滋补脾阴方药对糖尿病脑病大鼠脑组织PDHE1α蛋白表达的影响

目的观察滋补脾阴方药对糖尿病脑病大鼠脑组织PDHE1α蛋白表达的影响,探讨其改善糖尿病脑病大鼠认知功能的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为空白对照组、糖尿病脑病组和滋补脾阴方药组,每组5只。采用高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ)注射法建立2型糖尿病大鼠模型。于STZ注射后第7、12、16日分别进行空腹血清胰岛素(FSI)检测、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素耐量试验(ITT)。滋补脾阴方药组给予滋补脾阴方药灌胃,其余组给予等体积生理盐水灌胃,共16d。采用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;Western blot检测大鼠海马和皮质PDHE1α蛋白表达。结果糖尿病脑病组大鼠随机血糖、FSI水平较空白对照组明显升高(P0.01)。OGTT结果显示,糖尿病脑病组大鼠从30 min开始,各时间点血糖均高于空白对照组大鼠(P0.01),且120 min血糖仍高于0 min血糖。ITT结果显示,糖尿病脑病组大鼠血糖下降速率低于空白对照组。水迷宫实验结果显示,第3日起,糖尿病脑病组大鼠逃避潜伏期较空白对照组明显延长(P0.05),出现空间记忆能力损伤;滋补脾阴方药组大鼠第3、5日逃避潜伏期较糖尿病脑病组明显缩短(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,糖尿病脑病组大鼠海马和皮质PDHE1α蛋白表达明显低于空白对照组(P0.01,P0.05),滋补脾阴方药组大鼠PDHE1α蛋白表达较糖尿病脑病组明显升高(P0.05)。结论糖尿病脑病认知功能损伤可能与PDHE1α蛋白表达降低有关,滋补脾阴方药可能通过提高脑组织PDHE1α蛋白表达改善糖尿病脑病大鼠的学习记忆能力。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠海马内质网应激影响的研究

目的:探讨滋补脾阴方药(ZiBu PiYin Recipe,ZBPYR)对脾阴虚糖尿病大鼠海马内质网应激相关分子表达的影响。方法:高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(streptozocin,STZ)注射建立2型糖尿病模型,在此基础上,通过复合因素造模的方法建立脾阴虚糖尿病模型,以水迷宫实验评价模型大鼠是否出现学习记忆障碍,之后观察各组大鼠海马内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和真核转录因子2的α亚单位(eukaryotic translation initiation factor 2 subunitα,eIF2α)表达的变化。结果:ZBPYR治疗后GRP78 mRNA水平降低(P0.05),GRP78、磷酸化PERK、磷酸化eif2α蛋白水平明显降低(P0.05),与脾阴虚糖尿病组相比,差异有统计学意义。结论:滋补脾阴方药可能是通过影响内质网应激PERK信号传导改善脾阴虚糖尿病大鼠学习记忆障碍。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠脑组织和外周组织丙酮酸脱氢酶1α蛋白表达的影响

目的探讨滋补脾阴方药改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍的作用机制。方法将大鼠随机分为空白组、糖尿病组、脾阴虚组、脾阴虚糖尿病组(病证组)、脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药组(治疗组)。采用高脂饮食喂养4周联合小剂量链脲佐菌素注射方法建立2型糖尿病模型。在此基础上采用饮食不节、劳倦过度及灌服伤阴药方法建立脾阴虚糖尿病模型。治疗组给予滋补脾阴方药灌胃,其余各组给予等体积生理盐水灌胃,连续15 d。取大脑皮质、海马及胃、肝组织,采用Western blot观察各组丙酮酸脱氢酶1α(PDHE1α)蛋白表达变化。结果糖尿病组和病证组大鼠皮质PDHE1α表达低于空白组(P0.05),治疗组皮质和胃组织PDHE1α较病证组升高(P0.05)。各组大鼠海马及肝组织中PDHE1α蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论滋补脾阴方药能够调节大脑皮质及胃组织中PDHE1α蛋白表达,改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍。     

