右归丸水提液对小鼠卵巢颗粒细胞雌激素、孕酮分泌的影响及机制

目的:观察右归丸水提液对卵巢颗粒细胞分泌雌激素、孕酮功能的影响。方法:首先运用体外培养技术进行小鼠卵巢颗粒细胞体外培养,采用直接给药法,观察右归丸水提液对小鼠卵巢颗粒细胞雌激素、孕酮的分泌量(放射免疫测定法),并用检测卵巢颗粒细胞内cAMP水平(ELISA法)。结果:右归丸水提液高剂量组(0.18g/ml)可明显增加颗粒细胞雌激素、孕酮分泌量(P<0.01),同时显著增加颗粒细胞内cAMP的浓度(P<0.01)。结论:右归丸温补肾阳的作用可能与直接促进颗粒细胞的分泌功能有关,同时,其作用途径可能是通过激活颗粒细胞内酰苷酸环化酶而实现。     

补肾调冲含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞分泌雌、孕激素及超微结构的影响

目的：探讨补。肾调冲方对大鼠离体卵巢颗粒细胞分泌功能及超微结构的影响。方法：采用血清药理学的方法，以不同含药量的大鼠血清，与体外培养的颗粒细胞共同孵育24小时，用放免法测定培养液中E2、P的浓度；电镜观察颗粒细胞超微结构的变化。结果：补肾调冲含药血清可增加颗粒细胞E2的分泌量，降低P的分泌量，颗粒细胞微观结构与对照组比较差异明显，表现为滑面内质网和线粒体丰富，胞质内有大量脂滴。结论：补。肾调冲药可使卵巢颗粒细胞超微结构发生有利于雌、孕激素分必的转化，进而改善卵巢功能。     

二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

目的观察二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞体外分泌功能的影响。方法采用血清药理学方法，以不同含药量的初老小鼠血清，与体外培养的颗粒细胞共同培养48h，观察二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞雌激素（E2）、孕酮（P）分泌量（化学发光免疫测定法）以及抑制素B（INHB）分泌量（ELISA法）的影响。结果二至天癸颗粒含药血清可明显增加颗粒细胞E2、P、INHB的分泌量。结论二至天癸颗粒可通过调节颗粒细胞的分泌功能进而改善初老小鼠卵巢功能。     

虎杖中提取蒽醌苷的研究

目的：研究提取温度和提取液乙醇浓度对从虎杖中提取蒽醌苷的影响。方法：使用乙醇提、聚酰胺吸附、乙醇洗脱的方法，从虎杖中提取蒽醌苷。结果：提取温度升高，蒽醌苷提取率增大；提取液乙醇浓度增加，提取率酰增加。结论：增加温度和提取液乙醇浓度有利于提高提取率。     

毓麟合剂及其拆方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响

目的:探讨毓麟合剂及其拆方对离体大鼠卵巢颗粒细胞(GC)增殖及雌、孕激素分泌的影响。方法:体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞,加入毓麟合剂及其拆方汤剂作用24h后,在显微镜下观察卵巢颗粒细胞数量的变化,MTT法测定卵巢颗粒细胞增殖数量,ELISA法测定培养液中雌、孕激素的浓度。结果:毓麟合剂可明显增加卵巢颗粒细胞数量,并增加雌二醇(E2)和孕酮(P)的分泌。HE染色显微镜下观察可表现为卵巢颗粒细胞增多等。结论:毓麟合剂能够增加离体大鼠卵巢颗粒细胞数量并能够促进雌二醇和孕酮的分泌。     

补肾调冲含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞体外分泌功能的影响

目的探讨补肾调冲方对大鼠离体卵巢颗粒细胞分泌功能的影响。方法采用血清药理学的方法,以不同含药量的大鼠血清,与体外培养的颗粒细胞共同孵育24 h,用放免法测定培养液中E2,P,IGF-I,TNF-α的浓度。结果补肾调冲含药血清可升调颗粒细胞E2及IGF-I的分泌量。降调P,TNF-α的分泌量。结论补肾调冲方可通过调节卵巢颗粒细胞的分泌功能,进而改善卵巢功能。     

