健脾解毒方对人结肠癌裸鼠原位移植瘤铂类耐药相关铜转运蛋白ATP7A ATP7B表达的影响

目的:探讨健脾解毒方对奥沙利铂抑制人结肠癌裸鼠原位移植瘤生长的增效作用及其对移植瘤铂类耐药相关铜转运蛋白ATP7A、ATP7B表达的影响,揭示健脾解毒方对奥沙利铂增效作用的部分机制。方法:建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型,随机分为4组:对照组、奥沙利铂组、健脾解毒方组、健脾解毒方联合奥沙利铂组(联合用药组),治疗后观察各组移植瘤生长情况,采用实时荧光定量-PCR及免疫组化S-P法、Western-blot检测移植瘤中ATP7A、ATP7B mRNA和蛋白的表达。结果:(1)联合用药组的抑瘤率为53.6%,是单用奥沙利铂组的4.25倍;(2)奥沙利铂组裸鼠反复腹腔注射L-OHP后,移植瘤组织ATP7A和ATP7B的mRNA及蛋白表达均高于对照组(P<0.05);联合用药组移植瘤组织ATP7A和ATP7B的mRNA及蛋白表达均低于奥沙利铂组(P<0.05)。结论:健脾解毒方对奥沙利铂抑制人结肠癌裸鼠原位移植瘤生长有增效作用,其增效作用可能与下调移植瘤组织ATP7A和ATP7B的mRNA及蛋白表达,增加细胞内奥沙利铂药物的浓度有关。     

益气活血软坚解毒方联合奥沙利铂对H-22肝癌细胞的增效减毒作用

目的:探讨益气活血软坚解毒方(YHRJ)对H-22肝癌细胞的抑制及对奥沙利铂(OXA)化疗的增效解毒作用.方法:将H-22肝癌细胞移植瘤小鼠模型,随机分为阴性对照(NS)组、OXA组、等效剂量YHRJ(EYHRJ)组、高剂量YHRJ(HYHRJ)组、EYHRJ+OXA组和HYHRJ+OXA组,通过测量肿瘤大小,计算抑瘤...     

健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞的逆转作用

目的:探讨健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞HCT8/V的逆转作用及其可能机制.方法:人结肠癌HCT8/V多药耐药细胞常规培养,5％健脾解毒方药物血清作用48 h后,MTT法检测HCT8/V细胞对化疗药敏感性的影响,高效液相色谱法( HPLC)检测耐药细胞内长春新碱(VCR)药物浓度,流式细胞仪分析健脾解毒方对5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导的HCT8/V细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:健脾解毒方能增加HCT8/V细胞对VCR、顺铂(DDP)、5-Fu、吡柔比星(THP)4种化疗药物的敏感性,4种化疗药的IC50分别从( 191.08±18.18 )mg·L-1下降到(90.13±6.33 )mg·L-1;(290.79±28.38) mg·L-1下降到(22.16±1.82) mg·L-1;(23.12±1.99) mg·L-1下降到(9.88±0.86 )mg·L-1;(26.40±2.92) mg·L-1下降到(19.41±1.48) mg·L-1;健脾解毒方药物血清作用HCT8/V细胞48 h后细胞内VCR浓度明显增高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.健脾解毒方能提高5-Fu诱导的HCT8/V细胞的凋亡率,使细胞阻滞于G1期.结论:健脾解毒方通过增加结肠癌多药耐药细胞内化疗药物浓度,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,逆转HCT8/V细胞株的多药耐药性.     

肠胃清煎剂对裸鼠大肠癌皮下移植瘤奥沙利铂治疗的增效作用

目的探讨肠胃清煎剂对奥沙利铂(L-OHP)治疗结肠癌耐药细胞皮下移植瘤的增效作用。方法采用皮下接种构建结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP及敏感细胞HCT116异位瘤模型,运用中药复方肠胃清煎剂及1/2最大耐受剂量的L-OHP干预后,观察L-OHP对移植瘤体积及裸鼠体重的影响、中药复方作用后L-OHP治疗效果的变化。结果肠胃清煎剂及肠胃清煎剂联合L-OHP组荷瘤鼠体重减轻影响均少于单纯L-OHP组(P<0.01)。肠胃清煎剂低、高剂量联合L-OHP组肿瘤体积分别为53.75%、48.32%,同单纯中药或L-OHP比较,减小明显(P<0.01)。结论肠胃清煎剂具有一定抑制肿瘤生长的能力,在联合化疗药物作用下,其抑制效果明显,在有效治疗剂量中,与肠胃清煎剂剂量成正比。     

