丹皮酚对过氧亚硝基阴离子致成骨细胞增殖抑制的影响

目的：探讨过氧亚硝基阴离子（ONOO^-）对体外成骨细胞增殖的影响及丹皮酚（Pae)对抗ONOO^-的作用。方法：采用改良的淬灭流动反应方法，体外制备ONOO^-。以不同终浓度加入成骨细胞培养体系中，用MTT法观察在不同时相对成骨细胞增殖的影响，并用不同终浓度的Pae消除ONOO^-(1000μmol/L)对成骨细胞增殖的影响。结果：低浓度ONOO^-(50-200μmol/L)对培养的成骨细胞有促增殖作用；高浓度ONOO^-(1000μmol/L)则明显抑制成骨细胞增殖。Pae(10^-4～10^-7mol/L)可消除ONOO^-(1000μmol/L)对成骨细胞增殖抑制的作用。结论：低浓度ONOO^-促成骨细胞增殖，高浓度ONOO^-抑制成骨细胞增殖。Pae可消除高浓度ONOO^-对成骨细胞增殖的抑制作用。     

丹皮酚对急性肝细胞损伤的保护作用

目的在乙醇诱导的体外大鼠肝细胞急性损伤导致谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、丙二醛(MDA)水平升高的模型基础上,探讨丹皮酚对大鼠肝细胞的直接保护作用。方法分别将肝细胞接种于培养瓶中培养传代,利用50 mmol/L乙醇处理12 h建立急性大鼠体外肝细胞急性损伤模型,用含不同浓度丹皮酚(250、125、62.5、31.25、15.625μmol/L)的培养液与急性损伤肝细胞共孵育不同时间(0.5、1、3、6、12、24 h),MTT比色法测定丹皮酚对肝细胞损伤的预防作用,赖氏法测定上清液ALT和AST的水平,硫代巴比妥法测定上清液MDA水平。结果丹皮酚(125μmol/L,12 h)可抑制乙醇对肝细胞的损伤,并明显降低乙醇致急性损伤肝细胞的ALT、AST释放量和MDA水平。结论丹皮酚体外给药抑制乙醇诱导肝细胞的ALT、AST和MDA释放,提示其具有对肝细胞损伤的直接保护作用。     

丹酚酸B抗缺氧无血清诱导的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的研究

目的 在体外以缺氧无血清诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡,探讨丹酚酸B抗缺氧无血清诱导的大鼠BMSCs凋亡作用。方法 体外分离、培养大鼠BMSCs,用分别含0.1、1、10、100 mg/L丹酚酸B的完全培养液预处理1h后用磷酸盐缓冲液冲洗2次,再加入含0.1、1、10、100 mg/L丹酚酸B的不含血清培养...     

绿原酸通过Shp2激活Erk1/2促进大鼠成骨细胞增殖的实验研究

目的研究从杜仲叶中提取的绿原酸对大鼠成骨细胞的促增殖作用。方法 MTT法检测分别用0、0.1、1、10μmol/L 4种不同浓度梯度的绿原酸和0.1μmol/L绿原酸+10μmol/L Shp2抑制剂NSC87887处理大鼠成骨细胞增殖情况;用无血清无酚红DMEM培养基培养的饥饿大鼠成骨细胞用上述药物处理后,用Western blot检测其p-Shp2(Tyr580)、Shp2、P-Erk和Erk蛋白表达。结果 MTT法结果显示绿原酸(0¹μmol/L)促进大鼠成骨细胞的增殖,呈浓度依赖性;Western blot结果显示绿原酸可以诱导大鼠成骨细胞的p-Shp2(Tyr580)和Erk磷酸化水平升高,而NSC87887可以抑制其促进作用。结论绿原酸能够促进大鼠成骨细胞的增值,并且是通过Shp2/Erk途径实现的。     

丹皮的抗内毒素和解热作用研究

目的:研究丹皮的抗内毒素和解热作用。方法:丹皮抗内毒素作用采用体外鲎试剂法,解热作用采用内毒素、酵母和2,4-二硝基酚所致大鼠发热试验。结果:丹参生药于10mg/kg能在体外对内毒素有拮抗作用;丹皮10～40g/kg于体内能使内毒素、酵母和2,4-二硝基酚所致发热消退。结论:丹皮有一定的解热作用。     

