姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠突触 相关蛋白表达的影响

目的:观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白突触后致密蛋白-95(postsynaptic densityprotein-95,PSD-95)和骨架蛋白Shank1表达的影响。方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮阳性对照组(10 mg.kg-1.d-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,100 mg.kg-1.d-1),正常对照组为相同背景非转基因小鼠。灌胃3个月后,应用免疫组织化学和Western blot方法进行检测。结果:行为学检测,治疗组与模型组相比定位航行实验和空间探索实验存在不同程度的差异(P<0.01或P<0.05)。PSD-95和Shank1免疫组化,模型组小鼠大脑海马CA1区较对照组阳性细胞明显减少(P<0.01),姜黄素干预组有所恢复。Western blot检测海马PSD-95的蛋白结果显示,模型组小鼠海马PSD-95的蛋白表达条带均比对照组小鼠明显变细、颜色变浅(P<0.01);姜黄素干预组小鼠海马PSD-95的蛋白表达条带均明显增粗、颜色加深(P<0.05)。结论:姜黄素增加APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白shank1和PSD-95表达,改善APP/PS1双转基因小鼠突触的结构和可塑性,提高空间学习记忆能力。     

远志皂苷元对APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白表达的影响

目的观察远志皂苷元(TEN)对APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白PSD-95和Shank-1表达的影响。方法 50只转基因小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组、TEN低剂量组、TEN中剂量组、TEN高剂量组5组。同月龄C57BL/6J小鼠10只作为对照,分别给予多奈哌齐和不同剂量的TEN,对照组和模型组给予等剂量的双蒸水。3个月后,用免疫组织化学和Western blot方法检测突触相关蛋白PSD-95和Shank-1的表达。结果与对照组比较,APP/PS1双转基因小鼠海马PSD-95和Shank-1阳性细胞数明显减少,PSD-95和Shank-1蛋白表达降低;TEN各剂量组PSD-95和Shank-1阳性细胞数及蛋白表达较模型组均明显增加(P0.01)。结论 TEN能够增加APP/PS1双转基因小鼠PSD-95和Shank-1的表达,对突触的功能和可塑性具有改善作用。     

洗心汤对APP/PS1双转基因小鼠突触功能相关蛋白及受体表达的影响

目的观察洗心汤对APP/PS1双转基因小鼠空间学习记忆能力、海马CA1区突触超微结构和突触功能相关蛋白及受体表达的影响,初步探讨洗心汤方治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法选用8周龄雄性APP/PS1双转基因小鼠,分为模型组、盐酸多奈哌齐组、洗心汤组,另以同窝阴性小鼠设立空白对照组,每组15只。连续灌胃给药6个月后进行相关指标检测。采用Morris水迷宫实验观测APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力;透射电镜观察小鼠海马CA1区突触超微结构;分别采用免疫荧光法及免疫印迹法检测APP/PS1转基因小鼠海马CA1区突触后致密物质-95(PSD95)、N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NMDAR2B)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、生长相关蛋白43(GAP43)表达水平。结果与空白对照组比较,模型组逃避潜伏期延长,在目的象限游泳距离与穿越平台次数的百分比降低(P0.01);与模型组比较,洗心汤组小鼠逃避潜伏期均值总体下降(P0.01,P0.05),在目的象限游泳距离及穿越平台的次数占总路程与总穿越平台次数的百分比显著增加(P0.01,P0.05)。电镜结果表明,洗心汤组较模型组神经元细胞密集,细胞核多为圆形,核内染色质轻度凝集,核仁可见;细胞质内线粒体轻度肿胀,粗面内质网轻度扩张,游离核糖体丰富,脂褐素颗粒少见,突触结构基本清晰。免疫荧光结果表明,海马CA1区PSD95、NMDAR2B、MBP、GAP43蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01),免疫印迹实验中其含量亦呈现高表达水平(P0.05,P0.01)。结论洗心汤对APP/PS1转基因小鼠的空间学习记忆功能具有明显的改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构,提高小鼠海马突触功能蛋白及受体表达有关。     

