千层塔的 23 种原植物中石杉碱甲含量

  目的 测定各种新鲜千层塔原植物中石杉碱甲的含量。 方法 分检千层塔草药原料，核对馆藏标本确定原植物；野外采集上述原植物，从速粉碎与干燥； 2% 酒石酸提取总碱， HPLC 测定石杉碱甲含量，外标法定量。 结果 草药千层塔来源于石杉科石杉属与马尾杉属共计 23 种拟蕨类原植物，其中 18 种含有石杉碱甲，伏帖石杉中含量最高，达 0.200 4% ，而东北石杉等 5 种中未检出石杉碱甲。 结论 目前中国应用的千层塔原植物来源多样，且各种之间石杉碱甲含量差别较大。     

HPLC法同时测定17种石杉亚科植物石杉碱甲、乙

目的建立HPLC法同时测定17种(含2待发表新种)石杉亚科植物中石杉碱甲(huperzine A)和石杉碱乙(huperzine B)的含有量。方法石杉碱甲、乙酒石酸提取液的分析采用Wondasil C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇-醋酸铵溶液为流动相,等度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长310 nm;柱温室温。外标法定量。结果石杉碱甲、乙分别在0.002 0~0.30μg、0.001 8~0.27μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均加样回收率、RSD分别为103.86%(1.85%)、101.3%(1.30%)。17种石杉亚科植物中都含有石杉碱甲、乙,各物种之间含有量有显著性差异;喜马拉雅马尾杉中石杉碱甲含有量最高,达0.22%,柳杉叶马尾杉、有柄马尾杉和马尾杉含量也较高;马尾杉中石杉碱乙含有量最高。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于石杉亚科植物中石杉碱甲和石杉碱乙的质量控制。     

HPLC法测定6种石杉科植物中石杉碱甲的含量

目的 测定6种石杉科植物中石杉碱甲的含量。方法 用2％酒石酸溶液提取总碱，HPLC法测定，外标法定量。结果 石杉碱甲在所测定的5种石杉科植物蛇足石杉、皱边石杉、四川石杉、金丝条马尾杉、柳杉叶马尾杉中均有较高分布，分别达到0．0481％，0．0579％，0．0706％，0．0345％，0．1961％，在闽浙马尾杉中含量较少，仅为0．0061％。结论 方法简便、准确，可用于石杉碱甲资源的寻找。     

微波辅助萃取蛇足石杉总生物碱的工艺研究

蛇足石杉为厥类植物,属石松类石杉科(Huperziacease)石杉属(Huperzia),又名千层塔、蛇足草。蛇足石杉具有散瘀消肿、解毒、止痛功能,用于治疗瘀血肿痛、内伤吐血等。从蛇足石杉中提取分离得到的石杉碱甲(Hup A),是一种强效的可逆性胆碱酯酶抑制剂,在临床上主要用于治疗重症肌无     

不同条件对蛇足石杉组培苗生长及石杉碱甲积累的影响

目的:考察不同条件对蛇足石杉组培苗生长和石杉碱甲积累的影响。方法:通过添加不同浓度的组合激素、无机氮源、前体物、诱导子,考察其对蛇足石杉干重增长率和石杉碱甲含量的影响。结果:不同条件对蛇足石杉组培苗生长和石杉碱甲积累的影响不同,适当的组合激素和无机氮源利于蛇足石杉组培苗的生长,前体物和适当的诱导子利于石杉碱甲的积累。其中0.50 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)IBA的激素组合对蛇足石杉组培苗的生长促进效果最显著,其干重增长率在培养12周时约是对照组的1.32倍,而0.5 mmol·L~(-1)的赖氨酸对石杉碱甲积累的调控效果最好,与对照相比,在培养12周时,石杉碱甲含量提高了71.46%。结论:本研究初步实现了对蛇足石杉组培苗生长和石杉碱甲积累的调控,为通过千层塔的组织快繁缓解石杉碱甲的资源短缺提供了理论基础。     