丹皮酚对Aβ诱导的AD模型大鼠脑细胞凋亡因子的影响及作用机理

目的:研究丹皮酚对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠老年痴呆症(Alzheimer disease AD)动物模型的干预作用,探讨丹皮酚对AD模型大鼠脑细胞凋亡的影响及其作用机理。方法:32只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、Aβ诱导AD模型组和丹皮酚治疗组。动物喂养40 d后取大鼠脑组织观察其病理变化,用免疫组化染色法和原位杂交法检测大脑细胞凋亡因子P53和活化的Caspase-3以及凋亡细胞的表达水平。结果:用丹皮酚干预减轻Aβ诱导的大脑组织病理结构变化,明显抑制AD模型鼠凋亡因子P53和Caspase-3的表达,减少了凋亡细胞的产生。结论:丹皮酚能保护神经组织,具有明显的抗凋亡作用,可减缓AD的发生发展。     

熊果酸体外抗胃癌细胞SGC7901机制的研究

目的探讨熊果酸(urso lic ac id,UA)体外抑制胃癌细胞SGC 7901生长的作用机制。方法体外培养人胃癌细胞株SGC 7901,M TT法观察不同浓度UA作用不同时间对细胞生长的影响;不同浓度UA(0~40μm o l/L)处理SGC 7901细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;荧光染料Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;W estern B lotting法检测凋亡相关蛋白B cl-2和B ax的表达。结果20~40μm o l/L UA可抑制SGC 7901的生长,并呈浓度和时间依赖性,其作用12、24、36、48 h的IC50分别为(57.50±1.18)、(34.28±2.05)、(27.54±1.11)、(24.83±1.02)μm o l/L。20~40μm o l/L UA作用24 h后,SGC 7901细胞变圆,出现不同程度的漂浮;同时细胞被阻滞于G0/G1期并发生凋亡,随药物浓度升高,凋亡率增加,凋亡相关蛋白B cl-2表达减少,B ax无明显变化。结论熊果酸对SGC 7901细胞具有较强的抗肿瘤活性,其机制可能与细胞毒作用、增殖抑制作用以及下调凋亡相关蛋白B cl-2表达而促进凋亡有关。     

染料木素对大鼠成骨细胞骨钙素表达的影响

目的:探讨染料木素体外对大鼠成骨细胞骨钙素表达的影响.方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,染料木素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用放免法测定细胞骨钙素(BGP)的水平.结果:染料木素在1×10-9mol/L 范围内48h和72h,1×10-8mol/L及1×10-7mol/L 72h提高成骨细胞骨钙素的水平.结论:染料木素体外能提高成骨细胞骨钙素的表达.     

染料木素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的:探讨染料木素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,染料木素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果:染料木素在1×10~(-5)～1×10~(-9)mol/L浓度范围内作用24h、48h均能促进成骨细胞增殖,在1×10~(-7)～1×10~(-5)mol/L范围内作用72 h可提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论:染料木素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

紫外光线法测定气阴养骨片中丹皮酚含量

目的为控制气阴养骨片的质量,建立气阴养骨片中丹皮酚含量测定方法。方法用水蒸气蒸馏法提取制剂中丹皮酚,并定容至规定量。检测波长274 nm,吸收系数(E1%1 cm)862。结果丹皮酚线性范围2.4~12.0μg/m l,r=0.999 9,平均回收率为99.98%,RSD为0.1%(n=5)。结论该法能准确测定丹皮酚含量。     

丹皮酚平衡溶解度与油水分配系数测定及大鼠在体肠吸收研究

目的 测定丹皮酚在各种溶剂中的平衡溶解度及表观油水分配系数,并研究其在体肠吸收性质.方法 HPLC法测定丹皮酚的浓度,用摇瓶法测定丹皮酚的表观油水分配系数,大鼠在体单向肠灌流实验,按重量法计算动力学参数.结果 25℃丹皮酚在水中的平衡溶解度为0.5 g/L,在酸性磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度较低,碱性磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度较高,在常用的有机溶剂中的溶解度大于1 g/L;25℃丹皮酚在正辛醇-水系统中的油水分配系数Papp为263.2( lgPapp=2.42);丹皮酚在肠道各部位的吸收速率按空肠、回肠、十二指肠、结肠顺序下降.结论 不同pH值的介质对丹皮酚表观油水分配系数影响不大;丹皮酚在整个肠段均有吸收,小肠为主要吸收部位.     

