地黄不同品种的RAPD分析

目的 :探讨地黄不同品种 (种质)的遗传多样性和亲缘关系 ,为地黄育种提供依据。方法 :采用 20个10bp随机引物对 19个地黄不同品种的基因组DNA进行RAPD分析。 结果 :共扩增出 163个位点 ,其中多态性位点 114条 ,占 69.9%。根据SPSS 10.0分析软件中的Jaccard相似系数矩阵绘制遗传关系树系图 ,19个地黄品种分为北京系列、855系列、郭里茂等 4个类型。结论 :北京系列的 8个品种首先聚在一起 ,855系列中5个品种较早地聚在一起 ,表明其类内具有较近的亲缘关系。这一关系为地黄的育种材料的选择提供了参考。     

地黄资源遗传多样性分析

目的:研究不同地区栽培地黄及野生地黄品种间ITS序列差异,为地黄的系统发育和分子鉴定提供依据。方法:用CTAB法提取地黄叶片中总DNA,对PCR产物进行克隆测序,采用MEGA4.0进行系统进化分析。结果:各供试地黄的ITS区序列总长度为613~614 bp,长度变异仅1 bp,其中ITS1长度为224~225 bp,G+C占60.4%~63%;ITS2长度为224~225 bp,G+C占57.1%~65.3%;5.8S长度高度保守,均为164 bp。系统发育分析表明:北京2号地黄与其他地黄资源差异性较大,亲缘关系较远。野生地黄居群内差异较小,居群间没有差异。河南栽培地黄与山西、山东省栽培地黄间没有差异;野生地黄资源中神农山和青天河一带地黄与山东省栽培地黄亲缘关系最近,而河南栽培地黄和山西省栽培地黄与野生地黄没有差异。结论:不同地区地黄资源种间亲缘关系较近,系统分化不明显。     

怀区地黄遗传多样性的ISSR鉴定

目的利用ISSR标记技术对怀区地黄的8个品种和2个茎尖培养脱毒系进行了遗传多样性分析。方法用44条ISSR引物进行初选，然后用其中适合的10个ISSR引物进行ISSR分析。结果10条ISSR引物共扩增出110条带。基于这些条带，用SPSS10.0软件分析，建立了遗传Jaccard相关系数矩阵，构建了分子树状图，将怀区地黄的8个品种和2个组培系分为2类：其中一类群含有6个材料，包括组培85．5、大田85．5、组培9302、大田9302、金状元和金白地黄；另一类群含有4个材料，包括北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄。而且主成分分析结果支持上述的聚类分析结果；用POPGENE32软件分析知，多态性指数为0．3775，有效等位基因数为1．4037，多态性比率为71.82％；用一个ISSR6引物建立了10个供试地黄样品的DNA指纹图谱并且能将其彼此区分出来。结论ISSR标记适合于构建怀区地黄的DNA指纹图谱、品种鉴定和遗传多样性分析。     

老鹳草属植物遗传多样性的RAPD分析

目的:分析8种老鹳草属植物遗传多样性和亲缘关系。方法:利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析遗传多样性,UPGMA类平均法聚类分析。结果:筛选出的11个随机引物供试材料DNA随机扩增,共得到145条带。其中多态性条带114条,多态性为78.62%。经聚类分析,可将供试材料分为3类,与传统分类方法差异不大。结论:RAPD技术用于老鹳草属的遗传多样性和分类研究是可行的。     

野生地黄种内遗传多样性的RAPD，ISSR分析

目的：分析野生地黄群落之间的遗传差异类型，比较RAPD和ISSR分子标记在分析地黄野生种质遗传多样性中的应用。方法：应用RAPD和ISSR分子标记技术，对55份地黄材料进行了遗传差异分析。结果：平均每条RAPD引物扩增出1600条带，平均每条ISSR引物扩增出1908条带，多态性位点百分率分别为8958%和9432%；聚类分析表明，55份地黄分成7大类群。结论：野生地黄具有丰富的遗传多样性；不同地理居群的相似性为063～098；ISSR标记比RAPD标记能检测到地黄种内更高的遗传差异性。     

