补肾活血方对SAMP8小鼠学习记忆及海马神经干细胞影响实验研究

目的观察补肾活血方对快速老化SAMP8小鼠行为学及海马内神经干细胞的影响,以期为补肾活血方治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的临床应用提供实验依据。方法7月龄的SAMP8雄性小鼠随机分为3组,分别为模型组、中药组和西药对照组,同月龄的SAMR1小鼠作为正常对照组。中药组按照6 g/kg补肾活血方灌胃给药,西药组给予3 mg/kg的盐酸多奈哌齐灌胃,正常组和模型组小鼠给予同体积的生理盐水灌胃。连续灌胃4周后采用水迷宫、免疫组织化学法和Western Blot法观察小鼠行为学、海马区NeuN和Nestin的表达。结果与正常老化SAMR1小鼠相比,模型组SAMP8小鼠学习记忆能力明显下降,海马组织Nestin和NeuN的表达减少(P<0.05);与模型组相比,给予补肾活血方和盐酸多奈哌齐西药干预后,SAMP8小鼠学习记忆能力有所改善,海马组织内Nestin和NeuN的表达增多(P<0.05);中药组和西药对照组SAMP8小鼠相比,学习记忆、海马组织Nestin和NeuN的表达无显著性差异(P>0.05)。结论补肾活血方通过上调SAMP8快速老化小鼠海马组织Nestin和NeuN的表达,促进神经干细胞的增殖和向神经元分化,从而改善SAMP8小鼠的学习认知记忆能力,对AD起治疗作用。     

补肾活血方防治阿尔茨海默病的机制研究

目的观察补肾活血方对快速老化SAMP8小鼠行为学及海马内GFAP、Iba1表达的影响,分析该方防治阿尔茨海默病的作用机制。方法7月龄的SAMP8雄性小鼠随机分为模型组、中药组和西药对照组,同月龄的SAMR1小鼠作为正常对照组。中药组给予6 g/kg补肾活血方灌胃,西药组给予3 mg/kg的盐酸多奈哌齐灌胃,正常组和模型组小鼠给予同体积的生理盐水灌胃。连续灌胃4周后采用水迷宫、免疫组织化学法和western blot法观察小鼠行为学、海马内GFAP、Iba1的表达。结果与正常老化SAMR1小鼠相比,模型组SAMP8小鼠学习记忆能力明显下降,海马组织GFAP、Iba1的表达增多(P<0.05);与模型组相比,给予补肾活血方和盐酸多奈哌齐西药干预后,SAMP8小鼠学习记忆能力有所改善,海马组织内GFAP、Iba1的表达减少(P<0.05);中药组和西药对照组SAMP8小鼠相比,学习记忆、海马组织GFAP、Iba1的表达无统计学意义(P>0.05)。结论补肾活血方通过减少SAMP8快速老化小鼠海马组织GFAP、Iba1的表达,抑制星形胶质细胞及小胶质细胞种胶质细胞介导的慢性炎症反应,从而改善SAMP8小鼠的学习记忆能力,对阿尔兹海默病起治疗作用。     

益智健脑颗粒水提浓缩液对P8系快速老化小鼠内嗅区组织差异蛋白质表达的影响

目的分析益智健脑颗粒水提浓缩液(Yizhi Jiannao Granule Concentration Fluid,YJGCF)干预前后P8系快速老化小鼠(senescence accelerated mouse P8,SAMP8)内嗅区组织的差异蛋白质表达,从蛋白质组学水平探讨中药益智健脑颗粒水提浓缩液治疗阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)的作用机制。方法 6月龄SAMP8随机分为治疗组、模型组和对照组,每组10只。模型组不予处理,让其自由饮水,治疗组以YJGCF灌胃(0.3g/d),对照组以等剂量双蒸水灌胃。8周后、应用双向凝胶电泳技术分别分离3组SAMP8内嗅区组织总蛋白,得到差异蛋白质点,通过质谱分析得到相应肽质量指纹图谱,经蛋白质数据库查询,鉴定差异蛋白质点。结果治疗组与模型组存在32个差异点,初步鉴定了NADH脱氢酶铁硫蛋白6、Rho-GDP解离抑制因子α、β2珠蛋白、磷酸甘油酸激酶等14个差异蛋白质,其功能涉及线粒体能量代谢、氧化应激、神经元功能等方面。结论 YJGCF可调节SAMP8内嗅区组织的多种蛋白质表达,提示该药具有多靶点治疗的作用,且可能通过改善线粒体功能障碍、抗氧化应激、抑制神经细胞凋亡、保护神经元等途径来实现其治疗AD的作用。     

