β-榄香烯联合高温对肺腺癌A549细胞作用的实验研究

目的:观察榄香烯联合高温对人肺腺癌A549细胞的协同杀伤作用。方法:用MTT法检测高温处理或常温处理细胞对榄香烯的敏感性。采用15μg/mL榄香烯或60μg/mL榄香烯联合42℃高温处理1.5h或常温处理,使用流式细胞仪检测细胞周期,透射电镜观察细胞形态学改变。结果:高温作用后,榄香烯对A549细胞的IC50从35.43μg/mL降低至28.68μg/mL;MTT法检测显示低浓度榄香烯联合高温对A549细胞具有明显的协同杀伤作用,细胞呈现凋亡形态,可见凋亡小体,同时有细胞坏死。结论:低浓度榄香烯联合高温对A549细胞有协同细胞毒效应。     

蓝莓花青素经线粒体凋亡通路诱导人胃腺癌BGC-823细胞凋亡

目的:研究蓝莓花青素(Blueberry Anthocyanin,BA)诱导人胃腺癌BGC-823细胞凋亡过程中线粒体超微结构、线粒体膜电位及凋亡调节蛋白的改变。方法:采用倒置相差显微镜观察细胞形态;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dU TP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;透射电镜法观察线粒体超微结构改变;原位末端标记/碘化吡啶(TUNEL/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123(Rhodamine 123,Rho123)荧光探针标记流式细胞仪检测和分析线粒体跨膜电位(MTP,△Ψm);蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡调节相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平。结果:蓝莓花青素呈剂量和时间依赖性的抑制人胃腺癌BGC-823细胞生长;100μg/ml蓝莓花青素作用4h后线粒体肿胀空泡化、内部结构消失,8h后细胞核染色质成块状边集,细胞凋亡;不同浓度蓝莓花青素作用24h后,流式细胞仪检测BGC-823细胞凋亡率呈浓度依赖性增加。不同浓度蓝莓花青素作用BGC-823细胞24h后,代表线粒体膜电位的Rho123荧光强度降低;经100μg/ml蓝莓花青素刺激BGC-823细胞4、12、24小时后促凋亡蛋白Bax表达升高,抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低。结论:蓝莓花青素对人胃腺癌BGC-823细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,诱导凋亡可能通过线粒体凋亡途径起作用。     

β-榄香烯对人胃癌BAC823细胞凋亡及P38MAPK磷酸化的影响

目的 探讨P38MAPK信号转导通路在β-榄香烯诱导人胃癌BAC823细胞凋亡过程中调控作用.方法 人胃癌BAC823细胞体外传代培养,按空白对照组和药物处理组随机分组,其中药物处理组依药物浓度的不同再分为0.01,0.02,0.04,0.08 mg/ml,0.10及0.16 mg/ml处理组,作用时间为24h,采用流式细胞光度分析术(FCM)检测细胞凋亡率及细胞周期时相分布,同时进行细胞的形态学观察;采用免疫组化法检测P-P38MAPK的表达.结果 β-榄香烯可阻滞BAC823细胞于S期并诱导细胞凋亡,但细胞凋亡率并不完全与药物浓度呈正相关.P38MAPK的活化水平随药物浓度的增加而增强.结论 β-榄香烯可激活P38MAPK通路,而且此通路也很可能参与了β-榄香烯阻滞细胞周期诱导肿瘤细胞凋亡的过程.     

榄香烯诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的实验研究

目的:观察榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度榄香烯体外处理小鼠黑色素瘤B16细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及荧光染色等方法,检测榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。结果:榄香烯能抑制B16细胞增殖,使细胞停滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其作用呈明显浓度依赖性。形态学及流式细胞术分析结果均提示:在本实验条件下,榄香烯可诱导B16细胞凋亡,其诱导作用亦显示明显的浓度依赖关系。在此基础上,进一步分析发现:榄香烯可诱导B16细胞原癌基因bcl-2表达降低,抑癌基因p53表达增强。结论:榄香烯在体外通过干扰细胞周期、诱导细胞凋亡明显抑制B16细胞增殖,其作用机制可能与其诱导癌基因bcl-2表达减少、p53表达增加有关。     