滋补脾阴方药调节下丘脑中自噬及内质网应激改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍机制研究

目的：探讨滋补脾阴方药（ZBPYR）调节自噬及内质网应激（ERS）改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍的作用机制。方法：将大鼠随机分为空白对照组（cont）,糖尿病组（DM）,脾阴虚组（pi）,脾阴虚糖尿病组（piDM）,脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药治疗组（ZBPYR）。Western Blot观察微管相关蛋白1A/1B轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、抑制物阻抗性酯酶1α亚基（IRE1α）、c-Jun氨基端激酶（JNK）的蛋白表达。结果：DM组、pi组、piDM组LC3Ⅱ较cont组降低（P<0.05）,ZBPYR组LC3Ⅱ较DM组、piDM组增加（P<0.05）。与cont组比较,DM组、piDM组p-IRE1α、pi组、piDM组p-JNK1均有所增加（P<0.05）,ZBPYR组p-IRE1α、p-JNK1与DM组、piDM组比较有所降低（P<0.05）。结论：ZBPYR调节自噬及ERS改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠下丘脑胰岛素信号的调控作用

目的：通过观察胰岛素信号通路中关键分子的变化,进一步探讨脾阴虚糖尿病认知功能障碍的发病机制及滋补脾阴方药的作用机制,以期为糖尿病认知功能障碍的治疗提供新思路和新线索。方法：将大鼠随机分为空白对照组（Cont）,糖尿病组（DM）,脾阴虚组（pi）,脾阴虚糖尿病组（piDM）,滋补脾阴方药治疗组（ZBPYR）5 组。采用Western blotting 的方法观察下丘脑中胰岛素受体底物1（IRS-1）丝氨酸磷酸化水平及蛋白激酶C（PKC/Akt）丝氨酸磷酸化水平,以判定胰岛素信号传导是否出现障碍。结果：DM 组、pi组、piDM 组p-IRS-1ser 表达较Cont 组增加（P<0.05）,DM 组、piDM 组p-Akt 表达减弱（P<0.05）。ZBPYR 组p-IRS-1ser 较DM 组、piDM 组减弱（P<0.05）,p-Akt 表达较DM 组、piDM 组增加（P<0.05）。结论：DM 组、pi组、piDM 组大鼠下丘脑中胰岛素信号未正常向下传导,可能发生了胰岛素信号转导障碍。ZBPYR 具有纠正胰岛素信号转导障碍的作用。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质内质网应激的影响

目的观察脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质磷酸化(p)RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、真核起始因子2α-亚单位(eIF2α)、p-eIF2α、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的变化,探讨脾阴虚糖尿病相关认知下降发病机制及滋补脾阴方药的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、糖尿病组、脾阴虚组、脾阴虚糖尿病组(病证组)、脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药组(治疗组)。采用高脂喂养4周联合小剂量链脲佐菌素注射方法建立2型糖尿病模型。在此基础上采用饮食不节、劳倦过度及灌服伤阴药方法建立脾阴虚糖尿病模型。治疗组给予滋补脾阴方药灌胃,其余各组给予等体积生理盐水灌胃,连续15 d,取大脑皮质。采用Western Blot、RT-PCR方法观察PERK、eIF2α、p-eIF2α、GRP78表达变化。结果糖尿病组、脾阴虚组、病证组PERK、p-eIF2α蛋白表达及GRP78 mRNA表达较对照组增强(P0.05),糖尿病组、病证组GRP78蛋白表达较对照组增强(P0.05),治疗组上述分子表达较糖尿病组、病证组均减弱(P0.05)。结论内质网应激参与脾阴虚糖尿病相关认知下降的发病,滋补脾阴方药通过减轻内质网应激改善学习记忆障碍。     

