基于ISSR的地黄栽培品种与野生群体遗传多样性研究

目的 基于ISSR分子标记研究地黄Rehmannia glutinosa栽培品种与野生群体遗传多样性，比较它们的遗传多样性差异，构建它们之间亲缘关系，为地黄种质资源保护及新品种选育提供参考。方法 应用ISSR分子标记技术对地黄栽培品种，野生群体及其近缘种106个样品进行分析，利用POPGEN软件分析Nei’s基因多样性指数（H）等遗传信息参数，应用NTSYS软件构建亲缘关系UPGMA聚类图。结果 7条引物在所有取样群体中，共检测到85个位点，其中多态性位点83个，多态位点百分率（PPB）为97.65%。地黄栽培品种与野生群体及其近缘种的种群间H值为0.265 9，Shannon’s多样性信息指数（I）为0.412 5。地黄栽培品种的多态性位点26个，PPB为30.59%。河南省地黄野生群体多态性位点71个，PPB为83.53%。ISSR聚类分析结果显示地黄栽培品种，野生群体及其近缘种共分成7个组。结论 ISSR分子标记揭示地黄野生群体比栽培品种具有更高的遗传多样性，河南分布的野生地黄群体的遗传多性高于其他地区，与其作为栽培地黄的道地产区，具有一定的相关性。地黄野生群体间亲缘关系与其地理分布格局并无明显相关性。     

基于核基因ITS及叶绿体psbA-trnH和trnS-trnG基因怀地黄栽培起源探讨

目的从野生型驯化为栽培品种角度分析地黄Rehmannia glutinosa的遗传多样性,探讨河南焦作地区怀地黄的栽培起源。方法对地黄野生自然居群,栽培品种及其近缘物种ITS、psb A-trn H和trn S-trn G序列进行扩增和测序,分析比较中药材地黄野生自然居群,栽培品种间各序列的单倍型类型和核苷酸多态性,构建Neighbor-Joining(NJ)分子系统发育树。结果单倍型分析结果显示,地黄野生居群单倍型类型数量(ITS 6个,psb A-trn H 8个,trn S-trn G 9个)明显高于怀地黄栽培品种单倍型类型数量(ITS 3个,psb A-trn H 2个,trn S-trn G 3个)。地黄野生居群的单倍型多样性和核苷酸多样性均远高于怀地黄栽培品种间,在3个基因联合系统树上,地黄野生居群和栽培品种所有样品与茄叶地黄聚在一支,支持率为90%;23个栽培品种(29个样本)与来自温县的10号地黄野生居群聚为一支,支持率为78%。结论地黄野生型驯化为栽培品种过程发生了明显的遗传瓶颈,导致现存怀地黄栽培品种遗传基础狭窄,遗传多样性降低。怀地黄栽培品种可能起源于河南温县区域的地黄野生群体。     

地黄资源遗传多样性分析

目的:研究不同地区栽培地黄及野生地黄品种间ITS序列差异,为地黄的系统发育和分子鉴定提供依据。方法:用CTAB法提取地黄叶片中总DNA,对PCR产物进行克隆测序,采用MEGA4.0进行系统进化分析。结果:各供试地黄的ITS区序列总长度为613~614 bp,长度变异仅1 bp,其中ITS1长度为224~225 bp,G+C占60.4%~63%;ITS2长度为224~225 bp,G+C占57.1%~65.3%;5.8S长度高度保守,均为164 bp。系统发育分析表明:北京2号地黄与其他地黄资源差异性较大,亲缘关系较远。野生地黄居群内差异较小,居群间没有差异。河南栽培地黄与山西、山东省栽培地黄间没有差异;野生地黄资源中神农山和青天河一带地黄与山东省栽培地黄亲缘关系最近,而河南栽培地黄和山西省栽培地黄与野生地黄没有差异。结论:不同地区地黄资源种间亲缘关系较近,系统分化不明显。     

金银花种质资源遗传多样性的ISSR 分析

目的：探讨金银花种质资源的遗传多样性,为其育种提供参考。方法：对采自金银花主产区的18 个农家品种及野生忍冬和近缘种灰毡毛忍冬共计36 个样品进行ISSR-PCR 分析,采用NTSYS-pc 软件计算金银花不同农家品种及近缘种间的Jaccard 遗传相似系数,按非加权配对算术平均法（UPGMA）建立所研究类群的系统聚类图。结果：12 条引物共扩增出129 个条带,其中多态带为114 条,占总扩增条带数的88.37%,金银花种质资源具有较丰富的遗传多样性。从聚类分析图可以看出,金银花不同样本首先聚在一起,表明是一自然类群;野生忍冬与栽培品种具有明显的遗传差异;主产区传统品系毛花系列遗传相对较稳定,而鸡爪花系列品种繁杂,遗传变异大;新品种九丰一号已独立成一稳定品种。结论：ISSR 标记可以为金银花的种质资源鉴定、遗传关系分析及栽培育种提供分子生物学依据。     