β-榄香烯抗肝癌的促凋亡机制研究

目的：研究中药莪术提取物β-榄香烯对人肝癌HepG2 细胞增殖抑制及诱导凋亡,以及小鼠肝癌H22 荷瘤小鼠凋亡相关蛋白表达的作用。方法:体外培养人肝癌HepG2 细胞,MTT 法检测β-榄香烯对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI 双染检测细胞凋亡。通过建立H22 小鼠肝癌荷瘤模型,观察β-榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及凋亡相关蛋白的表达。结果：β-榄香烯对HepG2 细胞具有抑制增殖的作用,呈剂量和时间的依赖性;Annexin V-FITC/PI 法检测到早期凋亡细胞。不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同,各药物浓度组Caspase-3 蛋白均上调（P<0.05）,P65 蛋白均下调。结论：β-榄香烯可有效抑制人肝癌HepG2 细胞的增殖,其抑制癌细胞增殖的途径是通过诱导细胞发生凋亡,并且与上调凋亡相关蛋白Caspase-3、下调NF-κB P65 相关。     

β-榄香烯抑制人骨髓瘤细胞增殖

目的:研究从温郁金中提取的β-榄香烯对人骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖;AnnexinV/PI双标流式术检测细胞周期、细胞凋亡;Hoechst33342/PI双染荧光显微镜观察β-榄香烯处理后骨髓瘤RPMI-8226细胞形态学变化。结果:β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有显著抑制作用,呈浓度和时间依赖性。与对照组相比G0/G1细胞比例显著升高,而S、G2/M细胞比例降低。β-榄香烯作用48h可诱导骨髓瘤细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增。结论:β-榄香烯可有效抑制人骨髓瘤细胞增殖;其抑制作用与细胞周期阻滞和细胞凋亡激活有关。     

西兰花中异硫氰酸盐诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡作用及其机制的研究

目的：探讨西兰花中异硫氰酸盐(isothiocyanates,ITCS)诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡过程中的作用及其可能机制。方法：不同浓度ITCS处理人肝癌细胞HepG-2,应用MTT法检测ITCS对HepG-2细胞增殖的影响；流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况。结果：ITCS可明显抑制HepG-2细胞增殖；15,30,60,120,240 μg·mL^-1的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内活性氧分别为(23.1±1.8)%,(53.3±3.3)%,(57.9±2.0)%,(79.9±3.4)%,(93.4±2.6)%；Δψm分别为(94.8±5.5)%,(91.8±5.4)%,(66.0±5.6)%,(65.5±6.6)%,(44.3±2.7)%；60,120,240 μg·mL^-1的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%,(21.9±4.4)%,(70.2±5.3)%。结论：ITCS能够通过刺激HepG-2细胞内活性氧的产生,损伤线粒体,使其膜电位下降,引起HepG-2细胞凋亡。     

β-榄香烯衍生物(ET)诱导NB4细胞凋亡的机制研究

目的:于NB4细胞株中,对β-榄香烯衍生物ET(β-榄香烯13-色氨酸)进行抗肿瘤作用研究。方法:体外细胞培养,凋亡检测、流式细胞术和蛋白免疫印迹等技术进行机制研究。结果:ET在低于40μmol.L-1时可以抑制白血病细胞NB4生长并诱导凋亡;ET可以引起细胞内H2O2的蓄积并活化caspase-3;过氧化氢酶可以阻断ET引起的H2O2蓄积和凋亡。结论:ET主要通过HO的蓄积引起细胞凋亡。     

