋亡率明显下降，DNA凋亡带减弱。结论：沥水调脂胶囊对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡有一定的抑制作用。     

地骨皮调控H2O2所致内皮细胞凋亡的有效部位及相关信号通路研究

目的：筛选地骨皮调控H2O2所致人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HU-VEC）凋亡的有效部位,并研究相关的信号转导通路,探讨其保护作用的分子机制。方法：用H2O2构建凋亡模型,运用MTS检测细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率筛选地骨皮有效部位,及Western观察相关信号通路蛋白P-AKT、P-NF-KB表达情况。结果：地骨皮30%,50%,70%醉提取部位均可以减少HUVEC的凋亡,可以明显增加P-AKT的表达,降低P-NF-KB活性,尤其55%醇提地骨皮用量最小效果最佳。结论：地骨皮抑制H2O2所致HUVEC凋亡的主要成分在55%醇提部位,它可以通过AKT、NF-κB信号通路起到抗凋亡的作用。     

温阳活血方有效部位促进分化抑制因子1表达及抑制内皮细胞自噬性死亡的研究

目的 探讨温阳活血方对自噬损伤内皮细胞保护作用的物质基础以及对凋亡相关因子Activate Caspase-3、自噬相关蛋白泛素结合蛋白P62以及分化抑制因子1（ID1）表达的影响。方法 将温阳活血方不同极性提取物（石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和水提取物）作用于过氧化氢诱导的自噬性损伤内皮细胞模型,应用二苯基四氮唑溴盐（MTT）法观察内皮细胞的活性,用气相色谱-质谱联用技术（GS-MS）分析有效部位的化学成分,Western blot法检测有效部位对Activate Caspase-3、P62、ID1表达的影响。结果 温阳活血方石油醚部位可提高内皮细胞活性;GS-MS检测发现石油醚部位主要成分有4-（4-羟基-3-甲氧基苯基）-2-丁酮、3-丁烯基苯酞、Z-藁本内酯、E-藁本内酯、2,10-冰片二醇、Z,Z-9,12-亚油酸、6-姜酚、8-姜酚等;Western blot检测发现,石油醚部位能上调ID1、P62的表达,抑制Activate Caspase-3的表达。结论 石油醚部位是温阳活血方对抗内皮细胞自噬性死亡的活性部位,其通过降低内皮细胞内Activate Caspase-3的表达,提高P62和ID1的表达,以对抗内皮细胞的自噬性死亡。     

蕨麻正丁醇部位抑制缺氧损伤心肌细胞凋亡及Caspase 3/9表达

目的:研究蕨麻正丁醇部位对缺氧损伤心肌细胞凋亡及Caspase 3、Caspase 9表达的抑制作用。方法:建立大鼠原代培养心肌细胞缺氧模型,HE染色观察细胞组织形态,PI-Hochesst3342染色观察细胞凋亡,RT-PCR技术及免疫细胞化学染色方法检测细胞Caspase 3、Caspase 9 mRNA及其产物蛋白水平。结果:与模型组比较,正丁醇部位各剂量组Caspase 3、Caspase 9 mRAN表达水平均显著降低(P0.05或P0.01);高剂量组Caspase 3、Caspase 9蛋白水平显著降低(P0.01)。结论:蕨麻正丁醇部位可能通过减弱缺氧诱导的心肌细胞Caspase级联反应,抑制心肌细胞凋亡。     

蛇床子素通过Akt/eNOS降低氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡

目的:探讨蛇床子素对低密度脂蛋白诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及其机制研究。方法:采用HUVEC细胞,设置正常组、模型组和给药组,细胞培养12 h后,低密度脂蛋白进行细胞损伤,同时给予不同浓度蛇床子素(10、20、40μmol/L)进行干预,应用MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC标记的流式细胞术检测细胞凋亡;检测一氧化氮生成量;免疫印迹法检测p-AKt和p-eN OS蛋白表达水平。结果:与正常组相比,模型组细胞活力和凋亡率有显著差异;与模型组相比,蛇床子素提高细胞活力,抑制细胞细胞凋亡,作用效果呈剂量依赖性,20、40μmol/L蛇床子素均有显著性差异;与模型组相比,20、40μmol/L蛇床子素显著促进细胞一氧化氮合成;蛋白质检测结果显示,与模型组相比,蛇床子素可上调HUVEC细胞中Akt和eN OS蛋白磷酸化水平。结论:蛇床子素能够抑制ox-LDL诱导HUVEC的凋亡而发挥其保护作用,其作用机制可能与其激活Akt/eNOS/NO的信号通路相关。     