补肾活血针刺法对阿尔茨海默病模型小鼠海马脑红蛋白表达的影响

目的探讨补肾活血针刺法对阿尔茨海默病模型快速老化小鼠P8(SAMP8)学习记忆能力的影响及作用机制。方法将20只5月龄雄性SAMP8小鼠随机分为针刺治疗组、模型对照组各10只,另设5月龄雄性抗快速老化小鼠(SAMR1)10只作为正常对照组。针刺治疗组予以补肾活血针刺法干预,选穴百会、血海、肾俞、膈俞,采用捻转补泻手法。模型对照组及正常对照组未予特殊处理。干预4周后,取各组小鼠海马组织,采用免疫组化法检测脑红蛋白(Ngb)的表达情况。结果模型对照组小鼠海马组织Ngb的表达水平较正常对照组减弱(P<0.01);与模型对照组相比,针刺治疗组小鼠海马组织Ngb的表达水平明显升高(P<0.01)。结论补肾活血针刺干预能够明显增强SAMP8小鼠海马组织Ngb的表达,这可能是其改善SAMP8小鼠学习记忆能力的潜在分子机制之一。     

电针对快速老化小鼠认知功能及海马CA1区锥体神经元树突结构的影响

目的探讨电针刺激对快速老化模型小鼠(SAMP8)认知功能和海马CA1区锥体细胞树突结构的影响。方法选取SAMP8小鼠16只,随机分为模型组和治疗组,每组8只;另以8只正常老化SAMR1小鼠作为对照组。对照组和模型组不做任何处理。治疗组小鼠接受电针刺激治疗,取百会、肾俞、太溪穴,连续治疗8周。采用Morris水迷宫实验检测小鼠的认知功能;Golgi染色观察海马CA1区锥体神经元树突长度和数目,Western blot法检测海马突触后致密蛋白(PSD95)、脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、Ras同系物家族成员A(RhoA)和Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(ROCK2)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组逃避潜伏期明显延长,跨平台次数、基底和顶端树突长度及分支数目明显减少,PSD95、BDNF和TrkB蛋白表达水平明显下降,而RhoA和ROCK2蛋白表达水平明显升高(P0.05);与模型组比较,治疗组逃避潜伏期明显缩短,跨平台次数、基底和顶端树突长度及分支数目均明显增加,PSD95、BDNF和TrkB蛋白表达水平明显升高,而RhoA和ROCK2表达水平明显下降(P0.05)。结论电针可以明显改善SAMP8小鼠的认知功能,并增加海马CA1区树突长度和分支数目。树突可能是电针治疗阿尔茨海默病的靶点。     

电针对SAMP8小鼠皮质及海马突触素和突触后致密物-95表达的影响

目的观察电针对SAMP8小鼠皮质及海马突触素(SYN)和突触后致密物-95(PSD-95)表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的介入时机。方法 SAMP8小鼠48只随机分为模型组、3月龄电针组、6月龄电针组和9月龄电针组,每组12只,选取同龄正常老化SAMR1小鼠12只为对照组。电针组电针"百会""大椎""肾俞",频率2 Hz,每日1次,8 d为1个疗程,疗程间隔2 d,共3个疗程。各组均在10月龄取材,选择皮质及海马区,采用免疫组化和Westernblot检测突触相关蛋白SYN、PSD-95的表达。结果与对照组比较,模型组小鼠皮质及海马SYN和PSD-95蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,各电针组小鼠皮质及海马SYN、PSD-95蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与3月龄电针组比较,6月龄电针组、9月龄电针组皮质及海马SYN、PSD-95蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论电针可促进SAMP8小鼠皮质及海马SYN、PSD-95蛋白的表达,改善突触功能,且早期电针治疗效果最明显。     

