通痹灵和其它六个方药对强直性脊柱炎成纤维细胞的作用对比

目的：比较7个治疗强直性脊柱炎(AS)的临床方药对AS成纤维细胞的抑制作用，通过量化比较，以期筛选出最佳的治则方药，为临床中医药治疗AS提供指导或参考。方法：采用AS髋关节囊体外培养AS成纤维细胞系，经传代培养，运用中药血清药理学方法，制备7种AS有效代表方含药大鼠血清及对照组血清，分别通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法、羟脯氨酸(HYP)比色法、^125I标记放射免疫(RIA)法测定各含药血清对AS成纤维细胞的增殖、合成分泌胶原和骨钙素的影响，量化比较它们的抑制率。结果：各组含药血清对AS成纤维细胞都有一定的药理作用。对细胞增殖抑制的比较，各组作用强弱依次为C＞B＞D＞F＞A＞G＞E；对细胞外胶原合成抑制而言，作用强弱依次为B＞D＞C＞F＞A＞G＞E；对骨钙素的排泌的抑制作用，则强弱依次为B＞D＞F＞A＞C＞G＞E。结论：AS各有效代表方对AS成纤维细胞均有不同程度的抑制作用，综合分析，通痹灵(治则：扶正固本，化痰软坚散结)、复方雷公藤煎剂(治则：祛风湿止痹痛，益肝肾补气血)相对作用更强，因此，当临床运用中医药治疗AS，以延缓或阻断病情发展时，更有借鉴参考价值。     

补肾强脊颗粒对细胞因子诱导下强直性脊柱炎成纤维细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探讨补肾强脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)的作用机制。方法以体外培养的AS髋关节囊组织的成纤维细胞为实验对象,分正常组,AS对照组,AS诱导组,兔空白血清组,补肾强脊颗粒小、中、大剂量组和SASP对照组。在细胞因子骨形态发生蛋白(BMP)与转化生长因子-β(TGF-β)的诱导刺激下,观察补肾强脊颗粒对细胞因子诱导后的AS成纤维细胞增殖(样本5个,采用酸性磷酸酶法)、细胞周期(样本3个,采用PI法流式细胞术)及细胞凋亡率(样本3个,采用Annexin V法流式细胞术)的影响。结果补肾强脊颗粒含药血清作用后,对细胞因子诱导下的AS成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01);使细胞因子诱导下的AS成纤维细胞G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),S期的细胞比例降低(P<0.01);促使细胞因子诱导下的AS成纤维细胞早期凋亡率、晚期凋亡率均有不同程度的增加(P<0.01)。结论补肾强脊颗粒可以通过抑制细胞因子对成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响而达到抑制成纤维细胞进一步向成骨型的分化。     

天麻钩藤饮对胰岛素促自发性高血压乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的观察天麻钩藤饮对胰岛素诱发的心肌成纤维细胞增殖升高的影响。方法从1日龄的自发性高血压乳鼠取得心肌,进行心肌成纤维细胞培养,并通过显微镜和免疫组化鉴定,观察天麻钩藤饮含药血清对胰岛素所致心肌成纤维细胞增殖升高的作用;以MTT比色法和3-H-TdR掺入法检测细胞增殖情况,以流式细胞仪检测细胞DNA周期。结果两种细胞增殖检测方法均显示天麻钩藤饮对胰岛素所致的心肌成纤维细胞增殖升高有抑制作用;胰岛素造模后细胞增殖升高主要是促进细胞从G0/G1期向S期转化,使细胞DNA合成增加而促进细胞增殖;天麻钩藤饮组与模型对照组比较G0/G1期百分率明显增加、S期百分率明显减少。结论天麻钩藤饮对胰岛素所致细胞增殖有抑制作用;可通过将细胞阻抑在G0/G1期,抑制其向S期转化从而抑制细胞增殖。这可能是天麻钩藤饮临床上治疗高血压病和防治心肌纤维化的作用机理之一。     

补肾舒脊颗粒对强直性脊柱炎关节液成纤维细胞周期的影响

目的:观察补肾舒脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)患者关节液成纤维细胞周期的影响。方法:运用血清药理学方法共同孵育,选择不同浓度的含药血清与AS患者膝关节液体外培养成纤维细胞,并与空白血清,SSZ血清组作对照。结果:AS成纤维细胞周期中G1、G2期细胞比值均较正常对照组成纤维细胞显著减低,统计学有差异显著(P0.05);AS成纤维细胞周期中S期细胞比值均较正常对照组成纤维细胞显著升高,统计学有差异显著(P0.01)。与空白血清组相比,中药高、中、低剂量组成纤维细胞的S期比例均明显减少,G1、G2期细胞均明显比例增加,统计学均有差异显著(P0.01)。结论:补肾舒脊颗粒可以改变成纤维细胞各期细胞所占百分比,调控成纤维细胞DNA的合成,抑制成纤维细胞的增殖,从而发挥抗炎抗纤维化的作用。     

