益心康胶囊含药血清对氧应激所致大鼠心肌线粒体H+-ATP酶活性损伤的保护作用

目的：研究中药复方－益心康胶囊（H303）及其各组份含药血清地氧应激所致大鼠心肌线粒体H^ －ATP酶活性损伤的保护作用。方法：利用氧应激损伤体系（Fe^2 /VitC)与大鼠心肌线粒体共同孵育30min,观察对线粒体H^ －ATP酶的影响。 结果：大鼠心肌线粒体氧应激后,可致酶活性明显降低。单一组份研究表明,丹参和山楂（600mg/kg制备含药血清）对酶活性具有明显保护作用,低于各组份给药量的H303含药血清（100、200mg/kg）即可产生相似的保护作用。结论：H303含药血清对氧应激造成的线粒体呼吸链关键酶活性的降低具有保护作用,其中丹参和山楂可能是发挥作用的主要成份。     

补肾益智方含药血清保护Aβ25—35—3损伤PCI2细胞的实验研究

目的：探讨补肾益智方含药血清对由Aβ25-35-3诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤（PCI2）老年性痴呆（AD）细胞模型的保护作用。方法：建立PCI2细胞培养方法，用倒置显微镜进行形态学观察，利用WST-8法检测细胞活力以及荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位等方法，观察补肾益智方含药血清对AD细胞模型的影响。结果：补肾益智方5％含药血清对AD细胞模型的保护作用优于5％正常血清，差异均有显著性意义（P〈0．05）。结论：补肾益智方含药血清能在一定程度上减少Aβ25-35-3对PCI2细胞的神经毒性作用。     

益心康胶囊和复方丹参片含药血清对Fe^2＋／抗垭血酸致大鼠心肌线粒体游离钙及摄钙能力改变的影响

目的：研究益心康胶囊（H303）和复方丹参片（FD）对大鼠心肌线粒体损伤的保护作用,方法：利用体外自由基产生体系造成线粒体氧应激损伤,观察两药含药血清对线粒体游离钙及摄钙能力的影响。结果：2.5/2.5mM Fe^2 ／抗坏血酸损伤心肌线粒体30min后,可使线粒体游离钙及其摄钙能力发生不同的变化,线粒体摄钙能力明显降低,由正常血清对照组的73.1%降至30.8%。H303及FD（50－800mg/kg）含药血清组可使钙摄取能力有不同程度的增加。结论：自由基损伤可引起大鼠心肌线粒体游离钙及摄钙能力改变,H303和FD含药血清对此具有保护作用。     

丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3的影响

目的观察丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3蛋白表达的影响。方法制备丹参滴注液含药血清,以含药血清干预原代培养缺氧海马神经元,MTT法检测神经元增殖活力,免疫荧光法检测神经元Caspase 3蛋白的表达。结果缺氧组海马神经元增殖活力低于正常组(P0.05),神经元Caspase 3蛋白表达高于正常组(P0.05),丹参滴注液含药血清能减少缺氧组海马神经元caspase 3蛋白表达,改善细胞增殖活力(P0.05)。结论丹参滴注液含药血清能明显抑制缺氧海马神经元Caspase 3表达,促进缺氧神经元增殖,起到神经保护作用。     

预先针刺对癫痫持续状态后神经元损伤保护作用的实验研究

目的：观察预先针刺对癫痫持续状态（SE）后神经元损伤的保护作用。方法：建立氯化锂－匹罗卡品大鼠SE模型。神经元尼氏体亚甲蓝特殊染色法观察大鼠海马CA1区神经元尼氏体变化；原位细胞凋亡检测法（TUNEL染色）及电镜观察大脑皮质、海马CA1区神经元凋亡情况。结果：预先针刺组大脑皮质、海马CA1区可见少量棕色TUNEL染色阳性细胞核，较SE组明显减少，尼氏体染色阳性细胞数较SE组明显增多。结论：预先针刺可以减轻SE后神经元损伤，抑制神经元凋亡。     

氧应激对豚鼠心肌细胞线粒体膜电位的影响及益心康胶囊含药血清保护作用的研究

目的观察氧应激对豚鼠心肌细胞线粒体的影响，探讨抗心肌缺血中药复方——益心康胶囊(H303)含药血清对氧应激损伤的保护作用机制。方法利用激光共聚焦显微镜，观察羟自由基损伤体系(Fe2＋／H2O2)与豚鼠心肌细胞共同孵育30～60min后对心肌细胞线粒体膜电位的影响。结果豚鼠心肌细胞氧应激后，可致线粒体细胞色素氧化酶活性降低，以及荧光染料Rh123所显示的线粒体膜电位明显降低。H303含药血清可明显减轻上述损伤，表现为明显增强豚鼠心肌细胞线粒体氧化酶活性，使心肌细胞存活率增加；并具有保护心肌细胞膜电位的作用。结论氧应激可造成心肌线粒体膜电位降低。益心康胶囊含药血清可保护线粒体膜电位，从而发挥其膜稳定作用。     