长柄石杉L-赖氨酸脱羧酶基因克隆及序列分析

目的在对长柄石杉Huperzia serrata、闽浙马尾杉Phlegariurus minchegensis、华南马尾杉Phlegariurus austrosinicus和有柄马尾杉Phlegariurus petiolatus 4种石杉科植物的L-赖氨酸脱羧酶(L-lysine decarboxylase,LDC)基因编码区进行克隆的基础上,对长柄石杉的LDC基因全长序列进行分析并预测其蛋白结构。方法采用RT-PCR技术,以石杉科植物叶片提取的总RNA为模板克隆得到LDC基因编码区序列,通过BLAST比对和MEGA5.0软件对克隆的序列进行分析。采用RACE技术获得石杉科广布种长柄石杉的LDC基因全长序列,并对其蛋白的二级结构及三维结构进行预测分析。结果克隆的4种石杉科植物LDC基因序列与数据库中被注释为编码LDC的基因序列保持高度的相似性,长柄石杉LDC蛋白与NCBI中的蛇足石杉LDC氨基酸序列相似度很高,与蕨类植物江南卷柏的同源性也较高。长柄石杉LDC基因编码区全长为1 266 bp,编码403个氨基酸,Gen Bank登录号KF040056。结论克隆得到4种石杉科植物的LDC基因,分析了长柄石杉LDC基因的全长序列并预测其蛋白结构,为进一步阐明石杉科植物石杉碱甲生物合成途径奠定基础。     

高效液相色谱法测定昆明石杉中石杉碱甲的含量

目的 采用高效液相色谱(HPLC)法测定昆明石杉中石杉碱甲的含量.方法 采用ZORBAX SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:0.02mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(92:8),检测波长:310 nm.结果 石杉碱甲在0.015～0.048μg之间与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 95),平均回收率为99.63%,RSD为0.56%.结论 首次对昆明石杉中石杉碱甲的含量进行测定,该方法易行、灵敏、准确.     

HPLC法测定不同季节千层塔中石杉碱甲和石杉碱乙含量

目的:考察不同季节千层塔药材中石杉碱甲、乙的含量,为确定千层塔的最佳采收期提供依据。方法:采用超声提取方法进行样品的制备;用HPLC方法测定千层塔中石衫碱甲、石衫碱乙的含量。结果:石杉碱甲、乙线性范围分别为0.050μg-1.000μg、0.031μg-0.620μg,回收率分别为100.1%(RSD:0.72%,n=6)、99.5%(RSD:1.1%,n=6)。不同采收期千层塔中的石衫碱甲、石衫碱乙的含量差异较大,其中8月份的含量最高,为0.0236%、0.0124%。结论:该研究可为千层塔最佳采收期的确定提供参考,以8月份为千层塔药材的最佳采收时期。     

基于叶绿体matK基因序列探讨10种石杉科石杉属植物的系统关系及分子鉴定

目的:利用叶绿体matK基因序列探讨10种石杉属植物的系统发育及分子鉴定.方法:分别从9种石杉属植物中提取总DNA,经扩增纯化后,用PCR产物直接测序.结果:对石杉属Huperzia Bernh.9个种的叶绿体matK基因进行了测序,序列长度为1 589 bp,并对10个种(亮叶石杉H.lucidula的matK基因序列从GenBank中下载)的matK序列进行比对,其中有35个系统发育信息位点及35个变异位点,以垂穗石松Lycopodiella cernua为外类群,利用MEGA 3.1软件计算种与种之间的遗传距离在1.59%～0.25%,并构建系统树,获得最简约树和邻接树.结论:小杉兰组和蛇足石杉组植物分别聚成一枝,构成姊妹群,其靴带支持率分别为98%和99%.长柄石杉与蛇足石杉分别聚在2个不同进化枝,二者间有19个碱基差异,遗传距离为1.21%.建议应将长柄石杉单独列为一个种.     

不同产地皱边石杉中石杉碱甲的含量研究

目的 :采用HPLC测定湖南不同产地皱边石杉中的石杉碱甲含量。方法 :采用NovapakC18柱 ( 5 μm ,15 0mm×4 .6mm) ,流动相 :甲醇∶水 ( 4 0∶6 0 ) ,流速 :1mL·min-1,检测波长 :315nm。结果 :石杉碱甲在 4 .2～ 2 1μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系 ,桑植产皱边石杉中石杉碱甲含量最高。结论 :皱边石杉中石杉碱甲的含量随着外界环境的改变而改变 ,所建立的HPLC方法快捷、灵敏、准确。     

热带石松科植物中石杉碱甲的含量差异(英文)

