决明子、黄芪对大鼠棕色脂肪组织线粒体内膜解偶联蛋白与鸟嘌呤核苷三磷酸结合的影响

目的:探讨决明子、黄芪对大鼠棕色脂肪线粒体内膜解偶联蛋白(UCP)活性与含量的影响。方法:用~3H 标记的鸟嘌呤核苷三磷酸(GTP)与 UCP 相结合,用液体闪烁仪测定其放射性活性,经 ScatchardPlot 分析得出两者结合的解离常数(Kd)和最大结合量(Bmax)。结果:决明子组 Bmax、Kd 值与对照组比较无显著性差异;黄芪组较对照组 Bmax 增加1.29倍,Kd 值无改变。结论:决明子对棕色脂肪线粒体内膜 UCP含量增加及活性无明显影响;黄芪能使棕色脂肪线粒体内膜 UCP 含量增加,但不能使其活性增加。     

脾阳虚证大鼠肝细胞端粒长度变化的实验研究

目的：探讨脾阳虚状态下肝细胞端粒长度的变化。方法：采用经典复合造模法塑造脾阳虚证动物模型,测定肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和肝细胞端粒长度。结果：与正常对照组相比,脾阳虚证的肝组织中的GSH-PX活性明显降低(P＜0．01),肝细胞端粒长度显著缩短(P＜0．01)。结论：在脾阳虚状态下,肝细胞端粒长度缩短可能与自由基损伤有关。     

脾阳虚证模型大鼠回肠的比较蛋白质组学探析

目的基于蛋白质组学技术筛选与脾阳虚证相关的差异蛋白质,为进一步从分子水平上探讨脾阳虚证的本质提供有力的实验依据。方法 SPF级SD大鼠36只,随机分为正常对照组(16只)和脾阳虚证组(20只)。采用饮食不节、劳倦过度及苦寒伤阳药联合应用的方法,塑造脾阳虚证模型大鼠。分离、提取脾阳虚证组与正常对照组大鼠回肠的总蛋白,行双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术,应用DelyderTM2D6.5图像分析软件识别差异蛋白点,应用MALDI串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)技术获得相应肽质量指纹图,Mascot搜库鉴定差异蛋白质。结果经过统计学和模糊数学判定,脾阳虚大鼠模型造模成功。蛋白质组学初步鉴定,得到涉及细胞骨架、能量代谢及信号传导等多方面的差异表达的蛋白质8个,其中4个表达上调的蛋白分别是:结蛋白(desmin)、角蛋白8(cytokeratin 8,CK8)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)、埃兹蛋白(ezrin);4个表达下调的蛋白分别是:甘油醛三磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)、角蛋白1(cytokeratin 1,CK1)、肌动蛋白(actin)。结论脾阳虚证状态下机体能量代谢速率减慢,能量生成减少,回肠绒毛蛋白结构变化,吸收消化功能减弱,这可能是脾阳虚证的病理机制。     

脾阳虚大鼠肽转运载体蛋白表达及转运功能的改变

目的 观察脾阳虚模型大鼠小肠黏膜肽转运载体1(PepT1)的表达及其转运功能的变化.方法 采用劳倦泄下合利血平复合因素造模法建立脾阳虚大鼠模型,RP-HPLC法测定cefalexin血药浓度以评价小肠黏膜PepT1的转运吸收功能,免疫组化方法观察脾阳虚大鼠肠上皮PepT1蛋白表达情况.结果 十二指肠给药120 min后,RP-HPLC法测定模型大鼠血清cefalexin浓度为(5.23±2.10) μg/ml,高于正常对照组的(2.52±0.47) μg/ml(P<0.01);模型大鼠小肠黏膜上PepT1蛋白表达较正常对照大鼠表达升高.结论 脾阳虚证模型大鼠小肠黏膜肽转运载体PepT1表达及对cefalexin的转运能力增强.     

