银粉玻璃离子体的细胞毒性研究

目的研究临床常用的银粉玻璃离子体(日本松风)的体外细胞毒性。方法用细胞培养液浸提银粉玻璃离子体的粉剂(powder),液剂(liqu id)及粉剂+液剂(Power+liqu id)各24 h,配置不同浓度的浸提液(0.1~100 g/L),将小鼠成纤维细胞(L-929)在不同浓度的浸提液中分别培养24 h,通过A lam ar B lue比色法,检测各组分对L-929细胞相对增殖率的影响,评价其细胞毒性。结果 L-929细胞呈现高的细胞增殖率,各浓度浸提液之间均无显著性差异(P均>0.05),其细胞毒性为0~1级。结论临床常用的银粉玻璃离子体无明显的细胞毒性,具有较好的生物相容性。     

甘草查尔酮B对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的增殖抑制作用

目的:研究甘草查尔酮B(licochalcone B,LCB)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:取对数生长期MCF-7细胞按6×104个/孔接种于6孔板中,台盼蓝拒染法检测MCF-7细胞的生长曲线并计算细胞倍增时间;取对数生长期MCF-7细胞按1×104个/孔接种于96孔板中,噻唑蓝(MTT)法检测甘草查尔酮B(0,10,20,40,60,80μmol·L-1)作用24,48,72 h后,对MCF-7细胞的增殖抑制作用;取对数生长期MCF-7细胞按2×105个/孔接种于6孔板中,LCB(0,20,40,80μmol·L-1)作用48 h后,显微镜下观察细胞形态;取对数生长期MCF-7细胞按2×105个/孔接种于6孔板中,LCB(0,20,40,80μmol·L-1)作用48 h后,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态;取对数生长期MCF-7细胞按9×105个/瓶接种于细胞培养瓶中,LCB(0,20,40,80μmol·L-1)作用48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测与凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-XL,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9转录水平的变化。结果:与0μmol·L-1LCB组比较,LCB能够以时间和浓度依赖性方式有效的抑制MCF-7细胞增殖,经LCB处理后的MCF-7细胞呈现出染色体边集、核浓缩、核碎裂等典型凋亡形态学特征,细胞凋亡率随着LCB浓度的增加而升高,且LCB能明显下调Bcl-XL,上调Bax,Caspase-3,Caspase-9的表达(P0.05,P0.01)。结论:LCB在体外能显著抑制MCF-7细胞增殖,具有诱导MCF-7细胞凋亡的作用,其机制可能与药物上调Bax,下调Bcl-XL,激活由Caspase-3,Caspase-9介导的线粒体凋亡信号通路有关。     

枳实消痞丸诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的:从细胞增殖、凋亡和周期角度研究枳实消痞丸治疗胃癌的机制.方法:胃癌SGC-7901细胞阴性对照组加完全培养基,1 ×104细胞/孔接种于96孔板,将枳实消痞丸分为4,2,0.5,0.125,0.05 g·L-15个质量浓度加入,分别作用24,48,72 h,MTT法检测细胞增殖;1×105/孔接种于6孔板,加入2,0.5,0.125 g·L-13个质量浓度的药物,分别培养48,72 h,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果:枳实消痞丸4,2,0.5,0.125,0.05 g·L-1质量浓度作用于胃癌SGC-7901细胞,抑制率依次降低;作用于24,48,72 h,抑制率渐增.枳实消痞丸增加了G0/G1期的细胞比率,促进细胞凋亡,高、中浓度强于低浓度.结论:枳实消痞丸抑制了细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,其机制可能与药物阻滞细胞于G0/G1期和诱导细胞凋亡有关.     

平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用

目的:研究中药复方平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及诱导细胞凋亡的作用。方法:采用CCK-8比色法和磷脂酰丝氨酸外翻分析法分别检测平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖和细胞凋亡的作用。平肺浸膏(1 g.mL-1)由中日友好医院药学部提供,实验前经定性滤纸粗滤,0.22μm滤膜过滤后分装。人肺腺癌A549细胞常规复苏、培养及传代,处于对数生长期开始用于实验。实验分为空白对照、生药终浓度1,5,10 g.L-1共4组。细胞以7×104/mL接种于96孔培养板,24 h细胞贴壁后加不同浓度平肺浸膏,对照组只换液不加药。分别于加药后24,48,72 h用CCK-8法检测细胞增殖情况。将细胞以3×104/mL接种于6孔培养板,5 h细胞贴壁后加不同浓度的平肺浸膏。药物作用17 h后收获细胞,应用磷脂酰丝氨酸外翻分析法,于流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:平肺浸膏生药5,10 g.L-1在体外作用24 h以上表现出对A549细胞增殖的抑制作用,与常规对照组相比存在统计学差异(P<0.05),且这种抑制作用随时间和药物浓度增加而增强。生药10 g.L-1可诱导早期细胞凋亡,与常规对照组相比存在统计学意义(P<0.05)。结论:中药复方平肺浸膏能够抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡。     