(-) Huperzine A is a bioactive alkaloid from Huperzia serrata (Lycopodiaceae) used for the treatment of Alzheimer’s disease. High yielding (-) huperzine A species is of interest for mass propagation since it grows slowly in temperate countries. The content of (-) huperzine A from temperate countries was reported but none reported from tropical species. The aim of this study was to evaluate the content of (-) huperzine A from tropical club mosses and further identify a high yielding species. Club mosses from Lycopodiaceae family were collected from Peninsular Malaysia. The collected club mosses were dried, pulverized and extracted with methanol. A gradient reverse phase HPLC-photodiode array detector method with increasing amount of methanol in 0.01 % trifluoroacetic acid was developed. The calibration curve was linear from 5 to 100 g·mL-1 with correlation coefficient, r2, of 0.998 1. The precision for both intra-and inter-day peak area were between 0.48% to 1.24 % and 0.95% to 3.85 %, respectively. The recovery of the method was between 99.8% to 103.8 %. Though geographically segregated, (-) huperzine A content in Huperzia phlegmaria and H.carinata found in the tropics was highest and similar to species in Australasia. Both species may provide a good source of (-) huperzine A.     

产生物碱和石杉碱甲蛇足石杉内生真菌的初步研究

 目的 筛选产生物碱和石杉碱甲的内生真菌。方法 以分离自健康蛇足石杉植株组织中的14株内生真菌为材料,采用酸性染料比色法筛选产生物碱的菌株;在此基础上,对内生真菌发酵液进行HPLC测定,分析是否产生石杉碱甲;并利用形态学和rDNA ITS序列分析进行菌种的初步鉴定。结果 筛选出8株产生物碱的菌株,并从中筛选出一株产生石杉碱甲的内生真菌SY-02,初步鉴定内生真菌SY-02为1株炭角菌。结论 在分离自蛇足石杉的内生真菌中,能产生生物碱的真菌比例较高,内生真菌菌株SY-02能在发酵条件下产生石杉碱甲。以产生物碱的菌株为出发菌株,结合活性及结构检测,可以使产石杉碱甲内生真菌的筛选更具有方向性。     

A survey of potential huperzine A natural resources in China: the Huperziaceae

The Huperziaceae is comprised of two genera, Huperzia and Phlegmariurus. Because of the content of Lycopodium alkaloids like huperzine A, which are used to treat a number of human ailments, plants of the Huperziaceae are experiencing a rapid decline in China, mostly due to over-harvesting. Because of this trend, we engaged from 1995 to 2001 in an investigation of the natural resources of the Huperziaceae in China. The main objectives of this study were: to catalog Huperziaceae plant resources including the occurrence, general distribution, and abundance of the various Huperziaceae species in China; and to determine traditional use and pharmaceutical values of each species. Twenty-nine species, 2 varieties, and 2 forma of Huperzia and 19 species of Phlegmariurus were identified through field investigation, collection, visits with local traditional doctors, and review of specimens in herbaria and of the literature. Ethnobotanical studies of these plants revealed that 33 of these species are used by the local communities for medicinal purposes. One species, Huperzia serrata, is one of the most popular. As a result, it is observing the greatest decline, mandating a change in collection practice and general attitude towards these plants. Introduction of conservation plans and training of the local communities regarding appropriate collection practices of these plants and their marketing in China are required to reverse the trend of decline among these species. In addition, development of cultivation or other propagation practices, such as in vitro propagation, would have the added benefits of socio-economic uplift of the local communities and sustainability of this important source of huperzine A.     

分光光度法测定蛇足石杉中总黄酮含量

目的建立蛇足石杉中总黄酮含量的测定方法。方法以芦丁为对照品,采用分光光度法在510 nm处测定蛇足石杉中总黄酮的含量。结果芦丁浓度在8.16~57.12μg/ml范围内与吸光度值呈良好的线性关系,回归方程为A=10.649C 0.00557,r=0.9982,平均回收率为96.88%,RSD=2.53%。结论该测定方法简便、快速,准确,可作为测定蛇足石杉中总黄酮含量的方法。     

珍稀药源植物蛇足石杉(千层塔)研究进展

千层塔由于其治疗老年痴呆等疾病具有特殊的药用价值和潜在的巨大经济价值,正日益受到国内外的关注.该文综述了近年来国内外对千层塔的生物学特性、资源分布、内部显微结构、繁育、石杉碱甲提取分离及药理等方面的研究现状,并提出一些建议,对未来千层塔的研究进行了展望.     