姜黄素联合奥沙利铂对人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的抗癌作用研究

目的 探讨姜黄素与奥沙利铂联用对人结肠癌LoVo细胞株裸鼠移植瘤生长的影响及其作用机制.方法 将LoVo细胞接种子裸鼠皮下,制备裸鼠移植瘤模型.将造模成功的裸鼠随机分为对照组、姜黄素50 mg/kg组、奥沙利铂25 mg/kg组、姜黄素50 mg/kg+奥沙利铂25 mg/kg联合给药组,给药组裸鼠隔天ip给药1次,连续给药11次.末次给药后剥离瘤块称质量,计算移植瘤体积、抑瘤率;摘除眼球取血,检测血常规及肝、肾功能;流式细胞仪检测肿瘤细胞周期和凋亡率;HE染色分析肿瘤组织病理形态学;RT-PCR检测细胞凋亡相关基因的表达.结果 姜黄素组、奥沙利铂组、联合用药组的抑瘤率分别为59.47％、55.49％、70.56％,联合给药组抑制肿瘤生长的作用显著且对荷瘤裸鼠血液及肝肾无明显毒性;联合给药组可显著阻滞肿瘤细胞于S期和G2/M期,显著上调bax基因的表达.结论 姜黄素联合奥沙利铂可显著抑制LoVo细胞裸鼠移植瘤的生长.     

健脾解毒方对裸鼠皮下移植瘤Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的观察中药复方健脾解毒方对裸鼠皮下移植瘤Bax及Bcl-2 mRNA表达的影响。方法采用HCT8/V细胞制作裸鼠皮下移植瘤,将32只造模成功的裸鼠随机分为4组,每组8只。空白组予0.9%Na Cl溶液腹腔注射,化疗组予长春新碱腹腔注射,中药组予健脾解毒方灌胃,联合组予长春新碱腹腔注射和健脾解毒方灌胃。测量各组皮下移植瘤的瘤重及抑瘤率,光镜观察肿瘤组织病理情况,并采用Real-time PCR法测定Bax、Bcl-2 mRNA的表达。结果与空白组比较,化疗组、中药组、联合组瘤重明显降低,差异有统计学意义(P0.01);与化疗组比较,中药组、联合组瘤重均降低,差异有统计学意义(P0.01);相对于空白组,化疗组、中药组、联合组瘤体抑制率分别为22.84%、38.44%、51.53%,以联合组抑瘤效果最佳。与空白组比较,化疗组、中药组、联合组Bax mRNA表达水平显著升高(P0.05,P0.01),Bcl-2 mRNA表达水平均显著降低(P0.01);与化疗组比较,中药组、联合组Bax mRNA相对表达量高于化疗组(P0.05,P0.01),中药组、联合组Bcl-2 mRNA相对表达量均低于化疗组(P0.01)。结论健脾解毒方通过上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达,促进肠癌细胞的凋亡,且与化疗药具有协同作用。     

健脾解毒方联合FOLFOX4方案治疗晚期结直肠癌临床研究

目的观察健脾解毒方联合FOLFOX4方案治疗晚期结直肠癌的疗效和不良反应。方法将42例患者随机分为2组,研究组21例,采用健脾解毒方联合FOLFOX4方案化疗,对照组21例,单纯FOLFOX4方案化疗。比较两组近期疗效、临床受益反应以及毒副反应。结果近期有效率研究组为47.6%,对照组为35.0%,两组有效率及中位肿瘤进展时间比较无统计学意义(P0.05);两组中位生存时间及1年生存率比较,差异有统计学意义(P0.05)。研究组临床受益率为85.7%。对照组为55.0%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。研究组白细胞降低、神经毒性、乏力等毒副反应明显低于对照组(P0.05)。结论健脾解毒方对晚期结直肠癌FOL-FOX4方案化疗有增加近期疗效、提高生活质量、减少不良反应的作用。     