榄香烯诱导裸鼠移植瘤凋亡的作用机制研究

目的 观察榄香烯对裸鼠胃癌移植瘤的作用并探讨其相关机制.方法 雄性裸鼠建立人胃癌SCG-7901细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、榄香烯组、PD98059组、榄香烯和PD98059联合组（榄香烯＋PD98059组）.对比榄香烯和PD98059对裸鼠胃癌移植瘤的作用,测量对比裸鼠胃癌移植瘤的大小及药物对裸鼠生长的抑制作用.Western-blot方法检测各组ERK1/2蛋白、p-ERK1/2、p-P38蛋白的表达情况.结果 3个实验组在治疗后移植瘤大小与对照组比较明显减小,榄香烯组较对照组p-ERK1/2蛋白表达显著增多,3个治疗组相比对照组p-p38蛋白表达显著增加,两药联合比单一药物作用显著（均P＜ 0.05或P＜ 0.01）.结论 榄香烯和PD98059都能促进肿瘤组织凋亡,其中榄香烯促进裸鼠胃癌移植瘤凋亡可能与p-ERKl/2蛋白和p-p38蛋白上调有关,而PD98059促进裸鼠胃癌移植瘤凋亡可能与p-P38蛋白上调有关.     

电针对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导的帕金森病模型小鼠线粒体功能的影响

目的:观察电针对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)模型小鼠行为学、酪氨酸羟化酶(T H)、线粒体复合物Ⅰ — Ⅳ活性、线粒体膜电位、线粒体超微结构的影响,探讨电针治疗PD的可能靶点及机制.方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、美多巴组及电针组,每组11只,采用...     

基于线粒体功能特性研究健脾益气摄血方调控ITP乏力机制

目的:验证健脾益气摄血方缓解ITP乏力症状与改善线粒体功能的相关性。方法:通过被动免疫造模法建立ITP小鼠模型,分为正常组、模型组、强的松组、健脾益气摄血(JPYQSX)中、高剂量组。通过光谱法检测小鼠脾脏组织活性氧含量;通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测线粒体DNA相对拷贝数;通过免疫荧光法检测结肠ATP含量。结果:与正常组比较,模型组(P0.01)、强的松组(P0.05)、健脾益气摄血各剂量组(P0.01)小鼠脾脏组织ROS含量增多,脾脏组织线粒体DNA相对拷贝数明显下调(P0.01),结肠组织ATP含量明显下调(P0.01);与模型组比较,强的松组、健脾益气摄血各剂量组小鼠脾脏组织ROS含量减少,脾脏组织线粒体DNA相对拷贝数比较无统计学意义(P0.05),结肠组织ATP含量均显著升高(P0.01)。结论:健脾益气摄血方可通过改善线粒体功能来有效缓解ITP乏力症状。     

健脾补肾方对胃癌细胞系MGC-803线粒体膜电位和细胞内活性氧的影响

目的：研究健脾补肾方对MGC．803细胞凋亡的诱导作用及对线粒体膜电位和细胞内活性氧水平的影响。方法：应用流式细胞仪检测健脾补肾方含药血清诱导的MGC．803细胞凋亡及其线粒体膜电位和细胞内活性氧水平（分别用Annexin V、rhodamine 123和dihydrorhodamine 123）。结果：药物作用36h后，各用药组的细胞凋亡率显著高于空白血清组，药物作用有明显的时。效关系（P〈0．05）；药物作用36h后，中药组的细胞内活性氧水平基本稳定，而中西药组低于空白血清组和中药组（P〈0，05）；各用药组的线粒体膜电位水平随药物作用时间延长逐渐降低。结论：健脾补肾方可时间依赖地诱导MGC-803细胞凋亡，并可降低其线粒体膜电位，稳定细胞内活性氧水平；而且健脾补肾方与DDP具有协同作用。     