调心方对AD大鼠脑组织抗氧化能力的影响

目的：观察调心方对AD大鼠脑组织SOD、GSH—PX活性和MDA含量以及空间学习记忆能力等的影响。方法：采用二羟延胡索酸(DHF)加FeCl3-ADP左侧脑室注射法，复制氧化损伤型类AD大鼠模型：Morris水迷宫法检测大鼠空间记忆能力的变化；分光光度法测定大鼠脑组织SOD、GSH—PX活性和MDA含量；电镜观察大鼠脑线粒体超微结构变化，以及调心方对上述各项指标的作用。结果：调心方能明显改善模型大鼠低下的空间学习记忆能力，显著提高模型大鼠脑SOD，GSH—PX酶活性及降低MDA含量，而且调心方能明显改善模型大鼠线粒体超微结构的异常变化。结论：调心方能够通过提高脑内抗氧化酶(SOD、GSH—PX)活性，降低MDA含量，防止AD大鼠遭受活性氧损伤，从而保护线粒体结构免遭受损，改善能量代谢,进而防治AD的发生与发展。     

电针对APP/PS1转基因AD鼠Morris水迷宫学习记忆及脑皮层Aβ水平的影响

目的：探讨电针对5月龄APP/PS1转基因AD模型鼠学习记忆行为学及脑皮层Aβ水平的影响。方法：20只APP/PS1转基因阳性雄鼠随机分为模型组、电针组,每组各10只,APP/PS1转基因阴性雄鼠10只为对照组,电针组针刺＂百会＂、＂涌泉＂后接电针仪,疏密波,每次针刺持续15 min,隔日1次;对照组、模型组以相同方法用鼠袋束缚15 min,隔日1次,3组都持续5周,以Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,用免疫组化方法检测脑皮层Aβ1-40、Aβ1-42的表达。结果：3组间的逃避潜伏期差异有统计学意义（P〈0.05）,电针组与模型组之间的差异有统计学意义（P〈0.05）。免疫组化电针组Aβ1-40、Aβ1-42的表达降低。结论：电针或许通过减少Aβ的生成来提高APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力。     

调心方活性部位对大鼠海马脑片CA1区诱发LTP的影响

目的：研究调心方活性部位A对大鼠海马脑片诱发长时程增强(LTP)效应的影响。方法：采用细胞外微电极记录技术，记录大鼠海马脑片CA1区诱发群峰电位(PS)，然后施以100Hz，100串的强直刺激诱发LTP。结果：调心方活性部位A对大鼠海马脑片正常PS的形状、幅度无影响，提示并不影响海马的基础突触传递。给予强直刺激后，高浓度活性部位A可以明显增大LTP幅度，提示具有促进和维持LTP的作用。结论：调心方活性部位A可能是调心方促进和维持大鼠海马脑片诱发LTP的有效成分之一，对LTP的促进作用也是调心方活性部位A益智作用的机制之一。     

电针“百会”“涌泉”对APP/PS1双转基因小鼠海马突触可塑性相关蛋白表达的影响

目的:从β-淀粉样蛋白(Aβ)对突触的毒性作用和突触可塑性的角度探讨电针在阿尔茨海默病病理前期改善学习记忆能力的机制。方法:将12只4月龄雄性APP/PS1转基因小鼠随机分为电针组和模型组,每组6只;以6只4月龄雄性C57BL/6小鼠作为正常组。电针组针刺"百会""涌泉"穴,双侧"涌泉"穴接电针,每次电针15 min,每周3次,连续6周。采用免疫荧光法观察小鼠左侧海马Aβ阳性表达水平,免疫组织化学法观察小鼠左侧海马突触后致密物-95(PSD-95)的阳性表达,Western blot法检测小鼠右侧海马PSD-95和突触素(SYN)的蛋白表达水平。结果:免疫荧光结果显示,模型组和电针组海马区可见细胞外的Aβ,但未见团状老年斑;与正常组比较,模型组海马区Aβ表达水平显著增加(P<0.01);与模型组比较,电针组海马区Aβ表达水平减少(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,与正常组比较,模型组左侧海马区PSD-95阳性表达减少(P<0.05);与模型组比较,电针组左侧海马区PSD-95阳性表达增加(P<0.05)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组...     