地黄种质资源生物性状的比较研究

目的：比较地黄栽培品种与野生品种的性状差异，为地黄新品种的选育提供理论依据。方法：利用田间试验结合统计分析。结果：与野生品种相比，栽培品种株高明显降低、单株叶片数明显减少、产量显著增加；与野生品种比较，栽培品种叶片长度有所减少，叶片宽度、叶片中梓醇含量、多糖和还原糖有所增加但不明显，而块根中梓醇含量和水浸出物含量基本相同。结论：人工选育使地黄的株高降低、叶片数减少，产量增加，但有效成分含量没有明显改变。     

山东产丹参遗传多样性的扩增片段长度多态性指纹分析

目的研究山东产丹参的遗传多样性,初步探讨扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术在丹参道地性鉴别上的应用。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对山东产15个丹参样本进行DNA多态性分析。结果利用4对引物组合构建了15个丹参样本的DNA指纹图谱,通过相似性和聚类结果分析,丹参和白花丹参样本的遗传相似性较低,聚类结果也划分为两大类群,证明它们之间的亲缘关系较远,分化明显。临沂地区的野生和栽培丹参样本聚在一类,且栽培品种和野生品种之间具有一定的遗传差异。结论山东产丹参具有一定的遗传多样性,AFLP技术可用于丹参道地性鉴别。     

野生地黄种内遗传多样性的RAPD，ISSR分析

目的：分析野生地黄群落之间的遗传差异类型，比较RAPD和ISSR分子标记在分析地黄野生种质遗传多样性中的应用。方法：应用RAPD和ISSR分子标记技术，对55份地黄材料进行了遗传差异分析。结果：平均每条RAPD引物扩增出1600条带，平均每条ISSR引物扩增出1908条带，多态性位点百分率分别为8958%和9432%；聚类分析表明，55份地黄分成7大类群。结论：野生地黄具有丰富的遗传多样性；不同地理居群的相似性为063～098；ISSR标记比RAPD标记能检测到地黄种内更高的遗传差异性。     

怀区地黄遗传多样性的ISSR鉴定

目的利用ISSR标记技术对怀区地黄的8个品种和2个茎尖培养脱毒系进行了遗传多样性分析。方法用44条ISSR引物进行初选，然后用其中适合的10个ISSR引物进行ISSR分析。结果10条ISSR引物共扩增出110条带。基于这些条带，用SPSS10.0软件分析，建立了遗传Jaccard相关系数矩阵，构建了分子树状图，将怀区地黄的8个品种和2个组培系分为2类：其中一类群含有6个材料，包括组培85．5、大田85．5、组培9302、大田9302、金状元和金白地黄；另一类群含有4个材料，包括北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄。而且主成分分析结果支持上述的聚类分析结果；用POPGENE32软件分析知，多态性指数为0．3775，有效等位基因数为1．4037，多态性比率为71.82％；用一个ISSR6引物建立了10个供试地黄样品的DNA指纹图谱并且能将其彼此区分出来。结论ISSR标记适合于构建怀区地黄的DNA指纹图谱、品种鉴定和遗传多样性分析。     

ISSR分子标记在白芍亲缘关系的应用研究

目的：研究安徽、山东、北京、四川的栽培白芍和山西野生白芍的遗传多样性和亲缘关系,确定不同产区的白芍种质资源的差异,为白芍育种研究提供一定参考。方法：运用ISSR 分子标记技术,研究14份材料的遗传多样性水平。结果：选择条带清晰、多态性高、重复性好的7条引物进行扩增,共获得56条片段,其中多态性条带38条,平均多态性比率为67.86%;运用NTSYS软件计算样品间的遗传相似系数（GS值）,得到样品间遗传相似系数矩阵,其中亳州1号和亳州2号间相似系数最大,这说明两者间亲缘关系较近,遗传差异小;北京2号和山西野生白芍相似系数最小,说明两者间亲缘关系较远,遗传差异大;利用UPGMA法,根据遗传相似系数对各样品进行聚类分析,在GS值为0.72时把14个样品分为两大类群,北京和安徽栽培白芍为一个类群,其他品种为另一个类群。结论：4个产区的栽培白芍和山西野生白芍存在一定的遗传差异性,可以从基因水平把植株外型相似的栽培品种区分开,对新品种的选育有很大的意义。     