荷瘤小鼠扶正抑瘤颗粒含药血清对H22细胞的凋亡、自由基含量和线粒体膜电位的影响

目的观察荷瘤小鼠扶正抑瘤颗粒（FYG）含药血清对H22细胞的凋亡、自由基含量和线粒体膜电位的影响。方法应用流式细胞仪检测FYG含药血清对H22细胞凋亡情况的影响;应用激光共聚焦显微镜检测H22细胞DNARNA、自由基含量和线粒体膜电位的变化。结果FYG含药血清可引起H22细胞的凋亡,细胞DNARNA和线粒体膜电位降低,自由基含量升高。结论FYK含药血清引起H22细胞的凋亡可能与其影响H22细胞自由基含量和线粒体膜电位变化有关。     

复方地黄对AD大鼠行为学改变及海马CA1区神经元形态结构的影响

目的：观察复方地黄对阿尔茨海默病（Alzheimer’sDisease,AD）模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元形态结构的影响。方法：在腹腔注射D一半乳糖造成大鼠衰老的基础上,海马CA1区注射喹啉酸（QA）造成拟老年性痴呆学习记忆损害模型,复方地黄汤治疗后,观察光、电镜下海马CA1区神经元形态的变化。结果：复方地黄可明显缩短AD大鼠的Morris水迷宫潜伏期、增加平台象限路程比和跨平台次数,明显减轻海马CA1区神经元的损伤,阻止神经元数量上的过度缺失,明显修复线粒体,保护高尔基复合体、粗面内质网的形态,减少突触的溶解。结论：复方地黄对AD模型大鼠受损的神经行为学有明显的改善,对损伤的神经元有一定的保护作用;尤其对损伤突触有一定程度的修复.     

缺氧预适应及大花红景天预给药对缺氧小鼠海马神经元线粒体损伤的保护机制研究

目的:研究缺氧预适应及大花红景天预给药对缺氧小鼠海马神经元线粒体损伤的保护机制。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为空白组、缺氧组、缺氧预适应组、大花红景天口服液0. 67g/kg组、大花红景天水提物1、2、4 g/kg组。用低压低氧动物舱建立缺氧脑损伤模型,通过常压缺氧耐受实验、Morris水迷宫、TUNEL染色、透射电镜观察CA1区线粒体结构及检测线粒体膜电位(MMP)研究缺氧预适应和大花红景天对海马神经元缺氧损伤的保护作用。结果:与空白组比较,缺氧预适应组和大花红景天1、2和4 g/kg剂量组小鼠耐缺氧存活时间均明显延长。与缺氧组比较,缺氧预适应组和各药物组小鼠定位航行和空间探索能力明显改善。TUNEL结果显示,与空白组比较,缺氧组小鼠CA1区神经元凋亡明显,缺氧预适应组和各药物组可显著抑制神经元凋亡。线粒体形态及膜电位检测显示,与空白组比较,缺氧组小鼠线粒体损伤明显,MMP显著升高,缺氧预适应组和大花红景天1、2和4 g/kg剂量组可显著降低线粒体损伤和MMP。结论:缺氧预适应及大花红景天可通过抑制海马神经元凋亡、维持线粒体形态结构及降低MMP发挥抗缺氧脑保护作用。     

电针对MCAO大鼠海马组织形态学及神经元NT-3蛋白表达的影响

目的：研究电针对线栓法栓塞大脑中动脉所致局灶性脑缺血（MCAO）大鼠海马组织形态学及神经元NT-3蛋白表达的影响。方法：HE染色观察电针人中、内关及曲池、足三里对MCAO大鼠脑海马CA1区神经元死亡率及微血管数目的影响,免疫组织化学染色法及图像分析系统观察对神经元NT-3蛋白表达的影响。结果：电针人中、内关可显著降低MCAO大鼠海马CA1区神经元死亡率,可显著提高NT-3蛋白阳性细胞表达率及阳性表达光密度值。结论：电针可提高MCAO大鼠海马NT-3蛋白的表达,推测这是电针降低神经元死亡率,发挥脑缺血保护作用的机制之一。     

六味地黄汤含药血清对海马神经元突触活动的影响

目的：研究六味地黄汤益智作用的机理。方法：应用血清药理学和电生理方法，观察六味地黄汤含药血清对原代培养大鼠海马神经元自发突触活动的影响。结果：含药血清作用48h可明显增加海马神经元自发动作电流(spontaneous action cur-rent,sAC)和微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory post aynaptic currenl,mEPSC)的产生频率，但并不影响mEPSC的幅度。结论：六味地黄汤可作用于突触前位点对海马神经元突触活动产生调节作用，该作用可能是其调节海马神经元的兴奋性进而发挥益智作用的机制之一。     