楮实子对APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生的影响

目的探讨楮实子对APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生的影响。方法 40只APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性药组(10 mg/kg多奈哌齐)及楮实子低、高剂量组(1.8、3.6 g/kg),C57BL/6小鼠作为对照组,每组10只,灌胃给药6周。然后,Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,TUNEL法检测小鼠海马区神经细胞凋亡,免疫荧光染色法检测小鼠海马区NeuN/BrdU阳性细胞表达,Western blot法检测GSK-3β、β-catenin蛋白表达。结果与模型组比较,楮实子高剂量组学习记忆能力显著改善(P<0.05),凋亡细胞数显著减少(P<0.01),NeuN/Brdu阳性细胞数显著增加(P<0.01),GSK-3β蛋白表达显著降低(P<0.05),β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论楮实子能促进APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

独活香豆素对APP/PS1双转基因小鼠的神经保护作用

目的 :探讨独活香豆素(total coumarine of Angelica pubescentis,TCA)处理对APP/PS1双转基因阿尔茨海默模型小鼠的神经保护作用。方法:将7月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、独活香豆素高(14.4 mg/kg)、中(7.2 mg/kg)、低剂量组(3.6 mg/kg),每组10只。药物处理后,采用HE染色、尼氏染色检测独活香豆素对阿尔茨海默模型小鼠脑内椎体细胞和尼氏体的影响,用免疫荧光组织化学法观察脑内神经元的变化,并采用Hoechst33258染色观察神经细胞凋亡。结果:病理学观察结果显示:独活香豆素(14.4 mg/kg)组较阿尔茨海默模型组的小鼠椎体细胞数增加(77.56±5.82个/mm2),并且尼氏体数量增加;免疫荧光组化结果显示独活香豆素(14.4 mg/kg)组小鼠脑内海马区中分子量神经丝蛋白荧光强度(83.25±10.74%)明显高于模型组(26.28±3.08%);同时,独活香豆素(14.4 mg/kg)组显著减少凋亡细胞数(14.08±3.27%)。结论:独活香豆素14.4 mg/kg能够减少阿尔茨海默模型小鼠脑内神经性损伤,是通过增强中分子量神经丝蛋白表达和减少细胞凋亡。     

督脉电针对APP/PS1双转基因痴呆小鼠行为学和海马区Aβ沉积的影响

目的观察督脉电针对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠行为学和海马区β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)表达的影响,探讨针刺疗法抗痴呆的作用机制。方法 7月龄雄性APP/PS1小鼠共20只,随机分为模型组,电针组,每组10只。以相同遗传背景的C57BL/6小鼠10只作为正常对照组,选取"百会""印堂""人中",隔天针刺干预1次,共15次。采用Morris水迷宫观察各组小鼠学习记忆能力变化,采用免疫组化法观察各组小鼠海马区Aβ表达含量。结果与对照组比较,模型组逃避潜伏期增长(P<0.01),游泳距离增加(P<0.01),游泳速度无统计学差异,首次跨越原平台时间延长(P<0.01),距原平台平均距离增加(P<0.01),海马区Aβ表达增多(P<0.01);与模型组比较,电针组逃避潜伏期缩短、游泳距离减少(均P<0.01),游泳速度无统计学差异,首次跨越原平台时间减少、距原平台平均距离缩短(均P<0.05),海马区Aβ表达减少(P<0.01)。结论督脉电针干预可降低Aβ沉积,而提高APP/PS1双转基因小鼠学习记忆和空间探索能力。     

白藜芦醇对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的改善作用

目的探讨白藜芦醇对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的改善作用。方法 50只小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组(10 mg/kg)及白藜芦醇低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg),每组10只,10只C57BL/6小鼠作为对照组,各组灌胃给药40 d。Morris水迷宫定位航行实验和空间探索实验分别检测小鼠学习记忆能力,免疫荧光法检测小鼠海马区星形胶质细胞表达,RT-PCR法和ELISA法分别检测小鼠海马区IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达和水平。结果与模型组比较,白藜芦醇组缩短逃避潜伏期,增加穿越平台次数和目标象限停留时间,降低星形胶质细胞表达及IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达和水平,以中、高剂量组更显著(P0. 05,P0. 01)。结论白藜芦醇可改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制星形胶质细胞增生和炎性因子释放、减轻炎症反应有关。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠海马IRS-1和p-IRS-1表达的影响