山楂叶总黄酮对人类单核肿瘤细胞增殖的影响

目的研究山楂叶总黄酮(HF)对人类单核肿瘤细胞U937增殖的影响。方法 U937细胞以5×104个/mL的浓度,培养于10%胎牛血清(FCS)的RPMI1640全培养液中,分别加入浓度为0,25,50,100,150,200mg/L的HF。每组8孔接种于24孔培养板中孵育7d。每天计算各孔细胞密度,第7天测定细胞悬液中乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果 HF25～200mg/L组U937细胞密度均低于HF0mg/L组,浓度越高细胞密度越低(P0.05)。HF0～150mg/L组细胞悬液LDH活性无统计学意义(P0.05),HF200mg/L组LDH与前5组相比均有统计学意义(P0.05)。结论 HF具有抑制U937细胞增殖的作用,高浓度的HF(≥200mg/L)对U937细胞可能具有毒性作用。     

骨组织工程经多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质富集材料的细胞毒性研究

目的：评价多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质富集材料的细胞毒性，为该材料应用于临床提供实验依据。方法：参照GB／T16886．5—2003-ISO 10993—5：1999标准，将不同浓度的材料浸提液分别与人间充质干细胞（Mscs），成骨细胞（OS）体外复合培养。倒置相差显微镜行细胞形态学观察；MTT比色法测定1、3、5、7d的MSCs增殖活性；金氏比色法检测OS碱性磷酸酶活性。结果：不同时间点、不同浓度材料浸提液培养的MSCs均良好增殖，毒性0～1级；5d后浸提液培养组细胞增殖率优于阴性对照组（P〈0．05），随材料浸提液浓度增加而增加；浸提液培养组OS碱性磷酸酶活性与阴性对照组相比差异无显著性（P〉0．05）。结论：经多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质富集支架材料无细胞毒性，实验浓度范围内利于MSCs增殖，不影响OS的成骨活性。     

大黄素减轻胰腺腺泡AR42J细胞内质网应激的研究

目的:探讨大黄素对胰腺腺泡AR42J细胞内质网应激的影响。方法:AR42J细胞以1×105个/m L接种于6孔培养板中,分为正常对照组、模型组(雨蛙素终浓度为1×10-7mol·L-1,脂多糖终浓度为10 mg·L-1)、大黄素组(终浓度为10,20,40μmol·L-1),每组设3个复孔,培养24 h待细胞贴壁后弃上清,对照组加入单培、模型组加入用单培配置的造模液、治疗组在加入造模液前15~20 min分别加入不同浓度大黄素。37℃,5%CO2条件下继续培养3 h后,试剂盒检测细胞内蛋白酶、脂肪酶表达水平;光学显微镜观察细胞形态;激光共聚焦显微镜检测内质网钙离子水平;Western blot方法分析内质网应激相关信号分子的蛋白表达情况。结果:大黄素能显著抑制AR42J细胞合成蛋白酶、脂肪酶,减少细胞内钙离子水平,抑制内质网应激。结论:大黄素能够减轻雨蛙素联合脂多糖导致的胰腺腺泡细胞损伤,其作用机制与抑制细胞内钙超载及内质网应激有关。     