利用RAPD分析13种石斛属植物的遗传多样性和亲缘关系

目的通过对13种石斛属植物进行遗传多样性和亲缘关系分析,为更好地开发利用石斛资源奠定基础。方法随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析遗传多样性,U PGM A类平均法进行聚类分析。结果利用筛选出的10个随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到188条带,其中多态性带有180条,多态性百分率为95.74%。采用U PGM A类平均法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,得出反映各种间亲缘关系的树状图。在遗传距离(D)=0.63处,可将供试材料分为3类,RAPD对基因组的分析结果与传统分类学的结果差异不大。结论该标记技术对石斛属植物的遗传多样性和分类研究是可行的。     

新疆产中麻黄不同地理群体遗传关系的RAPD分析

 目的建立新疆3个不同地理群体的中麻黄(Ephdera intermedia)指纹图谱,进行遗传多样性分析。方法通过20个10碱基随机引物对新疆3个不同地理群体的中麻黄进行PCR扩增，并用人工栽培种作为对照，通过计算遗传相似性系数，建立UPGMA聚类图。结果共扩增出153个多态位点，建立了它们的基因组DNA指纹图谱。结论不同地理群体中存在丰富的遗传多样性；相距越远，群体间相似性程度越低；人工栽培种与同一产地野生种具有相似的遗传特性。     

基于SSR荧光标记的不同品种（系）当归遗传关系分析及分子身份证构建

目的 利用荧光SSR分子标记对甘肃省11个当归Angelicasinensis品种（系）194份当归样品进行遗传多样性和遗传结构分析,并构建其分子身份证,为当归新品种（系）选育提供科学依据。方法 采用课题组前期筛选出10对SSR荧光引物对供试材料进行PCR扩增,利用Popgen软件进行遗传参数的计算,利用Structure软件进行群体结构分析,利用NTSYS软件构建各居群的Nei’s遗传距离UPGMA聚类图,利用GenALEx软件进行分子方差分析;对扩增带型进行数字加字母编码,构建当归分子身份证。结果 10对SSR荧光引物共获得观测等位位点57个,平均每对引物5.7个,当归群体的观测杂合度（Ho）、期望杂合度（He）和Nei期望杂合度（Nei）分别为0.341 4、0.407 0和0.385 5;Structure分析将194份当归样品分成5个类群;当归品种（系）居群间的分化系数FST为0.147 7;分子方差分析显示居群内的变异百分比达到78%;最终利用10对SSR荧光引物,构建了10位字符的分子身份证,可以区分11个当归品种（系）。结论 栽培当归在物种水平上遗传多样性较高,各品种（...     

不同产地玛卡遗传多样性的ISSR分析

目的:从DNA分子水平分析国内外5个不同产地玛卡的遗传多样性,探索其相互之间的亲缘关系。方法:采用简单重复序列区间(ISSR)分子标记技术对11份不同产地玛卡进行聚类分析。从20条ISSR引物中筛选出8条进行PCR扩增,扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测,扩增结果进行遗传参数统计分析,用NTSYS软件UPGMA法进行亲缘关系聚类分析,构建聚类图。结果:8条引物共获得51条清晰可辨条带,其中多态性条带22条,平均多态性比率为43.1%。11份玛卡的相似系数在:0.627 5~0.960 8。聚类结果显示,国产与秘鲁原产玛卡明显被分为两大类。在国产9个样品中,云南、西藏、青海聚为一支,新疆产玛卡单独聚成一支。结论:ISSR标记可以区别秘鲁原产与引种的玛卡样品,然而国产玛卡整体遗传变异小,遗传稳定性强。     