多囊卵巢动物模型的实验研究

目的对孕激素联合HCG PCO动物模型进行评估。方法给24日龄雌性SD大鼠皮下埋植孕酮硅胶棒,2 d后再连续9 d皮下注射低剂量HCG,观察卵巢形态、血清激素含量及卵巢颗粒细胞凋亡、卵泡闭锁情况。结果模型组大鼠卵巢重量、体积增加,卵巢呈多囊性改变,卵泡颗粒细胞减少而膜细胞层增加,颗粒细胞凋亡及卵泡闭锁增加,血清中孕酮、睾酮明显增高,而雌二醇变化不明显。结论此动物模型卵巢病理改变及血内分泌改变与PCOS病人相似,可以作为多囊卵巢研究的动物模型。     

人参多糖对HCG诱导黄体与颗粒细胞功能的影响

目的研究人参多糖对大鼠卵巢功能的作用。方法采用体外细胞培养观察人参多糖对HCG诱导的黄体与颗粒细胞分泌孕酮与cAMP的影响,并检测了卵母细胞的存活率。分离培养黄体、颗粒与卵母细胞,设对照组与不同浓度人参多糖实验组,采用放免分析方法测定孕酮与cAMP生成含量,细胞存活率检测采用MTT法。结果与对照组比较,孕酮含量:黄体细胞为(6573.46±185.14)与(4509.55±126.82)pmol,颗粒细胞为(197.16±42.87)与(320.42±12.46)pmol。cAMP:黄体细胞为(31.20±17.13)与(65.26±15.93)fmol,颗粒细胞为(121.15±19.96)与(296.42±27.28)fmol。结论人参多糖抑制HCG诱导黄体细胞孕酮分泌,促进HCG诱导颗粒细胞孕酮分泌。而协同黄体细胞与颗粒细胞cAMP生成,人参多糖使卵母细胞生长抑制率降低,呈区间剂量依赖关系。     

内异止痛汤对EM模型大鼠卵丘颗粒细胞凋亡及分泌功能的影响

目的:探讨内异止痛汤对子宫内膜异位症(EM)模型大鼠卵丘颗粒细胞凋亡及分泌功能影响。方法:选取由恩施土家族苗族自治州中心医院和武汉大学人民医院实验动物中心提供的健康雌性SD大鼠30只,随机数字表法将其分成两组,观察组(15只)与对照组(15只),制备EM大鼠模型,观察组大鼠使用内异止痛汤灌胃,对照组大鼠采用生理盐水灌胃,观察两组大鼠卵细胞质量、卵丘颗粒细胞凋亡率、颗粒细胞内Bcl-2及Bax蛋白阳性表达率及细胞内雌二醇(E2)、孕酮(P)分泌量状况。结果:观察组大鼠卵细胞优质率为85.12%,高于对照组的71.65%,差异有统计学意义(P0.05);观察组大鼠颗粒细胞凋亡率为(4.71±1.64)%,低于对照组的(7.95±1.72)%,差异有统计学意义(P0.05);观察组大鼠Bcl-2阳性表达率、Bcl-2/Bax比值高于对照组,Bax阳性表达率低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);颗粒细胞在体外培养48、72小时以后观察组P、E2分泌量均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:内异止痛汤可降低EM大鼠卵丘颗粒细胞凋亡率,促进颗粒细胞分泌孕酮及雌二醇,提高优质卵细胞数量,改善内分泌。     