芦荟及其复方提取物对RAW264.7细胞炎症因子的影响

目的:观察芦荟及其复方提取物对小鼠巨噬细胞炎症因子的影响.方法:RAW264.7细胞按2×105/mL稀释,100μL/孔接种入96孔板,药物质量浓度为250,125,62.5 g?L-1下采用噻唑蓝比色法(MTT法)作用4h,检测芦荟及其复方提取物对小鼠巨噬细胞的毒性作用;药物质量浓度为50,25,12.5 g?L-1下采用硝酸还原酶法作用24 h,测定小鼠巨噬细胞一氧化氮(N0)含量,并用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定其在单纯药物及脂多糖(LPS)1 mg?L-1诱导情况下小鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)的含量.结果:芦荟及其复方提取物具有促进巨噬细胞释放NO的作用,并与药物浓度成正相关(P＜0.01);芦荟有促进TNF-α分泌(P＜0.01)和抑制IL-10分泌(P＜0.05)的作用,其复方在LPS诱导下则对TNF-α和IL-10都有抑制作用(P＜0.01).结论:芦荟在250～7.8 g?L-1下对臣噬细胞无细胞毒性,其复方则有一定毒性;芦荟及其复方对小鼠巨噬细胞炎症因子的释放有一定影响.     

从细胞凋亡和周期研究旋覆归连方抑制食管癌Eca9706细胞增殖作用

目的:从细胞增殖、周期和凋亡研究旋覆归连方治疗食管癌作用机制.方法:体外培养食管癌细胞株Eca9706,MTT法检测旋覆归连方抑制细胞增殖作用,观察其时效和量效;1×105/孔细胞接种于6孔板,加入15,25,60 mg·L-1的药物作用48 h,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡.结果:旋覆归连方具有很强的抑制Eca9706增殖作用,具有剂量依赖性,IC50 58.11mg·L-1;质量浓度15,25,60 mg·L-1在96 h内抑制率依时增加;早、晚期凋亡率用药组与阴性对照组相比明显增高(P＜0.05);细胞G1/G0期比率也明显增加(P＜0.05),60 mg·L-组出现了明显的凋亡峰.结论:旋覆归连方能抑制食管癌细胞的增殖,具有浓度和时间依赖性,可能与其阻滞了细胞G1/G0期和诱导细胞凋亡有关.     

矾冰纳米乳对L-929细胞抑制作用的影响

目的:探讨矾冰纳米乳对L-929实验细胞增殖抑制作用。方法:采用细胞病变抑制法与MTT法,将试验药物稀释后加入培养4h贴壁的L-929细胞中,37℃、5%CO2培养箱中观察24h、48h,同时设传统药物矾冰液和正常细胞对照,倒置显微镜下观察药物对细胞形态的影响,测定OD值比较药物对细胞生长的影响。结果:矾冰纳米乳对L-929细胞的生长有随浓度增加其生长抑制率也增加的趋势,与矾冰液比较有统计学差异(P<0.05);矾冰纳米乳在同一浓度、同一时间内细胞增长抑制率低于矾冰液,差异有统计学意义(P<0.05);同时矾冰纳米乳有随浓度降低,细胞培养时间延长其细胞抑制率也降低,与正常组细胞比较无统计学差异(P>0.05);倒置显微镜下观察细胞形态良好。结论:纳米矾冰乳对L-929培养细胞无毒性作用,可以用于临床。     

印度蜂蜜提取物中的酚类化合物的抗氧化活性及α淀粉酶抑制活性研究(英文)

AIM:To evaluate the antioxidant and α-amylase inhibition potential of phenolic compounds in the extracts of Indian honey.METHODS:Phenolic compounds were extracted from Indian honey through column chromatography.The antioxidant poten-tial of extracted phenolic compounds was measured by two different biochemical assays:ferric reducing antioxidant power(FRAP) assay and scavenging activity on 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH) radicals.Moreover,α-amylase inhibition assay of phenolic compounds of honey was also evaluated.RESULTS:The scavenging inhibition rate varied from 86.8% to 78.6% from the highest(6 mg·mL-1) to the lowest(1.5 mg·mL-1) concentration,whereas,reducing power assay varied from 0.89 Abs to 0.19 Abs from the highest to the lowest concentration.Butylated hydroxytoluene(BHT) was used as reference compound for antioxidant assays.α-amylase inhi-bition assay is reported from the phenolic honey extracts for the first time.The inhibition rate for α-amylase varied from 88.8% to 30.5% from the highest(20 μg·mL-1) to the lowest concentration(4 μg·mL-1).CONCLUSION:Honey phenolic extract possessed antioxidant and α-amylase inhibition activity,thus increasing its potential therapeutic property.     