复方苦参注射液对奥沙利铂耐药直肠癌裸鼠移植瘤的影响及与NOX1通路的关系

目的:观察复方苦参注射液(Compound Kushen Injection,CKI)对奥沙利铂耐药SW1463直肠癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并进一步探讨其作用机制与NOX1信号通路的关系。方法:诱导SW1463直肠癌细胞对奥沙利铂耐药后,建立SW1463耐药裸鼠移植瘤模型,将40只荷瘤鼠随机分为对照组、CKI低剂量组[1.0 mL/(kg·d)]、CKI中剂量组[2.0 mL/(kg·d)]和CKI高剂量组[4.0 mL/(kg·d)],记录荷瘤体积,持续干预28 d后处死动物取材,ELISA法检测移植瘤中活性氧(ROS)含量水平,qPCR法检测移植瘤中NADPH氧化酶(NOX)1和NOXO1的mRNA转录水平,ELISA法检测移植瘤中NOX1和NOXO1蛋白表达水平。结果:不同干预剂量CKI均能够显著抑制SW1463耐药裸鼠移植瘤的生长,降低移植瘤质量分数(P0.05 vs.对照组),并呈一定程度的剂量依赖性,其中CKI高剂量组抑瘤作用最佳(P0.05 vs.CKI低、中剂量组);不同干预剂量CKI均能够显著抑制SW1463耐药裸鼠移植瘤中ROS生成(P0.05 vs.对照组),其中CKI高剂量组ROS水平最低(P0.05 vs.CKI低、中剂量组);不同干预剂量CKI均能够显著抑制SW1463耐药裸鼠移植瘤中NOX1和NOXO1的mRNA相对转录水平和蛋白表达水平(P0.05 vs.对照组),其中CKI高剂量组抑制作用最强(P0.05 vs.CKI低、中剂量组)。结论:复方苦参注射液能够显著抑制SW1463耐药裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能是通过NOX1信号通路调控ROS水平从而发挥抗奥沙利铂耐药直肠癌作用的。     

益气健脾解毒方含药血清对奥沙利铂诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的 探讨益气健脾解毒方含药血清对奥沙利铂诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及凋亡抑制基因(Survivin)、caspase-3及caspase-9表达的影响.方法 运用血清药理学方法制备大鼠益气健脾解毒方含药血清,将人肝癌HepG2细胞按随机数字表法分为中药组、化疗组、联合组和空白组,空白组加入10%空白血清;化疗组加入2μg奥沙利铂和10%空白血清;联合组加入2μg奥沙利铂和10%益气健脾解毒方含药血清;中药组加入10%益气健脾解毒方含药血清.采用MTT法检测细胞抑制率,采用Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞Survivin、caspase-3、caspase-9蛋白及基因表达.结果 与空白组比较,中药组、化疗组及联合组人肝癌HepG2细胞抑制率明显增高(P<0.05).与化疗组及中药组比较,联合组Survivin[(0.151±0.054)比(0.288±0.089)、(0.375±0.063)]蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),Survivin mRNA[(0.205±0.091)比(0.487±0.073)、(0.725±0.092)]表达下调(P<0.05或P<0.01);caspase-3[(0.821±0.079)比(0.634±0.098)、(0.487±0.102)]、caspase-9蛋白[(0.901±0.047)比(0.709±0.054)、(0.402±0.012)]表达上调(P<0.05或P<0.01),caspase-3 mRNA[(1.928±0.226)比(1.564±0.195)、(1.287±0.312)]、caspase-9 mRNA[(2.063±0.517)比(1.536±0.084)、(1.019±0.182)]表达均上调(P<0.05或P<0.01).结论 益气健脾解毒方对奥沙利铂诱导HepG2细胞凋亡机制可能通过增强抑制Survivin及促进Caspase-3及caspase-9蛋白表达发挥作用.     

益气健脾解毒方联合西医治疗晚期胃癌的临床分析

目的探讨自拟益气健脾解毒方联合西医治疗晚期胃癌的疗效。方法选择晚期胃癌患者200例,随机分为试验组和对照组各100例,2组患者均给予相同对症处理。在此基础上,试验组给予自拟益气健脾化瘀方联合奥沙利铂及替吉奥治疗,对照组仅给予奥沙利铂及替吉奥治疗,观察2组治疗效果、不良反应事件发生率及生活质量差异。结果试验组经治疗客观有效率显著高于对照组(P0.05)。治疗后试验组各项不良反应事件发生率与对照组均相近(P0.05),生活质量评分显著高于对照组(P0.05)。结论自拟益气健脾解毒方联合奥沙利铂及替吉奥胶囊治疗晚期胃癌的疗效显著,能够明显提升患者的生活质量,且其不良反应事件发生率无显著变化,具有较高的临床应用价值,值得推广。     