附子理中汤对脾阳虚证大鼠免疫细胞因子的影响

目的: 观察附子理中汤对免疫细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探讨其对脾阳虚证免疫功能影响的可能机制。 方法: Wistar大鼠100只随机分为对照组、模型组、附子理中汤低、中、高剂量组5组,每组20只。在模型组基础上,附子理中汤低、中、高剂量组按5,10,20 g·kg^-1 ig,每天1次,连续4周。检测胸腺指数、脾脏指数、IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α含量。 结果: 与对照组比较,模型组胸腺指数,脾指数,IL-2,IL-6,TNF-α均降低(P<0.05或P<0.01),IL-10显著升高(P<0.01)。与模型组比较,附子理中汤中、高剂量组胸腺指数,脾指数,IL-2,IL-6,TNF-α均升高(P<0.05或P<0.01),IL-10降低(P<0.05或P<0.01)。 结论: 附子理中汤对细胞免疫因子产生影响,通过细胞免疫因子之间的效应可能是其改善脾阳虚大鼠免疫功能的机制之一。     

脾阳虚证大鼠心、肝、脑组织MAPK活性变化及温补脾阳方药对其影响的实验研究

目的 :探讨脾阳虚证MAPK细胞信号转导的规律。方法 :饮食不节加上劳倦过度复合造模法塑造脾阳虚证动物模型。采用免疫沉淀法检测心脏、肝脏及脑组织中MAPK活性。结果 :脾阳虚证模型组大鼠肝脏和脑组织MAPK活性无明显变化 ;心脏组织的细胞浆MAPK活性较正常对照组显著性升高 (P <0 .0 5 ) ;脾阳虚证治疗组肝脏组织的细胞浆MAPK活性较正常对照组及模型组均显著性升高 (P <0 .0 1 )。结论 :脾阳虚证状态下 ,机体各脏器组织MAPK参与的细胞信号转导发生不同的改变。温脾阳方药对脾虚大鼠各组织MAPK活性存在不同的影响作用。     

理中汤对脾阳虚大鼠模型PepT1及其转运功能的影响

目的 观察理中汤对脾阳虚模型大鼠小肠上皮肽转运载体蛋白1对二肽转运功能改变、肽转运载体PepT1及其mRNA表达变化的影响.方法 采用利血平复合因素造模法建立脾阳虚大鼠模型,以头孢氨苄做为PepT1的转运底物,通过反相高效液相法(RP-HPLC)测定其血药浓度来反映脾阳虚大鼠小肠上皮细胞PepT1的吸收转运功能,RT-PCR:测定大鼠小肠黏膜PepT1 mRNA表达,免疫组织化学方法观察大鼠小肠PeDT1蛋白表达情况,同时用酶联免疫法测定小肠黏膜组织cAMP含量.结果 模型组大鼠血清中cefalexin浓度明显高于正常组,经理中汤治疗后,大鼠cefalexin血药浓度与正常对照组比较无显著性差异;模型组大鼠PeDT1蛋白表达明显上调(P＜0.05),理中汤治疗组大鼠的PepT1蛋白表达与正常组比较未见明显差异;脾阳虚模型大鼠PepT1 mRNA表达水平较正常组明显下调(P＜0.05),经理中汤治疗后,其下调趋势被逆转,与正常组比较未见明显差异;模型组大鼠小肠黏膜cAMP浓度较之于正常组,明显降低,经过理中汤治疗恢复接近正常组水平.结论 脾阳虚模型大鼠小肠黏膜PepT1转运功能增强,蛋白表达上调,理中汤治疗可逆向调节这种改变.     

利血平所致脾虚大鼠脾阳虚证和脾气虚证的证候属性

目的 研究利血平所致脾虚大鼠的脾阳虚证和脾气虚证的证候属性.方法 SD大鼠80只,模型组和治疗组腹腔注射利血平造成脾虚模型,选用分别代表脾气虚证和脾阳虚证的四君子汤和理中丸作为治疗药物,检测各项指标,并将检测结果作为多元统计分析对象,采用聚类分析法,分析样本及指标的区分度,以探讨不同指标与脾气虚证和脾阳虚证的相关性.结果 12项指标在正常组和模型组有较好的区分度;从白细胞介素1(IL-1)及血管活性肠肽含量和动物体重等指标看,二者有相同的变化趋势;从脾T细胞增殖、转化生长因子β(TGF-β)等指标看,理中丸组高于四君子汤组;从胃泌素、外周血中T细胞亚群CD4 /CD8-的比值和白细胞介素6(IL-6)含量等指标看,理中丸组低于四君子汤组.结论 模型组与正常组有很好的区分度,利血平脾虚证模型成功;理中丸和四君子汤对脾虚大鼠的作用既有相同之处,也有不同之处,与中医理论相符.     