保肾片对大鼠肾间质成纤维细胞作用的实验研究

目的 :从细胞水平上探讨对慢性肾功能衰竭疾病治疗有效的中药复方保肾片对体外培养的大鼠肾间质成纤维细胞的影响。方法 :本实验取SD大鼠肾间质成纤维细胞进行体外培养 ,以保肾片喂服SD大鼠后的含药血清加入到培养细胞中 ,应用MTT法和流式细胞仪检测细胞的增殖和凋亡。结果 :喂服中药保肾片的大鼠血清 ,与不喂药的大鼠血清对照组相比 ,显著抑制细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ,并且能诱导细胞发生凋亡。结论 :保肾片延缓慢性肾衰进展的作用机理可能与抑制肾间质成纤维细胞增殖和诱导其发生凋亡有关     

温阳化浊通络方对系统性硬皮病成纤维细胞周期和增殖的影响

目的:运用血清药理学方法,探讨温阳化浊通络方对系统性硬皮病(SSc)皮肤成纤维细胞周期和增殖的影响.方法:通过SSc患者制备强的松、青霉胺及温阳化浊通络方含药血清,分别加入皮肤成纤维细胞培养体系中.培养48 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别测定细胞增殖和细胞周期.结果:与对照组相比,不同浓度的西药组、中药组、中西医结合组含药血清均能明显抑制正常人和SSc皮损成纤维细胞的增殖(P＜0.05或P＜0.01).与西药组相比,20%中西医结合组血清抑制作用更加明显(P＜0.01).不同浓度的中药组血清能显著提高SSc皮损成纤维细胞的G0-G1期细胞比例(P＜0.01),降低S期细胞和G2-M期细胞比例(P＜0.05或P＜0.01).结论:温阳化浊通络方通过抑制SSc皮损成纤维细胞进入细胞分裂周期,对其增殖具有明显的抑制作用.同时,温阳化浊通络方对体外培养的正常皮肤和SSc皮损成纤维细胞的干预作用不具有选择性.     

补肾舒脊颗粒对强直性脊柱炎患者关节液成纤维细胞增殖的影响

目的:观察补肾舒脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)患者关节液成纤维细胞增殖功能的影响。方法:运用血清药理学方法,选择不同浓度的含药血清与AS患者膝关节液体外培养成纤维细胞共同孵育,于不同时间观察其增殖水平,并与空白血清,SSZ血清组作对照。结果:与正常成纤维细胞相比,AS的成纤维细胞增殖速度快,从第3天开始两者间即有统计学差异。给予补肾舒脊颗粒能明显抑制AS成纤维细胞的增殖,给药3d后,与空白血清对照组相比,差异有统计学意义,并且补肾舒脊颗粒对成纤维细胞增殖的抑制作用有明显的量效关系。结论:补肾舒脊颗粒可通过抑制AS成纤维细胞的增殖,发挥其临床抗炎、抗纤维化的作用。     

通痹灵总碱对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响

目的：探讨通痹灵总旗对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响。方法：分离培养类风关患者滑膜成纤维样细胞，IL-1D刺激，不同浓度通痹灵总碱作用后，MTT法测定细胞增殖率。结果：通痹灵总碱能显著抑制滑膜成纤维样细胞增殖，并且抑制作用呈明显的量效关系。结论：通痹灵总碱可抑制类风关滑膜成纤维样细胞增殖。     

血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察血府逐瘀胶囊及血塞通胶囊含药血清对溶血磷脂酸（LPA）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖效应的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉VSMC并分为7组：空白血清组，血府逐瘀胶囊含药血清组，血塞通胶囊含药血清组，3组分别＋LPA组，卡托普利含药血清＋LPA组。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察不同含药血清对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果空白血清＋LPA组、血府逐瘀胶囊含药血清组较空白血清组0D值升高（P〈0．05），S期指数升高（P〈0．01）。血府逐瘀胶囊含药血清＋LPA组、血塞通胶囊含药血清＋LPA组较卡托普利含药血清＋LPA组0D值降低（P〉0．05，P〈0．01）；S期指数升高（P〈0．01，P〉0．05）。结论LPA、血府逐瘀胶囊对体外培养的VSMC有促增殖作用，血塞通胶囊无促增殖作用。血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用，血塞通胶囊作用更强。其作用机制部分与抑制DNA合成、阻止细胞进入S期有关。     

