VEGF和Dll4/Notch信号通路调控自然流产母胎界面血管发育的研究进展

健康的胎盘血管网络对胚胎的发育及胎盘正常的血液循环极其重要。许多研究证明在血管形成过程中,存在多个信号传导通路,VEGF和Dll4/Notch信号通路就是其中非常重要的两条通路。胎盘VEGF mRNA表达与该部位的血管形成有关,胎盘血管在妊娠期中不断形成,并与绒毛一起植入子宫蜕膜层,     

半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用

目的观察并比较半夏蛋白对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的生长抑制作用。方法应用流式细胞技术,检测半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用,并观察了其诱导凋亡作用的量-效关系。结果60%硫酸铵沉淀蛋白没有明显诱导Bel-7402细胞凋亡的作用,而30%硫酸铵沉淀蛋白有诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。30%沉淀进一步分离结果显示,只有0.1 mol/L NaCl洗脱峰有一定诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。结论半夏蛋白有一定的诱导Bel-7402细胞凋亡作用,其主要成分可能存在于总有机酸部位。     

鳖甲煎丸对大鼠肝星状细胞中NF-κB信号通路的影响

目的研究鳖甲煎丸(鳖甲胶、阿胶、蜂房等)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)中核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中NF-κB、p65、p50、IκB及靶基因表达的影响。方法使用鳖甲煎丸药物血清培养HSC-T6细胞24 h后,采用q PCR检测p65、p50、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)m RNA的表达,免疫荧光法检测p65的表达,Western blot检测NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、NF-κB抑制蛋白β(IκBβ)及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与空白对照组及阴性对照组相比,鳖甲煎丸的中、高剂量组及阳性对照组p65、VEGF、TIMP-1 m RNA的表达显著降低,各组间p50 m RNA的表达无显著差异,但免疫荧光显示p65在细胞质中的表达降低。同时,鳖甲煎丸能显著上调IκBα的蛋白表达,并能明显下调α-SMA的表达,具有剂量依赖性,但对IκBβ的表达无显著影响。结论鳖甲煎丸对肝纤维化的治疗作用可能与影响NF-κB信号通路、抑制下游靶基因的表达有关。     

鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响

目的研究鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测鳖甲煎丸不同浓度含药血清(0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%)对肝癌细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞BAX、Bcl-2、STAT3 mRNA表达;Western blot法检测细胞BAX、Bcl-2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果分别处理SMMC-7721细胞24、28 h,鳖甲煎丸含药血清能明显抑制肝癌细胞的增殖,具有浓度依赖性。鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)作用肝癌细胞24 h后,细胞总凋亡率显著增高(P0.01),随浓度增加而增高。与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清(10%、15%)上调BAX mRNA表达(P0.05),而BAX蛋白表达不明显;除5%含药血清鳖甲煎丸组Bcl-2 mRNA外,鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)下调Bcl-2、STAT3 mRNA和蛋白表达,并能抑制STAT3磷酸化,升高BAX/Bcl-2比值(P0.05,P0.01)。结论鳖甲煎丸含药血清诱导SMMC-7721肝癌细胞发生凋亡可能与影响STAT信号通路有关。     

鳖甲煎丸抗肝癌转移的理论依据及分子机制探讨

转移和侵袭是肝癌的基本特征,也是影响肝癌治疗效果的重要因素。肝细胞癌的转移侵袭与Wnt/β-catenin信号通路密切相关。针对肝癌转移的病机特点,从扶正培本、解毒散结及活血化瘀等3个方面分析了鳖甲煎丸抗肝癌转移的防治原则和理论依据。在此基础上,深入探讨鳖甲煎丸干预肝细胞癌转移的作用机制和分子机制,对筛选肝细胞癌的预后指标和寻找新的治疗靶点、深化和完善肝细胞癌转移侵袭的基础理论研究具有十分重要的意义。     

华蟾素对人肝癌细胞Bel-7402细胞增殖及周期的影响

目的:观察华蟾素注射液对人肝癌Bel-7402细胞增殖及周期的影响.方法:将不同浓度的华蟾素注射液作用于Bel-7402细胞,应用噻唑蓝还原法(MTT比色法)检测华蟾素注射液对Bel-7402细胞增殖的影响;应用流式细胞术(FCM)检测Bel-7402细胞周期分布.结果:华蟾素注射液可以抑制Bel-7402细胞增殖,其抑制作用与作用时间和剂量呈正相关,并可使细胞阻滞于G2/M期.结论:华蟾素注射液能够抑制人肝癌细胞Bel-7402的增殖,并可使细胞阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡.     