β-榄香烯注射液联合紫杉醇注射液对乳腺癌MB-468细胞体外协同作用研究

目的探讨β-榄香烯与紫杉醇对乳腺癌细胞株协同作用及其机制。方法体外分别以β-榄香烯注射液（2．5、5．0、10．0、20．O、40．0、80．0、160．0、320．0、640．0μg／mL）、紫杉醇注射液（0．00100、0．00200、0．00400、0．00800、0．01600、0．03125、0．06250、0．12500、0．25000μg,mL）作用24h和48h以及两药联合处理人乳腺癌细胞株MB-468细胞,SRβ法检测增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布,通过Western blot检测干预后细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinase,CDK1）、细胞周期蛋白β1（cyclinB1）、细胞周期调控蛋白P21cip1和P27kip1表达变化。结果单药β．榄香烯或紫杉醇对MB-468细胞株生长均有抑制作用,β-榄香烯24h和48h的IC50和IC20值分别为34．20、52．59和10．15、17．81阻g,mL,紫杉醇24、48h的IC50值分别为2．449和1．698μg／mL。联合组（β-榄香烯和紫杉醇的浓度分别为20、40和0．016、0．008μg／mL）对乳腺癌Mβ-468细胞株的生长抑制率具有协同作用,Q值〉1．15。β-榄香烯组（52．59μg／mL）cyclin-β1蛋白表达有明显的下降,联合组较紫杉醇单药组（1．698μg／mL）cyclinβ1的表达水平也有降低,联合组P27kip1蛋白的表达较β．榄香烯和紫杉醇单药作用时有增加。结论β-榄香烯对紫杉醇具有协同作用,其可能机制是通过下调细胞周期蛋白cyclinβ1表达和上调P27kip1表达有关。     

β-榄香烯抑制肝星状细胞表达ANGⅡ及RhoA/ROCK信号

目的:探讨β榄香烯对肝星状细胞表达分泌血管紧张素Ⅱ、血管紧张素原及Rho/ROCK的影响.方法:HSC-T6细胞株培养24 h,以不同浓度β榄香烯及空白对照分别作用4,12,24 h后,放射免疫法检测培养上清中ANGⅡ的量,RT-PCR检测HSC中AGT及Rho/ROCK mRNA的表达.结果:在4 h时,10.0 mg·L~(-1)β-榄香烯组培养上清中ANGⅡ的分泌量为(50.970±8.081)pmol·L~(-1),较空白组(74.500±10.999)pmol·L~(-1)明显下降(P＜0.05),而5.0,2.5 mg·L~(-1)β-榄香烯组对ANGⅡ分泌无明显抑制作用.12 h时,10,5 mg·L~(-1)β-榄香烯组ANGⅡ分泌量分别为(83.727±6.850),(91.090±3.226)pmol·L~(-1),显著低于空白对照组(104.367±5.030)pmol·L~(-1), (P＜0.01,P＜0.05);而2.5 mg·L~(-1)β-榄香烯组作用不明显.24 h时,5,2.5mg·L~(-1)β-榄香烯组ANGⅡ分泌量分别为(104.133±3.296),(100.957±2.581)pmol·L~(-1),与空白组(116.620±7.110)pmol·L~(-1)比较明显减少(P＜0.05,P＜0.01);而10 mg·L~(-1)β-榄香烯组作用不明显.与空白组比较,4,12,24 h各时间点,各个浓度的β榄香烯对HSC表达AGTmRNA均有抑制作用,F分别为30.33,28.04,107.19,P均为0.4,12,24 h各时间点,2.5,5.0,10 mg·L~(-1)β-榄香烯对HSC表达RhoAmRNA均有抑制作用,F分别为19.87,14.35,40.13,均P=0,无明显剂量依赖性;4,24h时间点,2.5,5.0,10mg·L~(-1)β榄香烯对HSC表达ROCK-1,ROCK-2mRNA均有抑制作用(P＜0.01),而12h时各组之间无显著差异.结论:β榄香烯能使HSC分泌ANGⅡ及HSC内AGT mRNA表达降低,同时抑制下游信号RhoA,ROCK-1,ROCK-2 mRNA的表达,抑制ANGⅡ的生物学效应,从而延缓肝纤维化及门脉高压的发生.     