舒筋健脑颗粒对HIBD新生大鼠海马区BDNF及TrKB蛋白表达的影响

目的观察舒筋健脑颗粒对缺血缺氧脑损伤(HIBD)新生大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)及酪氨酸蛋白激酶B(TrKB)蛋白表达的影响。方法 48只7日龄新生大鼠分为空白组、模型组、中药低剂量组及中药高剂量组,各组根据术后14、28 d分为两个亚组(n=6)。采用Rice-Vannucci经典方法建立新生大鼠HIBD模型。模型组及空白组予温盐水灌胃,中药低剂量组及中药高剂量组予相应浓度的舒筋健脑颗粒混悬药液灌胃。术后14、28 d采用蛋白免疫印迹试验法检测各组大鼠海马区BDNF、Trk B蛋白的表达。结果术后14、28 d,与模型组比较,中药低剂量组及中药高剂量组BDNF、Trk B蛋白表达较多(P0.05),与中药低剂量组比较,中药高剂量组BDNF、Trk B蛋白表达明显增加(P0.05)。结论丰富环境可以促进HIBD新生大鼠脑组织修复,其机制可能与上调海马区BDNF及TrKB蛋白的表达有关。     

针刺对快速老化鼠SAMP10体温的影响

目的 探讨“益气调血，扶本培元”针法对快速老化鼠SAMP10体温的影响。方法 采用24只7月龄快速老化SAMP10雄性小鼠，随机分为气血组、非穴组、SAMP10对照组，每组8只，9只正常老化的SAMR1雄鼠作为R1正常组，于每日14：00和17：00测量两次各组小鼠腹部体温。结果 14：00时，P系各组之间体温无差异（P〉0．05）；17：00时，气血组体温低于非穴组和对照组，均表现显著差异（P〈0．05，P〈0．01）。结论 “益气凋血，扶本培元”针法能够在一定程度上调节SAMP10小鼠体温变化．抑制体温升高．从而可能有助干延缓SAMP10小鼠的寿命。     

洗心汤对快速老化模型小鼠血脑屏障通透性及海马组织P-gp、CB1、CB2蛋白表达的影响

目的 观察洗心汤对快速老化模型（SAMP8）小鼠血脑屏障通透性及海马组织P-糖蛋白（P-gp）、大麻素受体1(CB1)和大麻素受体2(CB2)蛋白表达的影响,探讨洗心汤治疗阿尔茨海默病（AD）的可能机制。方法 60只SAMP8小鼠随机分为模型组、益生菌组和洗心汤高、中、低剂量组,每组12只,另12只抗快速老化（SAMR1）小鼠作为对照组,各给药组分别予相应药物灌胃10周,对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水。Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,伊文思蓝法检测小鼠血脑屏障通透性,ELISA检测血清基质金属蛋白酶9(MMP9)、肿瘤坏死因子（TNF）-α、核因子（NF）-κB含量,Western blot检测海马组织P-gp、CB1、CB2蛋白表达,免疫荧光染色检测海马组织P-gp表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠学习记忆能力明显降低,脑组织伊文思蓝渗出量明显增加,血清MMP9、TNF-α和NF-κB含量明显增加,海马组织P-gp、CB2蛋白表达明显降低,CB1蛋白表达明显升高,差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）;与模型组比较,洗心汤高剂量组小鼠学习记忆能力明显...     

二苯乙烯苷对SAMP8小鼠APPmRNA和PS1mRNA表达的影响

目的:探讨灌胃给二苯乙烯苷(TSG)后SAMP8小鼠β淀粉样蛋白前体(APP)mRNA和早老蛋白-1(PS1)mRNA表达的变化。方法:6月龄快速老化模型小鼠SAMP8 50只,随机均分为SAMP8空白组,阳性药石杉碱甲对照组,高、中、低剂量TSG组(0.3,0.1,0.033 g·kg-1·d-1)共6组;6月龄正常老化小鼠SAMR1鼠10只为正常对照组。各组分别灌胃相应药物60 d后,应用实时定量PCR法检测海马组织APP和早老蛋白-1(PS1)mRNA的表达。结果:与SAMP8空白组比较,TSG组APP mRNA 2-△△CT值明显降低,PS1 mRNA 2-△△CT值也明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),表明TSG组APP mRNA和PS1 mRNA表达下调。结论:二苯乙烯苷对痴呆小鼠SAMP8有显著地抗痴呆作用,其作用机制可能与调控APP,PS1表达有关。     

