五子衍宗丸及其拆方对老年大鼠心脑线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及ATP合成的影响

目的 :研究五子衍宗丸及其拆方对线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及三磷酸腺苷(ATP)合成的影响。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果 :五子衍宗丸及其拆方的枸杞子、菟丝子可减少老年大鼠脑组织线粒体DNA缺失 (P <0 0 1) ,提高脑线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ活力和ATP的合成 (P <0 0 5,P <0 0 1) ;枸杞子、菟丝子还可减少老年大鼠心线粒体DNA缺失 (P<0 0 5,P <0 0 1)。结论 :五子衍宗丸、枸杞子、菟丝子对老年大鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的影响

目的：研究五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活力的影响。方法：38例男性老年肾虚者采用单盲法，随机分为五子衍宗丸治疗组和安慰剂对照组，服药3个月。分别用聚合酶链反应（PCR）和酶动力学方法检测治疗前后外周血白细胞线粒体DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体的活力。结果：五子衍宗丸可提高男性老年肾虚者外周血白细胞线粒体呼吸链酶复合体I、Ⅳ活力，减少线粒体DNA缺失（P＜0．05，P＜0．01）。结论：五子衍宗丸对男性老年肾虚者白细胞线粒体DNA氧化损伤有保护作用。     

电针对SAMP8小鼠海马线粒体呼吸链酶复合体活性的影响

目的观察电针对SAMP8小鼠海马线粒体呼吸链酶复合体活性的影响,从线粒体角度探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法选取8月龄SAMP8小鼠16只,随机分为模型组8只,电针组8只,另选取8只8月龄的SAMR1小鼠为对照组,疗程结束后,采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,分光光度法检测海马线粒体呼吸链酶复合体的活性。结果模型组与对照组相比,模型组鼠平均逃避潜伏期明显延长,原平台象限停留时间缩短,海马线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性降低(P<0.01,P<0.05);电针组与模型组比较,电针组平均逃避潜伏期缩短,原平台象限停留时间延长,海马线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论电针治疗AD的可能机制是提高海马线粒体呼吸链酶复合体活性,改善线粒体功能。     

脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及滋补脾阴方药作用机制的实验研究

目的:本项研究旨在通过对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织线粒体DNA(mtDNA)缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的研究,探讨脾阴虚衰老状态下mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化的规律,进一步揭示脾阴虚衰老的病理实质和滋补脾阴方药的作用机制,从而为脾实质的研究提供客观依据.方法:建立大鼠脾阴虚证衰老模型,观察脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化;观察滋补脾阴方药对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的调控.结果:脾阴虚衰老状态下,大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失较青年组和正常老年组明显增多,线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活力较青年组和正常老年组明显下降,滋补脾阴方药可减少脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织的mtDNA缺失,提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活力.结论:脾阴虚衰老机体细胞mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力发生异常改变,滋补脾阴方药对脾阴虚衰老时机体mtDNA、呼吸链酶复合体活力有调控作用.     

脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及滋补脾阴方药作用机制的实验研究

目的：本项研究旨在通过对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织线粒体DNA(mtDNA)缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的研究，探讨脾阴虚衰老状态下mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化的规律，进一步揭示脾阴虚衰老的病理实质和滋补脾阴方药的作用机制，从而为脾实质的研究提供客观依据。方法：建立大鼠脾阴虚证衰老模型，观察脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力变化；观察滋补脾阴方药对脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的调控。结果：脾阴虚衰老状态下，大鼠心肌、脑组织mtDNA缺失较青年组和正常老年组明显增多，线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活力较青年组和正常老年组明显下降，滋补脾阴方药可减少脾阴虚证衰老大鼠心肌、脑组织的mtDNA缺失，提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活力。结论：脾阴虚衰老机体细胞mtDNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力发生异常改变，滋补脾阴方药对脾阴虚衰老时机体mtDNA、呼吸链酶复合体活力有调控作用。     