部分粉葛品种遗传关系的SRAP研究

目的:粉葛品种间遗传关系的分析.方法:以野葛和苦葛为外组,18个粉葛栽培品种为试材,通过SRAP分析,利用TREECONW软件分析遗传距离,UPGMA方法聚类,构建聚类树状图.结果:22对引物组合共得到338条扩增条带,其中有216条呈现多态性,占63.9%,平均每对引物组合产生15.4个位点和9.8个多态性位点,揭示了粉葛较为丰富的遗传多样性.粉葛品种遗传距离变化范围在0.0047～0.2658,平均0.136;聚类结果显示18个粉葛品种及外组被明显地划分三大聚类群,大部分品种并没有按地域形成独自的类群.结论:SRAP标记为粉葛遗传关系研究提供了新的DNA分子标记技术手段.     

野生与栽培当归遗传多样性比较

目的比较野生当归Angelica sinensis与栽培当归的遗传多样性。方法应用ISSR分子标记对48个栽培当归居群和7个野生当归居群1 038个样本进行扩增,利用Popgen 1.32软件对其Shannon’s多样性信息指数(I)等遗传信息参数进行分析,并利用SPSS 19.0中的独立样本t检验进行差异显著性检验;运用Gen Al Ex 6.5软件对野生和栽培当归2个组群遗传变异进行AMOVA分析;应用NTSYS软件构建当归野生和栽培各居群的Nei’s遗传距离UPGMA聚类树状图,并使用Gen Al Ex6.5软件中的Mental test分析遗传距离与地理距离的相关性。结果野生当归居群和栽培当归居群的多态位点百分率(PPB)为83.77%和96.10%,I平均值为0.221 7和0.282 8,Nei’s基因多样性指数(H)平均值为0.344 4和0.434 3,且存在极显著差异(P0.001);野生和栽培当归居群的种群间遗传分化指数(Gst)、基因流(Nm)值分别为0.299 1、1.171 8和0.733 4、0.181 7,组间变异百分比为15.85%,居群间变异百分比为54.3%,居群内变异百分比为29.85%;遗传距离变化范围0.014 4~0.730 7。结论当归野生居群的遗传多样性低于栽培居群,野生居群间的遗传分化程度明显低于栽培居群,当归总的遗传变异来自于居群间,野生居群与栽培居群亲缘关系较远,且遗传距离与地理距离存在相关性。     

丹参主要居群的遗传关系及药材道地性的初步研究

目的 研究丹参主要居群的遗传关系及药材的道地性问题。方法 选择丹参主要产地样本44个（包括9个居群样本），进行RAPD分析，得到的扩增条带用NTSYS－pc和AMOVA软件进行数据处理。结果 （1）从100多个引物中选择出11个多态性强和重复性好的引物，扩增得到129条带；（2）不同居群内多态位点比率为20.9%－55.0%；（3）用UPGMA法得到所有样本的聚类图，可分为6个主要分支组和3个组外个体，其中四川中江居群的5个样本聚为一组，并与其他样本遗传距离较大；（4）按产地分组，遗传差异的80.44%存在于居群内，8.29%来自于组内居群间，11.27%的遗传差异来自于组间。结论 （1）丹参居群内遗传多样性十分丰富；（2）山东和河南的栽培居群栽培种源来自于当地野生居群，尚没有进行人工选择，丹参酮ⅡA等成分的减少的原因主要是栽培条件不理想；（3）地区间居群的遗传分化不均衡，四川中江和河北承德居群与其他居群距离较远；（4）丹参的道地性的确定应当依据现代的优质药材评价系统，山东和河南产的丹参也可主为是丹参的道地药材。     

主产区远志种质资源遗传多样性的ISSR分析

目的对主产区远志种质资源进行遗传多样性研究。方法利用ISSR分子标记分析来自于主产区陕西、山西和河北3个省的10个居群的远志种质资源的遗传多样性。结果 12条ISSR引物扩增出276条带,其中有271条为多态性条带,聚类分析结果表明,地理来源相同的野生居群和栽培居群先行聚合。野生和栽培远志居群的遗传变异主要发生在居群间,栽培居群的遗传多样性略低于野生居群,二者均不符合距离隔离模型。结论聚类分析结果与栽培居群多为就地取材的事实相符。造成远志这种遗传变异型式的原因在于其本身的繁殖生物学特性以及当前的粗放栽培模式。     