鳖甲煎丸对肝纤维化模型大鼠肝组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白及其靶基因表达的影响

目的探讨鳖甲煎丸治疗肝纤维化的可能作用机制。方法 48只大鼠随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱组和鳖甲煎丸低、中、高剂量组,每组8只。除空白对照组外其余各组大鼠腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立肝纤维化模型。首次注射后第2天开始给药,鳖甲煎丸低、中、高剂量分别给予为鳖甲煎丸混悬液0.55、1.1、2.2 g/(kg·d)灌胃,秋水仙碱组给予秋水仙碱片混悬液0.11 mg/(kg·d)灌胃,空白对照组和模型组给予2 ml生理盐水灌胃,共8周。Masson染色观察肝脏病理形态学改变;检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)等肝功能指标,及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)水平;Westernblot法检测大鼠肝组织中β-链蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达。结果与模型组比较,鳖甲煎丸各剂量组均不同程度纤维组织增生明显减少,血清ALT、AST含量及MDA、HYP、TGF-β1、CTGF、TNF-α、VEGF水平降低,SOD水平升高(P<0.05),肝组织中β-catenin、p-GSK-3β和p-AKT蛋白表达明显减少,且以鳖甲煎丸高剂量组效果更佳(P<0.05)。各组大鼠肝组织中GSK-3β和AKT蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论鳖甲煎丸能够显著减轻CCl4致大鼠肝纤维化的程度,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化、减少其下游靶基因的表达水平有关。     

半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402生长抑制作用的研究

目的:观察并比较半夏蛋白对体外培养人肝癌细胞Bel-7402生长的抑制作用.方法:应用MTT技术检测半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的抑制作用,并观察其量效关系.结果:30%沉淀、60%沉淀及Tris-HCl洗脱峰的量效关系不明显,0.05M和0.1M NaCl的洗脱峰呈现较好的量效关系,且对Bel-7402细胞的抑制作用与空白对照组有显著性差异(P＜0.05).结论:层析后的半夏蛋白对体外培养肝癌细胞增殖有较好的抑制作用,呈现显著的量效关系.     

鳖甲煎丸对人肾小球系膜细胞干预作用的研究

目的:探讨中药鳖甲煎丸药物血清对人肾小球系膜细胞(MCs)增殖和凋亡作用的影响。方法:应用细胞培养技术,进行人MCs培养,采取血清药理学方法,制备鳖甲煎丸药物血清,利用脂多糖(LPS)为刺激因子,将培养的MCs分为空白对照组(简称空白组);鳖甲煎组;脂多糖组;脂多糖鳖甲煎组(简称脂甲组)。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测MCs增殖、凋亡和细胞周期。结果:LPS刺激后,增殖指数明显提高,与空白组比较有明显差异(P<0.01);鳖甲煎丸药物血清能明显抑制人MCs增殖(P<0.01),并且使多数MCs阻滞在G0/G1期,能诱导人MCs发生凋亡。结论:抑制MCs增殖和促进凋亡可能是鳖甲煎丸延缓慢性肾脏疾病进展的部分作用机制。     

鳖甲煎丸对肺纤维化大鼠TGF-β1及smad3／7信号通路的影响

目的：观察鳖甲煎丸抗博莱霉素所诱导的大鼠肺纤维化的作用机制。方法：SD大鼠50只,随机分为生理盐水对照组、模型对照组、醋酸泼尼松组、鳖甲煎丸中剂量组、鳖甲煎丸高剂量组。采用博莱霉素气管内注入法,制备肺纤维化模型,于实验第28天留取标本,用免疫组化技术检测TGF-β1及smad3、smad,在肺组织中的表达。结果：鳖甲煎丸中、高剂量组大鼠TGF-β1表达减弱,smad,表达增强,smad,在鳖甲煎丸高剂量组表达减弱。结论：鳖甲煎丸能够减轻博莱霉素导致的大鼠肺纤维化程度,其作用机制与调控TGF-β1的smad,门信号转导蛋白表达有关。     

鳖甲煎丸对荷瘤小鼠VEGF、PCNA表达的影响

目的:探讨鳖甲煎丸对H22荷瘤小鼠的抑瘤机制.方法:建立H22荷瘤小鼠动物模型,随机分成4组:鳖甲煎丸高剂量组、鳖甲煎丸低剂量组、阴性对照组、环磷酰胺组.用免疫组织化学方法检测各组荷瘤小鼠肿瘤组织的血管内皮生长因子(VEGF)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达强度.结果:鳖甲煎丸对H22荷瘤小鼠肿瘤组织的VEGF、PCNA有显著的抑制作用.结论:鳖甲煎丸可能是通过抑制VEGF、PCNA的表达来抑制肿瘤生长的.     