活血解毒汤对急性冠状动脉综合征患者血清MMP-1、MMP-9、TIMP-1的影响

目的观察活血解毒汤对急性冠状动脉综合征（ACS）患者血清MMP-1、MMP-9及TIMP-1的影响，探讨活血解毒疗法对动脉粥样硬化斑块稳定的可能机制。方法随机将62例ACS患者分为活血解毒治疗组（32例）与西药常规对照组（30例）；治疗4周后比较两组血清MMP-1、MMP-9及TIMP-1水平变化。结果两组血清MMP-1、MMP-9水平明显降低，TIMP-1明显升高，治疗组作用更明显，与对照组比较差异有统计学意义。结论活血解毒疗法可明显降低ACS患者血清MMP-1、MMP-9水平，升高TIMP-1水平，从而起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。     

中西医结合治疗血管性痴呆40例临床观察

目的：观察中药自拟＂健脑益智汤＂配合西药治疗血管性痴呆的疗效。方法：将80例血管性痴呆患者随机分为两组,治疗组和对照组各40例。对照组用5%In JG-S 250m L加胞二磷胆碱针1.0;5%In JG-S 250 m L加吡拉西坦针8.0,1次/d,静脉滴注。治疗组在对照组基础上加服中药＂健脑益智汤＂。两组均以15d为1个疗程,1个疗程后休息7d,2个疗程后,比较两组治疗效果。结果：治疗组临床疗效明显高于对照组（P〈0.05）。结论：健脑益智汤配合西药静滴治疗血管性痴呆有较好的疗效。     

益智健脑颗粒对阿尔茨海默病患者外周血清中IL-1β与TNF-α表达的影响

目的:探讨益智健脑颗粒对阿尔茨海默病(AD)患者外周血清中IL-1β与TNF-α表达的影响。方法:严格按照配对的原则选择AD患者及健康老人,应用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISE)检测IL-1β与TNF-α表达的水平。结果:血清IL-1β含量AD组与正常对照组比较,差异有显著性(P0.05);血清TNF-α含量AD组高于正常对照组,但差异无显著性(P0.05);中药组治疗前后IL-1β比较,P0.05,TNF-α治疗前后比较,P0.05;西药组治疗前后IL-1β比较,P0.05,TNF-α治疗前后比较,P0.05;中药组与西药组比较差异无显著性意义(P0.05)。结论:(1)AD患者血清IL-1β、TNF-α水平高于正常老年人,这可能与AD脑内炎症反应有关;(2)益智健脑颗粒可通过抑制细胞炎性因子而对AD患者发挥其治疗作用。     

姜黄素对快速老化小鼠学习与记忆功能及海马Ca2+/CaMKⅡ水平的影响

目的 探讨不同浓度的姜黄素对快速老化小鼠（senescence-accelerated mouse, SAM）学习与记忆的影响和可能的机制。 方法 将小鼠随机分为SAMR1正常对照组, SAMP8模型对照组, SAMP8+溶剂（花生油）对照组以及SAMP8+低 、中、高浓度姜黄素处理组,灌胃持续25天。实验结束次日,通过Morris水迷宫测试各组小鼠学习和记忆成绩的变化;测定各组小鼠海马组织［Ca2+］i浓度;通过Western blot和RT-PCR观测Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ, CaMKⅡ）和钙调蛋白（calmodulin, CaM）mRNA在海马组织的表达情况。 结果 SAMP8模型对照组小鼠隐蔽平台的逃避潜伏期明显延长;海马组织［Ca2+］i明显增高;海马膜中CaMKⅡ表达量降低;海马组织CaM mRNA的水平明显降低（P<0.05, P<0.01）。经中、高浓度姜黄素处理的SAMP8小鼠隐蔽平台的逃避潜伏期显著缩短（P<0.01）。经低、中和高浓度姜黄素处理的SAMP8组小鼠海马组织［Ca2+］i均明显降低;海马组织膜中CaMKⅡ表达量均明显增加;海马组织CaM mRNA水平均明显增高（P<0.05, P<0.01）。     

养心颗粒对易损斑块家兔模型胆固醇7-α-羟化酶和MMP-9含量的影响

目的:探讨养心颗粒对易损斑块家兔模型胆固醇7-α-羟化酶和MMP-9含量的影响。方法:采用球囊损伤家兔颈总动脉,同时给予家兔高脂饮食喂养8周,8周后注入p53腺病毒载体,将造模成功家兔随机分为模型对照组、养心颗粒组、辛伐他汀组,每组6只,另取6只家兔作为空白对照组,药物治疗2周后进行药物触发,用ELISA法检测胆固醇7-α-羟化酶和MMP-9含量。结果:养心颗粒组与治疗前比较,CYP7A1含量升高、MMP-9含量减少,差异具有统计学意义(P0.05)。辛伐他汀组与治疗前比较,CYP7A1含量明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);两治疗组相互比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:养心颗粒可升高易损斑块家兔模型血清CYP7A1含量,降低MMP-9表达水平,这可能是养心颗粒稳定易损斑块的作用机制之一。     