脾阳虚大鼠肝脾蛋白激酶C活性的实验研究

为探讨脾虚证时信号转导方面的改变,采用过度疲劳、饮食失节和苦寒泻下复合因素塑造大白鼠脾阳虚证模型,测定其肝脏和脾脏PKC活性。结果表明,脾阳虚证大白鼠模型肝细胞膜PKC活性明显下降(P<0.001),而健脾药主要提高脾细胞膜PKC活性(P<0.05)。提示健脾药可能通过激活脾细胞PKC活性而发挥免疫调节作用     

附子理中汤对脾阳虚证大鼠血糖、甘油三酯及总胆固醇的影响

目的:分析附子理中汤对脾阳虚证大鼠血糖、甘油三酯(TG)以及总胆固醇(TC)水平的影响和内在联系.方法:大鼠共4组,每组16只.①对照组:普通饲料喂养,自由饮水;②阳虚组:手术切除肩胛骨间棕色脂肪组织( brown adipose tissue,BAT),余同①组;③脾阳虚组:高脂饲料(83％普通饲料,15％ TG(TG),2％(TC)在19℃环境喂养,余同②组;④中药组:附子理中汤每天按4 g·kg-1ig;余同③组.全部4组动物4周后第1天左颈总动脉插管取血检测血糖、血清甘油三酯(TG),血清总胆固醇(TC)含量.结果:①各组血糖含量(mmol·L -)的比较:阳虚组(1.40±0.071)与对照组(5.41±0.08)相比血糖降低(P＜0.01);脾阳虚组(5.81±0.08)与阳虚组相比血糖升高(P＜0.01);附子理中汤组(5.01±0.08)与阳虚组相比,血糖升高(P＜0.01);附子理中汤组与脾阳虚组相比,血糖有下降趋势.②各组血清TG含量(mmol·L-1)的比较:阳虚组(0.284±0.110)与对照组(0.487±0.076)相比血清TG降低(P＜0.01);脾阳虚组(0.620±0.184)与阳虚组相比血清TG增加(P＜0.01);附子理中汤组(0.462±0.111)与阳虚组相比,血清TG升高(P＜0.01),附子理中汤组与脾阳虚组相比,血清TG有下降趋势.③各组血清TC含量(mmol·L -)的比较:脾阳虚组(0.183±0.025)、附子理中汤组(0.211±0.026)与对照组(0.081±0.020)相比血清总TC均升高(P＜0.01).结论:附子理中汤使血清TG降低;增加对葡萄糖的利用及加强其代谢,使血糖水平降低.附子理中汤“健脾”功效表现为促使糖和脂类代谢趋向正常,从而使血糖和血脂向恢复正常水平的方向转化.     

