小檗碱、莲心碱和甲基莲心碱对HERG通道表达的影响

目的:利用免疫荧光化学染色法和Western blot法分别定性、定量地检测不同浓度的小檗碱、莲心碱和甲基莲心碱对稳定转染在HEK-293细胞中HERG钾通道表达的影响,以及不同浓度的小檗碱对大鼠心肌组织Ikr通道蛋白表达的影响,探讨小檗碱、莲心碱和甲基莲心碱的抗心律失常机制.方法:Western blot法检测HERG-HEK细胞上HERG通道蛋白的表达;免疫荧光化学染色法并利用共聚焦显微镜定性测定不同浓度的小檗碱、莲心碱和甲基莲心碱对HERG通道蛋白表达的影响;Western blot法定量检测不同浓度的小檗碱对大鼠心肌组织Ikr通道蛋白表达的影响以及小檗碱、莲心碱和甲基莲心碱对稳定转染在HEK-293细胞中HERG钾通道蛋白表达的影响.结果:Western blot法检测稳定转染有HERG基因的HEK293细胞能高水平的表达HERG通道蛋白.10,30μmol· L-1的小檗碱明显抑制HERG-HEK细胞中HERG通道蛋白的表达(P＜0.0l).10,20 mg·kg-1的小檗碱抑制大鼠心肌组织Ikr通道蛋白的表达(P＜0.05).3,10,30μmol·L-1的莲心碱促进HERG-HEK细胞中HERG通道蛋白的表达(P＜0.05).甲基莲心碱不影响HERG-HEK细胞中HERG通道蛋白的表达.结论:稳定转染的HERG-HEK细胞能高水平的表达HERG通道蛋白;小檗碱对体外HERG-HEK细胞和大鼠心肌组织Ikr通道的蛋白表达均有抑制作用;莲心碱促进HERG-HEK细胞中HERG通道蛋白的表达;甲基莲心碱对HERG通道蛋白表达无影响.     

从miRNA-17-92途径探讨小檗碱和吴茱萸碱对大肠癌HT29细胞周期调控机制

目的:探讨盐酸小檗碱和吴茱萸碱通过调控miR-17-92基因簇对大肠癌HT29细胞周期的作用机制,为中医药防治大肠癌提供实验依据。方法:体外培养人结肠癌HT29细胞,盐酸小檗碱(2.5,5.0,10.0μM)和吴茱萸碱(1.8,3.75,7.5μM)作用于稳定转染miR-17-5p和miR-20a的HT29细胞后,采用MTT法、流式细胞术、实时荧光定量PCR及Western印记法检测药物对HT29细胞增殖、细胞周期分布情况、mRNA表达水平及E2F1蛋白表达的影响。结果:盐酸小檗碱和吴茱萸碱可以抑制转染的HT29细胞增殖,具有时间依赖性;并且盐酸小檗碱和吴茱萸碱分别以浓度5.0、3.75μM作用转染HT29细胞72h后抑制率超过50%,因此盐酸小檗碱取2.5、10.0μM,吴茱萸碱取1.8、7.5μM用于后续实验,二者能够将细胞阻滞在S期,抑制miR-17-5p和miR-20a的表达水平及E2F1的蛋白表达。结论:盐酸小檗碱和吴茱萸碱通过靶向miR-17-92抑制E2F1蛋白的表达,将细胞阻滞在S期,进而抑制大肠癌HT29细胞的增殖,为中医药防治大肠癌提供新的靶点及实验依据。     

去氢骆驼蓬碱调控FOXD3-AS1 对肺癌A549 细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨去氢骆驼蓬碱对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:不同浓度(0.175、0.35、0.7 ng/mL)的去氢骆驼蓬碱作用A549细胞24 h后,细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞核增殖抗原Ki67和半胱天冬酶-3(Caspases3)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测叉头框转录因子D3的反义RNA 1 (FOXD3-AS1)基因表达水平。转染FOXD3-AS1小干扰RNA至A549细胞,上述相同方法观察下调FOXD3-AS1表达对A549细胞增殖、凋亡及Ki67和Caspases3蛋白表达的影响。结果:去氢骆驼蓬碱作用A549细胞后,细胞存活率、克隆形成数及Ki67蛋白和FOXD3-AS1的表达均降低(P0.05),而细胞凋亡率和Caspase3蛋白表达均升高(P0.05)。下调FOXD3-AS1表达后,A549细胞存活率、克隆形成数及Ki67蛋白表达均降低(P0.05),细胞凋亡率和Caspase3蛋白表达均升高(P0.05)。下调FOXD3-AS1表达且同时使用去氢骆驼蓬碱作用A549细胞后,细胞存活率、克隆形成数及Ki67蛋白表达均降低(P0.05),凋亡率和Caspase3蛋白表达均升高(P0.05)。结论:去氢骆驼蓬碱可能通过下调FOXD3-AS1表达抑制肺癌A549细胞增殖并促进细胞凋亡。     

荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及其机制初探

 目的 探讨荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用并对其作用机制进行研究。方法 MTT比色法检测荷包牡丹碱在不同浓度及不同时间对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用。利用TUNEL法探讨荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡效果;流式细胞术（FMC）测定荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞周期的分布;比色法测定荷包牡丹碱对半胱天冬酶（caspase）-3蛋白活性的影响。结果 荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549增殖抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强;荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞具有明显的凋亡效应;荷包牡丹碱与A549肿瘤细胞作用后,发生S期阻滞（P<0.05);荷包牡丹碱促使caspase-3蛋白活化(P<0.05)。结论 荷包牡丹碱能有效抑制人肺腺癌细胞A549的生长,使细胞周期阻滞在S期,进一步诱导其凋亡,并使caspase-3蛋白活化。caspase-3蛋白的激活可能在荷包牡丹碱诱导A549细胞凋亡过程中起重要作用。     

小檗胺对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究小檗胺体外对人肺腺癌A549细胞凋亡及TNF-α-JNK信号通路的影响.方法 MTT比色法检测小檗胺对A549细胞增殖的影响;显微镜观察A549细胞形态变化;Annexin V/PI双标法检测细胞的凋亡率;Western blotting法检测细胞凋亡标记蛋白Bcl-x、Caspase-3和PARP表达的变化,c-jun氨基末端激酶(JNK)的蛋白表达及其磷酸化表达水平;荧光定量PCR和ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的变化;通过JNK通路抑制剂进一步验证TNF-α-JNK信号通路在小檗胺药效中的作用.结果小檗胺能够显著抑制A549细胞增殖,并呈浓度相关性,小檗胺给药后24 h的IC50值为9.01 μmol/L;经小檗胺处理后,A549细胞可见典型的凋亡形态学改变,Annexin V/PI双标法检测结果也显示小檗胺可诱导A549细胞凋亡,小檗胺10 μmol/L组细胞早期凋亡率为13.8％,为对照组的6.6倍;小檗胺可显著降低抗凋亡蛋白Bcl-x的表达,明显增强促凋亡蛋白Caspase-3和PARP的活性,显著提高TNF-α基因和蛋白表达及JNK蛋白的磷酸化表达水平,激活TNF-α-JNK通路.结论小檗胺能抑制A549细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与TNF-α-JNK信号通路的激活有关.     

小檗碱对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究小檗碱对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响。方法培养THP-1细胞并加入小檗碱后,MTT法检测细胞增殖。100 ng/mL PMA和20 ng/mL IL-4将THP-1细胞诱导成M2型肿瘤相关巨噬细胞,小檗碱预给药后,随机分为对照组、模型组、小檗碱组,细胞培养上清与A549细胞共培养。RT-PCR、Western blot、ELISA检测CD206、IL-10、TGF-β表达,Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果小檗碱最佳刺激浓度为20μmol/L。与模型组比较,小檗碱组可显著抑制CD206、IL-10、TGF-β表达(P0.05)。小檗碱可抑制THP-1细胞转化为M2型肿瘤相关巨噬细胞。结论小檗碱可调节A549细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制肿瘤相关巨噬细胞向M2型巨噬细胞的转化有关。     

小檗碱对人非小细胞肺腺癌细胞迁徙转移的影响及其分子机制的研究

目的:观察低剂量的小檗碱的抗肿瘤活性,并探讨其抑制肿瘤细胞增殖及肿瘤转移的分子机制。方法:以人非小细胞肺腺癌A549为模型,用0、5、10、20、30μmol/L的小檗碱处理处于对数期增长的A549细胞24小时或者30μmol/L的小檗碱处理细胞不同时间。侵袭小室以及基质凝胶转移实验检测A549细胞的侵袭与迁移能力;免疫印迹方法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、上皮钙黏素(E-Cadherin,N-Cadherin)以及细胞信号转导分子(Stat3)的表达。结果:20、30μmol/L小檗碱孵育A549细胞48h后,其迁移与侵袭率显著降低;免疫印迹结果显示小檗碱能显著抑制Stat3转移到细胞核内;此外,抑制Stat3表达后,能显著抑制MMP以及N-Cadherin而增强E-Cadherin的表达。结论:小檗碱通过抑制Stat3转移到细胞核从而调节MMP的表达和A549细胞转移和迁徙。     