衰老小鼠脑组织mtDNA缺失呼吸链酶复合体活性的变化以及独活作用机制的实验研究

目的：研究独活及其醇提物对衰老小鼠脑组织线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活性的影响。方法：用聚合酶链反应（PCR）、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果：自然衰老小鼠脑组织mtDNA缺失较青年小鼠明显增多，线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活性较青年小鼠明显下降。独活及其醇提物可减少自然衰老小鼠脑组织的mtDNA缺失，提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活性。结论：独活及其醇提物对自然衰老小鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

补肾健脾养血活血方对老年小鼠肾线粒体DNA缺失突变的影响

目的:研究补肾健脾养血活血方对老年Balb/c小鼠肾线粒体DNA缺失突变的影响。方法:老年Balb/c小鼠随机分为老年空白组和老年给药组,分别给予生理盐水和补肾健脾养血活血方4个月。采用聚合酶链反应(PCR)技术和光密度扫描检测两组线粒体DNA的缺失突变情况。结果;与老年空白组比较,补肾健脾养血活血方能显著减少老年Balb/c小鼠肾mtDNA的缺失(P<0.001)。结论:补肾健脾养血活血方可以抑制老年小鼠mtDNA的缺失突变,提示补肾健脾养血活血法组方能减少mtDNA的氧化损伤,对mtDNA有保护作用,从而从分子水平提供了本方延缓衰老的可能机制。     

衰老小鼠脑组织mtDNA缺失呼吸链酶复合体活性的变化以及独活作用机制的实验研究

目的:研究独活及其醇提物对衰老小鼠脑组织线粒体DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体活性的影响。方法:用聚合酶链反应(PCR)、酶动力学和生物发光技术进行检测。结果:自然衰老小鼠脑组织m tDNA缺失较青年小鼠明显增多,线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ活性较青年小鼠明显下降。独活及其醇提物可减少自然衰老小鼠脑组织的m tDNA缺失,提高线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活性。结论:独活及其醇提物对自然衰老小鼠线粒体DNA的氧化损伤有保护作用。     

银杏平颤方及其拆方对帕金森病模型小鼠脑内线粒体酶复合体活性的影响

目的 探讨银杏平颤方防治帕金森病的机理及其阻止帕金森病模型小鼠黑质多巴胺神经元凋亡的途径.方法 取雄性C57BL/6J小鼠,分为正常组、模型组和4个中药组（即全方组、解毒方组、平肝方组和化瘀方组）.采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶腹腔注射建立帕金森病模型,分别于用药14天和28天处死,测定小鼠脑线粒体酶复合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ的活性.结果 与正常组比较,模型组小鼠脑线粒体酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活性明显降低（P＜0.05,P＜0.01）,Ⅱ的活性无明显变化;与模型组比较,全方组和化瘀方组14天时脑线粒体酶复合体Ⅰ活性均显著提高（P＜0.05）,解毒方组14天、平肝方组28天、化瘀方组两个时段复合体Ⅱ的活性均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组比较,中药各组在14天时复合体Ⅳ活性均升高（P＜0.05,P＜0.01）,平肝方组和化瘀方组在28天时显著升高（P＜0.05）.结论 银杏平颤方及其拆方可能通过部分抑制脑内线粒体酶复合体活性下降,维持线粒体的功能,阻止中脑多巴胺神经元的凋亡,以减缓帕金森病的进展.     