我国肉苁蓉寄主梭梭种质资源多样性的AFLP分析

该研究主要采用AFLP技术结合PopGene32和NTSYSpc2.1软件分析了我国西北地区5省14地103份梭梭的遗传多样性。结果表明：梭梭群体总的多态位点百分率为94.13%,5个省居群平均Nei’s基因多样性指数（H）为0.308 0,Shannon’s多态性信息指数（I）为0.467 6,说明梭梭种群内遗传多样性较高。基因分化系数（G_st）为0.313 8,即68.62%的遗传变异来自省内,31.38%的遗传变异来自省间。5个省间的基因流（N_m）为1.093 5,其基因流属于风媒异交植物的特征。AMOVA分析表明,梭梭89.34%的遗传变异出现在省内,仅有10.66%的遗传变异发生在省与省之间,进一步分析得知省内的遗传变异主要发生在各采样点居群间（84.80%）。依据Nei’s遗传距离对不同居群进行UPGMA聚类分析,得知新疆和青海的梭梭样品和其他各省相比其遗传关系较远且各自聚为一支,而甘肃、内蒙古和宁夏产区的样品遗传关系较近聚为一支。总之,我国梭梭种群遗传多样性较高,各地区之间的遗传分化较小,现阶段该物种的种内丰度较高。因此,加强不同地区的梭梭种质繁育和人工种植推广可以有效的保护野生梭梭资源并实现可持续利用。     

药用植物党参的RAPD分析

目的:从DNA分子水平上分析甘肃党参主要栽培区的9个栽培居群和4个自然居群的遗传多样性和遗传关系,进而探讨纹党参的来源。方法:从200条随机引物中筛选出14个引物,对217个体进行RAPD扩增并计算多态性条带,再用NTSYS软件聚类分析。结果:14个引物共检测出125个可重复的位点,其中党参及其变种素花党参的多态位点分别为109和106,多态位点百分率为87．20％和84．80％。13个居群聚为两大类:8个党参栽培居群为一类,素花党参包括1个文县栽培居群与4个自然居群为第二类。结论:RAPD分析结果揭示了甘肃栽培的党参和素花党参在居群水平上具有丰富的遗传多样性。8个栽培党参居群间的遗传分化很小,与地理距离存在一定的相关性。在甘肃各地的栽培党参中,仅文县栽培品为素花党参,即正品纹党。     

青钱柳种质资源SCoT分子标记遗传多样性分析＊

目的 采用SCoT分子标记技术评价青钱柳的遗传多样性。方法 采集广西、湖南、湖北、江西、安徽和贵州6省22个居群共176份样本，对不同居群青钱柳的遗传多样性进行研究。结果 筛选出了5条引物，并对176个样品进行PCR扩增，扩增出总条带数69条，其中多态性条带数69条，多态性百分比（PPB）为100%。有效等位基因（Ne）为1.4912，Nei''s基因多样性指数（H）为0.3017，Shannon''s信息指数（I）为0.4662，种质间基因分化系数（Gst）为0.3742，基因流（Nm）为0.8362。NTSYS聚类分析结果表明，地域和种质是影响青钱柳样品间遗传相似度的重要因素，同一种质、同一地域的样品亲缘关系更为接近。结论 不同的青钱柳居群遗传多样性丰富，其中广西桂林全州县野生和广西柳州三江县栽培的遗传多样性最高，具有很高的进化潜力。地域和种质（野生或栽培）是影响青钱柳各居群间亲缘关系的重要因素，除此之外，还有海拔、土壤、气候、水质、光照、甚至微生物等因素互相叠加，共同对青钱柳产生影响，从而造成青钱柳种质资源的遗传多样性复杂多样。该结果为青钱柳良种选育及质量评价提供科学依据。     

不同产地野生玉竹种质资源多样性与亲缘关系的ISSR分析

目的 研究中国不同居群野生玉竹种质资源的遗传多样性.方法 选取我国11个不同居群的野生玉竹样品和1个居群的栽培样品进行ISSR分析,Popgene 32及Ntsyspc-2.1软件分析处理数据.结果 通过筛选得到10条ISSR引物,扩增得到115条带,其中108条为多态性条带,多态性条带百分率为93.38％; Nei's基因多样性(H)为0.432 1±0.084 1,Shannon 信息指数(Ⅰ)为0.619 7±0.100 5,遗传距离(GD)变异为0.128 9～0.496 5;利用UPGMA法构建分子树状图,可将12个居群聚合为两大类.结论 不同产地野生玉竹种间存在较高的多态性,遗传多样性较为丰富;野生玉竹的遗传多样性高于栽培居群的遗传多样性,可能与栽培方式和环境因素有关;药用植物玉竹对环境变化的适应能力强,地理来源相同的野生居群和栽培居群先行聚合,与其种质间的亲缘关系较近有关;聚类结果可以部分反映地理分布的特点,为种质资源的鉴定打下良好基础.