魟鱼软骨多糖对小鼠Lewis肺癌的作用及分子机制探讨

目的:研究魟鱼软骨多糖(RCG)对小鼠Lew is肺癌的作用,并初步探讨其作用机制。方法:建立小鼠Lew is肺癌模型,将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量魟鱼软骨多糖(RCG)组、环磷酰胺(CTX)组,计算原发瘤抑制率及肺转移数;采用RT-PCR和W estern b lot检测原发瘤组织VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达。结果:应用魟鱼软骨多糖各剂量组,小鼠原发瘤抑制率、肺转移数与生理盐水组比较差异有显著性(P<0.05,P<0.01);与生理盐水比较,魟鱼软骨多糖各剂量组,VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:魟鱼软骨多糖明显抑制小鼠Lew is肺癌原发瘤的生长和转移,可能与其抑制肿瘤VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达有关。     

应用魟鱼软骨多糖滴眼液抗大鼠角膜新生血管形成的实验研究

目的:探讨魟鱼软骨多糖(Ray Cartilage Glycosaminoglycans,RCG)滴眼液对大鼠角膜新生血管(Corneal neo-vascularization,CNV)的作用。方法:制备魟鱼软骨多糖滴眼液,缝线诱导大鼠角膜新生血管,将实验分为生理盐水(Sa-line)组、不同剂量魟鱼软骨多糖(RCG)组、肝素+可的松(Heparin+corlin)组,通过计算新生血管面积、病理组织学观察、免疫组化检测评价应用魟鱼软骨多糖滴眼液对大鼠角膜新生血管的作用。结果:与生理盐水组比较,应用魟鱼软骨多糖滴眼液各组新生血管面积明显减少,有显著性差异(P<0.01),同时角膜组织炎性细胞数和VEGF表达也明显减少。结论:应用魟鱼软骨多糖滴眼液抑制了大鼠角膜新生血管形成,可能与魟鱼软骨多糖能够缓解缝线刺激炎症,减少VEGF表达有关。     

魟鱼软骨多糖对Lewis肺癌MMP-9表达的影响

目的:鱼软骨多糖(RCG)对Lewis肺癌基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法:建立小鼠Lewis肺癌模型,将动物分为生理盐水组、不同剂量鱼软骨多糖组、环磷酰胺组,观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算原发瘤抑制率;采用RT-PCR和Western blot检测瘤组织MMP-9基因和蛋白表达。结果:该多糖各剂量组小鼠的肿瘤生长曲线平缓,小鼠原发瘤抑制率、肺转移数与生理盐水组比较差异有显著性(P<0.05;P<0.01);与生理盐水比较,鱼软骨多糖各剂量组,MMP-9 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:鱼软骨多糖明显抑制小鼠Lewis肺癌原发瘤的生长和转移,可能与其抑制肿瘤MMP-9基因和蛋白表达有关。     

魟鱼软骨多糖对Lewis肺癌VEGF MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响

目的探讨魟鱼软骨多糖(RCG)对Lewis肺癌血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的影响。方法:接种Lewis肺癌细胞,复制肺癌移植瘤模型;将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量魟鱼软骨多糖(RCG)组、环磷酰胺(CTX)组,给药后观察肿瘤生长情况,计算肿瘤抑制率和肺转移瘤灶数目;采用Westernblot检测瘤组织中VEGF、MMP-2和MMP-9的蛋白表达。结果:与生理盐水组比较,魟鱼软骨多糖各剂量组对肿瘤的抑制率和肺转移数都具有显著性差异(P<0.05;P<0.01);与生理盐水比较,该多糖各剂量组对VEGF、MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:魟鱼软骨多糖明显抑制小鼠Lewis肺癌原发瘤的生长和转移,可能与其抑制肿瘤VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

