特女贞苷与红景天苷的大鼠在体胃肠吸收比较

特女贞苷与红景天苷是女贞子炮制前后含量变化较大的2种活性成分。为探讨女贞子炮制增效机制,该实验采用大鼠在体胃肠灌流模型,用HPLC测定给药后不同时间点大鼠胃与小肠灌流流出液中特女贞苷与红景天苷含量并计算吸收速率常数和吸收百分率,结果在特女贞苷的胃肠灌流流出液中均可检出其次级苷红景天苷。特女贞苷与红景天苷在小肠中的吸收速率常数分别为0.055 3,0.144 2 h^-1,4 h累计吸收率分别为24.46%,60.14%,在胃中吸收速率常数分别为5.70,8.26 h^-1,4 h累计吸收率分别为34.21%,47.23%。实验证明特女贞苷在大鼠胃与小肠内均可被代谢为红景天苷,红景天苷较特女贞苷更利于胃肠吸收。结果提示女贞子炮制后补肝肾药效增强与特女贞苷转化为红景天苷后更利于机体吸收有关。     

植物生长物质对红景天愈伤组织诱导和培养的影响

目的:考察植物生长物质对四裂红景天愈伤组织诱导和培养的影响并分析愈伤组织中红景天苷含量。方法:运用正交设计实验,在MS固体培养基中添加不同种类、不同含量的植物生长物质,进行愈伤组织的诱导和培养,并用HPLC检测愈伤组织中红景天苷的含量。结果:培养基中含有2,4-D1mg·L^-1,NAA2mg·L^-1,6-BA0.5mg·L^-1,KT0.1mg·L^-1时,愈伤组织诱导效果最好,诱导率为83.3%。当生长物质配比为2,4-D1mg·L^-1,6-BA0.1mg·L^-1和KT0.5mg·L^-1时,最适于愈伤组织的培养,培养30d后干重达11.77g·L^-1,红景天苷的含量为干重的0.28%。结论:红景天愈伤组织在诱导和培养2个阶段所需的生长物质种类和含量有很大差异;诱导的愈伤组织能够合成红景天苷。     

芪天滴丸主要活性成分的大孔吸附树脂分离纯化工艺研究

 目的 采用大孔吸附树脂法，优化芪天滴丸中赤芍、红花及红景天活性成分的纯化工艺条件。 方法 以芍药苷、羟基红花黄色素 A （ HSYA ）及红景天苷为指标，对 4 种树脂进行了筛选；以芍药苷和 HSYA 为指标，优化 HPD100 型大孔树脂富集纯化的工艺条件。 结果 HPD100 型对芪天滴丸中芍药苷、 HSYA 及红景天苷具有很好的吸附特性，优化 HPD100 型大孔树脂富集纯化的工艺条件为：样品溶液含芍药苷 2.98 g ·L^-1 ，含 HSYA 1.44 g ·L^-1 ，含红景天苷 0.81 g ·L^-1 ，吸附时间不低于 12 h ，吸附速度 60 mL·h^-1 ，洗脱速度 60 mL·h^-1 ， 20% 乙醇洗脱 200 mL 。大孔吸附树脂反复使用 7 次。 结论 HPD100 大孔吸附树脂能有效富集纯化赤芍、红花及红景天中的活性成分。     

RP-HPLC内标法测定大鼠血清红景天苷浓度的研究

 目的RP-HPLC内标法建立大鼠血清中红景天苷浓度的测定方法。方法健康♂SD大鼠尾静脉注射红景天苷(60mg·kg^-1)后,分别于不同时间点眼眶静脉丛取血0.5mL,高氯酸沉淀血清蛋白,离心取上清液进样分析。色谱柱为SHIMADZU C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(10∶90∶0.011∶0.016),流速为1.5mL·min^-1,检测波长为277nm,柱温为50℃,进样量10μL,内标为咖啡因。结果红景天苷质量浓度在0.56～70mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9975),以信号/噪音=3∶1计算,红景天苷最低检测浓度为0.15mg·L^-1,日内、日间精密度分别≤4.5%,≤5.4%,血清样品的平均回收率为(99.27±4.38)%。结论建立的RP-HPLC内标法方法简便、快速、准确,适合于红景天苷的血药浓度测定及药动学研究。     