地黄饮子对快速老化小鼠 SAMP8线粒体通路细胞凋亡的影响

目的：研究地黄饮子对快速老化小鼠P8线粒体通路细胞凋亡的影响,探讨其治疗AD的药效及作用机制。方法：运用RT-PCR检测地黄饮子对SAMP8小鼠Caspase -3、Caspase -9、Apaf -1基因mRNA表达的影响,观察小鼠细胞凋亡情况。结果：地黄饮子能下调海马Caspase-3 mRNA、Caspase -9mRNA、Apaf-1mRNA的表达,且均有统计学意义。结论：地黄饮子可通过对细胞凋亡的线粒体途径的影响,抑制促凋亡基因,减少神经元的丢失,从而改善学习记忆能力。     

怡脉颗粒对动脉粥样硬化家兔Hs-CRP、MMP-9的影响

目的利用高脂喂饲诱发动脉粥样硬化模型，探讨中药怡脉颗粒对家兔动脉粥样硬化的干预作用及其机制。方法32只日本雄性大耳白兔随机分为四组（空白对照组、模型对照组、血脂康组、怡脉颗粒组），每组8只，其中怡脉颗粒组和血脂康组造模的同时给药，前两组以等量蒸馏水灌胃10周后测定各组空腹血清高敏C反应蛋白（Hs-CRP）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）含量。结果模型对照组Hs-CRP及MMP-9较空白对照组明显升高，怡脉颗粒组和血脂康组Hs-CRP及MMP-9均明显低于模型对照组，怡脉颗粒组MMP-9明显低于血脂康组。结论怡脉颗粒对动脉粥样硬化有明显的预防和治疗作用，降低Hs-CRP及MMP-9可能是其作用机制之一。     

健脑益智胶囊对缺血性卒中患者脑保护作用机制研究

目的观察健脑益智胶囊对缺血性卒中患者的脑保护作用，并探讨其作用机制。方法180例缺血性卒中患者随机分为2组。对照组60例，给予常规方法治疗；治疗组120例，在常规治疗基础上给予健脑益智胶囊口服。观察2组患者内皮素（ET）、降钙素基因相关肽（CGRP）、脂质过氧化物（LPO）、超氧化物歧化酶（SOD）含量的变化。结果治疗组在降低BT、升高CGRP、降低LPO、升高SOD及改善神经功能缺损、降脂、降低血粘度方面与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论健脑益智胶囊可调节ET、CGRP、LPO、SOD含量，降脂、降低血粘度可能是其对缺血性卒中患者脑保护的作用机制之一。     

健脑益智胶囊对颅脑损伤大鼠血浆NPY含量的影响

目的研究健脑益智胶囊对颅脑损伤后大鼠血浆神经肽Y（NPY）含量的影响。方法将SD大鼠按照随机原则分成A组（假手术组）、B组（模型对照组）、C组（吡拉西坦治疗组）、D组（健脑益智胶囊治疗组）;每组再按照标本采集时间随机分为4个亚组（即A1、A2、A3、A4;B1、B2、B3、B4;C1、C2、C3、C4;D1、D2、D3、D4）,每组10只。采用自由落体方法造模后,C组给予吡拉西坦治疗,D组给予健脑益智胶囊治疗,治疗后第3天、5天、7天、10天观察大鼠一般状况（精神状态、进食量、行为活动度）和血浆NPY的含量变化并进行分析。姑果治疗第3天B组大鼠血浆NPY含量明显高于其他各组（P均〈0．05）;治疗第5,7天,D组大鼠血浆NPY含量明显低于B组和C组（P均〈0．05）;治疗第7天,D组大鼠的精神状态和进食量明显优于B组和C组。结论健脑益智胶囊能抑制颅脑损伤后大鼠血浆NPY含量快速增高,减轻脑血管的收缩,从而改善脑组织的血供。