参芎化瘀胶囊对大鼠全脑缺血再灌注损伤及其海马CA1区生长相关蛋白43表达的影响

目的探讨参芎化瘀胶囊对大鼠全脑缺血再灌注损伤及海马CAl区生长相关蛋白43（growthassociatedprotein43,GAP43）表达的影响。方法100只成年SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和参芎化瘀胶囊每El1次组（中药A组）,每日2次组（中药B组）,每日3次组（中药C组）,每组20只。采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法制备全脑缺血再灌注动物模型。在1、3、7、14天4个时间点通过HE染色观察海马CAl区组织学改变,免疫组织化学法检测海马CAl区GAP43蛋白的表达同时测定行为学评分,第14天通过Westernblot法检测海马CAl区GAP43蛋白质含量。结果与对照组比较,模型组各时间点GAP43蛋白表达增高（P〈0．05）,行为学评分升高（P〈0．05）,变性神经元增加,存活神经元减少（P〈0．05）。与模型组比较,参芎化瘀胶囊各组GAP43蛋白表达均升高（P〈0．05）,其中中药C组最明显（P〈0．01）;行为学评分显著降低（P〈0．05）;变性神经元数量减少,存活神经元数量增加（P〈0．05）;14天存活神经元数明显增多,其中以中药C组存活神经元数量最多、GAP43蛋白质含量最高,与中药A、B两组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论参芎化瘀胶囊对大鼠全脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与升高GAP43的表达有关。     

Protective effects of alpinae oxyphyllae fructus (Alpinia oxyphylla MIQ) water-extracts on neurons from ischemic damage and neuronal cell toxicity

Alpinae Oxyphyllae Fructus (Alpinia oxyphylla MIQ) (Korean name Ik-Jj-In) is a medicinal plant used in Korea for the treatment of various symptoms accompanying hypertension and cerebrovascular disorders. The present study was performed to investigate the effects of Alpinae Oxyphyllae Fructus water-extracts (AOF) on a cultured primary neuron cell system, cell cytotoxicity and lipid peroxidation in Abeta treatment conditions. Cell killing was significantly enhanced by addition of increasing concentrations of Abeta. Pretreatment of AOF attenuated in cell killing enhanced by increasing concentrations of Abeta. Abeta-induced cell death was protected by the application of water extract of AOF in a dose-dependent manner, and concentrations of 50 to 100 micro g/ml had a significant effect compared to exposure of Abeta only. AOF has been shown to protect primary cultured neurons from N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor-mediated glutamate toxicity. The evidence indicated that AOF protects neurons against ischemia-induced cell death. Oral administration of AOF into mice prevented ischemia-induced learning disability and rescued hippocampal CA1 neurons from lethal ischemic damage. The neuroprotective action of exogenous AOF was also confirmed by counting synapses in the hippocampal CA1 region. The presence of AOF in neuron cultures did not repress a NMDA receptor-mediated increase in intracellular Ca(2+), but rescued the neurons from NO-induced death. AOF may exert its neuroprotective effect by reducing the NO-mediated formation of free radicals or antagonizing their toxicity.     

六味地黄汤对悬吊应激小鼠下丘脑-垂体-卵巢轴激素的影响

目的 :观察悬吊应激雌性小鼠下丘脑 垂体 卵巢 (HPO)轴功能的变化及六味地黄汤 (LW )对其影响。方法 :用悬吊方法应激雌性小鼠 (第 1～ 3d悬吊 30min ,以后每 3d增加 30min) ,建立动物HPO轴功能失常模型 ,用放射免疫分析法检测下丘脑促性腺激素释放激素 (GnRH)含量及血清雌二醇浓度 ,用Westernblot检测垂体促黄体生成素 (LH)水平。结果 :悬吊应激组小鼠体重下降 ,动情周期及动情间期延长 ,下丘脑GnRH、垂体LH水平下降 ,血清雌二醇浓度升高。口服LW对应激小鼠动情周期无明显影响 ,但能一定程度减少其体重的下降 ;同时 ,口服LW能显著提高应激小鼠下丘脑GnRH和垂体LH的水平 ,并能明显降低应激小鼠血清雌二醇的浓度。结论 :悬吊应激可导致雌性小鼠HPO轴功能紊乱 ,LW对应激小鼠HPO轴功能紊乱具有明显纠正作用     