复方酪萨维口腔速崩片中蔷薇红景天提取物的大孔树脂纯化工艺优选

目的：优选大孔树脂纯化复方酪萨维口腔速崩片中蔷薇红景天提取物的工艺条件。方法：以红景天苷、酪萨维的含量及回收率为指标,通过单因素试验筛选大孔树脂型号并优选其纯化工艺。结果：AB-8型树脂分离效果较好,最佳工艺为蔷薇红景天提取物加适量水充分溶解以2 BV·h^-1的流速上样,径高比1：7,红景天苷、酪萨维的比上柱量分别为7.18,10.43 mg·g^-1,水洗除杂,加40%乙醇12 BV洗脱,洗脱流速4 BV·h^-1,树脂可重复利用3次;红景天苷、酪萨维平均提取量分别为1.870%,3.186%,平均回收率分别为82%,96.26%,平均纯度依次为5.72%,9.72%,纯度分别提高了2.51,2.94倍,浸膏得率由纯化前的13.73%减少至4.57%。结论：AB-8型大孔树脂对红景天苷和酪萨维具有良好的纯化效果,优选的工艺稳定可行。     

HPLC测定6种青海产红景天植物中红景天苷的含量

 目的 研究提取方法及HPLC测定条件以测定狭叶红景天、吉氏红景天、深红红景天、四裂红景天、大花红景天和园丛红景天中红景天苷的含量。方法 色谱柱：Spherisorb C₁₈(5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相：甲醇-水(20∶80);流速：1.0 ml·min^-1;检测波长：223 nm。结果 甲醇回流30 min可提取完全;红景天苷线性范围为0.097～0.870 μg,平均回收率为99.6%,RSD＝1.62%。结论 该分析方法简便、灵敏、准确;红景天苷含量与红景天种类有一定的关系。     

红景天苷对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 红景天苷是从红景天的根茎部中提取得到的，是红景天中含量最高的天然活性化合物。该实验旨在研究红景天苷对人源性肝癌细胞（HepG2细胞）增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 选取未作任何处理的HepG2细胞作为空白组，以终浓度为20、40、80 μmol·L^-1红景天苷处理的HepG2细胞作为红景天苷组。采用多功能细胞分析仪测定红景天苷对HepG2细胞增殖的影响，划痕实验测定红景天苷对HepG2细胞迁移能力的影响，Transwell小室实验测定红景天苷对HepG2细胞侵袭能力的影响，倒置显微镜观察红景天苷对HepG2细胞形态的影响，透射电镜观察红景天苷对HepG2细胞中线粒体的影响，流式细胞术分析红景天苷对HepG2细胞凋亡及周期分布的影响，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定红景天苷对HepG2细胞相关凋亡基因的影响，蛋白免疫印迹法测定红景天苷对HepG2细胞相关迁移、侵袭及凋亡蛋白的影响。结果 与空白组比较，红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）细胞指数均明显下降（P<0.05），愈合面积均明显增加（P<0.05），且呈时间和浓度依赖性；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）中能够穿过Matrigel基质胶的HepG2细胞数量呈浓度依赖性减少；红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）总凋亡率呈浓度依赖性升高，且阻滞细胞于G₂/M期（P<0.05）；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin）表达呈浓度依赖性升高（P<0.05），神经钙黏附蛋白（N-cadherin）表达呈浓度依赖性降低（P<0.05）。红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）胱天蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Caspase-3蛋白及胱天蛋白酶-9（Caspase-9）蛋白表达均呈浓度依赖性升高（P<0.05），肌动蛋白结合蛋白（Girdin）及Bcl-2表达均呈浓度依赖性降低（P<0.05）。结论 红景天苷对HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭均具有抑制作用，且通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。表明红景天苷可作为一种潜在的肝癌化疗候选药物。     

3种前体饲喂对高山红景天悬浮培养细胞中红景天苷的影响

目的: 研究前体饲喂对高山红景天细胞生长和红景天苷含量的影响。 方法: 在细胞培养起始期分别添加苯丙氨酸、肉桂酸和酪氨酸3种前体,在细胞生长的稳定期第14 d收获细胞,测定细胞干重、红景天苷含量、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸裂解酶(PAL)的活性。 结果: 苯丙氨酸的最佳添加质量浓度为20 mg ·L^-1,肉桂酸和酪氨酸的最佳添加质量浓度均为10 mg ·L^-1,此时红景天苷含量分别为2.65,3.50,3.21 mg ·g^-1。但高浓度的酪氨酸对细胞的生长有一定的抑制作用。 结论: 3种前体在合适的浓度下均能促进细胞中红景天苷的生物合成,并提高多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸裂解酶(PAL)的活性,其中肉桂酸作用明显。     