魟鱼软骨多糖对小鼠G_(422)胶质瘤血管形成的影响

目的:观察魟鱼软骨多糖对小鼠G422胶质瘤血管形成及瘤组织VEGF mRNA和蛋白表达的影响。方法:建立小鼠G422胶质瘤腋下肿瘤模型,将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量魟鱼软骨多糖(RCG)组、环磷酰胺(CTX)组,观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,CD31免疫组织化学染色计数肿瘤组织微血管密度(M icrovessel density,MVD),采用RT-PCR和W estern b lot技术检测瘤组织血管内皮生长因子(Vascu lar endothelial growth factor,VEGF)mRNA和蛋白表达。结果:魟鱼软骨多糖各剂量组小鼠的肿瘤生长曲线平缓,MVD显著减少,VEGF mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:魟鱼软骨多糖明显抑制小鼠G422胶质瘤的生长,抑制肿瘤的血管形成,可能与其下调肿瘤VEGF mRNA和蛋白表达有关。     

魟鱼软骨多糖对大鼠膀胱肿瘤生长的抑制作用

目的：探讨缸鱼软骨多糖连续膀胱灌注对大鼠膀胱肿瘤生长的作用和机制。方法：40只雌性Wistar大鼠。随机分为对照组（n=20）和缸鱼软骨多糖（RCG）组（n=20），制作N-甲基亚硝基脲诱导大鼠原位膀胱癌模型，于第8周行分别连续（每周1次，共6次）膀胱灌注生理盐水和鲤鱼软骨多糖制剂，于第14周进行病理观察、测量膀胱总重量，微血管密度和凋亡指数。结果：第14周时，对照组（n=16）和RCG组（n=15）大鼠膀胱均可见明显肿物。光镜下可见癌组织侵入肌层。RCG组大鼠膀胱的重量和肿瘤的MVD小于对照组（t=3．005，P=0．005；t=2．841，P=0．008）；RCG组大鼠膀胱肿瘤的AI大于对照组但无统计学意义（t=1．552，P=0．132）。结论：RCG可抑制大鼠膀胱肿瘤生长，可能与抑制肿瘤血管生长有关。     

魟鱼软骨多糖对小鼠恶性黑色素移植瘤血管生成拟态及PI3K表达的影响

目的:探讨魟鱼软骨多糖(Ray cartilage glycosaminoglycans,RCG)对小鼠恶性黑色素瘤模型中肿瘤和血管生成拟态的抑制作用及对肿瘤组织中磷脂酰肌醇3-激酶蛋白(PI3K)表达水平的影响。方法:将体外培养的B16小鼠黑色素瘤细胞接种于C57BL/6小鼠右腋下部复制肿瘤模型,将40只SPF级小鼠随机分为空白对照组(生理盐水)、环磷酰胺(CTX,60 mg/kg)组与魟鱼软骨多糖(600、300、150 mg/kg)组,观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率;采用CD31/PAS双重染色检测魟鱼软骨多糖对肿瘤血管生成拟态计数的影响,Western Blot法测定PI3K表达变化,RT-PCR法测定PI3K基因的表达变化。结果:与空白对照组相比较,魟鱼软骨多糖的不同剂量组都对小鼠黑色素瘤的瘤重具有一定的抑制作用,且600mg/kg剂量的魟鱼软骨多糖最明显,CD31/PAS双重染色结果显示600mg/kg魟鱼软骨多糖组对血管生成生成拟态有较强的的抑制作用,Western Blot和RT-PCR结果表明随着魟鱼软骨多糖药物浓度的升高,PI3K蛋白表达水平逐渐明显降低,基因表达水平逐步明显降低,其中600mg/kg魟鱼软骨多糖组抑制作用最强。结论:魟鱼软骨多糖具有影响小鼠黑色素移植瘤和血管生成拟态生成的作用,并且可能与降低PI3K蛋白的表达有关。     

魟鱼软骨多糖诱导膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨缸鱼软骨多糖体外抑制膀胱癌EJ细胞株及诱导凋亡的作用。方法：体外培养膀胱癌EJ细胞株，以不同浓度缸鱼软骨多糖和丝裂霉素C处理，12，24，48和72h后通过MTT法测定细胞生长抑制作用，采用电镜观察和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：缸鱼软骨多糖和丝裂霉素C能抑制EJ细胞的生长，并在一定剂量和时间范围内存在时间、浓度依赖关系。电镜下凋亡细胞体积缩小，染色质浓缩致密，并沿核膜分布形成花瓣形。丝裂霉素C组和各缸鱼软骨多糖组细胞周期阻滞于G2／M期；不同浓度的缸鱼软骨多糖均可诱导EJ细胞凋亡，随缸鱼软骨多糖浓度和时间增加，可细胞凋亡率增加；50mg／mL和100mg／mL组凋亡率与丝裂霉素C组比较无显著差异。结论：缸鱼软骨多糖能抑制膀胱癌EJ细胞株的生长，诱导凋亡可能为其抗肿瘤作用机制之一。     