滋补脾阴方药调节下丘脑中自噬及内质网应激改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍机制研究＊

目的：探讨滋补脾阴方药（ZBPYR）调节自噬及内质网应激（ERS）改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍的作用机制。方法：将大鼠随机分为空白对照组（cont）,糖尿病组（DM）,脾阴虚组（pi）,脾阴虚糖尿病组（piDM）,脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药治疗组（ZBPYR）。Western Blot观察微管相关蛋白1A/1B轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、抑制物阻抗性酯酶1α亚基（IRE1α）、c-Jun氨基端激酶（JNK）的蛋白表达。结果：DM组、pi组、piDM组LC3Ⅱ较cont组降低（P<0.05）,ZBPYR组LC3Ⅱ较DM组、piDM组增加（P<0.05）。与cont组比较,DM组、piDM组p-IRE1α、pi组、piDM组p-JNK1均有所增加（P<0.05）,ZBPYR组p-IRE1α、p-JNK1与DM组、piDM组比较有所降低（P<0.05）。结论：ZBPYR调节自噬及ERS改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍。     

滋补脾阴法对脾阴虚糖尿病大鼠脑组织β淀粉样蛋白及胰岛素降解酶的调节作用

目的：观察脾阴虚糖尿病大鼠海马及大脑皮质中不同形式的β淀粉样蛋白（Aβ）、胰岛素降解酶（IDE）变化,及其在脾阴虚糖尿病认知功能障碍中的作用,并观察滋补脾阴法对其影响。方法：将大鼠随机分为空白对照组（Cont）、糖尿病组（DM）、脾阴虚组（pi）、脾阴虚糖尿病组（piDM）、滋补脾阴方药治疗组（ZBPYR）5 组。采用梯度离心的方法提取可溶性与不可溶Aβ,通过ELISA 方法测定各组大鼠海马及大脑皮质中可溶性与不可溶的Aβ1-42 及Aβ1-40 的含量变化,通过Western blot 方法观察各组大鼠海马及皮质中IDE 蛋白表达变化。结果：DM 组、piDM 组大鼠海马、大脑皮质可溶性与不可溶Aβ1-42 均高于Cont 组（P<0.05）,ZBPYR 组较DM 组、piDM 组降低了海马、大脑皮质可溶性与不可溶Aβ1-42 的表达（P<0.05）。DM 组、pi 组、piDM 组大脑皮质可溶性Aβ1-40 较Cont 组增加（P<0.05）,ZBPYR 组较DM 组、piDM 组有所下降（P<0.05）。DM 组、piDM 组海马IDE 蛋白表达较Cont 组降低（P<0.05）,ZBPYR 组海马较DM 组、piDM 组升高（P<0.05）;DM 组、pi 组、piDM 组大鼠大脑皮质IDE 蛋白水平较Cont 组降低（P<0.05）,ZBPYR 组大脑皮质较DM 组降低（P<0.05）。结论：脑组织中Aβ1-42 增加可能是糖尿病大鼠、脾阴虚糖尿病大鼠认知功能障碍的主要病理变化,IDE 表达下降可能是导致Aβ1-42 增加的原因之一,滋补脾阴法可能通过上调IDE 蛋白表达降低Aβ1-42 的含量。     

滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠空肠葡萄糖转运蛋白1、葡萄糖转运蛋白5 表达的影响

目的：观察脾阴虚大鼠空肠葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）、葡萄糖转运蛋白5（GLUT5）mRNA与蛋白表达的变化,以及滋补脾阴方药（ZBPYR）的干预作用。方法：利用饮食失常兼过劳结合燥热耗伤阴液法进行脾阴虚大鼠模型的复制,将SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组、脾阴虚组和滋补脾阴方药组。使用实时荧光定量PCR（qPCR）法测定空肠GLUT1、GLUT5的mRNA表达,蛋白质印迹（Western Blot）法测定空肠GLUT1、GLUT5的蛋白表达。结果：与正常组比较,脾阴虚组GLUT1、GLUT5的mRNA和蛋白表达量均下降（P<0.05）;与脾阴虚组比较,滋补脾阴方药组能够明显上调GLUT1、GLUT5的mRNA表达水平（P<0.01）,并增加GLUT1、GLUT5蛋白的表达含量（P<0.05）。结论：通过上调脾阴虚大鼠空肠GLUT1、GLUT5 mRNA和蛋白的表达,可能是ZBPYR对脾阴虚证发挥干预作用的机制之一。     

滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠空肠组织黏蛋白表达的影响

目的观察滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠空肠组织黏蛋白(MUC)表达的影响,探讨其相关作用机制。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型组和滋补脾阴方药组。采用复合方法建立脾阴虚证动物模型,连续38 d,滋补脾阴方药组于造模第25～38日予滋补脾阴方药药液灌胃,正常对照组和模型组予生理盐水灌胃。免疫组化观察大鼠空肠组织MUC的表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠空肠组织MUC2蛋白表达有降低趋势,MUC3和MUC5AC蛋白表达明显升高(P0.05);与模型组比较,滋补脾阴方药组大鼠MUC2蛋白表达有上调趋势,MUC3蛋白表达明显降低(P0.001),MUC5AC蛋白表达有下调趋势。结论滋补脾阴方药可改善脾阴虚模型大鼠MUC的表达。     

滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑组织内质网应激影响的研究

目的:观察滋补脾阴方药(ZBPYR)对脾阴虚痴呆大鼠不同脑区内质网应激的影响.方法:通过证病结合的方法建立脾阴虚痴呆大鼠模型,以免疫组化方法检测各组大鼠海马(CA1、CA3、DG区)、大脑皮质中内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78( GRP78)、凋亡促进因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达变化.结...     

滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑内NMDA受体mRNA表达的影响

目的：观察滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑内N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA表达的影响。方法：运用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA在各脑区的表达状况作相应的检测。结果：痴呆组以及脾阴虚痴呆组大鼠NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA在各脑区表达均明显减弱下调（P<0.05）;ZBPYR治疗组NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA均明显上调（P<0.05）。结论：使用ZBPYR治疗的大鼠NMDAR mRNA的表达水平在各脑区均明显上调,这表明ZBPYR以提升NMDAR mRNA的方式,使得NMDAR蛋白的含量显著增多,而发挥其抗痴呆作用。     

滋补脾阴方药对糖尿病认知功能障碍大鼠皮质线粒体功能障碍预防作用机制

目的：探讨滋补脾阴方药对糖尿病认知功能障碍大鼠皮质线粒体功能障碍的预防作用机制。方法：SD大鼠随机分为空白对照组（Con）,糖尿病组（DM）,滋补脾阴方药治疗组（ZBPYR1）和滋补脾阴方药预防组（ZBPYR2）。水迷宫测试大鼠学习记忆能力;透射电镜观察皮质线粒体超微结构、数量变化;Western Blot检测Cyto C表达。结果：①DM组较Con组学习记忆能力下降（P<0.05）;ZBPYR1组学习记忆能力较DM组改善（P<0.05）,ZBPYR2组较DM组改善较为明显（P<0.01）。②DM组皮质线粒体数量较Con组减少（P<0.05）,线粒体形态发生肿胀、变形、嵴走向紊乱、模糊甚至溶解;ZBPYR干预后上述结果得到改善,且ZBPYR2组较DM组线粒体数量增多（P<0.05）。③DM组胞浆中Cyto C较Con组增强（P<0.01）,ZBPYR干预后Cyto C表达减弱。结论：ZBPYR调节皮质区线粒体形态、数量的变化,阻止线粒体中Cyto C向胞浆中释放,提高糖尿病大鼠认知功能。     