红景天苷注射剂的制备及其在大鼠体内药动学研究

 目的 制备红景天苷注射剂并研究其在大鼠体内的药动学。方法 以高纯度红景天苷为原料,通过对活性炭用量以及灭菌条件的选择,确定了红景天苷注射剂的制备工艺。按照《中国药典》要求,对注射剂进行质量研究和稳定性考察。通过对大鼠尾静脉给药,用高效液相色谱法测定血药浓度,获得红景天苷的药-时曲线,并利用DAS 3.0计算其在大鼠体内的药动学参数。结果 注射剂工艺中活性炭用量为0.1% （1 000 mL注射液中含1 g活性炭）;灭菌温度为115 ℃,时间为30 min,该工艺制得的红景天苷注射剂为无色澄明液体,红景天苷含量在标示量的90%～110%内。稳定性结果显示,红景天苷注射剂在加速实验6个月内、长期实验12个月内稳定。建立了血药浓度的HPLC分析方法,其最低检测浓度为0.05 μg·mL^-1,最低定量浓度为0.2 μg·mL^-1。红景天苷血药浓度在0.5～400.0 μg·mL^-1内线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率大于95%;药动学结果显示,消除半衰期为7.6 min,表观分布容积为324.0 mL·kg^-1,清除率为32.0 mL·min^-1·kg^-1。结论 红景天苷注射剂的制备工艺可行,成品质量合格、稳定;红景天苷在大鼠体内半衰期短,清除率较大,适宜制成注射剂作为临床急救用药。     

高山红景天苷对大鼠心钠素基因表达的影响

 目的 从基因表达水平研究高山红景天苷对大鼠心脏内分泌功能的影响。方法 分别给各组大鼠按15 mg·kg^-1·d^-1ip红景天苷氯化钠溶液。饲养30 d后,断头处死。冷酚法提取心房总RNA,用(α³²P)标记的大鼠心钠素前体原cDNA控针与各组大鼠心房总RNA做Northern blot杂交和Dot blot杂交,以检测心房ANP-mRNA的含量。结果 老年大鼠ANP-mRNA含量明显低于青年大鼠,注射红景天苷后,老年大鼠ANP-mRNA含量增加而青年大鼠减少。结论 老化过程中ANP基因表达能力明显衰退,红景天具有一定的抑制心脏内分泌功能老化的作用。     

HPLC测定白加黑中盐酸伪麻黄碱和氢溴酸右美沙芬的含量

 目的:测定白加黑中盐酸伪麻黄碱和氢溴酸右美沙的含量?方法:采用苯基键合硅胶柱;流动相为乙腈-水-磷酸(40∶60∶0.1),其中每1000ml该溶液中加入十二烷基硫酸钠(SDS)4.0g;以盐酸萘甲唑啉为内标;检测波长为224nm;流速为1.0ml·min^-1?结果:盐酸伪麻黄碱线性范围0.225～1.125mg·ml^-1,平均回收率为100.23%,RSD=0.69%(n=7);氢溴酸右美沙芬线性范围0.112～0.560mg·ml^-1,平均回收率为99.81%,RSD=0.95%,(n=7)?结论:方法简便,结果准确?     

红景天苷对慢性重复悬尾应激动物的保护作用

目的:研究红景天苷(salidroside)对慢性重复悬尾应激模型(repeated tail-suspension test,R-TST)小鼠的保护作用。方法:昆明种小鼠50只,随机分为5组,即对照组、应激组、红景天苷高(60 mg.kg-1)、中(30 mg.kg-1)、低剂量组(15 mg.kg-1)。采用重复悬尾应激模型,重复悬吊应激11 d,每天应激1次,每次2 h,并每隔3 d增加1 h,每次应激前30 min ig给予相应剂量的红景天苷或生理盐水,并于末次应激结束30 min后眼眶取血,用RIA测定血清中睾酮含量。摘取脾脏、胸腺、肾上腺和睾丸,称重并计算脏器指数。取肾上腺和睾丸用4%多聚甲醛固定并制作组织切片,HE染色,显微镜下观察形态学变化。结果:应激后小鼠体重增长程度明显受抑,质量增加幅度仅为对照组的27%;肾上腺指数上升,为对照组的164%;脾脏指数下降为对照组的70%;肾上腺皮质肥厚,髓质萎缩甚至消失。应激组小鼠血浆睾酮水平显著低于对照组(P<0.01)。应激前30min给予低剂量红景天苷可逆转应激导致的体重增加减缓,降低肾上腺指数,脾脏指数增加;肾上腺皮质肥厚及髓质萎缩等病理症状减轻,睾酮恢复至正常水平。但中剂量组和高剂量红景天苷组上述作用不显著。结论:低剂量红景天苷可显著改善应激小鼠体重增加减缓、肾上腺指数升高、脾脏指数下降、肾上腺皮质肥厚、髓质萎缩和结构层次模糊等,且能显著抑制重复悬尾应激所引起的睾酮水平低下并使其恢复正常,提示红景天苷可能通过改善应激所致的睾酮水平降低及维持肾上腺的正常结构和正常生理功能发挥抗应激作用。     