五子衍宗丸中不同配伍对金丝桃苷在大鼠体内吸收及分布影响

目的观察五子衍宗丸中不同配伍对金丝桃苷在大鼠体内吸收及分布的影响,为探察其配伍规律提供实证依据。方法取SD雄性大鼠72只,随机分为金丝桃苷组(6.11 mg/kg)、菟丝子组(2.60 g生药/kg)、菟丝子+枸杞子组(5.40 g生药/kg)、菟丝子+车前子组(3.40 g生药/kg)、五子衍宗丸组(7.60 g生药/kg)及空白组,每组12只。各组按剂量连续灌胃给药7天,空白组给等量水,末次给药前禁食不禁水12 h,分别于末次给药前及给药后1、2、3、4、6、8、10、12、16、24、32、48、60、72 h时每组中随机选取6只大鼠,从眼眶静脉丛取血约0.5 mL,肝素抗凝,采用HPLC法测定血浆中金丝桃苷含量,计算药动学参数[血浆半衰期(t1/2)、药峰浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax)、平均驻留时间(MRT)、药时曲线下面积(AUC)];分别取给药3 h后各组剩余大鼠的心、肝、脾、肺、肾、睾丸和脑组织,组织匀浆,用HPLC外标法测定组织中金丝桃苷含量。结果药动学研究结果显示:金丝桃苷在大鼠体内呈现双峰吸收现象,与金丝桃苷组比较,不同配伍各组中金丝桃苷的t1/2、Tmax、MRT、AUC均显著增加(P<0.05);与菟丝子组比较,菟丝子+枸杞子组Cmax、t1/2、Tmax均显著增加,菟丝子+车前子组t1/2明显降低,Tmax显著减小(P<0.05),五子衍宗丸组t1/2、Tmax显著下降,Cmax、MRT0-∞、AUC0-∞均显著增加(P<0.05)。组织分布研究结果显示:金丝桃苷在肝脏、肾脏、睾丸组织中含量较高,其中肾脏含量最高,与金丝桃苷组比较,菟丝子组、菟丝子+枸杞子组、五子衍宗丸组大鼠各组织中金丝桃苷含量均有所增加,其中肝脏分别增加9.63%、34.56%、74.52%;肾脏分别增加了16.02%、85.43%、109.07%;睾丸组织分别增加了34.81%、288.13%、431.66%,差异有统计学意义(P<0.05)。与菟丝子组比较,菟丝子+枸杞子组与五子衍宗丸组大鼠各组织中金丝桃苷含量均有显著增加,其中睾丸组织增幅最大,分别为187.93%和294.45%,肾脏次之,含量增幅分别为59.84%和80.21%(P<0.05)。结论菟丝子配伍枸杞子明显促进金丝桃苷的吸收及在肾脏、睾丸等组织分布,显著延长体内时间;菟丝子配伍车前子则抑制金丝桃苷的吸收及在组织中的分布;五子衍宗丸可能通过对金丝桃苷成分的正、负调控,明显增加金丝桃苷在睾丸组织中的分布,使睾丸成为全方主要靶向器官,从而充分发挥补肾益精的功效。     

五子衍宗丸对小鼠记忆力、免疫功能、耐缺氧及耐疲劳的影响

目的:观察五子衍宗丸对小鼠记忆力、免疫功能、耐缺氧及耐疲劳的影响。方法:选用ICR雄性小鼠,五子衍宗丸高、中、低剂量分别按生药计为2.4,1.2,0.6 g·kg-1,ig给药。以Morris水迷宫测定小鼠记忆力和认知能力;碳粒廓清率、迟发型变态反应测定免疫功能;常压缺氧和常温游泳法测定耐缺氧和耐疲劳能力。结果:与对照组比较,五子衍宗丸各剂量组小鼠寻找隐藏平台的逃避潜伏期及总路程明显缩短(P0.05或P0.01);高剂量组廓清指数K值明显增加(P0.01);各剂量组耳肿胀度无明显差异;高、中剂量组耐缺氧时间明显延长(P0.01);高剂量组常温游泳时间有所延长(P0.05);结论:五子衍宗丸具有明显增强小鼠记忆力和空间认知力,提高小鼠耐缺氧、抗疲劳能力的作用;同时可提高非特异性免疫功能,但对细胞免疫功能无明显作用。     