丹参素对非小细胞肺癌A549细胞内氧化还原状态及相关核转录因子的影响

目的:探讨丹参素(DSS)抗肿瘤作用的分子机制,重点在于是否与其抗氧化作用及改变非小细胞肺癌A549细胞内氧化还原状态及影响相关核转录因子和信号通路有关。方法:通过体外DPPH自由基清除、高铁还原、亚铁螯合实验和DCFH-DA荧光探针标记ROS,检测DSS的抗氧化活性及对A549细胞内ROS水平的影响;采用MTT法测定DSS对A549细胞增殖能力的时效与量效关系;采用Western blot技术检测DSS对A549细胞内缺氧诱导因子HIF-1α及氧化还原调节转录因子Nrf2蛋白表达的影响,以及上游Akt,ERK1/2 MAPK信号磷酸化水平的影响。结果:DSS能够剂量依赖性降低A549细胞内ROS水平,与其较强的自由基清除和抗氧化活性有关;DSS能以时间和剂量依赖性的方式抑制A549细胞生长,进一步机制研究发现,DSS能降低Nrf2表达,与抑制Akt以及ERK1/2的磷酸化水平有关,但对HIF-1α的表达没有影响。结论:DSS具有治疗非小细胞肺癌的作用,机制在于通过清除ROS进而抑制Akt,ERK1/2的磷酸化而下调Nrf2的表达并最终抑制A549细胞的生长。     

三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注海马细胞Ca~(2 )及线粒体膜电位的影响

目的:观察缺血再灌注后海马区细胞内游离钙离子(Ca2 )、线粒体跨膜电位(Δψm)的变化以及三七总皂苷的保护作用。方法:用大脑中动脉栓塞(MCAO)再通法建立大鼠脑缺血再灌注模型,以荧光染色流式细胞仪检测各实验组海马区细胞内游离Ca2 浓度和线粒体Δψm的变化。结果:与假手术组相比,模型组海马区细胞内游离Ca2 浓度显著升高(P<0.01)、线粒体Δψm显著降低(P<0.01),与模型组相比,三七总皂苷组海马细胞内游离Ca2 浓度显著降低(P<0.01)、线粒体Δψm显著升高(P<0.05)。结论:三七总皂苷能抑制缺血再灌注引起的海马区细胞内Ca2 浓度升高,抑制线粒体Δψm下降,保护海马区细胞线粒体功能,这可能是其抗脑缺血再灌注损伤作用机制之一。     

地黄寡糖对3T3-L1脂肪细胞增殖及胰岛素抵抗的作用

目的：探讨地黄寡糖对脂肪细胞增殖和胰岛素抵抗的影响。方法：培养3T3-L1前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测3T3-L1前脂肪细胞及脂肪细胞的增殖情况,同时采用地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型,检测地黄寡糖对细胞培养基中葡萄糖浓度的影响。结果：在DMEM高糖培养基中,地黄寡糖可促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,抑制3T3-L1脂肪细胞增殖,作用呈明显量效关系；使3T3-L1前脂肪细胞及3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量增加,呈明显量效关系；地黄寡糖能明显增加胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞培养基中的葡萄糖消耗量,增强对胰岛素的敏感性。结论：地黄寡糖可以促进前脂肪细胞的增殖,抑制脂肪细胞的增殖,地黄寡糖对地塞米松诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗具有明显的改善作用。     

胃肠舒对糖尿病大鼠胃窦平滑肌细胞线粒体的影响

目的 :研究中药胃肠舒对糖尿病(diabetes mellitus, DM)大鼠胃窦平滑肌细胞线粒体形态、结构、功能和蛋白的影响,探讨胃肠舒促胃肠运动的线粒体动能调控机制。 方法 :选择体重150~170 g的SD大鼠随机分为4组:正常对照组、DM组、DM+胃肠舒Ⅰ组(750 mg·kg^-1)、DM+胃肠舒Ⅱ组(1 500 mg·kg^-1)。透射电子显微镜检测线粒体形态、结构的变化,流式细胞术检测线粒体跨膜电位的变化,荧光测定法检测线粒体呼吸链的变化,Western Blot检测线粒体蛋白的变化。 结果 :胃肠舒能改善DM大鼠胃窦平滑肌细胞线粒体的形态、结构,增强呼吸链功能,线粒体跨膜电位和ATP含量增高,细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase, COX)活性增强,活性氧自由基(ROS)释放减少,凋亡蛋白家族Bcl-2表达上调,Bax表达下调。 结论 :胃肠舒促胃肠运动可能与改善平滑肌的线粒体动能系统有关。