基于ISSR的地黄栽培品种与野生群体遗传多样性研究

目的 基于ISSR分子标记研究地黄Rehmannia glutinosa栽培品种与野生群体遗传多样性,比较它们的遗传多样性差异,构建它们之间亲缘关系,为地黄种质资源保护及新品种选育提供参考。方法 应用ISSR分子标记技术对地黄栽培品种,野生群体及其近缘种106个样品进行分析,利用POPGEN软件分析Nei’s基因多样性指数（H）等遗传信息参数,应用NTSYS软件构建亲缘关系UPGMA聚类图。结果 7条引物在所有取样群体中,共检测到85个位点,其中多态性位点83个,多态位点百分率（PPB）为97.65%。地黄栽培品种与野生群体及其近缘种的种群间H值为0.265 9,Shannon’s多样性信息指数（I）为0.412 5。地黄栽培品种的多态性位点26个,PPB为30.59%。河南省地黄野生群体多态性位点71个,PPB为83.53%。ISSR聚类分析结果显示地黄栽培品种,野生群体及其近缘种共分成7个组。结论 ISSR分子标记揭示地黄野生群体比栽培品种具有更高的遗传多样性,河南分布的野生地黄群体的遗传多性高于其他地区,与其作为栽培地黄的道地产区,具有一定的相关性。地黄野生群体间亲缘关系与其地理分布格局并无明显相关性。     

根癌农杆菌介导的怀地黄遗传转化研究

目的研究适于怀地黄Rehmannia glutinosa遗传转化的激素质量浓度和潮霉素质量浓度。方法以地黄无菌苗叶片为外植体,以根癌农杆菌介导的叶盘法进行转化,分析了潮霉素和乙酰丁香酮(AS)对抗性愈伤诱导率和再生芽分化效率的影响。结果潮霉素的质量浓度对抗性愈伤和抗性芽的产生影响很大,影响抗性愈伤诱导的临界质量浓度为9 mg/L,影响抗性芽分化的临界质量浓度为6 mg/L,适宜于进行地黄遗传转化的质量浓度为12 mg/L。侵染培养基和共培养培养基中添加100μmol/L的AS可以极显著提高转化效率。PCR扩增和β-葡萄糖苷酶(GUS)染色结果表明,外源基因成功整合到地黄基因组中。结论建立了有效的怀地黄稳定遗传转化再生体系,为地黄的分子生药学研究和遗传改良奠定基础。     

雷公藤属3种植物遗传关系与遗传多样性的RAPD分析

目的：阐明雷公藤属植物的遗传关系和遗传多样性。方法：用RAPD分子标记方法研究来自雷公藤属植物3个种4个类型24个居群的110个样本。结果和讨论：从100个随机引物中筛选出10个引物,得到128条带,其中多样性条带123个,占96%。通过聚类分析可以看出,东北雷公藤明显与其他种有显著的遗传差异；中间类型和雷公藤的关系较与昆明山海棠的关系更密切,但中间类型和雷公藤之间也有明显的遗传分化,且中间类型呈现较雷公藤复杂的遗传多样性,不同的中间类型居群与雷公藤的关系远近不同。大量的中间类型的存在,连接了昆明山海棠与雷公藤这2个种,从分类上建议将2个种合并。将除去东北雷公藤的其他居群作为一个整体分析,居群间分化明显,遗传多样性主要存在于居群间,因此应当收集不同来源的种质以保存尽可能多的遗传多样性。     

地黄栽培历史及其品种考证

目的：考证地黄的栽培历史以及品种记载。方法：查阅古今文献。结果：除部分本草书籍对地黄的记载与目前不一致外，多数记载应为玄参科植物地黄。地黄的栽培历史可追溯到1000多年以前，当时就有块根膨大的类型，并开始了人工栽培。由于长期的栽培，选育了许多优良品种，有文献记载的品种多达50余个，但对品种的描述过于简单，严重影响了品种的识别和应用。结论：地黄栽培历史悠久，种质资源丰富，可能是造成有关中药质量不稳定的原因之一。因此急需对其进行系统地收集、整理和保存研究，为成分分析、活性筛选和临床应用奠定基础。同时建议在进行相关研究时，应高度重视取样的一致性；在进行GAP基地建设时，应选择优良品种。     