消岩汤对肺腺癌A549实体荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡干预机制的研究

目的分析消岩汤干预下Survivin siRNA对肺腺癌A549实体荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的影响。方法以人肺腺癌A549实体移植瘤裸鼠模型为研究对象,将消岩汤含药血清及siRNA转染后的A549细胞分别进行瘤内注射,通过流式细胞术观察小鼠体内细胞凋亡情况;免疫细胞化学法检测Survivin蛋白表达。结果 siRNA转染组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于消岩汤组,但显著低于消岩汤+siRNA转染组。siRNA转染组和消岩汤组均可诱导细胞凋亡,且siRNA转染组的诱导作用强于消岩汤组,消岩汤+siRNA转染组可协同增强诱导细胞凋亡作用。结论消岩汤联合Survivin siRNA可协同增强诱导细胞凋亡作用。     

钩吻总碱对人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨钩吻总生物碱提取物(钩吻总碱)促进人结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。方法:钩吻总碱体外干预HT-29细胞24 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法评估其对细胞增殖的影响,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察HT-29细胞的凋亡情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察HT-29细胞B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2 mRNA表达情况,利用紫外分光光度法检测含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶-3(Caspase-3)表达量的变化。结果:钩吻总碱可抑制HT-29细胞增殖,200 mg·L~(-1)钩吻总碱干预24 h后,对HT-29细胞增殖的平均抑制率达54.17%。DAPI染色及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察到钩吻总碱可促进HT-29细胞凋亡。RT-PCR观察到钩吻总碱能降低HT-29细胞Bcl-2 mRNA表达(P0.05),对Bax mRNA表达无明显影响,提高了Bax/Bcl-2 mRNA表达(P0.05)。利用紫外分光光度法检测到随着钩吻总碱浓度的升高,HT-29细胞的Caspase-3表达呈上升趋势(P0.05)。结论:钩吻总碱能有效地抑制HT-29细胞的增殖,促进HT-29细胞的凋亡,其机制可能与通过Bax/Bcl-2途径诱导细胞凋亡相关。     

延胡索叔胺碱和季胺碱对豚鼠心室肌细胞动作电位和HERG通道电流的影响

目的:观察延胡索叔胺碱和季胺碱对动作电位和HERG通道的影响,探讨2种生物碱抗心律失常的作用机制。方法:采用全细胞膜片钳技术记录急性分离的豚鼠心室肌细胞动作电位和培养的稳定转染HERG通道蛋白的HEK293细胞的HERG通道电流。结果:叔胺碱(30,100 mg/L)可延长APD90(90%复极化时程);1 mg/L和3 mg/L季胺碱可缩短APD90,加深静息电位;30 mg/L和100 mg/L季胺碱可延长APD90;叔胺碱(3~300 mg/L)可浓度依赖性抑制HERG尾电流幅度,IC50为55μmol/L;1 mg/L和3 mg/L季胺碱可明显升高HERG尾电流电流幅度,而30 mg/L和100 mg/L季胺碱可明显降低尾电流幅度。结论:延胡索叔胺碱可浓度依赖性延长动作电位时程和抑制HERG通道电流,而季胺碱高浓度与叔胺碱作用相同,低浓度则能够缩短动作电位时程和兴奋HERG通道电流,呈现双相性。     

珍珠母超微粉蛋白及寡肽对小鼠镇静安眠作用比较

目的比较珍珠母超微粉蛋白、寡肽对小鼠镇静安眠作用。方法利用PCPA制造小鼠失眠模型,观察小鼠的自主活动情况,ELISA法测小鼠血中ATCH含量并计算脑及脑系数。结果阳性对照组、寡肽组小鼠的自主活动次数显著降低,小鼠血中ACTH的含量增加,但脑干系数无影响。结论超微粉寡肽类成分(MCP)镇静安眠活性最强,为镇静安眠主要活性部位,调节ACTH可能是其镇静安眠机制。     

丁香苦苷不同给药途径的药物动力学研究

目的:研究并比较丁香苦苷单体两种给药途径在家兔体内的药物动力学过程,考察丁香苦苷单体口服后的绝对生物利用度。方法:家兔静脉注射丁香苦苷注射液和灌胃给予丁香苦苷水溶液,采集血样,固相萃取小柱活化方法处理血浆后高效液相色谱法测定丁香苦苷血浆浓度,采用药动学软件3P97进行数据处理,确定药动学参数。结果:丁香苦苷静脉给药后在体内符合二室模型分布,其主要药动学参数分别如下:T1/2α为2.41min,T1/2β为15.38min。灌胃给药后丁香苦苷的药动学行为符合一级吸收二室模型,Cmax为17.91min,T1/2(α)为9.642min,T1/2(β)31.748min。绝对生物利用度为35.9%。结论:丁香苦苷单体经口服和静脉两种给药途径给药后,吸收和消除均较快。     