高河菜提取物对积滞化热模型大鼠消化液成分的影响

目的：研究高河菜提取物对积滞化热模型大鼠消化液成分的影响；方法：建立积滞化热模型后，测定模型大鼠胃酸含量及胃蛋白酶活性；结果：高河菜提取物能明显增加胃液分泌量，游离酸和总酸的酸度，提高胃蛋白酶活性，与模型组相比有统计学意义。结论：高河菜提取物能治疗积滞化热证，其机制与增加胃酸分泌量和酸度，提高胃蛋白酶活性有关。     

逍遥散加减方对高催乳素血症大鼠卵巢自分泌及旁分泌机制的影响

目的:探讨逍遥散加减方对高催乳素血症大鼠模型卵巢自分泌及旁分泌机制的影响。方法:采用腹腔注射甲氧氯普胺制成高催乳血症大鼠模型,随机分为6组:空白组、模型组、逍遥散加减方高、中、低剂量组(分别予以逍遥散加减方60、30、15g·kg^-1·d^-1)、溴隐亭组0.001g·kg^-1·d^-1,药物治疗30d后通过免疫组化检测大鼠卵巢组织胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子2(IGF-2)阳性结果的表达;采用MTT检测卵巢颗粒细胞存活率及增殖率;采用ELISA法测定卵巢抗苗勒试管激素(AMH)的含量;采用PCR检测血清促卵泡激素受体(FSHR)的含量。结果:与空白组比较,模型组IGF-1、AMH、FSHR、卵巢颗粒细胞存活率、细胞增殖显著减少(P<0.05,P<0.01);逍遥散加减方中、低剂量组IGF-1显著降低(P<0.01),逍遥散加减方低剂量组AMH及卵巢颗粒细胞存活率显著降低(P<0.05),溴隐亭组IGF-1、卵巢颗粒细胞存活率显著降低(P<0.05);与模型组比较,逍遥散加减方高剂量组AMH、IGF-1、卵巢颗粒细胞存活率显著升高(P<0.01,P<0.05),逍遥散加减方高剂量组细胞增殖率及FSHR升高(P<0.05,P<0.01)。结论:逍遥散加减方高剂量组通过提高IGF-1、FSHR及AMH的含量调节卵巢自分泌/旁分泌机制,进而提高动物模型卵巢颗粒细胞存活率。     

卵泡膜细胞胰岛素抵抗及隐丹参酮的调控

目的:探索胰岛素抵抗的卵泡膜细胞对腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)的反应变化以及中药隐丹参酮对卵泡膜细胞甾体激素合成的调控作用。方法:采用猪卵巢卵泡膜细胞进行体外培养,应用渥漫青霉素(Wortmannin)诱导构建胰岛素抵抗的细胞模型,并应用隐丹参酮和Forskolin处理各组细胞,检测中药隐丹参酮和/或Forskolin作用后各组的培养液葡萄糖浓度和激素水平的变化以及胰岛素信号分子和甾体激素合成关键酶的mRNA表达变化。结果:卵泡膜细胞发生胰岛素抵抗后,睾酮(T)、孕酮(P)合成能力明显增强,17α羟化酶(CYP17)、3β-羟基甾脱氢酶(3β-HSD)、过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、细胞色素芳香化酶(P450arom)和类固醇激素合成急性调节蛋白(STAR)的mRNA表达量增加,胰岛素抵抗卵泡膜细胞对Forskolin的生物效应反应性增强。中药隐丹参酮能够缓解卵泡膜细胞胰岛素抵抗,同时也降低了培养液中睾酮的水平和甾体激素合成酶CYP17和STAR的mRNA水平。结论:中药隐丹参酮能够降低由于卵泡膜细胞胰岛素抵抗所产生的功能异常,提示中药增敏剂可以用于多囊卵巢综合征的治疗,可以起到改善生殖功能的作用。     