怀地黄药材HPLC指纹图谱研究

目的: 建立怀地黄药材的HPLC指纹图谱,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。 方法: 采用HPLC梯度洗脱法,对怀地黄药材进行测定,色谱条件,Dikma DiamonsilC₁₈柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,乙腈-0.1%磷酸水系统梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长205 nm。 结果: 标定了13个共有峰,建立了HPLC指纹图谱,该图谱的相关系数均在0.99以上。 结论: 该方法精确可靠,重复性好,可为控制怀地黄药材内在质量提供科学依据。     

地黄种质资源生物性状的比较研究

目的：比较地黄栽培品种与野生品种的性状差异，为地黄新品种的选育提供理论依据。方法：利用田间试验结合统计分析。结果：与野生品种相比，栽培品种株高明显降低、单株叶片数明显减少、产量显著增加；与野生品种比较，栽培品种叶片长度有所减少，叶片宽度、叶片中梓醇含量、多糖和还原糖有所增加但不明显，而块根中梓醇含量和水浸出物含量基本相同。结论：人工选育使地黄的株高降低、叶片数减少，产量增加，但有效成分含量没有明显改变。     

地黄中介体亚基基因RgMed6的分离与表达特性

目的克隆地黄中介体亚基基因Rg Med6,分析其编码的蛋白序列特征和基因表达特性。方法利用地黄转录组数据库进行同源比对,获得拟南芥Med6的同源基因片段,通过序列拼接获得RgM ed6的全长开放阅读框(ORF),在NCBI上进行BLASTp获得RgM ed6的同源蛋白,用MAFFT进行多序列联配,应用MEGA 6.0构建系统进化树,以实时荧光定量PCR技术检测Rg Med6在地黄不同组织以及逆境胁迫下的相对表达量。结果获得1条924 bp的c DNA序列,包含1个771bp的完整ORF,编码256个氨基酸,具有Med6蛋白的典型结构域和1个潜在的核定位信号序列。Rg Med6在检测的5个地黄组织(器官)中均有表达,其中在地黄叶片里表达强度最大,其次为花蕾,在茎中表达量最低。在连作地黄块根中RgM ed6的表达量降低,Na Cl胁迫处理下Rg Med6的表达量升高。结论首次克隆了地黄中介体亚基基因Rg Med6,为阐明其在地黄生长发育和逆境胁迫中的分子功能奠定基础。     

试管地黄诱导技术的研究

目的 :研究小植株离体条件下试管地黄诱导的最佳培养基和培养条件。方法 :选用地黄“855”为试验材料 ,研究了植物激素、蔗糖浓度、活性炭和日照时间等对地黄试管苗不定根的形成及膨大的影响。结果与结论 :将试管苗先在 1/2MS +IBA 1mg·L^-1的培养基中诱导生根后 ,转入诱导培养基中 ,根可膨大形成试管地黄 ,其最适诱导培养基为MS+6BA2mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1+蔗糖 5% ,最适培养条件为 25℃、光照 2000～3000lx ,12h·d^-1,培养基中不宜添加活性炭和GA3 。     

地黄叶片器官形态建成的研究

目的 :研究地黄叶片器官发生的形态建成 ;建立诱导地黄叶片直接再生植株和试管小地黄的最佳培养基和培养条件。方法 :从无菌脱毒苗上采取不同位置的叶片 ,接种到附加不同激素的培养基中 ,诱导叶片直接再生植株和试管地黄。结果与结论 :MS +6 BA 2 .0mg·L^-1培养基最适合叶片再生植株。MS +6 BA 1.0mg·L^-1+NAA 0 .5mg·L^-1培养基适合诱导试管地黄。最佳培养条件是光照 12h·d^-1,光强 2 0 0 0～ 3 0 0 0lx ,温度 (2 5± 1)℃。