天钩降压胶囊中天麻苷、丹皮酚在大鼠离体小肠的吸收动力学

目的:研究天钩降压胶囊中有效成分的大鼠离体小肠吸收动力学.方法:采用外翻肠囊法,用HPLC测定不同取样时间肠内液天麻苷、丹皮酚的含量,计算累计吸收量,以天麻苷、丹皮酚的累计吸收量对时间作线性回归分析,计算吸收动力学参数.结果:天麻苷回归方程为y =0.000 6X -0.012 8(r=0.993 0),Ka =6.0 × 10-5μg·min-1·cm-2,t1/2=1.16×104h;丹皮酚回归方程为Y=0.00068X+0.001 1(r=0.9835),Ka =6.8 ×10-5 μg·min -·cm-2,t1/2=1.02 ×104 h.结论:天钩降压胶囊中天麻苷、丹皮酚在大鼠离体小肠的吸收为一级动力学过程.     

抗痨颗粒对耐多药结核分枝杆菌蛋白质组学的影响

目的:应用蛋白质组学的双向电泳技术,比较分析抗痨颗粒提取物作用前后耐多药结核分枝杆菌的全菌蛋白表达差异,揭示药物作用机制.方法:临床耐多药结核分枝杆菌接种在7H9添加OADC液体培养基中37℃培养6～8d,细菌密度为1×108/mL～2 × 108/mL.抗痨颗粒浸提物的最低抑菌浓度(MIC)为0.638 8 g·L-1.加到液体培养基中,作用20 h,终浓度为相当于生药0.255 6 g·mL-1.局部内环境与外部环境完全隔离下,采用双向凝胶电泳分离全菌总蛋白,得到差异表达的蛋白质点进行分析比对.结果:耐多药结核分枝杆菌用药前后,发现了8个差异斑点,确定其中2个蛋白质为:硫代硫酸硫转移酶( thiosulfate sulfurtransferase)和假定蛋白Rv0634A.结论:揭示了抗痨颗粒对耐多药结核分枝杆菌的翻译,结构组成,氨基酸代谢,氰化物和H2S的解毒以及硫和铁转移等各方面均有一定影响,从而破坏结核分枝杆菌的生活能力,从而达到抑制结核分枝杆菌的目的.     

61株放线菌菌株的化学筛选及目标菌株的抗MRSA活性评价(英文)

目的:从用于抗感染民间药物的泥土中,发现能代谢产多种类似物或结构类型,且次级代谢产物具有抗MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)活性的放线菌菌株。方法:采用平板法,在改良高氏培养基上进行放线菌菌株的选择性分离,分得菌株用HPLC-UV对其进行化学筛选;然后分别采用琼脂扩散法和微量肉汤稀释法,对目标菌株发酵提取物的抗MRSA活性和最低抑菌浓度进行测定;采用MTT法测定目标菌株对人结肠癌细胞株HCT-116的细胞毒性。结果:从采集于湖南省株洲县的土壤样品中分得61株放线菌菌株;HPLC-UV图谱分析显示:目标菌株ZZ027、ZZ021和ZZ044发酵提取物含有很多类似物和不同结构类型的化合物;其中菌株ZZ027和ZZ021发酵提取物(500μg)对MRSA指示菌的抑菌圈分别为29～35mm和17～24mm,最低抑菌浓度(MICS)分别为0.625～1.25mg·mL1和2.50mg·mL1;同时菌株ZZ021发酵提取物抑制人结肠癌细胞株HCT-116的IC50为6.4μg·mL1,而菌株ZZ027和ZZ044发酵提取物的IC50>20μg·mL1。结论:从用于抗感染民间药物的泥土样品中,经选择性分离、化学筛选和抗MRSA活性测定,得到能代谢产多种似物和结构类型,且具有抗MRSA活性的放线菌菌株ZZ027和ZZ021;并且菌株ZZ021发酵提取物对人结肠癌细胞株HCT-116显示明显的细胞毒性。     

γ-巯丙基键合硅胶脱除龙胆提取液中的镉

目的:研究γ-巯丙基键合硅胶(MPS)脱除龙胆提取液中镉(Cd)的最佳工艺,并对其脱镉性能进行评价.方法:采用静态吸附和动态吸附的方式考察镉的脱除率,并以镉脱除率、含固量、HPLC指纹图谱等指标综合评价MPS的脱镉性能.结果:静态吸附的工艺参数:药液浓度相当于0.20 g(药材)·mL-1,吸附时间为120 min,药材量-MPS 15:1;动态吸附的工艺参数:径高比为1:3.5,药液浓度相当于0.20 g(药材)·mL-1,药液流速0.9 mL· min-1,药材量-MPS 50:1;龙胆药液脱镉前后的含固量及HPLC指纹图谱无显著性差异.结论:γ-巯丙基键合硅胶(MPS)能有效地脱除龙胆药液中的镉,脱镉性能良好.     