川芎嗪和丹参对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用与抑制血管生成的关系

目的　观察川芎嗪注射液 (TMP)、丹参注射液对小鼠 L ewis肺癌生长和转移及肿瘤血管生成的影响。方法　用 C57BL小鼠 L ewis肺癌模型 ,分别 ip TMP 5 0 ,10 0 ,2 0 0 mg/(kg· d) ,丹参注射液 5 ,10 ,2 0 g/(kg· d) ,共2 1d,检测小鼠 L ewis肺癌移植瘤体积、质量、肺转移灶数、肿瘤微血管密度 (MVD)和血管内皮生长因子 (VEGF)的表达。结果　与模型组相比 ,TMP组小鼠 L ewis肺癌移植瘤的体积、质量、肺转移灶数、肿瘤 MVD和 VEGF的表达均显著降低 ;丹参组与模型组比较差异无显著性。结论　 TMP可抑制小鼠 L ewis肺癌移植瘤的生长和转移 ,其作用机制与抑制 VEGF的表达、抑制血管生成有关。丹参对小鼠 L ewis肺癌移植瘤的生长和转移无明显影响。     

魟鱼软骨多糖对小鼠恶性黑色素瘤的抑制作用及对Laminin5γ2、HIF-α表达的影响

目的:研究魟鱼软骨多糖对小鼠黑色素瘤的抑制作用及对Laminin-5γ2、HIF-α表达的影响。方法:体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞,MTT法测定魟鱼软骨多糖不同剂量组对黑色素瘤细胞与基质之间粘附的影响,将培养的B16细胞悬液接种于C57BL/6小鼠右侧腋下部位,建立肿瘤模型。将实验分为空白对照组、魟鱼软骨多糖高、中、低剂量(700mg/kg、300mg/kg、100mg/kg)组、环磷酰胺(60mg/kg)组,观察肿瘤生长情况并计算原发瘤抑制率;采用Western blot方法检测Laminin-5γ2、HIF-α蛋白的表达,采用RT-PCR方法检测Laminin-5γ2mRNA、HIF-αmRNA的表达。结果:应用魟鱼软骨多糖100、20、4、0.8mg/L,黑色素瘤细胞于基质间的粘附受到抑制,分别为16.67%、11.90%、9.52%、7.14%。小鼠原发瘤抑制率与空白对照租比较有显著性差异,魟鱼软骨多糖100、300、700mg/kg和环磷酰胺组抑癌率分别为14.77%,31.48%,44.55%;与空白对照组比较,魟鱼软骨多糖各剂量组随着药物浓度的升高,Laminin-5γ2、HIF-α蛋白表达受到抑制,Laminin-5γ2、HIF-α的基因表达显著降低。结论:魟鱼软骨多糖能够在一定程度上抑制小鼠黑色素瘤移植瘤的生长,可能与其减少肿瘤中Laminin-5γ2、HIF-α蛋白表达有关,Laminin-5γ2、HIF-α有望成为抗癌治疗的新靶点。     

肺岩宁方抗C57小鼠Lewis肿瘤血管生成的实验研究

目的观察肺岩宁方对C57小鼠Lewis肿瘤微血管密度(MVD)、血管阳性面积和血管内皮生长因子(VEGF)的影响,并探讨其作用机理。方法120只小鼠接种Lewis肺癌细胞株造模,随机分为对照组、化疗组、肺岩宁组、综合组,接种后第5d进行药物干预;在治疗的第14d、21d、28d每组分别随机处死10只小鼠,石蜡包埋肿瘤组织,免疫组化法测定肿瘤切片的MVD、血管阳性面积和VEGF表达。结果第14d,化疗组、综合组、肺岩宁组小鼠肿瘤MVD和血管阳性面积均显著低于对照组(P<0.05);第21d和28d,综合组和肺岩宁组小鼠肿瘤MVD和血管阳性面积均显著低于化疗组(P<0.05);对照组和化疗组VEGF表达逐渐升高,而肺岩宁组和综合组呈降低趋势。结论肺岩宁方可减少VEGF表达和降低肿瘤MVD以抑制肿瘤血管生成。     