土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用

目的研究土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡和细胞周期的影响,探讨土鳖虫抗肿瘤效应。方法以土鳖虫乳剂给SD大鼠灌胃,采血并制备血清。四氮唑盐法(MTT法)检测含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡。结果土鳖虫含药血清可明显抑制肝癌HepG-2细胞体外增殖,20%土鳖虫含药血清作用72h后抑制率高达56.728%,抑制率呈浓度依赖关系。流式细胞仪检测细胞凋亡发现肝癌HepG-2细胞以坏死居多,细胞周期多阻滞于G0-G1期。结论土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞体外增殖有明显的抑制作用。     

润喉开音颗粒对体外培养人声带小结成纤维细胞细胞周期的影响

目的:观察润喉开音颗粒对体外培养人声带小结成纤维细胞细胞周期的影响,探讨润喉开音颗粒治疗声带小结的作用机制。方法:采用组织块贴壁法对临床摘取人声带小结标本进行体外培养,有成纤维细胞游出并顺利传代者视为培养成功,将成纤维细胞传至第3代后用于正式实验。体外培养人声带小结成纤维细胞随即分为润喉开音颗粒组、金嗓散结丸组及空白对照组,流式细胞仪检测各组细胞细胞周期。结果:润喉开音颗粒各浓度组细胞处于G0/G1期及G2/M期细胞比例均较空白对照组升高,处于S期细胞比例较空白对照组明显降低。结论:润喉开音颗粒可以将人声带小结成纤维细胞阻滞于G0/G1期及G2/M期,使DNA合成受阻,阻抑细胞的有丝分裂。     

体外压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞周期和增殖指数影响的研究

目的 通过体外实验探讨压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞周期和增殖指数(PI)的影响,为推拿基本力学刺激"舒筋散结"的治疗作用提供细胞生物学方面的实验依据.方法 体外培养大鼠筋膜组织成纤维细胞,对细胞实施压力刺激后,检测细胞周期与PI变化.结果 筋膜组织成纤维细胞接受压力作用后,细胞周期发生阻滞,休止期和DNA合成前期(G0/G1期)细胞增多,分裂前期(S期)细胞减少,PI降低,差异有统计学意义.结论 压力刺激对筋膜组织成纤维细胞周期与PI的抑制性调节,可能是推拿"舒筋散结"的细胞生物力学原理之一.     

黄芪、当归及其组方促血管内皮细胞增殖作用的研究

目的：探讨黄芪、当归及其组方对人脐静脉内皮细胞增殖和细胞周期的影响。方法：以离体培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,,HUVEC)为模型,采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪分析其细胞周期、SABC法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,对黄芪、当归及其组方的促HUVEC增殖作用进行了观察研究。结果：黄芪、当归单用或合用均可促进内皮细胞生长,增加细胞周期中S期细胞的数目,尤以复方作用明显(P<0．05或P<0．001)。同时,各给药组均能上调VEGF的表达,而对照组VEGF仅有微弱表达(P<0．05或P<0．01)。结论：黄芪、当归有促进血管内皮细胞增殖及DNA合成的作用,两药配伍应用时具有协同效应,提示在缺血心肌新生血管的发生和发展中可能具有一定作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株抑制作用的体外研究

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞)增殖的抑制作用及对细胞凋亡和细胞周期的影响,研究其对结肠癌的抑癌机制。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG(10,20,35μg/ml)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对结肠癌细胞株凋亡和细胞周期的影响。结果 MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株的抑制作用均具有浓度依赖性,且HT29细胞株尚具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制结肠癌细胞株的增殖。结论EGCG对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制与增强细胞凋亡和影响细胞周期有关,具体作用机制有待进一步研究。     

益脑康胶囊对AS性AIS大鼠血清中内皮损伤相关因子的影响

目的研究益脑康胶囊对动脉粥样硬化(AS)性急性缺血中风(AIS)大鼠血液中一氧化氮(NO)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)等内皮损伤相关因子的影响,评价益脑康对AS性AIS的防治作用。方法采用一次性腹腔注射维生素D3联合高脂饲料喂养法复制AS大鼠模型。在此基础上采用内皮素-1诱导法建立AS+AIS复合模型。分别检测模型大鼠脑组织含水量,主动脉病变程度,血清NO、VEGF、PDGF-BB的水平。结果益脑康预防组、益脑康治疗组和立普妥阳性对照组大鼠脑组织含水量低于AS+AIS模型组(P<0.01)。益脑康预防组、立普妥治疗组血清NO水平高于AS+AIS模型组(P<0.01,P<0.05)。三个干预组血清VEGF、PDGF-BB水平低于AS+AIS模型组(P<0.01,P<0.05)。结论益脑康胶囊预防或治疗性用药能够提高血清NO水平,降低VEGF、PDGF-BB水平,可以减轻血管内皮损伤、纠正内皮功能紊乱、延缓动脉粥样硬化和抗血栓形成,可能对于动脉粥样硬化和急性缺血中风具有防治作用。     