丹皮酚对Aβ1-42致神经元细胞毒的保护作用及机制

目的:考察丹皮酚对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤神经元的保护作用及机制.方法:取生长良好的新生大鼠海马神经元和经诱导分化后的SH-SY5Y细胞株,在培养液中加入不同浓度(1,5,10 μmol·L-1)的丹皮酚孵育6h后,再加入Aβ1-42寡聚体(30 μmol·L-1)分别孵育24,48 h.采用Heochst33258荧光染色法观察神经元的凋亡形态,Annexin V/PI双染流式细胞术测定SH-SY5Y细胞凋亡率,RT-PCR法检测神经元BDNF和Bcl-2 mRNA的表达.结果:与模型组比较,各剂量丹皮酚(1,5,10 μmol·L-1)显著减少海马神经元核固缩,降低SH-SY5Y细胞的凋亡率至22.4％,18.1％,16.4％,显著增加海马神经元BDNF和Bcl-2 mRNA的表达.结论:丹皮酚可通过增加神经元BDNF和Bcl-2的表达,拮抗Aβ1-42寡聚体诱导的神经细胞损伤.     

丹皮酚注射液增强免疫功能的实验研究

丹皮酚在低浓度时（１０－１５ｍｇ／ｋｇ）能够显著提高外周血酸性α－醋酸萘酯酶（ＡＮＡＥ）阳性淋巴细胞百分率和白细胞移行抑制因子的释放，从而增强机体细胞免疫功能；并且能够显著改善外周血中性白细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬作用，而增强机体非特异性免疫功能。丹皮酚对于脾脏特异性花环形成细胞的比率虽有所提高，但在统计学上意义不显著。     

丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注损伤后TLR4及神经细胞凋亡的影响

 目的 观察丹皮酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后 Toll样受体4（TLR4）和神经细胞凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法 大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、尼莫地平组（0.4 mg·kg^-1）、丹皮酚组（15、30 mg·kg^-1）。采用线栓法阻塞大脑中动脉建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。通过 HE染色观察大鼠大脑皮层区细胞损伤程度，免疫组化法检测缺血侧脑组织 TLR4表达的变化，酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素6（IL-6）含量，流式细胞仪检测神经细胞凋亡。结果 丹皮酚可明显改善大鼠皮层区细胞损伤，减少 TLR4的表达、降低血清中 IL-6含量，减轻神经细胞凋亡率。结论 丹皮酚能减轻缺血再灌注脑组织损伤程度、降低神经细胞凋亡率，机制可能与抑制脑组织内 TLR4表达有关。     

杜仲叶提取物对体外培养的成骨细胞代谢功能调节研究

目的：研究杜仲叶提取物对体外培养成骨细胞（Osteoblast OB)代谢功能的调节作用,从而进一步明确杜仲补肾,强筋健骨的作用机理以及筛选杜仲叶防治骨质疏松药效成分,方法：用杜仲叶三个提取部位（Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ）不同浓度对体外培养的成骨细胞作用,由新生SD大鼠头盖骺作原代培养,用传代的第一代细胞做药效试验,测定指标：（1）细胞增殖情况,用MTT计数法[1,2];（2）碱性磷酸酶（ALP）活性测定,对硝基磷酸盐法。结果：Ⅱ,Ⅲ提取部位对细胞增殖作用与对照组比较,P＜0．001,ALP的活性与对照组比较,三个部位均为P＜0．001,结论：表明Ⅱ,Ⅲ提取部位的10^-5mg/L浓度组具有明显的调节骨代谢功能的药效作用。     

人参皂苷Rb1对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:研究人参皂苷Rb1对大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)mRNA表达的影响。方法:不同浓度的人参皂苷Rb1作用于体外培养的大鼠成骨细胞不同时间,采用MTT法检测药物对成骨细胞增殖功能的影响,PNPP法检测成骨细胞中ALP活性分析药物对成骨细胞分化的影响,半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG/RANKL mRNA,分析药物对破骨细胞分化的影响。结果:人参皂苷Rb1(1.12×10-9-1.12×10-5mol/L)作用于体外培养的大鼠成骨细胞3d时,1.12×10-8-1.12×10-6mol/L人参皂苷Rb1可显著促进成骨细胞的增殖(P0.05或P0.01);1.12×10-7-1.12×10-6mol/L人参皂苷Rb1可显著促进成骨细胞的分化(P0.01);1.12×10-9-1.12×10-8mol/L人参皂苷Rb1可显著上调成骨细胞中OPG/RANKLmRNA的比值,抑制破骨细胞的分化(P0.01);1.12×10-7-1.12×10-5mol/L人参皂苷Rb1可显著下调成骨细胞中OPG/RANKLmRNA的比值,促进破骨细胞的分化(P0.01)。结论:人参皂苷Rb1对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、分化及破骨细胞的分化有显著影响。     