中肺合剂抗小鼠Lewis肺癌肺转移作用及相关机制的实验研究

 目的 观察中肺合剂对小鼠Lewis肺癌抗肿瘤肺转移的作用,并探索其相关机制。方法 采用Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型观察中肺合剂抗肿瘤肺转移作用,并采用荧光定量QRT-PCR法测定中肺合剂对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织基质金属蛋白酶（MMP）-9表达的影响,采用EnVision法检测肿瘤组织血管内皮细胞生长因子（VEGF）和CD34蛋白的表达情况,并计数微血管密度(MVD)。结果 中肺合剂低、中、高剂量组（12.7,25.4,50.8 g·kg-1）和环磷酰胺（CTX）阳性对照组对移植性Lewis肺癌小鼠的肺转移抑制率为16.7%、45.8%、19.4%和80.6%,以中剂量组肺转移抑制作用最佳。中肺合剂能下调Lewis肺癌小鼠肿瘤组织MMP-9、VEGF蛋白的表达水平,并降低肿瘤组织MVD。MMP-9、VEGF表达和MVD之间呈正相关。结论 中肺合剂对小鼠Lewis肺癌具有显著的抗肿瘤肺转移作用,以中剂量组最佳。其作用机制可能与该药能降低肿瘤组织MMP-9、VEGF蛋白的表达水平,并降低肿瘤组织MVD有关。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠VEGF，VEGFR2，IL-4，ET-1的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(VEGFR2),白细胞介素(IL)-4,内皮素-1(ET-1)及核转录因子-κB(NF-κB)的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为5组,每组10只,组别为正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组(10,20,40 g·kg~(-1)·d~(-1))。以烟熏合并脂多糖(LPS)气管滴注的方法制备COPD大鼠模型。成功造模后,治疗组灌胃给药,正常组及模型组灌胃等体积蒸馏水。光镜观察大鼠肺血管的病理变化,并测定肺血管壁厚度。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织匀浆液中IL-4的含量,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测ET-1 mRNA表达;免疫组化检测肺组织VEGF,ET-1及VEGFR2的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清,BALF及肺组织匀浆液中IL-4含量均显著降低(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味低、中、高剂量组IL-4含量均有程度不等的上升(P0.01)。与正常组比较,模型组肺组织ET-1 mRNA表达量显著升高(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味低、中、高剂量组肺组织ET-1 mRNA表达量均显著降低(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠肺组织中的VEGF,VEGFR2表达增多,ET-1蛋白表达显著上升(P0.01),与模型组比较,二陈汤加味低、中、高剂量组VEGF,VEGFR2表达降低,ET-1蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:二陈汤加味可能通过提升IL-4的含量,抑制VEGF,VEGFR2及ET-1的蛋白表达,从而减轻COPD大鼠肺组织炎症及肺血管重构的进程,减缓COPD及其并发症的进展。     

益气消瘢法对雌激素诱导子宫肌瘤模型豚鼠血管内皮生长因子及其受体蛋白表达的影响

目的：观察益气消瘾法对雌激素诱导子宫肌瘤模型豚鼠血管内皮生长因子及其受体蛋白表达的影响,探讨该法方药抑制血管生成治疗子宫肌瘤的作用机制。方法：通过去势＋皮下注射苯甲酸雌二醇建立子宫肌瘤模型,并给予不同剂量益气消瘸法中药进行治疗。采用免疫组化法检测子宫组织微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平;采用RT-PCR检测子宫组织VEGFR1 mRNA、VEGFR2 mRNA表达。并对以上指标进行统计学分析。结果：与正常对照组比较,模型组豚鼠子宫肌组织MVD、VEGF、VEGFR表达显著升高（P〈0．01）;与模型组比较,中药各剂量组均有不同程度的降低,其中以高剂量组最为明显,说明益气消瘸法高剂量中药组可以显著抑制MVD、VEGF及其受体的蛋白表达。结论：益气消瘸法通过抑制血管生成进而抗肌瘤细胞增殖,这可能是该法治疗子宫肌瘤的作用机制之一。