电针对2型糖尿病认知障碍模型大鼠学习记忆能力的影响

目的:观察电针对2型糖尿病认知障碍大鼠大脑皮质Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白及基因表达的影响,探讨电针改善其学习记忆的作用机制.方法:将100只Sprague-Dawley(SD)大鼠采用随机数字表法分为正常组10只和造模组90只.造模组大鼠以高脂高糖饲料喂养1个月后,采用小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法建立2型糖尿病大鼠模型.将造模成功的50只大鼠通过Morris水迷宫实验(MWM)筛选出认知障碍大鼠20只,按照血糖值与MWM数据随机分为模型组和电针组,每组10只.电针组大鼠针刺足三里、内庭及胰俞,其中足三里和内庭加电针刺激,每日治疗1次,每次20 min.每周治疗6 d,连续治疗4周.模型组与正常组大鼠只固定不治疗.治疗4周后,测定大鼠随机血糖值;MWM测定大鼠学习与记忆能力;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定(TUNEL)法检测凋亡细胞;Western blot(WB)及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测大脑皮质Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白及基因的表达.结果:造模后,电针组和模型组大鼠随机血糖值和MWM逃避潜伏期明显增高,MWM通过平台次数减少,与正常组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而模型组与电针组之间差异无统计学意义(均P>0.05).治疗4周后,与正常组相比,模型组随机血糖值及MWM逃避潜伏期明显升高(均P<0.05),MWM穿越原平台次数明显减少(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白及基因表达明显升高(均P<0.001);Bcl-2蛋白及基因表达明显降低(均P<0.001),神经细胞的凋亡数显著增加(P<0.001);与模型组比较,电针组随机血糖值明显降低(P<0.05),MWM逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),MWM穿越原平台次数明显增多(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白及基因表达明显降低(均P<0.001);Bcl-2蛋白及基因表达明显升高(均P<0.001),神经细胞的凋亡数明显减低(P<0.001).结论:电针可以改善大鼠2型糖尿病造成的学习记忆能力损伤,其作用机制可能是通过抗细胞凋亡作用完成.     

糖脂清方通过保护海马神经元对提高2型糖尿病大鼠学习记忆能力的影响

目的:观察糖脂清方提高2型糖尿病大鼠学习记忆能力,保护海马神经元的作用。方法:SD雄性大鼠,采用高糖高脂饲料加链脲佐菌素(30 mg·kg-1)腹腔注射制作2型糖尿病模型。将造模大鼠随机分为模型组、糖脂清高、中、低(12,6,3 g·kg-1)剂量组,另设正常组。连续灌胃8周后进行水迷宫行为学测试,结束后处死取材。苏木-伊红(HE)染色观察海马组织病理形态学结构,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测海马神经元细胞凋亡情况。结果:与模型组比较,糖脂清方能明显降低2型糖尿病大鼠血糖(P0.05,P0.01),明显缩短逃避潜伏期,增加穿越平台次数、原平台游泳路程及游泳时间(P0.05,P0.01);显著改善海马组织病理情况,更加显著地降低海马神经元细胞凋亡指数(P0.01)。结论:糖脂清方可以显著降低高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠模型的血糖水平,改善胰岛素抵抗,提高大鼠学习记忆能力,减少海马神经元细胞凋亡,并具有保护作用。     

电针“智三针”对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马CA1区突触相关蛋白表达的影响

目的:观察电针"智三针"对血管性痴呆(VaD)大鼠学习记忆及海马CA1区突触后致密物-95(Psd-95)和突触囊泡膜蛋白(Syp)表达的影响,探讨电针"智三针"调控神经元突触可塑性从而改善VaD学习记忆的可能机制。方法:将48只造模成功的大鼠随机分为VaD模型组、尼莫地平组、电针智三针组,每组16只,采用改良Pulsinelli四血管阻断法(4-VO)制作VaD大鼠模型,另取12只未造模大鼠为假手术组。Morris水迷宫检测各组大鼠行为学,免疫组织化学法检测大鼠海马CA1区Psd-95和Syp阳性细胞表达,蛋白质印迹法检测大鼠海马CA1区Psd-95和Syp蛋白的表达情况。结果:与假手术组比较,VaD模型组大鼠在2 d后逃避潜伏期明显延长,而第三象限游泳时间和跨越平台次数明显减少(P<0.05);与VaD模型组比较,电针智三针组大鼠逃避潜伏期缩短、跨越平台次数增加(P<0.05)。与假手术组比较,VaD模型组大鼠海马CA1区Psd-95与Syp蛋白表达量明显减少(P<0.05);与VaD模型组比较,电针智三针组与尼莫地平组大鼠海马CA1区Psd-95与Syp蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论:电针"智三针"可能通过增加海马CA1区Psd-95和Syp的表达,调控海马CA1区突触可塑性,减少神经元突触丢失,从而达到改善VaD大鼠学习记忆的作用。