绞股蓝总皂苷对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响

目的:探讨绞股蓝总皂苷(gypenosides,Gyp)对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响.方法:采用MTT法检测Gyp对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的增殖抑制作用;单细胞凝胶电泳法检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402 DNA损伤的影响;RT-PCR技术从分子水平上检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用机制.结果:100 ～400 μg· mL-1的Gyp对人肝癌细胞Bel-7402增殖生长有抑制作用,Gyp(182 μg·mL-1)作用4,8,12,16,24 h后,单细胞凝胶电泳观测到DNA损伤,12h时DNA损伤最大,达到(81.15±14.23)％,且有时间依赖性;Gyp组细胞caspase-8大量表达,对照组细胞无表达.结论:Gyp能抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖且促进其凋亡,其作用机制与DNA损伤以及caspase-8的大量表达有关.     

基于PI3K/AKT/GSK-3β信号通路探讨鳖甲煎丸调控肝癌细胞Hep3B增殖转移的机制

目的:研究鳖甲煎丸对肝癌细胞Hep3B增殖和转移的影响,探讨其抗肝细胞癌的作用机制.方法:分别使用不同浓度的鳖甲煎丸药物血清培养肝癌细胞Hep3B,采用CCK8、细胞划痕实验观察肝癌细胞增殖和转移能力的改变;采用Western Blot检测PI3K、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3 β、E-cadherin、N...     

鳖甲煎丸对肺纤维化大鼠TGF-β1及smad信号通路的影响

目的：观察鳖甲煎丸抗博莱霉素所诱导的大鼠肺纤维化的作用机制。方法：SD大鼠50只,随机分为生理盐水组,模型组,醋酸泼尼松组,鳖甲煎丸中剂量组,鳖甲煎丸高剂量组。采用博莱霉素气管内注入法,制备肺纤维化模型,于实验第28天留取标本,用免疫组化技术检测TGF-β1及smad3、smad7在肺组织中的表达。结果：鳖甲煎丸中、高剂量组大鼠TGF-β1表达减弱、smad7表达增强,smad3在鳖甲煎丸高剂量组表达减弱。结论：鳖甲煎丸能够减轻博莱霉素导致的大鼠肺纤维化程度,其作用机制与调控TGF-β1的smad蛋白表达有关。     

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响。[方法]将实验大鼠随机分为4组:生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本。利用原位杂交染色法对标本进行含药血清作用后显微镜图像分析。[结果]光镜下,鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组端粒酶数量减少、密度降低,与灌服生理盐水组相比较有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组无明显差异(P>0.05)。[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响有减弱作用。     

鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠细胞免疫功能的干预作用

目的:观察鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠肿瘤细胞免疫功能的影响。方法:将50只小鼠分成实验组和正常组,对实验组小鼠进行肝癌荷瘤小鼠造模后,分为模型组和鳖甲煎丸高、中、低剂量组,连续灌胃给药15d。流式细胞仪对荷瘤小鼠外周血中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和CD4+T/CD8+T进行测定;采用ELISA法检测荷瘤小鼠外周血中白细胞介素-2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果:鳖甲煎丸可使荷瘤小鼠外周血中CD4+T淋巴细胞显著增加(P0.01),CD8+T淋巴细胞亚群的比例显著下降(P0.01),CD4+T/CD8+T升高显著(P0.01);同时,鳖甲煎丸还可以提高肝癌荷瘤小鼠血清IFN-γ水平(P0.01)和血清IL-2水平(P0.01)。结论:鳖甲煎丸抑制肝癌生长的作用可能是通过提高肝癌荷瘤小鼠外周血中CD4+T细胞亚群的比例和降低CD8+T细胞亚群的比例,来纠正CD4+T/CD8+T的失衡,改变Th1/Th2漂移现象,维持Th1功能亚群的优势来实现的。     

白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞生长的影响

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞生长的影响。方法常规法体外培养人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞,设空白对照组、阳性对照组和供试药物组(大、中、小剂量),分别采用MTT法和流式细胞仪检测白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制率和凋亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果白花蛇舌草多糖可抑制人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长,并促进其凋亡,其作用效果与其浓度正相关,与空白对照组相比具均有显著性差异(P﹤0.01)。结论本研究结果提示,白花蛇舌草多糖具有较好的抗肿瘤活性。     

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖的影响。[方法]将实验大鼠随机分为四组,生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组。无菌条件下从大鼠后腔静脉采血,分离血清。将同组大鼠血清混匀,冷藏备用。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本。对标本进行0D值测定,计算细胞增殖抑制率。[结果]鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组血清作用人肝癌HEPG2细胞48H后与灌服生理盐水组相比较细胞增殖抑制率有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组细胞增殖抑制率三者无明显差异(P>0.05)。[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖有抑制作用。