女贞子中红景天苷的提取纯化工艺优选

目的:优选女贞子中红景天苷的提取、纯化工艺.方法:采用HPLC测定红景天苷含量,以红景天菅含量及浸膏得率的综合评分为指标,通过正交试验考察溶剂、料液比、时间及次数对红景天苷提取工艺的影响;通过单因素试验筛选大孔树脂型号,并优选其纯化工艺条件.结果:优选的提取工艺为加6倍量水回流提取3次,每次1h;D4020型大孔树脂纯化女贞子中红景天苷的工艺条件为上样液质量浓度0.5 g·mL-1,吸附流速1 BV·h-1,用5 BV的20％乙醇溶液洗脱,收集洗脱液,减压回收,即得红景天苷粗品,其纯度达16.34％.结论:按优选的工艺条件提取、纯化后,女贞子中红景天苷含量提高了2.12倍.     

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定中/长链脂肪乳注射液中磷脂酰胆碱含量

 目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定脂肪乳注射液中磷脂酰胆碱(PC)含量。方法采用Lichrospher 100Diol柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以正庚烷-异丙醇(86∶114)为流动相A,正庚烷-异丙醇-水(31∶62∶12)为流动相B,进行梯度洗脱。流速为1.0 mL·min^-1,柱温为40℃;蒸发器温度80℃,空气,喷气流速为2.0 L·min^-1。结果磷脂酰胆碱的线性范围为0.134～0.938 g·L^-1,r=0.998 2(n=7),PC加样回收率为98.9%,RSD为0.3%(n=9)。结论本法操作简便快速、重复性好、灵敏度高、准确、专属性高。     

高效液相色谱法测定血清中富马酸奎的平浓度

 目的：建立用高效液相色谱法(HPLC)测定血清中富马酸奎的平浓度的方法。方法：HPLC测定，流动相为甲醇-水-1 mol·L^-1醋酸铵-5 mol·L^-1氨水(400∶100∶5∶1)的混合液体，pH9.7,流速1 mL·min^-1,C₁₈柱，紫外检测波长254 nm，以外标法定量。结果：线性范围10～300 μg·L^-1，最低检测限5 μg·L^-1，平均提取回收率93.10%，日内与日间精密度平均分别为3.41%和4.16%。结论：用HPLC可以较好的对血清中富马酸奎的平进行定性和定量。     

高效液相色谱法测定人血浆中利奈唑胺的血药浓度

 目的 建立人血浆中利奈唑胺的HPLC测定方法。方法 采用氯霉素为内标，用5%三氯乙酸-甲醇溶液(1∶1)沉淀蛋白，色谱柱为Symmetry C₁₈ (4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为乙腈-水 (28∶72)，流速为1.0 mL·min^-1，柱温30 ℃，检测波长254 nm。结果 利奈唑胺在0.25~50 mg·L^-1内线性关系良好，r＝0.999 7，最低检测浓度为0.05 mg·L^-1，平均绝对回收率95.68%，方法回收率在100%~102%之间。高、中、低3种浓度的日内、日间RSD均小于6%。结论 本方法简单、快捷、灵敏、准确，适用于利奈唑胺临床血药浓度的监测。     

反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中美洛昔康浓度及其药动学

 目的：建立血浆中美洛昔康浓度的高效液相色谱分析方法,用此方法对大鼠灌胃给药，对3种剂量的美洛昔康进行药动学研究。方法：色谱条件：色谱柱为C₁₈ (4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水-冰醋酸-乙腈(600∶500∶20∶50), 流速1.0 ml.min^-1，检测波长355 nm,柱温40℃, 血药浓度-时间数据采用PKBP-N1程序拟合其药动学参数。结果：血浆中内源性杂质不干扰美洛昔康及其分解产物的测定，血浆中回收率为98.80%，RSD为1.78%。日间RSD＜7.17%,日内RSD＜6.69%。大鼠灌胃给药1.0,2.0，6.0 mg·kg^-1美洛昔康后,血药浓度时间曲线符合二室开放模式,并由此测得美洛昔康在大鼠体内的半衰期分别为43.25,38.60,37.10 h,达峰时间分别为2.02,1.90,1.94 h。峰浓度分别为2.52,4.85,10.62 μg·ml^-1，AUC分别为112.8，142.2，412.0 μg·h·ml^-1。结论：本方法简便,准确,能较好地满足美洛昔康血药浓度监测及药动学的要求。