补肾解毒方与健脾解毒方对慢性乙肝患者不同阶段的T淋巴细胞功能影响的研究

目的:比较补肾解毒方和健脾解毒方对乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)慢性感染患者在不同免疫状态下外周血T淋巴细胞(Ts)功能影响。方法:选取本院感染科2013年9月至2014年5月门诊慢性HBV感染患者40例,据患者不同免疫状态分为清除组和耐受组,另选本院健康职工10例作为对照组。采用大鼠补肾解毒药物血浆和健脾解毒药物血浆进行干预。以T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD28+分子的表达及干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的水平作为研究指标,判断干预对外周血T淋巴细胞(Ts)功能影响情况。结果:各组健脾组和补肾组血浆在干预后CD3+、CD4+、CD8+、CD28+的表达均显著升高,耐受组中P<0.05,补肾组血浆干预后CD28+及CD8+分子显著高于健脾组,P<0.05;两种药物血浆分别干预后,CD28+分子表达均显著高于清除组同期,P<0.05。结论:健脾解毒法和补肾解毒法均能促进慢性HBV感染患者T细胞功能的恢复,免疫耐受期可能是中医药治疗的一个重要时期,补肾解毒药物效果优于健脾毒药物,需要分子实验和临床实验提供更多循证依据。     

健脾解毒汤联合化疗对胃癌术后患者的影响

目的观察健脾解毒汤结合化疗对胃癌术后患者的影响。方法将69例胃癌术后患者按照队列研究分为两组;对照组32例采用单纯化疗治疗,观察组37例采用化疗药物结合健脾解毒汤治疗。观察两组中医证候疗效、生存质量、复发和毒副反应情况。结果中医证候疗效、生存质量、毒副反应的改善,观察组优于对照组(P<0.05);两组复发率比较无显著性差异(P>0.05)。结论健脾解毒汤联合化疗可提高胃癌术后患者中医证候疗效和生存质量,减轻化疗毒副反应。     

健脾解毒方介导JNK/SAPK信号通路调控人结肠癌细胞多药耐药

目的:探讨健脾解毒方(JPJD)介导JNK/SAPK信号通路对人结肠癌细胞多药耐药的调节机制。方法:人结肠癌细胞HCT8和多药耐药细胞HCT8/V常规培养,应用Western Blot检测健脾解毒方药物血清对P-糖蛋白(P-gp)以及c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通路中c-Jun63/73磷酸化水平;RFQ-PCR检测MDR1 mRNA的表达;电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)检测细胞内奥沙利铂(L-OHP)药物浓度的改变。结果:人结肠癌多药耐药细胞HCT8/V的P-gp和c-Jun的磷酸化表达明显高于HCT8细胞;与对照组比较,健脾解毒方药物血清作用48h后HCT8/V细胞的c-Jun的Ser63/73磷酸化、P-gp、MDR1 mRNA水平显著降低(P0.01),细胞组内L-OHP浓度明显增高(P0.01)。结论:健脾解毒方通过降低c-Jun的Ser63/73磷酸化,抑制JNK信号通路的激活,降低P-gp的表达,逆转HCT8/V细胞的多药耐药。     

解毒凉血方对肝卵圆细胞向成熟肝细胞的诱导分化作用和机制研究

目的:研究解毒凉血方对肝卵圆细胞的诱导分化作用及其作用机制。方法:SD大鼠随机分为模型组、解毒凉血方组、正常对照组;通过喂饲2-乙酰氨基芴加2/3肝切除术建立肝卵圆细胞增殖模型;HE染色观察肝组织病理学,透射电镜观察肝卵圆细胞的超微结构,免疫组织化学观察各组大鼠肝组织OV6、ALB、CD34及Notch1的表达和分布。结果:模型组造模过程中至7周末肝组织汇管区周围可见大量的卵圆细胞增生,OV6、CD34、Notch1蛋白与正常对照组比较在肝组织中呈高表达,ALB蛋白较正常对照组表达明显减少;解毒凉血方组肝组织卵圆细胞增生较模型组明显减少,OV6、CD34、Notch1蛋白表达较模型组明显减少(P0.05)、ALB蛋白表达较模型组明显增加(P0.05)。结论:解毒凉血方能有效的促进卵圆细胞向成熟肝细胞分化,此作用机制可能与调节Notch信号通路有关。     