蛇足石杉HsCAS1基因克隆及序列分析

本研究对蛇足石杉(Huperzia serrata)环阿屯醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)基因HsCAS1编码区进行克隆及序列分析。根据本实验室已获得的蛇足石杉转录组数据,从中获得1条具有环氧角鲨烯环化酶保守结构域的编码CAS的转录本,采用RT-PCR方法获得该基因的编码区序列,并对HsCAS1蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析。利用实时荧光定量PCR方法检测HsCAS1基因在蛇足石杉的根、茎、叶中的表达情况。序列分析表明,所克隆的HsCAS1基因编码区长为2,271 bp,编码756个氨基酸残基,HsCAS1与紫果冷杉(Abies magnifica)的CAS具有61%的序列相似性。生物信息学预测HsCAS1蛋白含有3个跨膜区,具有萜类环化酶等保守结构域,不含信号肽。HsCAS1在蛇足石杉的根中表达丰度高于茎和叶。本研究在国内外首次获得蛇足石杉HsCAS1基因的编码区序列,为进一步研究HsCAS1在石杉科植物甾醇合成途径中的功能及鉴定酶活性位点奠定基础。     

微生物对蛇足石杉扦插生根及若干生理生化指标的影响

目的:研究原生境土壤微生物、内生真菌和根表真菌对蛇足石杉扦插生根率和若干生理生化指标的影响。方法:蛇足石杉分别在原生境土壤(土壤Ⅰ)、接种了内生真菌和根表真菌的灭菌土壤(土壤Ⅱ)、灭菌土壤(土壤Ⅲ)上进行扦插,调查蛇足石杉扦插生根率,测定可溶性蛋白含量,可溶性糖含量,PPO(多酚氧化酶),POD(过氧化物酶)活性、黄酮类化合物和石杉碱甲含量。结果:与土壤Ⅲ上的扦插蛇足石杉相比,土壤Ⅰ和土壤Ⅱ上植株生根率,分别提高了10%和16%,土壤Ⅱ上扦插植株茎中的可溶性蛋白含量显著提高(P<0.05),土壤Ⅰ上扦插植株叶片和茎中的可溶性糖含量显著提高(P<0.05),土壤Ⅰ和土壤Ⅱ上的扦插植株的黄酮类化合物含量显著提高。结论:原生境土壤微生物、内生真菌和根表真菌对扦插蛇足石杉的生根有促进作用,提高蛇足石杉体内的代谢水平。     

Huperzine A from Huperzia species--an ethnopharmacolgical review

Huperzine A (HupA), isolated originally from a traditional Chinese medicine Qiang Ceng Ta, whole plant of Huperzia serrata (Thunb. ex Murray) Trev., a member of the Huperziaceae family, has attracted intense attention since its marked anticholinesterase activity was discovered by Chinese scientists. Several members of the Huperziaceae (Huperzia and Phlegmariurus species) have been used as medicines in China for contusions, strains, swellings, schizophrenia, myasthenia gravis and organophosphate poisoning. HupA has been marketed in China as a new drug for Alzheimer's disease (AD) treatment and its derivative ZT-1 is being developed as anti-AD new drug candidate both in China and in Europe. A review of the chemistry, bioactivities, toxicology, clinical trials and natural resources of HupA source plants is presented.     

蛇足石杉1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸 还原异构酶（HsDXR1）基因克隆与表达分析

基于本实验室已获得的蛇足石杉转录组数据,获得一个编码1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶（1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase,DXR）的转录本,分析其开放阅读框序列,发现该转录本编码全长为1 440 bp 的蛇足石杉DXR 基因（HsDXR1）,含有479 个氨基酸残基。采用RT-PCR 方法获得了HsDXR1 全长,并对HsDXR1 编码蛋白的理化性质、结构域及三维结构进行预测分析。结果显示HsDXR1 编码蛋白的预测分子量为51.496 1 kDa,等电点为6.44;不含信号肽和跨膜区;亚细胞定位预测表明该蛋白最可能定位于叶绿体;具有DXR 蛋白典型的结构域。实时荧光定量PCR 检测HsDXR1 基因在蛇足石杉的茎中表达量最高,其次为根,在叶中表达量最低。本研究获得了蛇足石杉HsDXR1 基因的编码区序列,为进一步研究HsDXR1 在蛇足石杉萜类化合物生物合成途径中的功能奠定基础。