江西建昌帮阴附片和阳附片对阳虚小鼠棕色脂肪组织的影响

目的:观察棕色脂肪组织(BAT),细胞,蛋白以及相应基因在大黄混悬液所致阳虚模型小鼠中的表达情况,探讨建昌帮特色附子炮制品的产热机制。方法:随机选取20只小鼠,雌雄各半,作为正常雌、雄组,其余80只小鼠灌服大黄混悬液(质量浓度0. 25 g·mL~(-1))建立阳虚模型,造模结束后随机分为模型雌、雄组,生附片雌、雄组,阴附片雌、雄组以及阳附片雌、雄组,每组10只。按照小鼠组别给予相应药液,灌胃2周(1. 54 g·kg~(-1)·d~(-1)),正常组和模型组给予等体积蒸馏水。灌胃结束后,采集小鼠肩胛处BAT,进行苏木素-伊红(HE)染色观察BAT细胞变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测解偶联蛋白1(UCP1)及其mRNA的表达。结果:与同性别正常组比较,模型组的BAT比重显著降低(P0. 01);雌性小鼠中生附片组和阴附片组的BAT比重较模型组显著增加(P0. 01),而雄性小鼠各给药组与模型组相比则无显著性差异。与同性别正常组比较,模型组小鼠BAT的细胞有许多散在分布的空泡,由于空泡较大,可观察到的细胞较少;与同性别模型组比较,生附片组小鼠BAT细胞可见细胞空泡减少,细胞较小并且排列紧密,阳附片组中BAT细胞的密度也明显增加,阴附片组BAT细胞中空泡相对减少,但细胞无显著增加。同性别小鼠之间比较,模型组与正常组的UCP1表达水平相比具有统计学意义(P0. 05,P0. 01);在雌性小鼠中,阳附片组较模型组的UCP1表达水平显著升高(P0. 05),雄性小鼠的各给药组较同性别模型组均有显著差异(P0. 05),其中阳附片的显著性最优。模型组较同性别正常组的UCP1 mRNA相对表达量显著下降(P0. 05,P0. 01);在雌性小鼠中,与模型组比较,阳附片组、生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量显著升高(P0. 05,P0. 01),与阳附片组比较,生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量有显著性差异(P0. 05);在雄性小鼠中,与模型组比较,阳附片组的UCP1 mRNA相对表达量显著升高(P0. 01),生附片组、阴附片组则无显著性差异,生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量与阳附片组比较有显著性差异(P0. 05)。结论:生附片、阴附片和阳附片对大黄所致的阳虚证均有明显改善作用,机制可能为促进UCP1蛋白及其mRNA的表达、增强BAT的活性,且阳附片效果最好。     

脾阴虚模型大鼠回肠的蛋白质组学差异性研究

目的：探讨基于蛋白质组学技术的脾阴虚模型大鼠回肠组织的差异性蛋白表达。方法：SPF级SD大鼠23只,随机分为健康对照组和脾阴虚实验组。采用饮食不节加劳倦过度结合耗伤阴液的方法塑造脾阴虚证大鼠模型。经模糊数学评价方式判定后,分离出回肠组织,应用蛋白质组学技术,鉴定健康对照组与实验组回肠组织蛋白表达差异,经MASCOT搜库鉴定差异蛋白质。结果：脾阴虚实验组回肠组织发现6个差异表达蛋白点（P〈0.05）。结论：脾阴虚证的发生与热休克蛋白90表达下调密切相关。     

附子理中汤对脾阳虚大鼠骨骼肌能荷及CNTF mRNA的影响

目的:观察附子理中汤对脾阳虚大鼠骨骼肌能荷及睫状神经营养因子(CNTF)mRNA表达的影响。方法:大鼠分为对照组、模型组和附子理中汤组,模型组施行肩胛骨间棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)切除术,饲以高脂饲料,19℃环境喂养3周。附子理中汤组在模型组基础上以附子理中汤按5 mL·kg-1体重ig,每日1次,连续ig4周。测定大鼠骨骼肌能荷值,RT-PCR法检测CNTF mRNA表达。结果:与对照组大鼠骨骼肌能荷(0.042±0.018)比较,模型组(0.032±0.014)与附子理中汤组(0.024±0.012)的能荷值均降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,附子理中汤组的能荷值降低明显(P<0.05)。对照组CNTF mRNA相对表达量为(0.862±0.072),模型组CNTF mRNA相对表达量(0.426±0.056)较对照组降低(P<0.01)。与模型组比较,附子理中汤组CNTF mRNA相对表达量(0.838±0.068)升高(P<0.01)。结论:附子理中汤对CNTF mRNA表达有调节作用,通过上调CNTF mRNA表达,增加CNTF含量,发挥CNTF对骨骼肌营养作用和能量代谢调节作用。     

脾气虚大鼠脾肝组织蛋白激酶C活性变化的实验研究

目的 :探讨脾气虚脾肝组织蛋白激酶C活性变化 ,以揭示脾气虚与脾肝组织PKC活性变化的关系。方法 :采用复合因素塑造大白鼠脾气虚证模型 ,采用底物磷酸化法检测模型脾肝组织蛋白激酶C活性。结果 :脾气虚证大鼠模型脾组织细胞膜中PKC活性明显降低 (P <0 0 0 1) ,而脾组织细胞浆中PKC活性无明显变化 (P >0 0 5 ) ;脾气虚证大鼠模型肝组织细胞膜PKC活性无明显变化 (P >0 0 5 ) ,肝组织细胞浆中PKC活性明显升高 (P<0 0 1)。健脾益气中药有提高脾组织细胞膜中PKC活性的趋势 ,但作用不显著 ,无统计学意义 ,而该中药能够降低脾组织细胞浆中PKC活性 (0 0 1