目的:观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)和磷酸化胰岛素受体底物-1(p-IRS-1)表达的影响.方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照罗格列酮组(10mg.kg-1·d-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,l00mg.kg-1·d-1),正常对照组为相同背景非转基因小鼠.灌胃3个月后,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR方法进行检测.结果:IRS-1和p-IRS-1免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区IRS-1阳性细胞较对照组明显增加(P＜0.01),p-IRS-1明显减少(P＜0.01);与模型组相比,姜黄素各干预组可减少IRS-1阳性细胞数(P＜0.05或P＜0.01),并升高p-IRS-1阳性细胞数(P＜0.05或P＜0.01).Westem blot检测海马IRS-I和p-IRS-1的蛋白表达结果与免疫组织化学检测结果一致.RT-PCR检测IRS-1 mRNA表达结果与免疫组织化学和Western blot结果相反.结论:姜黄素可以使APP/PS1双转基因小鼠海马增加的IRS-1和减少的p-IRS-1得以恢复,并增加IRS-1 mR-NA表达,改善APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导,提示姜黄素可能通过调节胰岛素信号转导机制发挥抗AD作用.     

电针“百会”、“涌泉”两穴对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆行为与海马超微结构的影响

目的观察电针对淀粉样前蛋白/早老蛋白1(amyloid precursor protein/presenilin-1,APP/PS1)双转基因鼠空间学习记忆行为及海马超微结构的影响。方法将4月龄的APP/PS1双转基因小鼠按随机分配法分为模型组、电针组和药物组,以相同月龄同窝阴性小鼠作为对照组,每组12只。电针组取"百会"、"涌泉"两穴,每次留针时间为15分钟,隔日1次,针刺5周;药物组予乙酰胆碱酶抑制剂0.92 m L/g灌胃。Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力及空间探索能力,取脑做海马CA1区透射电镜片并观察。结果 Morris水迷宫检测四天小鼠上台潜伏期结果显示:模型组与对照组比较有统计学差异(P0.05);空间探索实验:模型组在原有平台象限(第三象限)区域活动时间明显低于对照组(P0.05);透射电镜结果显示:在微血管、神经元突触及神经元超微结构上对照组优于模型组。结论电针治疗可改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力,并对海马超微结构有良性调节作用,这些表现可能是电针改善AD小鼠学习记忆行为学的机制之一。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠海马CA1区AKT及p-AKT表达的影响

目的: 观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠丝/苏氨酸激酶(serine-threonine kinase, AKT,又称PKB)和磷酸化的丝/苏氨酸激酶(phosphorylated serine-threonine kinase, 即p-AKT)表达的影响. 方法: 将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为5组,分别为模型组、罗格列酮组(10 mg·kg^-1·d^-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,100 mg·kg^-1·d^-1),选取同月龄同背景的非转基因小鼠为对照组.连续灌胃3个月后,应用免疫组织化学和Western blot方法检测小鼠海马CA1区中AKT和p-AKT的蛋白表达. 结果: 免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区AKT和p-AKT阳性细胞均较对照组明显减少(P<0.05,P<0.01),与模型组相比,罗格列酮组与姜黄素高、中剂量组AKT和p-AKT阳性细胞均有明显恢复(P<0.05,P<0.01),其中姜黄素中剂量组p-AKT阳性细胞数增加最为显著(P<0.01).Western blot检测结果与免疫组化结果基本一致. 结论: 姜黄素可以使AD模型APP/PS1双转基因小鼠海马CA1区中减少的AKT和p-AKT细胞有所恢复,提示姜黄素可能通过调节AKT及其磷酸化过程,从而进一步调节PI3K/AKT途径的胰岛素信号转导通路发挥抗AD作用.     

葛根素减轻APP/PS1双转基因小鼠的认知障碍和tau蛋白过磷酸化

该实验利用APP/PS1双转基因模型小鼠,观察葛根素对小鼠学习记忆能力及tau蛋白磷酸化的影响。选用APP/PS1双转基因模型小鼠,3个月龄后开始灌胃给药。给药3个月后,通过Morris水迷宫实验测试小鼠学习记忆能力的变化;行为学测试结束后,处死动物,留取脑组织标本,ELISA法检测皮层Aβ水平;Western blot法检测皮层tau蛋白、磷酸化tau蛋白、GSK3β及磷酸化GSK3β(Ser9)蛋白表达情况。Morris水迷宫实验显示,APP/PS1双转基因模型小鼠逃避潜伏期较正常对照组明显延长,原象限停留时间明显缩短。葛根素组小鼠逃避潜伏期较模型组明显缩短,原象限停留时间明显延长。与正常对照组比较APP/PS1双转基因模型小鼠皮层Aβ水平增多,磷酸化tau蛋白表达显著增加,磷酸化GSK3β(Ser9)蛋白表达降低;给予葛根素后,APP/PS1转基因小鼠寻台潜伏期明显缩短,Aβ水平减少,磷酸化tau蛋白表达显著减少,磷酸化GSK3β(Ser9)蛋白表达增加。葛根素通过减少Aβ的生成,激活GSK3β信号通路,抑制tau蛋白磷酸化,改善APP/PS1双转基因模型小鼠的学习记忆损害。     