健脾补肾活血方对脑梗死患者神经功能缺损和T细胞亚群的影响

目的:评价健脾补肾活血方治疗脑梗死的临床疗效及其对细胞免疫功能的影响.方法:采用随机数字表法将脑梗死患者随机分为治疗组和对照组各30例,对照组采用西药常规治疗,治疗组在西药常规治疗的基础上加服具有扶正固本作用的中药健脾补肾活血方,14 d为1个疗程,共观察2个疗程.分别评定两组患者治疗前及治疗后7,14,28 d卒中量表(NIHSS)评分,并用流式细胞仪检测治疗前后外周血T淋巴细胞亚群变化.结果:治疗组显效率76.67％,总有效率93.33％.对照组显效率40.0％,总有效率73.33％.治疗组疗效明显高于对照组(P＜0.01,P＜0.05).两组患者治疗后NIHSS评分较治疗前均明显下降(P＜0.01).治疗后治疗组NIHSS评分较对照组下降更明显(P＜0.01).两组患者治疗后CD3+,CD4+,CD4+/CD8+较治疗前均明显增加(P＜0.01),CD8+明显下降(P＜0.01).治疗后治疗组CD3+,CD4+,CD4+/CD8+较对照组增加更明显(P＜0.01),CD8+下降也较对照组更明显(P＜0.01).结论:具有扶正固本作用的中药健脾补肾活血方能够改善脑梗死患者临床症状和体征,临床疗效明显,并且可以明显改善患者的细胞免疫功能.     

清热解毒方对急性细菌性腹膜炎大鼠血清内毒素及细胞因子的影响

目的 : 观察清热解毒方对腹腔感染大鼠血清内毒素及细胞因子水平的影响。 方法 : Wistar大鼠随机分为4组:对照组、模型组、清热解毒方组、头孢克肟组,ig1次,给药30 min后大肠杆菌ip造成大鼠急性细菌性腹膜炎模型,于6,12,18,24 h后分别检测各组动物血浆内毒素,肿瘤坏死因子α(TNF-α),IL-6,IL-10水平。 结果: 造模后模型组大鼠血清内毒素,TNF-α,IL-6,IL-10较对照组明显升高(P<0.01),清热解毒方组与头孢克肟组上述指标较模型组明显降低。 结论: 清热解毒方能有效降低大肠杆菌腹腔感染大鼠血清内毒素及TNF-α,IL-6,IL-10水平。     

消痰散结方对裸鼠胃癌原位移植瘤模型P16基因甲基化的影响

目的观察消痰散结方对胃癌裸鼠原位移植瘤模型P16基因甲基化的影响,探讨消痰散结方抗癌作用机制。方法培养胃癌细胞系MKN-45,制备胃癌裸鼠原位移植瘤模型,分为模型对照组和中药组。中药组给予消痰散结方水煎剂(含原药材2.51g/mL),模型对照组给予生理盐水,连续6周。称重法测定抑瘤率,RT-PCR法测定P16基因表达,Methylight法测定P16基因甲基化水平。结果消痰散结方能抑制肿瘤生长,抑瘤率达54.82%。消痰散结方能逆转P16基因甲基化,增加P16mRNA表达,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论消痰散结方可以有效抑制胃癌细胞生长,逆转P16基因甲基化可能是其作用机制之一。     

益肾健脾养血通利方对多囊卵巢综合征大鼠模型胰岛素样生长因子-1 mRNA表达的影响

目的观察益肾健脾养血通利方对多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠模型胰岛素样生长因子-1（IGF-1）mRNA表达的影响,从而在分子水平初步探讨该方治疗PCOS的可能机制。方法SD雌性大鼠72只,随机分为正常对照组、模型组、克罗米芬组及中药小、中、大剂量组,除正常对照组外,其余各组皮下埋植左旋炔诺孕酮硅胶棒,建立PCOS大鼠模型,应用原位杂交法观察IGF-1 mRNA在大鼠多囊卵巢中的表达。结果模型组IGF-1 mRNA表达明显高于对照组,图像半定量分析显示中药治疗组均能减少IGF-1 mRNA的表达。结论益肾健脾养血通利方具有降低大鼠多裳卵巢中IGF-1 mRNA的表达,改善胰岛素抵抗状况的作用。