育麟方对卵巢储备功能降低大鼠颗粒细胞分泌功能的影响

目的: 研究育麟方影响环磷酰胺致卵巢储备功能降低大鼠模型卵巢颗粒细胞的分泌功能的机制。 方法: 性成熟雌性SD大鼠参考文献制备卵巢储备功能降低大鼠模型,分为育麟方高、中、低剂量组,补佳乐组,模型组,正常组。正常组,模型组予蒸馏水20 mL ·kg^-1,补佳乐组予戊酸雌二醇片0.21 mg ·kg^-1,育麟方低、中、高组分别予育麟方生药15.2,30.4,60.8 g ·kg^-1 ig 21 d后,予动情前期处死,放射免疫法测定大鼠血清卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)水平及抗苗勒管激素(AMH)表达水平,光镜下观察卵巢组织形态学变化,卵泡数目及黄体数目。 结果: 与正常组比较,模型组FSH,LH含量明显升高(P<0.05),AMH含量明显降低(P<0.05),各级卵泡数目,黄体数目明显减少(P<0.05);与模型组比较,育麟方治疗组大鼠血清FSH,LH水平明显减少(P<0.05),育麟方中剂量组及补佳乐组血清AMH水平明显增高(P<0.05),育麟方中、高剂量组的各级卵泡及黄体数量明显增多(P<0.05)。 结论: 育麟方可能通过影响卵巢储备功能降低模型鼠的颗粒细胞内分泌功能而改善其卵巢储备功能。     

当归注射液对辐射损伤后小鼠卵巢颗粒细胞凋亡影响的实验研究

目的 :探讨当归注射液对辐射损伤的卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法 :应用当归注射液对 6 0 Co- γ射线辐射损伤后的小鼠卵巢组织给予治疗 ,连续给药 30 d,通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测治疗后的卵巢颗粒细胞凋亡率。结果 :实验用药组卵巢颗粒细胞凋亡率显著低于实验对照组 (P <0 .0 0 1)。结论 :当归注射液对辐射损伤后的小鼠卵巢结构和功能具有重要的保护作用     

补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌及其IGF-1 mRNA表达的影响

目的:观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌功能及其IGF-1 mRNA表达的影响。方法:制备原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞,预培养24h后,分别加入FSH(50ng/mL)和不同浓度的补肾调冲方(100、10、1、0.1μg/mL),继续培养48h后,放免法测定颗粒细胞培养液中E2、P水平及细胞内cAMP含量,用Real-tim e RT-PCR方法实时定量测定颗粒细胞IGF-1 mRNA的表达量。结果:①补肾调冲方可明显增加3H-TdR掺入颗粒细胞DNA中的数量,并促进颗粒细胞分泌E2、P,增加颗粒细胞中cAMP的含量;②补肾调冲方可促进基础状态下颗粒细胞IGF-1 mRNA的表达,在一定范围内呈剂量依赖性。结论:补肾调冲方在无FSH作用的条件下,可直接促进颗粒细胞内IGF-1 mRNA的表达,使细胞内cAMP的含量增加,从而调节颗粒细胞增殖与分泌功能。     

In vitro stimulation of granulosa cells by a combination of different active ingredients of unkei-to

Unkei-to is widely used in traditional Japanese herbal medicine for its ovulation-inducing effect. In the present study, we investigated the in vivo effects of unkei-to and its compounds on the steroidogenesis and cytokine secretion in human granulosa cells. Unkei-to stimulated the secretions of 17beta-estradiol and progesterone from highly luteinized granulosa cells obtained from in vitro fertilization patients; the stimulated effect on estradiol secretion occurred with 0.3 microg/ml, while a significant effect on progesterone secretion was obtained at 10 microg/ml. The unkei-to stimulation of estradiol secretion could be accounted for by the effects of its ingredients, Shakuyaku (paeoniae radix, Paeonia lactiflora Pallas) and Keihi (cinnamomi cortex, Cinnamomum cassia Blume); while dose response curves for unkei-to and Keihi to induce progesterone production were superimposable. Exposure of the cells to unkei-to caused dose-dependent increases in the concentrations of interleukin (IL)-1beta, IL-6 and IL-8 in the culture medium. Similar results were obtained when cells were incubated with the ingredient Ninjin (ginseng radix, Panax ginseng C.A. Meyer), but not Shakuyaku and Keihi. These results indicate that unkei-to has direct stimulatory effects on human granulosa cells to stimulate the steroidogenesis and secretion of cytokines (IL-1, IL-6 and IL-8). The various beneficial actions of unkei-to on the ovary may result from a combination of different ingredient herbs with different stimulatory effects on both steroidogenesis and the ovulatory process within the ovary, as well as stimulatory effect on the hypothalamus-pituitary axis.     