地黄饮子对海马神经元缺氧损伤的保护机制

目的 观察地黄饮子(熟地黄、巴戟天、山茱萸、石斛、肉苁蓉等)对缺血缺氧损伤海马神经细胞的保护作用并探讨机制.方法 将培养细胞分为对照组,模型组及药物保护组;其中,损伤组采用Na2S2O4 I mmol/L加低糖作用3h;药物保护组在加入损伤因素同时加入不同浓度含地黄饮子血清.通过比色法测定培养液中乳酸脱氢酶含有量(LDH),采用MTT法测定脑海马神经细胞存活率,利用线粒体内琥珀酸脱氢酶(SDH)含有量来分析地黄饮子的保护作用及其作用的有效浓度;测定缺血缺氧损伤下海马神经细胞内超氧化物歧化酶(SOD) 与丙二醛(MDA)含有量.结果 含地黄饮子血清与空白血清比例在1∶3～3∶1之间,均对缺氧神经细胞具有保护作用.降低损伤细胞LDH释放,细胞膜损伤程度减轻.MTT值不同程度升高,提示细胞活力状态提高、细胞能量代谢过程有所改善;地黄饮子可以保护缺血缺氧环境中海马神经细胞内SOD的活力,降低MDA的含有量,而且随剂量的增加而增加.结论 地黄饮子对缺氧损伤脑海马神经细胞有明显保护作用;其作用机制可能与降低氧自由基损伤有关.     

柴胡提取物对大鼠海马原代培养神经元5-HT3受体介导离子通道的影响

目的: 探讨柴胡提取物（Radix Bupleuri Extract,RBE）含药血清对抑郁情绪模型大鼠原代培养的海马神经元5-羟色胺3受体（5-HT₃R）通道电流的作用。方法：复制抑郁情绪大鼠模型,以柴胡提取物进行药物干预,采用旷场实验和糖水偏好实验评价模型, 制备各组大鼠血清并灭活除菌,对原代培养的大鼠海马神经元干预24 h后,采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元5-HT₃R通道电流。结果:与正常组相比,模型组大鼠旷场实验总分显著性降低（P<0.01）,糖水偏好系数显著降低（P<0.01）,模型组大鼠血清孵育的海马神经元电流密度值明显增加（P<0.01）;与模型组相比,柴胡提取物组和氟西汀组旷场实验总得分明显提高（P<0.05,P<0.01）,糖水偏好系数均明显增加（P<0.05,P<0.05）,柴胡提取物和氟西汀含药血清孵育的海马神经元电流密度值均明显减少（P<0.01,P<0.01）。结论：柴胡提取物能改善抑郁情绪模型大鼠异常的5-HT3R通道电流,这可能是其发挥抗抑郁情绪的中枢机制之一。     

抗纤复方含药血清对HSC-LI90细胞基质金属蛋白酶及其抑制因子基因表达的影响

目的：观察抗纤复方含药血清对肝星形细胞(HSC)LI90细胞(HSC-LI90)基质金属蛋白酶及其抑制因子基因表达的影响。方法：以0．5、2．0、4．0g／kg等不同剂量抗纤复方灌胃大鼠制备的含药血清，作用HSC-LI90细胞48h，应用Northern印迹杂交的方法，检测膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶-2及其抑制因子-l(TIMP-l)基因的表达，并用酶图法检测基质金属蛋白酶-2的活性。结果：抗纤复方含药血清抑制HSC-LI90细胞TIMP-1，增加HSC-LI90细胞膜型基质金属蛋白酶基因表达，对基质金属蛋白酶-2基因表达及其活性没有影响。结论：抗纤复方抑制HSC-L190细胞TIMP-l基因表达水平，促进胶原降解，可能是抗肝纤维化的作用机制之一。     

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路与针刺保护癫痫继发海马神经元损伤的关系

目的:观察针刺对戊四唑(PTZ)诱发癫痫大鼠海马神经元损伤的保护作用及该保护作用与磷脂酰肌醇-3-激酶(PI 3K)/蛋白激酶B(Akt)信号转导通路的关系。方法:SD大鼠120只随机分为5组:正常组、PTZ组、LY 294002组、针刺+LY 294002组、针刺组,每组24只。针刺组、针刺+LY 294002组针刺"百会"大椎"30min,共治疗5次。正常组、PTZ组、针刺组先侧脑室注射二甲基亚砜5μL,LY 294002组、针刺+LY 294002组侧脑室注射LY 294002(5μL),30min后正常组腹腔注射生理盐水2mL,其余各组腹腔注射PTZ(50mg/kg),于注射后4h与24h取脑组织。分别用HE染色法于光镜下观察海马结构改变,用电镜观察海马超微结构。结果:癫痫发作后4h光镜、电镜均可见大鼠海马神经元损伤,24h后损伤进一步加重。LY 294002组大鼠海马神经元损伤明显加重。针刺+LY 294002组大鼠海马神经元损伤明显,与LY294002组比较未见明显好转。针刺组大鼠海马神经元损伤明显减轻。结论:针刺具有明显保护癫痫继发脑神经元损伤作用,其保护作用与细胞内PI 3K/Akt信号转导通路有关。