北寄生提取物抑制人肝癌HepG2细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

目的：探讨北寄生提取物对人肝癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。方法：分别采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性、光镜观察细胞结构变化、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：0.3mg.mL-1北寄生提取物处理24h后,细胞增殖明显受到抑制,且抑制率随时间延长而增加;光镜下可观察到细胞凋亡形态的改变;0.3mg.mL-1北寄生提取物处理48h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率为24.7%。结论：北寄生提取物不仅能有效地抑制肿瘤细胞的增殖,同时又有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

凤尾草提取物对不同肿瘤细胞生长抑制作用研究

目的:研究凤尾草提取物对不同肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法:采用MTT法及Trypan Blue拒染法检测凤尾草提取物对体外培养的人肝癌细胞株BLE-7402、小鼠黑色素瘤细胞株B16-BL6、人白血病细胞株HL-60细胞增殖的抑制作用。结果:凤尾草提取物在5～80μg·mL-1剂量的范围内对上述3种细胞株均有明显的抑制作用。结论:凤尾草提取物在体外对多种肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用。     

含当归芍药散简方脑脊液对神经细胞的保护作用

目的:探讨含当归芍药散简方脑脊液的神经保护作用及其可能的机制.方法:采用FeSO4和H202作用产生自由基的方法诱导建立PC12细胞氧化损伤模型,分别用当归芍药散简方(0.135 g·mL-1)ig家兔(1.5 g·kg-1),于1,14 d时取脑脊液添加于培养液中(每组分5％,10％,20％3个体积分数)处理PC12细胞,MTT法铡定细胞活性,硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力,甲基百里香酚蓝(MTB)比色法测定细胞内Ca1+水平,免疫细胞化学法测定α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)阳性表达,BCA蛋白定量及斑点印迹法测定α7nAchR亚单位水平.结果:含20％当归芍药散简方脑脊液对PC12细胞活性(以吸光度表示,A)1 d组(1.241±0.117)和14d组(1.297±0.213)与损伤组(0.986±0.051)比较能明显增加PC12细胞活性(P＜0.05,P＜0.01)、显著提高SOD活力(19.48±0.34),(19.52±0.33)U·mL-1对(18.18±0.12)U·mL-1(P＜0.01),有效降低MDA含量及细胞内Ca2+水平均降低,与损伤组比较P＜0.01;明显上调α7nAChR的表达,14 d组与1d组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:当归芍药散简方对FeSO4和H2O2诱导建立PC12细胞氧化损伤模型具有保护作用,其机制与保护α7nAchR有关.     

RP-HPLC法测定百合知母汤中芒果苷、新芒果苷的含量

目的建立一种高效液相色谱方法测定百合知母汤中芒果苷和新芒果苷的含量。方法 Agilent TC-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈和0.033%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速:1mL·min-1;检测波长:310nm。结果芒果苷和新芒果苷分别在3.32～66.4μg·mL-1(r=0.9998)、2.58～51.6μg·mL-1(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系。结论本方法简便、准确、可靠,可用于百合知母汤中芒果苷和新芒果苷的含量测定。     

总量统计矩分析法定性定量分析补阳还五汤提取物HPLC指纹图谱

目的:采用总量统计矩分析法对补阳还五汤提取物HPLC指纹图谱进行分析。方法:建立补阳还五汤提取物HPLC指纹图谱。对10批补阳还五汤样本,采用总量统计矩分析法,计算其相关参数并进行分析。结果:10批药材补阳还五汤纯成分的平均AUCT为1.976×107μV.s;AUCPWT为3.807×104μV.s/mg;MCRTT为13.72min,VCRTT为15.74 min2;浓度CT为519.0 mg/mL。结论:统计矩原理可用来刻画多成分(峰)曲线性的特征,AUCT能用于中药复方指纹图谱定量分析,AUCPWT、MCRTT、VCRTT能用于中药复方指纹图谱定性分析。本法具有加合运算的特征,能消除溶剂的干扰,获得纯品的总量统计矩参数;具偶联性,能与多维向量偶联构成多维曲线中心矩及偏差分析。