《老老恒言》论老年养生

简要论述了《老老恒言》中有关老年养生的思想和方法 ,认为饮食以调理脾胃为要 ,应注意饮食有节、五味调和、清淡为补 ;起居以养静为要 ,应注意调顺四时、起居有常、静养与导引相结合 ;养性以安命为要 ,应注意清心寡欲、修心养性     

Evaluation of estrogenic activity of alcoholic extract of rhizomes of Curculigo orchioides

The rhizomes of Curculigo orchioides Gaertn. (Amaryllidacea) is an important Ayurvedic as well as Unani drug. It is present in several drug formulations used in the treatment of menorrhagia and other gynecological problems. In this study, we conducted a comparative study of estrogenic activity of alcoholic extract of Curculigo orchioides with diethylstilbestrol in bilaterally ovariectomized young albino rats. Bilaterally ovariectomized albino rats were divided into five groups (n=9) receiving different treatments, consisting of vehicle (0.6% w/v sodium carboxy methyl cellulose), ethanolic extract of rhizomes of Curculigo orchioides at three different doses (viz., 300, 600, 1200 mg/kg body weight) and standard drug diethylstilbestrol (DES) at a dose of 2 mg/kg body weight. All these were administered orally daily for 7 days. Estrogenic activity was assessed by taking percentage vaginal cornification, uterine wet weight, uterine glycogen content and uterine histology as parameters of assessment. Alcoholic extract of Curculigo orchioides showed a significant increase in percentage vaginal cornification, uterine wet weight (P<0.001), uterine glycogen content (P<0.001) and a proliferative changes in uterine endometrium compared to the control.     

病性变化和转化的哲理数学原理

病性的变化和转化以及疾病的传变是中医病理学的2个核心问题。它们可分别从阴阳五行数学的公理1和公理2、3得到圆满的解释。病性变化,其症结在于主导属性明晰度的大小发生变化;病性转化,其症结则在于主导属性明晰度的正负号发生变化。     

中药产业竞争力提升战略研究

本文运用了竞争力理论与战略理论,分析了中药产业竞争力提升的环境与条件,提出了提升中药产业竞争力的三大战略目标、三大总体战略、四条战略举措及三个实施阶段与重点任务。     

血管性认知障碍的中医治疗有效思考

血管性认知障碍概念的提出,为现代医学治疗脑血管疾病提供了新的认识空间,要求对患者实施早期诊断,早期治疗。由于现代医学治疗该病的局限性,为中医的治疗带来了一个广阔的空间。中医中药采用补虚,逐瘀,化痰,理气,解毒,清热,通络,开窍等多种方法,其中以补肾、化痰、活血最为常用。中成药以及针灸在临床的运用为血管性认知障碍提供了多元化治疗。大量的临床及实验室的实践研究表明了中医治疗该病的有效性,同时也给医者思考的空间:中医为何有效及其有效的理论依据。     

中药产业竞争力提升战略研究

本文运用了竞争力理论与战略理论，分析了中药产业竞争力提升的环境与条件，提出了提升中药产业竞争力的三大战略目标、三大总体战略、四条战略举措及三个实施阶段与重点任务。     

肾阳虚与血瘀关系的实验研究

目的探讨肾虚与血瘀之间的发展变化规律,为补肾活血法提供实验依据。方法制作肾阳虚动物模型,选取Wistar大鼠37只,分为对照组、模型组、治疗组。观察动物外观、一般体征、脏器重量和血脂等改变。结果模型组动物皮毛稀疏,精神萎靡,懒动,大便溏稀,耳垂毛细血管紫暗;模型组肾上腺、精囊腺的重量与对照组比较明显降低;血清睾酮含量降低;模型组血清TC和LDL-C明显增高,TG增高不明显,HDL-C降低。结论肾阳虚同时伴有血瘀,血瘀时间的延迟可出现肾阳虚。     

胃脘痛证候量化诊断的探讨

目的:探讨胃脘痛证候的量化诊断规律。方法:以因子分析方法对808例胃脘痛患者的临床四诊信息进行分析。结果:因子分析从胃脘痛临床症状中提取12个因子,分别代表脾胃湿热、脾胃虚寒、肝胃气滞、气阴两虚、胃热炽盛、胃阴亏虚、肝胃郁热、脾胃气虚等8个证候,同时对各个证候进行量化。结论:因子分析所得的胃脘痛的常见证候分类及量化诊断为临床辨证提供客观依据。