葛根素注射液浓度对红细胞溶血率的影响

目的 考察体外溶血实验葛根素注射液浓度对红细胞膜脆性的影响及与红细胞溶血率的相关性.方法 用热诱导法考察50℃时葛根素注射液对Beagle犬红细胞膜脆性的影响;将不同浓度的葛根素溶液分别与Beagle犬红细胞、豚鼠红细胞在温度为37℃的生化培养箱内孵育6 h,于不同时间点观察各样品管的溶血程度,并于6 h后通过紫外分光光度计测定各管在波长540 nm处的吸光率,计算溶血率.结果 高温条件下葛根素注射液可加剧Beagle犬红细胞溶血程度;葛根素注射液均能直接引起Beagle犬、豚鼠红细胞溶血,溶血率与葛根素浓度成明显的量效关系.结论 葛根素注射液在一定浓度下可引起红细胞膜脆性增加;随着浓度的升高葛根素注射液的溶血作用更明显.     

葛根素亚微乳的制备及体内抗溶血评价

 目的制备葛根素亚微乳,并对葛根素亚微乳体内的抗溶血进行评价。方法以复合物-相转变-高压乳化法制备葛根素亚微乳,以红细胞数,血浆结合珠蛋白,血浆血红蛋白,红细胞渗透脆性等血液参数值为评价指标,以市售葛根素注射液为对照,进行葛根素亚微乳体内抗溶血评价研究。结果相转变乳化法制备的葛根素亚微乳的理化性质稳定,平均粒径188.14nm,Zeta电位-29.03 mV,包封率89.72%。体内溶血实验结果表明,葛根素亚微乳组家兔的红细胞数,血浆结合珠蛋白,血浆血红蛋白,红细胞渗透脆性等水平与空白对照组没有显著性差异,而市售葛根素注射液组家兔出现了血管内溶血现象。结论相转变乳化法制备的葛根素亚微乳理化性质稳定,凭借亚微乳载药系统对葛根素的包合作用,减轻了葛根素血管内溶血的不良反应,更安全有效。     

葛根素注射液体外溶血的实验研究

目的 研究葛根素注射液对Beagle犬红细胞的溶血作用.方法 取24只Beagle犬的红细胞,分别与不同浓度的葛根素注射液(1～10 mg/mL)、丙二醇溶液(2%～20%)共同孵育,观察24 h内红细胞的状态和溶血发生率,用χ2检验统计分析溶血实验结果.结果 增大葛根素注射液浓度、延长与供试品(红细胞)反应时间(葛根素10 mg/mL,丙二醇浓度20%,反应时间24 h),24只Beagle犬红细胞的溶血发生率高达66.7%,而等浓度丙二醇对照溶液组的溶血发生率为16.7%,两者差异有显著性(P<0.01).结论 与常规溶血试验方法相比,本研究中改进的溶血反应评价方法能够更准确检测出葛根素注射液所致的偶发性溶血反应,所致溶血反应主要由高浓度的葛根素所引起.     

金针菇多糖对小鼠血清溶血素产生及抗体形成细胞的影响

目的：探讨从金针菇多糖(FVP)中分离的成分FVP l对小鼠体液免疫的影响。方法：正常小鼠及接种S180的荷瘤小鼠，分别设FVP1的不同剂量组(5mg/kg/d,10mg/kg/d,20mg/kg/d)和空白对照组，腹腔注射给药后连续6天；第一次给药后3h 腹腔注射SRBC进行免疫，末次给药后2h，摘眼球取血和脾脏，进行小鼠血清溶血素抗体测定及脾细胞介导羊红细胞定量溶血分光光度试验(QHS)。结果：荷瘤小鼠的溶血素生成明显低于正常小鼠，QHS反应也较正常小鼠明显受抑。FVP1可不同程度地促进正常和荷瘤小鼠的溶血素生成及QHS反应。结论：荷瘤小鼠存在着体液免疫功能的下降，FVP1体内给药对机体的体液免疫功能有一定的增强作用。     