五子衍宗液对雄性大鼠下丘脑单胺类递质、性激素和生育能力的影响

本研究观察了五子衍宗液对雄性大鼠下丘脑单胺类递质、性激素和生育能力的影响。结果表明,该方可升高老龄大鼠下丘脑去甲肾上腺素(NE)含量,降低5-羟色胺(5-HT)含量和5-HT/多巴胺(DA)比值;升高老龄大鼠血浆睾酮(T)含量,降低雌二醇(E_2)/T比值;提高雄性大鼠精子活动度、精子计数和生育能力。     

基于P53/P21和碱基切除修复通路的五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸DNA损伤的保护作用研究

目的基于P53/P21和碱基切除修复(BER)通路研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸DNA损伤的保护作用。方法将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,衰老模型组、五子衍宗方低剂量组(1 g/kg)和高剂量组(4 g/kg),另取2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组,每组8只。给予普通饲料或含药饲料饲养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织。免疫荧光检测大鼠睾丸组织中DNA损伤相关蛋白γ-H2AX及BER相关蛋白脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(APE1)、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1)和X线修复交错互补基因1(XRCC1)的表达和定位;ELISA法检测大鼠睾丸组织中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)的量;Western blotting法检测大鼠睾丸组织中p-P53和P21蛋白的表达水平。结果与衰老模型组相比,五子衍宗方能明显降低睾丸DNA损伤相关蛋白γ-H2AX和BER相关蛋白OGG1、APE1和XRCC1的表达水平;ELISA检测结果显示,与衰老模型组相比,五子衍宗方能显著下调8-OHd G的量;Western blotting结果显示,五子衍宗方能显著降低自然衰老大鼠睾丸p-P53、P21的蛋白表达水平。结论五子衍宗方可通过调节P53/P21和BER通路减轻自然衰老大鼠睾丸DNA损伤。     

基于PI3K/Akt通路观察五子衍宗方对老龄大鼠精原干细胞增殖的影响

目的:探讨五子衍宗方(Wuzi Yanzong Fang,WYF)基于磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对老龄大鼠精原干细胞增殖的作用及其机制研究。方法:以自然衰老大鼠为研究对象,将40只18月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为老龄模型组,WYF低、中、高剂量组,每组10只,另以10只2月龄大鼠作为青年组。WYF低、中、高剂量组分别灌胃给药0.4,0.8,1.6 g·kg~(-1),青年组、老龄模型组分别灌胃给予生理盐水,每周停药2 d,持续给药4个月。末次给药后麻醉处死大鼠,快速取出睾丸组织。免疫荧光法检测Sertoli细胞数量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),前髓细胞锌指蛋白(PLZF),干细胞因子(SCF)和骨形态蛋白4(BMP4)mRNA表达水平,免疫荧光法检测精原干细胞数量及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光法检测磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)的表达与定位。结果:与青年组比较,老龄模型组Sertoli细胞数量未见明显差异,而GDNF,PLZF,SCF和BMP4 mRNA表达水平显著降低,精原干细胞数量减少,PCNA表达下降,PI3K,p-Akt蛋白表达降低(P0.01);与老龄模型组比较,WYF各剂量组GDNF,PLZF,SCF和BMP4 mRNA表达水平显著升高,精原干细胞数量增多,PCNA表达上调,PI3K,p-Akt表达明显增多(P0.05,P0.01)。结论:WYF能够明显促进老龄大鼠精原干细胞的增殖,其作用机制可能与调节睾丸内PI3K/Akt信号通路有关。     