调心方有效部位对类AD大鼠脑组织凋亡信号转导分子Caspase-3及凋亡相关基因bcl-2、bax mRNA表达的影响

目的研究调心方有效部位（TX0201）对Aβ25-35所致类AD模型大鼠脑组织凋亡相关基因调节作用机制的异同。方法采用双侧杏仁核注射Aβ25-35造成类AD大鼠模型,观察大鼠Morris水迷宫空间记忆能力,并分别通过RTPCR和免疫组化方法研究类AD大鼠神经元细胞凋亡相关基因bax、bcl-2 mRNA,特异的凋亡信号转导分子Caspase-3和A8阳性神经元变化以及TX0201的影响。结果类AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,App695 mRNA表达提高,Caspase-3和bax／bcl-2上升。TX0201能有效控制以上病理变化。结论TX0201提高模型大鼠定向学习记忆能力,可能通过降低bax／bcl-2、下调Caspase-3而减轻神经细胞凋亡而发挥作用。提示通过有效调节神经元凋亡相关基因是TX0201的重要作用机制之一。     

丹参素对氧化低密度脂蛋白致血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 探讨丹参素( DSS)对氧化低密度脂蛋白(ox - LDL)致血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响和机制.方法 采用反复贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养成功后,采用第3～10代细胞应用于实验.收集培养的细胞种植在6孔板中的4个孔中,分为4组:①正常组;②ox - LDL(100 mg/L)干预组;③ox - LDL(1 00 mg/L)+ DSS( 50 mg/L)干预组;④ox - LDL(100mg/L)+ DSS(100 mg/L)干预组,作用12h后,收集每孔细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 丹参素可明显升高ox - LDL引起的凋亡指数升高.结论 丹参素可促进ox - LDL致血管平滑肌细胞凋亡.     

丹参麦冬水溶性部位对过氧化氢致血管内皮细胞凋亡的影响

目的研究丹参与麦冬的水溶性部位6部位(MD-6)对过氧化氢H2O2损伤人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC凋亡的保护作用及机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),以H2O2行内皮细胞凋亡造模后,再加入不同浓度的MD-6作用24 h。用MTT法检测细胞生长活力,Hoechst染色观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,Western Blot检测ERK蛋白含量变化。结果H2O2造模后,细胞增殖明显受抑,Hoechst染色见大量凋亡细胞,流式细胞检测出明显凋亡峰,ERK的表达量有明显的下降,而加药组的ERK表达量一定程度回升与正常组相比P0.01,具有明显的统计学意义。结论丹参与麦冬的乙酸乙酯提取部位MD-6保护内皮细胞,抗内皮细胞凋亡。     

内热针疗法对膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡及Caspase-3和Caspase-9表达的影响