清开灵注射液的单次给药毒性反应研究

目的:研究清开灵注射液引起的毒性反应。方法:单次给药毒性试验——昆明种小鼠尾静脉注射药液1次,观察14 d内动物的反应。体外溶血试验——对不同清开灵注射液及其成分进行溶血试验。结果:在给药后很短时间内,随药物剂量增加,小鼠出现乏力、抽搐、昏迷甚至死亡的不同反应;高剂量组小鼠,在血常规检测中发现红细胞、白细胞计数以及血红蛋白含量偏低,在病理切片中显示肺部充血明显;用药组与生理盐水对照组比较血清电解质(K+、Na+,Ca2+)含量无显著性差异;清开灵注射液拆方后的金银花、栀子在一定浓度条件下均可引起溶血,其中金银花的溶血作用最明显;不同批号的清开灵注射液在较高浓度下也产生不同程度的溶血作用。清开灵注射液在体外对其致敏Balb/C小鼠和未经致敏Balb/C小鼠的溶血度无显著差异。结论:清开灵注射液在临床上的部分不良反应,可能是药液中金银花和栀子等引起血管内急性溶血而出现的,且溶血作用与过敏性无关。     

虎杖苷注射液的溶血、过敏及刺激试验

目的观察虎杖苷注射液的溶血、过敏和刺激反应，为临床安全用药提供参考。方法采用兔血体外溶血，豚鼠和大鼠全身过敏、被动皮肤过敏，兔血管刺激和肌肉刺激的方法，观察虎杖苷注射液的溶血、过敏和刺激反应。结果虎杖苷注射液各管在30，60，180min均未发生溶血现象，也未出现红细胞凝集反应；虎杖苷注射液不引起豚鼠全身过敏反应和大鼠被动皮肤过敏反应；虎杖苷注射液（0．39mg／mL）5．6mg／kg对兔耳血管和肌肉均无刺激作用。结论在本实验条件下，虎杖苷注射液（0．39mg／mL）没有体外溶血作用和凝集反应；无全身过敏反应和被动皮肤过敏反应；对兔耳血管和肌肉均无刺激作用。     

火把花根片抑制溶血素抗体的量-时-效关系研究

目的:观察火把花根片抑制溶血素抗体的生成作用,考察量效关系与时效关系,为确定药物的最佳给药剂量和给药时间提供参考。方法:通过给小鼠腹腔注射鸡红细胞产生溶血素抗体的模型,观察不同给药剂量和不同给药时间对小鼠溶血素抗体生成的影响,同时进行了火把花根片对首次免疫和二次免疫后溶血素抗体生成抑制作用的比较研究。结果:量效关系实验结果表明:5g生药/kg、10g生药/kg及15g生药/kg对溶血素抗体生成的抑制率分别为0%、43.6%及71.8%。时效关系实验结果表明:火把花根片15g生药/kg给药3天、5天、7天的抑制率分别为24.0%、41.7%和61.1%;给药7天后停药,第7天、第14天、第21天及第28天的抑制率分别为27.3%、34.8%、41.4%及58.8%。首次和二次免疫实验结果表明:15g生药/kg连续给药14天,第7天和第14天(二次免疫)的抑制率分别为61.1%及6.3%。结论:火把花根片对小鼠溶血素抗体的生成有明显的抑制作用,半数有效量为:9.69g生药/kg,最佳给药剂量是15g生药/kg,最佳给药时间是7天,给药7天后的维持时间不低于4周。15g生药/kg连续给药14天对第二次免疫后溶血素抗体的生成没有明显的抑制作用。该研究为火把花根片的质量控制及该药物在临床更合理的使用提供有益的试验依据。     

葛根素对体内外晚期糖基化终末产物形成的抑制作用

目的研究葛根素对体内外晚期糖基化终末产物(AGEs)形成的影响。方法 C57BL/6小鼠采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(40 mg/kg)构建糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组,氨基胍组(100 mg/kg),葛根素低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组,另设对照组。连续给药8周后,检测空腹血糖(FBG)、口服糖耐量(OGTT)、糖化血清蛋白(GSP)及血清AGEs水平。此外将不同浓度的葛根素(0.5、1.0、2.0 mmol/L)与丙酮醛和牛血清白蛋白共孵育144 h,建立体外非酶糖基化反应模型,用荧光光度法测定AGEs的荧光值,考察葛根素体外抑制AGEs生成的规律。结果葛根素能够显著降低糖尿病小鼠的FBG,改善OGTT,抑制GSP及血清AGEs的生成。葛根素在体外非酶糖基化反应体系中抑制AGEs的生成,并有一定的剂量依赖性。结论葛根素可以显著降低糖尿病小鼠的FBG,对体内外AGEs的形成具有明显的抑制作用。     