化瘀祛痰方对AS家兔肝脏线粒体呼吸链酶复合物的影响

目的:探究化瘀祛痰方对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)家兔肝脏线粒体呼吸链酶复合物的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:健康SPF级雄性新西兰白兔90只,随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰方高、中、低剂量组(4,8,16 g·kg-1),辛伐他汀组(1.4 mg·kg-1),每组15只。正常组给予基础饲料喂养,其他组采用高脂饲料喂养,建立动脉粥样硬化模型,造模8周后,化瘀祛痰方高、中、低剂量组与辛伐他汀组给予相应药物溶液,正常组和模型组给予等量生理盐水,4周后,全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TC),胆固醇(cholesterol,TC),高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察肝组织形态学改变;分光光度计法检测家兔肝脏线粒体呼吸链酶复合物活性;Blue-Native-Page技术检测线粒体呼吸链酶复合物含量。结果:与正常组比较,模型组家兔血清中TC,TG,LDL-C显著升高,HDL-C显著降低;与模型组比较,化瘀祛痰方高、中、低剂量组与辛伐他汀组家兔血清中TC,TG,LDL-C显著降低,HDL-C显著升高(P0.05,P0.01),其中化瘀祛痰方中以高剂量效果最为显著。HE及油红O染色结果显示模型组较正常组比较家兔肝组织肿胀明显、脂肪空泡清晰可见,胞浆内脂滴蓄积明显;与模型组比较,化瘀祛痰高、中、低剂量组及辛伐他丁组脂肪空泡明显减少或消失,肝组织形态恢复或部分恢复正常,其中化瘀祛痰方中以高剂量效果最为显著。与正常组比较,模型组肝脏线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ活性及含量显著降低(P0.01);与模型组比较,化瘀祛痰方高剂量组与辛伐他汀组肝脏线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ活性和含量明显升高(P0.05,P0.01)。结论:化瘀祛痰方可能是通过影响线粒体呼吸链酶复合物的活性及含量减少脂质沉积,防治动脉粥样硬化。     

当归芍药散加味方及拆方对大鼠松果体β-肾上腺受体含量和功能的影响

目的:研究当归芍药散加味方对老年鼠松果体β肾上腺受体(β-AR)含量及功能的影响。方法:选用老年鼠(18个月),分组灌服当归芍药散加味方及其君臣药、佐药水煎液,3周后,用放射配基受体结合分析法测定其松果体β-AR,同时用四唑蓝比色法(MTT)测定各组大鼠松果体培养上清液(PCS)促进脾细胞ConA 诱导 T 淋巴细胞增殖 OD 值(SCTOD 值)。结果:与老年对照组比较,当归芍药散全方组大鼠松果体β-AR 明显增多(P<0.01),当归芍药散全方组和君臣药组大鼠 PCS 对 SCTOD 值明显增多(P<0.01)。结论:结果表明当归芍药散加味方可提高老年鼠松果体β-AR,使松果体可分泌较多的促进淋巴细胞增殖的物质。     

电针预处理对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌组织FXR基因及心肌细胞线粒体功能的影响

目的探讨电针预处理改善心肌缺血再灌注损伤的可能作用机制。方法40只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、FXR抑制剂组及电针预处理组,每组10只。各组大鼠均予捆绑固定7天后,除假手组外其余各组均进行心肌缺血再灌注造模处理。FXR抑制剂组第8天尾静脉注射法尼酯X受体(FXR)抑制剂z-Guggulsterone 0.4μl/g后再造模,电针预处理组从第1天开始取"内关""足三里""关元"电针7天,第8天再造模。造模后测定大鼠血清白细胞介素8(IL-8)浓度及心肌细胞线粒体呼吸链酶活性及Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-Mg^2+-ATP酶活性,检测心肌组织FXR基因表达水平。结果与假手术组相比,缺血再灌注组IL-8浓度升高,呼吸链酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-Mg^2+-ATP酶活性均降低,FXR基因表达水平上调(P<0.01)。与缺血再灌注组相比,FXR抑制剂组与电针预处理组IL-8浓度均降低,呼吸链酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-Mg^2+-ATP酶活性升高,FXR基因表达水平降低(P<0.01)。与FXR抑制剂组比较,电针预处理组IL-8浓度、FXR基因表达水平升高,Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-Mg^2+-ATP酶活性及呼吸链酶Ⅲ、Ⅳ均降低(P<0.05)。结论电针预处理可能通过降低血清IL-8浓度,提高心肌细胞线粒体呼吸链复合酶、ATP酶活性,下调FXR基因表达,从而改善心肌缺血再灌注损伤。