目的:探究内热针疗法对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠软骨细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶3和9(Caspase-3和Caspase-9)表达的影响。方法:采用随机数字分组法将32只大鼠分为正常组、模型组、对照治疗组和治疗组,每组8只。正常组不予任何治疗,其余3组采用经改良后的Videman法左后肢伸直位固定制动法建立大鼠KOA模型,牵拉大鼠左后肢踝关节使其处于完全伸直位,并采用树脂绷带进行固定,共制动6周。造模成功后,模型组大鼠不给予任何治疗;对照治疗组大鼠给予中频脉冲电疗法;治疗组大鼠予内热针进行治疗,每次30min,每天1次,每周休息2d,共治疗3周。3周后,分离损伤软骨组织,采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining,HE)观察各组大鼠膝关节软骨组织病理变化;采用酶联免疫吸附反应(enzyme linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测组织匀浆上清液中细胞色素C(cytochrome-C,Cyt-C)的含量。分离损伤软骨组织中的软骨细胞,采用流式细胞仪分别检测各组细胞凋亡及线粒体膜电位变化;分别采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot,WB)检测软骨细胞中Caspase-3和Caspase-9在mRNA和蛋白水平上的表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠软骨组织损伤明显;损伤软骨组织匀浆上清液中Cyt-C的表达水平上升(P0.01);软骨细胞凋亡显著增加(P0.01);软骨细胞线粒体细胞膜电位显著下降(P0.01);Caspase-3和Caspase-9在mRNA及蛋白水平上的表达显著增加(均P0.01)。与模型组比较,对照治疗组和治疗组KOA大鼠软骨组织损伤得到明显缓解;损伤软骨组织匀浆上清液中Cyt-C的表达水平降低(均P0.01);软骨细胞凋亡显著降低(均P0.01);软骨细胞线粒体细胞膜电位显著升高(均P0.01);Caspase-3和Caspase-9在mRNA及蛋白水平上的表达显著降低(均P0.01)。与对照治疗组比较,治疗组对KOA大鼠的治疗作用更加显著。结论:内热针能显著改善KOA大鼠的病理学变化,抑制KOA中软骨细胞的凋亡,这可能与其抑制Caspase-3和Caspase-9的表达密切相关。     

通脉汤对氧化低密度脂蛋白损伤内皮细胞核因子-κB表达的影响

血管内皮损伤是动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）发生的始动环节,内皮功能障碍在冠状动脉粥样硬化性心脏病（Coronary Heart Disease）的发病机制中起重要作用。氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）是引起内皮损伤的关键因素之一,血管内皮损伤能促进血管内皮的氧化和炎症。ox-LDL可通过激活转录因子NF-κB,诱导血管内皮细胞及单核-巨噬细胞表达粘附分子、趋化性细胞因子、促炎因子及其它炎症反应的中介物。通脉汤是治疗冠心病的中药复方,是孙明教授经过多年临床实践总结出来的经验方,     

罗布麻叶抑制喂饲胆固醇大鼠低密度脂蛋白的氧化

罗布麻Apocynum venetum 叶富含矿物质如Ca、Fe和Na等,但不含咖啡因。作者在对药用及食用植物进行研究时发现罗布麻叶提取物具有自由基清除作用。其提取物在体外能有效抑制酶或非酶引起的脂质过氧化反应,显著提高大鼠体内SOD、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化酶的活性,并能降低血中总     

养血活血药抑制低密度脂蛋白氧化的研究

运用电子顺磁共振 (EPR)技术 ,研究养血活血药 (当归、桑椹、黄精、首乌 )对抑制脂质自由基的猝灭能力。建立低密度脂蛋白氧化的模型 ,采用EPR技术捕获在低密度脂蛋白氧化过程中所产生的脂质自由基 ,分别观察当归、桑椹、黄精、首乌这 4种药物对脂质自由基的抑制作用。结果 ,在 1 5g/ml浓度下对脂质自由基的猝灭能力单味当归为 73 4%、单味桑椹为 71 5 %、单味黄精为 40 9%、单味首乌无抑制能力。中药当归、桑椹具有抑制低密度脂蛋白氧化的能力 ,为良好的抗氧化剂。     

白藜芦醇对脑缺血再灌注后细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 研究白藜芦醇(Res)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响.方法 48只SD雄性大鼠随机分成4组,假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、Res低剂量组(15 ms/kg,I/R+R1组)和Res高剂量组(30 ms/ks,I/R+R2组).缺血2 h再灌注24 h,TTC法测鼍脑梗死体积,原位末端标记(TUNEI)法检测脑细胞凋亡水平,免疫组化法及Western blot检测Caspase-3蛋白表达,结果 与I/R组相比,Res能明显抑制缺血区脑组织Caspase-3蛋白的表达(P<0.01),减少凋亡细胞数(P<0.01),缩小脑梗死体积(P<0.01).结论 Res对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡有抑制作用,其机制可能与Caspase-3表达下降有关.