楮实子对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠免疫功能的影响

目的：研究楮实子对环磷酰胺模型小鼠免疫功能的影响。方法：以环磷酰胺制备小鼠免疫低下模型并结合体外药理实验，测定灌胃给药后小鼠体内巨噬细胞吞噬率、血清溶血素抗体水平，并观察植物血凝素诱导T淋巴细胞的增殖反应。采用含药血清体外培养小鼠腹腔巨噬细胞，MTT法考察巨噬细胞的活性，并观察体外培养的巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数。结果：楮实子提高免疫抑制小鼠碳粒廓清率，促进血清溶血素形成。结论：楮实子有提高免疫抑制小鼠免疫功能的作用，但未显示出促进T淋巴细胞增殖的作用。     

天麻注射液对小鼠脾淋巴细胞转化的影响

目的 :观察天麻注射液对小鼠脾淋巴细胞转化的影响。方法 :采用 3H_TdR参入法检测ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖。结果 :①腹腔注射2 5mg/kg,5mg/kg,10mg/kg,20mg/kg天麻注射液12h,ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞转化明显高于对照组 (P<0.05,P<0.01) ;40mg/kg的天麻注射液对小鼠脾淋巴细胞转化无明显影响。②体外实验0 1μg/ml～100μg/ml的天麻注射液组与对照组比较 ,小鼠脾淋巴细胞转化明显增加 (P<0.05,P<0.01) ;200μg/ml～400μg/ml天麻注射液组的小鼠脾淋巴细胞转化与对照组比较 ,差异无显著性意义 ;800μg/ml天麻注射液组的小鼠脾淋巴细胞转化则显著低于对照组。结论 :低浓度的天麻注射液(腹腔注射2 5～20mg/kg,体外实验0 1～100μg/ml)具有提高小鼠脾淋巴细胞转化的功能 ,中等浓度的天麻注射液(腹腔注射40mg/kg,体外实验200～400μg/ml)对ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞转化无明显作用 ,而高浓度的天麻注射液(体外实验800μg/ml)则有抑制小鼠脾淋巴细胞转化的作用     

葛根素注射液对家兔不良反应的实验研究

 目的 研究葛根素注射液的不良反应情况及作用机制。 方法 参考反映Ⅱ型变态反应的免疫毒理学研究模型，以家兔耳缘静脉注射绵羊红细胞为阳性对照组，连续注射葛根素注射液（28.6 mg·kg-1）6 d，停药1 d，持续6周，停药当天观察家兔免疫系统大体症状如呼吸困难、喷嚏等，并监测体温；检测血液、尿液中溶血相关指标和肝肾功能指标；用Coombs实验法检测家兔血清体外使红细胞溶血情况；给药结束后处死家兔测定脏器指数，并进行组织学观察。 结果 家兔注射葛根素注射液3周开始出现尿潜血，第5、6周血浆游离血红蛋白显著增加，提示家兔可能出现血管内溶血。中性粒细胞数目从1周开始减少，其中第4周与对照组相比有显著性差异（P<0.05），提示对粒细胞有损伤；淋巴细胞数目在第2周显著增加（P<0.05）；血小板数目于第6周显著增加；脏器指数显示胸腺增生，提示免疫系统参与此过程。血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）及肝脏病理学结果提示肝脏损伤。而免疫系统大体反应均未见显著变化。Coombs试验结果表明，3周后有67%的家兔血清在体外使与葛根素抗原共孵育的红细胞溶血，提示其含有葛根素抗体。结论 静脉注射葛根素注射液会引起家兔溶血、粒细胞减少、淋巴细胞增加及肝损伤等不良反应，其机制可能与Ⅱ型变态反应相关。     