不同浓度补肾健脾方对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响

目的:观察不同浓度补肾健脾方含药血清对原代培养的卵巢颗粒细胞增殖作用的影响以及不同浓度补肾健脾方对小鼠卵巢组织卵泡颗粒细胞层增殖的影响。方法:采用机械分离法结合胰蛋白酶消化法体外原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,通过HE染色法进行细胞形态鉴定。采用MTT法检测,分别观察含质量分数5%、10%、20%补肾健脾方含药血清对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响。体内实验通过给雌性小鼠灌胃不同浓度的补肾健脾方,连续灌胃4周,取卵巢组织做病理形态学观察。结果:质量分数20%、10%、5%的补肾健脾方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖作用各不相同,质量分数20%、10%的含药血清、20%的空白血清对卵巢颗粒细胞的增殖作用最明显,与正常组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。补肾健脾方大剂量、中剂量、小剂量对卵巢卵泡颗粒细胞层的厚度呈现一定的增高趋势。结论:补肾健脾方对小鼠的卵巢颗粒细胞具有一定的增殖作用。     

何首乌饮含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响

目的观察不同剂量的中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞端粒酶活性的影响,探讨其在调节卵泡微环境过程中所起的作用。方法制备大鼠排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞(GC)分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养。用TRAP-ELISA方法分析GC的端粒酶活性;运用流式细胞术分析GC凋亡、坏死情况。结果各剂量组何首乌饮含药血清可明显上调GC端粒酶活性,与对照组比较,中、高剂量何首乌饮含药血清能够显著提高GC端粒酶活性(P均<0.05)。随着中药血清药物剂量的增加,颗粒细胞凋亡率逐渐下降,与对照组比较,中、高剂量组何首乌饮含药血清均能够显著降低离体GC的凋亡率(P均<0.01),各含药血清组细胞坏死率虽较对照组高,但与各组比较差别无统计学意义。结论何首乌饮通过上调离体培养的大鼠卵巢GC端粒酶活性、抑制凋亡从而对卵泡局部微环境的调节,可能是其调节下丘脑-垂体-卵巢轴的重要靶点之一。     

二仙汤及其拆方对大鼠性腺细胞分泌功能的影响

目的:观察二仙汤及其温肾、滋阴、调理冲任3个拆方对性腺细胞分泌功能的影响,比较二仙汤3个组成部分对性腺细胞的作用、差异和协同,从细胞水平揭示其配伍组方的原理。方法:按方剂组成原理进行拆方,用放射免疫方法观察二仙汤及其拆方对原代培养雄性大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮(T)、原代培养雌性大鼠黄体细胞孕酮(P)及卵泡颗粒细胞分泌雌二醇(E2)的影响。结果:①对睾丸间质细胞分泌T的作用,以二仙汤全方组促进作用最明显,而滋阴组有降低T的趋势,温肾组和当归组作用不明显;②对黄体细胞分泌P的作用,以全方组促进作用最好,其次为温肾组,当归组和滋阴组的作用不明显;③对促进颗粒细胞分泌E₂的作用,以全方组效果最好,其次为温肾组、滋阴组,而当归有提高E₂的趋势。结论:二仙汤能直接促进睾丸间质细胞分泌T,黄体细胞分泌P以及促进颗粒细胞分泌E₂,综合来看,全方组作用最好,拆方组作用有异同。