阿里红多糖对APP/PS1双转基因小鼠神经损伤的保护作用

目的:探讨阿里红多糖对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠的神经保护作用。方法:将SPF级40只3月龄APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分成5组,分别为模型组、盐酸多奈哌齐0.65 mg/kg组,阿里红多糖50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg组;8只C57小鼠作为正常对照组。连续灌胃给药90 d。采用Morris水迷宫法测定小鼠空间学习记忆能力,通过比色法测定小鼠脑组织中SOD、GSH-Px、AchE活性和MDA含量的变化;采用HE染色观察小鼠脑神经元形态和脑组织病理学变化;刚果红染色法和免疫印迹法检测各组小鼠脑组织中与神经元损伤相关的APP、Aβ_(1-40),以及TrkA的含量变化。结果:在水迷宫实验中,相比正常组小鼠,模型组小鼠的学习记忆能力均有所下降,海马组织内SOD、GSH-Px、AchE酶活性明显下降,MDA含量明显升高;与模型组相比,阿里红多糖各组小鼠活动量均增加,学习记忆能力得到不同程度的恢复,SOD、GSH-Px、AchE活性升高, MDA含量降低。在免疫组化染色和免疫印迹实验中,相比正常对照组小鼠,模型组小鼠(0.5%CMC)的脑组织中明显可见坏死的神经元,APP、Aβ_(1-40)蛋白沉积数量增多,TrkA含量下降;而阿里红多糖给药各组神经元数量不同程度增多,体积变大,坏死情况得以不同程度改善,APP、Aβ_(1-40)含量降低,TrkA含量升高。结论:天然药物阿里红多糖能明显改善阿尔茨海默病AD小鼠的学习记忆能力,促进神经元生长,对AD小鼠具有神经保护作用。     

红花黄色素对APP/PS 1双转基因小鼠脑组织中胶质细胞活化及炎症因子释放的影响

目的:探讨红花黄色素(SY)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease AD)转基因小鼠学习记忆能力的影响及其对脑组织中胶质细胞活化和炎症因子释放的影响。方法:选用6月龄APP/PS 1双转基因小鼠60只,随机分成5组:转基因组、多奈哌齐组(0.75 mg/kg)、红花黄色素10、30、100 mg/kg剂量组,同月龄野生型C57BL/6小鼠12只作为对照组,其中转基因组与对照组灌胃相应体积的生理盐水。连续3个月灌胃给予相应药物治疗后,进行Morris水迷宫实验。采用免疫组织化学法检测GFAP及CD45的表达,ELISA试剂盒测定各组小鼠皮层中IL-6、IL-8及TNF-α的表达。结果:与野生型小鼠相比,转基因组小鼠空间学习记忆能力明显下降,皮层及海马CA1、CA3、DG区的CD45、GFAP表达水平均增高,皮层组织中TNF-α、IL-6、IL-8水平显著增加。经红花黄色素治疗后,红花黄色素10、30、100 mg/kg剂量组学习记忆能力显著改善,其对GFAP、CD45、IL-6、IL-8及TNF-α的表达具有显著降低的作用;红花黄色素100 mg/kg剂量组对转基因小鼠海马各区CD45、皮层及海马部位GFAP以及皮层IL-6、IL-8的表达均有显著降低的作用;红花黄色素10 mg/kg剂量组对小鼠大脑海马CA1、CA3及皮层部位的CD45、海马及皮层部位的GFAP、皮层IL-8的表达有显著降低的作用。结论:红花黄色素可以提高痴呆小鼠的学习记忆能力,同时可抑制脑组织胶质细胞活化,减轻皮层组织炎症损伤。