丹皮酚体外抗肿瘤作用研究进展

丹皮酚为中药牡丹皮的主要活性成分。现代药理研究发现,丹皮酚具有抗菌消炎、解热镇痛、免疫调节、抗肿瘤、抗血栓以及抗氧化等作用。近年来,丹皮酚抗肿瘤作用及机制的研究逐渐成为热点,其在抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性以及减轻肿瘤患者对放化疗的不良反应等方面具有独特的优势,且对多种肿瘤细胞均有抑制作用,应用前景广阔,现将近年来丹皮酚体外抗肿瘤作用的研究以及相关机制的探讨综述如下。     

丹皮酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护中HMGB1表达的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护中HMGB1表达的影响。方法:清洁SD大鼠40只随机分为4组(n=10):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、丹皮酚低剂量组(PaeLD组)及丹皮酚高剂量组(PaeHD组)。建立大鼠心肌缺血再灌注模型。TTC染色法检测大鼠梗死心肌体积,Tunnel法检测心肌缺血坏死区细胞凋亡;免疫印迹检测缺血坏死组织HMGB1的表达。结果:PaeLD及PaeHD组与I/R组相比,心肌梗死体积减小,凋亡细胞减少;心肌组织HMGB1水平明显减少。其中PaeHD组更明显。结论:丹皮酚能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与减轻大鼠HMGB1表达有关。     

基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的]基于中医"通肾络、益脾肾"治法,探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法]成熟无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠40只,随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度:高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/m L,灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组,正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集,Hoechst33342荧光染色,观察各组足细胞凋亡状况及形态变化;流式细胞仪检测足细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果]流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率(P0.01或P0.05),高剂量组不能改善凋亡情况(P0.05);Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率;蛋白印迹结果显示,与高糖组相比,通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高,自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降(P0.05或P0.01),高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变(P0.05)。[结论]中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡,降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

丹皮酚、芍药苷及二者配伍对体外培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的观察丹皮酚、芍药苷及二者配伍对体外培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法用体外细胞培养方法,培养乳鼠心肌细胞,复制心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。分别在缺氧和复氧阶段将细胞培养液换成含药培养液以进行药物干预,研究丹皮酚和芍药苷的作用时,各设100、75、50和25mg/L4个剂量组,研究二者配伍作用时设芍药苷40mg/L和20mg/L组、丹皮酚40mg/L和20mg/L组、以及芍药苷20mg/L+丹皮酚20mg/L5个剂量组,模型组只造模不进行药物干预,而正常对照组则不造模。分别测定缺氧2.5～5h后及复氧2h后细胞培养上清液中的肌酸肌酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)漏出量,计算缺氧/复氧过程中各指标总漏出量及漏出抑制率。结果与正常对照组比较,模型组缺氧2.5h后MDA漏出量增加,缺氧3、5h后、复氧2h后CK、LDH和MDA漏出量、漏出总量均增加,各指标漏出抑制率均降低,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,丹皮酚高剂量组及芍药苷高、中剂量组缺氧后LDH、MDA漏出量及复氧2h后各指标漏出量、漏出总量均减少(P<0.01,P<0.05),各指标漏出抑制率均升高(P<0.01,P<0.05);而丹皮酚低、极低剂量组仅复氧2h后CK漏出量及漏出总量减少(P<0.01,P<0.05),CK漏出抑制率升高(P<0.01)。芍药苷极低剂量组仅复氧2h后LDH漏出量及漏出总量均减少(P<0.01),LDH漏出抑制率升高(P<0.01)。配伍组各指标与丹皮酚、芍药苷各组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹皮酚、芍药苷及二者配伍对体外培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤均具有保护作用,二者配伍作用强度与同剂量单味药物作用强度相当,未见显著配伍增效作用。