番茄红素对牛胸主动脉平滑肌细胞增殖的作用及作用机制

目的：研究番茄红素对牛胸主动脉平滑肌细胞增殖的作用及作用机制。方法：采用组织块法体外培养牛胸主动脉平滑肌细胞,以含10%小牛血清的培养基制备牛胸主动脉平滑肌细胞增殖模型。细胞分为正常组、阴性对照组、模型组及1、0.1和0.01μmol·L^-1三个不同浓度的番茄红素实验组。实验采用MTT法测定牛胸主动脉平滑肌细胞的增殖活性,采用流式细胞术测定细胞周期分布,并测定了细胞内的SOD活性和MDA含量。结果：番茄红素在三个实验浓度下都能显著抑制血管平滑肌细胞的增殖。一方面,番茄红素抑制了G1期细胞进入S期;另一方面,番茄红素在1和0.1μmol·L^-1的浓度下,能明显增强细胞中的SOD活性,同时,在三个给药浓度下,细胞内的MDA含量都显著降低。这些作用都具有浓度依赖性,并且与模型组比较均有统计学差异。结论：番茄红素对牛胸主动脉平滑肌细胞的增殖有抑制作用,并且这种抑制作用可能与它能够抑制细胞进程和它的强抗氧化性能够抑制细胞中的脂质过氧化和氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的形成有关。它有望成为防治动脉粥样硬化的一种新的药物。     

复方金蟾胶囊对移植性小鼠肉瘤及细胞周期的抑制作用

目的观察复方金蟾胶囊对小鼠移植性肉瘤S180的抑制作用并探讨其作用机制。方法采用移植性肉瘤S180模型进行抑制肿瘤的实验,并应用流式细胞仪检测S180肿瘤细胞增殖周期。结果复方金蟾胶囊对S180肉瘤的抑制率大于40%,生命延长率大于39%,其促进S180肿瘤细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0G1期,减少增殖细胞在S期的分布,且呈明显量效关系。结论复方金蟾胶囊具有良好的抗肿瘤作用,且有明显量效关系。     

雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及作用机制。方法　体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,通过3 H -TdR掺入试验 ,观察雷公藤内酯醇对血清诱导的细胞增殖的影响 ;采用流式细胞技术 ,观察该药对细胞增殖周期的影响。结果　雷公藤内酯醇在 (0 .5～ 4 )× 10 -5g/L的浓度范围内 ,以一种剂量依赖性的方式抑制了血清诱导的VSMC增殖 ;雷公藤内酯醇可显著增加细胞周期中G0 /G1期细胞百分含量 ,减少S期细胞的百分含量 ,阻断细胞由G0 /G1期向DNA合成的S期转化 ,作用呈剂量依赖性。结论　雷公藤内酯醇可能通过影响细胞周期的转化而抑制VSMC的增殖。     

大黄素对肝星状细胞增殖及细胞外信号调节激酶的影响

目的:观察大黄素对HSC-T6细胞增殖及细胞外信号激酶(ERK1)表达的影响。方法:将培养细胞分成正常组和大黄素不同浓度干预组(大黄素终浓度分别为20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L),采用MTT法观察大黄素对HSC-T6增殖的影响;采用流式细胞仪观察各组细胞周期的变化;采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量法观察ERK1mRNA的表达;采用免疫细胞化学SABC法,观察HSC-T6 ERK1表达的变化。结果:不同浓度大黄素对HSC-T6的增殖均有抑制作用(与正常组比较P0.05,P0.01),且呈一定的量效关系。大黄素作用HSC-T6细胞后,G0/G1期增加,S期减少;当浓度为40～60μmol/L时,G2/M期减少(与正常组比较均P0.05)。正常组HSC-T6有ERK1mRNA表达,而大黄素使ERK1mRNA的表达显著降低,(与正常组比较P0.05,P0.01)。正常组HSC-T6 ERK1阳性均强表达,大黄素使ERK1阳性表达细胞数量减少,阳性减弱。结论:大黄素对HSC-T6细胞增殖有抑制作用,其作用与阻滞细胞于G0/G1期、抑制其ERK1表达有关。