养血注射液的血液流变学及其一般药效学试验研究

目的：研究养血注射液降低血液粘度的作用及其安全性。方法：通过大鼠血液流变学试验观察养血注射液对血液粘度的降低作用,并开展急性毒性和溶血试验,确定注射液的安全性。结果：养血注射液高剂量组能降低高、中、低切血液粘度和血浆粘度,中剂量组效果能降低中、低切血液粘度和血浆粘度,低剂量组能降低低切血液粘度和血浆粘度;小鼠尾静脉注射LD50=36．57ml／kg,3批溶血试验,溶血率均低于3．5％,符合规定。结论：养血注射液能够很好地降低血液粘度,具有毒性小、溶血率低、安全性好的特点。     

葛根提取物不同途径给药后葛根素在大鼠体内药代动力学研究

目的:研究葛根提取物经不同途径给药后葛根素在大鼠体内的药代动力学。方法:葛根提取物经大鼠尾静脉注射(i.v.)、鼻腔给药(i.n.)(20mg/kg)及灌胃给药(i.g.)(200mg/kg),以甲醇沉淀血浆蛋白质,反相高效高相液相色谱测定葛根素在大鼠血浆中的浓度,用Kinetica程序软件计算药代动力学参数。结果:葛根素在(0.05315-53.1500)mg/L线性关系良好(r=0.9999),回收率为95.72%,RSD=2.31%;计算出尾静脉注射给药途径主要药动学参数:AUC=(795.41±59.85)mg.L-1.min-1,Cmax=(65.74±7.71)μg/mL,MRT=(18.96±2.08)min,t1/2=(16.95±3.55)min;鼻腔给药途径主要药动学参数:AUC=(227.34±19.42)mg.L-1.min-1,Cmax=(3.78±1.80)μg/mL,Tmax=(7.50±2.74)min,MRT=(117.09±38.37)min,t1/2=(22.50±10.60)min;灌胃给药途径主要药动学参数:AUC=(732.48±471.57)mg.L-1.min-1,Cmax=(3.53±1.32)μg/mL,Tmax=(27.00±16.43)min,MRT=(394.22±209.24)min,t1/2=(237.84±112.39)min;结论:葛根提取物经3种途径给药的主要药动学参数具有显著性差异,鼻腔给药吸收迅速,生物利用度较口服高,该结果可以为葛根提取物的给药途径和剂型研究提供科学依据。     

葛根素和葛根总异黄酮的雌激素样活性

目的：研究葛根素和葛根总异黄酮的雌激素样活性。方法：去卵巢大鼠、幼年小鼠、成年小鼠和雌激素化小鼠灌胃给予葛根素和葛根总异黄酮150－600mg/kg，连续5－9天后，阴道脱落细胞检查和子宫重量法判断雌激素样作用。结果：葛根素和葛根总异黄酮能明显增加去卵巢大鼠阴道涂片中角化细胞数量，部分恢复去卵巢大鼠的性周期；使去卵巢大鼠和幼年小鼠子宫重量明显增加，这种作用呈明显的剂量依赖性。对正常成年小鼠的子宫生长无明显影响，在合用雌二醇时，葛根素和葛根总异黄酮均使雌二醇的促子宫生长作用明显减弱。结论：葛根素和葛根总异黄酮对雌激素低下动物显示弱雌激素活性，对正常雌激素水平动物无明显雌激素样活性，而在合用雌二醇时，则部分抑制雌二醇的促子宫生长作用，提示葛根素和葛根总异黄酮具有雌激素受体部分激动剂的特性。     

葛根素注射剂致溶血的研究进展

葛根素注射剂在心脑血管疾病治疗中应用广泛,但其致溶血的不良反应已严重影响临床使用.作者系统介绍了葛根素注射剂致溶血的实验室和临床病例研究结果,并结合本课题组的前期研究工作对葛根素致溶血的机制和过敏原进行总结和评述.     