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脾阳虚证失眠大鼠模型的建立和附子理中汤的干预效应

目的:探讨附子理中汤对脾阳虚证失眠大鼠下丘脑增食素(orexin) mRNA表达及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA axis)的影响及机制.方法:100只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、附子理中汤低剂量组,中剂量组和高剂量组5组,每组20只.模型组按400 mg· kg-1 ip对氯苯丙氨酸(PCPA)每天1次,连续2d,建立脾阳虚证失眠模型.低剂量组、中剂量组、高剂量组分别以附子理中汤10,20,40 g·kg-1 ig,每日1次,连续7d.疗程结束后对各组大鼠用ELISA法检测下丘脑5-羟色胺(5-HT)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)及血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,RT-PCR法检测下丘脑orexin mRNA表达.结果:与正常组相比,模型组orexin mRNA表达量显著升高(P＜0.01),5-HT含量显著降低(P＜0.01);CRH,ACTH含量显著升高(P ＜0.05,P＜0.01).与模型组相比,附子理中汤高剂量组orexin mRNA表达量显著降低(P＜0.01),附子理中汤高、中剂量组5-HT含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05);高剂量组CRH,ACTH含量显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:附子理中汤下调orexin mRNA表达,抑制HPA轴激活,降低应激反应性,可能是其治疗失眠的机制之一.     

四逆汤对肾、脾、心阳虚大鼠线粒体MDA/GSH-px的影响

目的:观察四逆汤对脾阳虚、肾阳虚、心阳虚大鼠线粒体MDA/GSH-px的影响,揭示四逆汤的抗氧化机制。方法:将SPF级SD大鼠140只,随机分为7组:正常对照组、肾阳虚模型组、脾阳虚模型组、心阳虚模型组、肾阳虚干预组、脾阳虚干预组、心阳虚干预组,每组20只。造模成功后均予四逆汤灌胃15d,测定MDA含量和GSH-px活性。结果:造模成功后,肾阳虚、心阳虚、脾阳虚模型大鼠线粒体MDA含量增高,GSH-px活性降低,GSH-px/MDA比值下降,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。经四逆汤干预后,MDA含量降低,GSH-px活性增高,GSH-px/MDA比值升高,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:四逆汤具有提高机体GSH-px活力,减轻自由基损伤和抑制脂质过氧化物反应的作用。     

附子理中汤对脾阳虚大鼠AQP4的影响及其止泻机制

目的:观察附子理中汤对脾阳虚大鼠水通道蛋白4(AQP4)的影响,探讨附子理中汤止泻作用的机制.方法:Wistar大鼠100只随机分为对照组、模型组、附子理中汤低、中、高剂量组5组,每组20只.在模型组基础上,低剂量组按10g·kg-1ig,中剂量组按20 g·kg-1 ig,高剂量组按40 g·kg-1 ig,每天1次,连续4周.取结肠标本,酶联免疫法(ELISA)法检测AQP4含量,RT-PCR法检测AQP4 mRNA表达.结果:和对照组比较,模型组的AQP4含量(13.25 ±4.22) ng·L-1.AQP4mRNA相对表达量(0.38±0.11)均降低(P＜0.01或P＜0.05).和模型组比较,附子理中汤中剂量组的AQP4含量(23.84±5.68) ng·L-1,AQP4 mRNA相对表达量(0.54±0.26)均升高(P＜0.05).和模型组比较,高剂量组的AQP4含量(28.98±6.12) ng·L-1,AQP4 mRNA相对表达量(0.62±0.32)均显著升高(P＜0.01).结论:附子理中汤能恢复脾阳虚大鼠AQP4含量和AQP4 mRNA正常表达,以高剂量的恢复作用较明显,附子理中汤可能通过上调AQP4表达,促进胃肠道黏膜对水液的重吸收而起到止泻的作用.