Alleviation of PEGylated Puerarin on Erythrocyte Hemolysis Induced by Puerarin in Glucose-6-phosphate Dehydrogenase- deficient Rats

Objective To explore and analyze the reducing hemolytic effects of PEGylated puerarin (PEG-PUE) on erythrocytes induced by PUE in glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD)-deficient rats. Methods The rat model with G6PD-deficiency was established via sc injecting 1% acetylphenyl-hydrazine. Then the G6PD-deficient erythrocyte suspension obtained from this rat model was used to evaluate the hemolytic effects of PUE and the reducing hemolytic effects of PEG-PUE via hemolytic activity and erythrocyte osmotic fragility assay. Results It was found that PUE could cause a serious hemolysis to the erythrocyte suspension with the increase of drug concentration and the prolongation of drug incubation time, the hemolytic rate of PUE was up to 40%, while the addition of PEG-PUE to the erythrocyte suspension revealed no significant hemolysis. Additionally, the result of erythrocyte osmotic fragility indicated that PEG-PUE exerted a slight effect on the erythrocyte membranes, and the NaCl concentration that induced 50% hemolysis (32 mmol/L) was about one-third PUE. Conclusion These results demonstrate that PEG-PUE could play a significant role in reducing the side effect of hemolysis induced by PUE. The low hemolytic activity of PEG-PUE makes it a favorable candidate for in vivo tests and PEG-PUE could also provide the useful insight for the further formulation development as an innovative drug.     

葛根素对糖尿病大鼠胰岛素、血糖及血液流变学的影响

目的:观察葛根素对糖尿病性大鼠胰岛素、血糖及血液流变学的影响。方法:采用链脲佐菌素联合完全弗氏佐剂诱导糖尿病大鼠,将造模成功大鼠随机分为模型对照组,二甲双胍250mg/kg组,葛根素高剂量组(300mg/kg)、中剂量组(150mg/kg)和低剂量组(75mg/kg),各组连续灌胃给药60d,于给药后15 d、35 d、60 d,检测胰岛素和血糖,末次给药后检测糖化血红蛋白、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及血液流变学指标。结果:与模型组相比,葛根素75、150及300mg/kg剂量组均能明显降低糖尿病大鼠的胰岛素、血糖和糖化血红蛋白的含量(P<0.01),显著升高糖尿病大鼠的SOD、降低MDA(P<0.05)。结论:葛根素能提高大鼠的抗氧化能力,改善大鼠的血液流变性。     

聚乙二醇化葛根素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨聚乙二醇(PEG)化葛根素对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用.方法 将SD大鼠随机分为6组(每组10只):假手术组,MIRI模型组,葛根素注射剂(20 mg/kg)对照组,PEG化葛根素低、中、高剂量(244、488、976 mg/kg)组.阻断大鼠升主动脉造成心肌缺血30 min,再灌注120 min,造成大鼠MIRI模型,在结扎后5 min各给药组尾iv给药.心电图监测心律失常情况,再灌注结束后腹主动脉采血,测定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转氨酶(AST)和丙二醛(MDA)水平,并测量心肌梗死面积.结果 葛根素注射剂和PEG化葛根素均具有抗心律失常,降低血清中CK、LDH、AST和MDA水平的作用,减少心肌梗死面积;其中PEG化葛根素中、高剂量组的药效明显强于葛根素注射剂组.结论 PEG化葛根素对大鼠MIRI引起的损伤具有保护作用.     

Antihyperglycemic effect of puerarin in streptozotocin-induced diabetic rats

The antihyperglycemic action of puerarin, purified from the roots of Pueraria lobata, was investigated in streptozotocin-induced diabetic rats (STZ-diabetic rats). Bolus intravenous injection of puerarin decreased the plasma glucose concentrations in a dose-dependent manner in STZ-diabetic rats. Similar treatment with puerarin also decreased the plasma glucose in normal rats, although the effect was not as great as that in STZ-diabetic rats. Puerarin at the effective dose (15.0 mg/kg) significantly attenuated the increase of plasma glucose induced by an intravenous glucose challenge test in normal rats. In the isolated soleus muscle of STZ-diabetic rats, puerarin enhanced the uptake of radioactive glucose in a concentration-dependent manner. Moreover, the mRNA and protein levels of the subtype 4 form of glucose transporter (GLUT4) in soleus muscle were increased after repeated intravenous administration of puerarin in STZ-diabetic rats for 3 days. These results suggest that puerarin can increase the glucose utilization to lower plasma glucose in diabetic rats lacking insulin.