真菌诱导子对怀地黄组培苗生长及次生代谢产物合成的影响

目的:研究分离自地黄不同部位的内生真菌诱导子对怀地黄组培苗生长及其次生代谢产物含量的影响,初步探究其促生作用。方法:以2株Alternaria属内生真菌A.alternata,Penicillium属内生真菌P.axalicum制备不同类型的诱导子,发酵液滤液和菌丝降解液,分别考察其对地黄组培苗株高、鲜重、叶绿素含量、梓醇及毛蕊花糖苷含量的影响,并用SPSS 17.0进行数据分析。高效液相色谱法测定梓醇及毛蕊花糖苷含量。结果:不同菌株制备的真菌诱导子促生作用差异明显,以Penicillium属内生真菌P.axalicum制备的真菌诱导子对怀地黄组培苗促生效果较佳,且以其发酵液滤液促生效果最好。在该培养条件下,怀地黄组培苗株高、鲜重、根长、总叶绿素、梓醇及毛蕊花糖苷含量增加率分别为27.80%,29.49%,22.08%,15.05%,35.98%和68.18%。结论:内生真菌诱导子可促进怀地黄组培苗生长,并提高其次生代谢产物含量,在今后地黄内生真菌应用中可做进一步探究。     

明党参内生真菌种群的生态分布及其诱导子活性研究

目的研究不同产区、不同生长期明党参内生真菌的种群结构与生态分布,以及内生真菌诱导子对明党参细胞生长与多糖积累的影响。方法采用微生物分离、培养与鉴定等生物学方法、植物细胞悬浮培养方法以及统计分析方法。结果从4个产地明党参植株中共分离到8属116株内生真菌,其中镰孢属(Fusarium LK.exFR.)、地霉属(Geotrichum LK.)和链格孢属(Alternaria Nees)为优势种群。随着明党参生长期的不同,内生真菌种群结构出现明显的动态变化。在苗期和孕蕾期,内生真菌种群丰富,数量较多,尤其是在孕蕾期3种优势种群的分离率和分离频率分别达到30%和19%以上。部分内生真菌种群还具有明显的区域专一性和组织专一性。此外,内生真菌Fusarium sp.3诱导子处理组,明党参细胞生长量和多糖量分别比对照提高了31.86%和38.01%。结论明党参内生真菌具有丰富的生物多样性,种群结构及分布与其生态环境具有密切的相关性,且部分明党参内生真菌诱导子对其细胞生长和多糖积累均具有显著的促进作用。     

两面针内生真菌遗传多样性分析及其抗菌活性研究

为了揭示抗菌草药两面针内生真菌的分布和种群特征及其在抗菌研究中的应用潜力,该研究对广西野生两面针内生真菌的分子鉴定、遗传多样性和抗菌活性进行研究。两面针内生真菌分离培养和分子鉴定的结果显示,从两面针植物中分离获得35株内生真菌,隶属于2门4纲10目12科15属,刺盘孢属Colletotrichum和镰孢属Fusarium为优势菌属,均占总菌株数的20%;根、茎和叶内生真菌多样性存在明显差异,茎部内生真菌的Shannon index(H'=1.678)明显较根(0.882 1)和叶(0.515 4)部高。抗菌活性分析结果显示,14.28%的内生真菌至少对1种病原指示菌有抑菌活性,其中Fusarium sp. ZN-34菌株对大肠杆菌的抑菌效果最强; Fusarium sp. ZN-26菌株对金黄色葡萄球菌的抑菌效果则最好;综合抑菌的广谱性和效能而言,Fusarium sp. ZN-26和Phialemoniopsis pluriloculosa ZN-35对2种病原细菌的抗菌效果较好。以上研究结果表明,广西野生药用植物两面针中蕴藏着丰富多样的内生真菌资源及多种有较好抑菌活性的内生真菌,可为两面针内生真菌抗菌基础物质的提取、分离和分析及天然新颖抗菌剂的开发提供可利用的候选菌株。     

狼毒大戟根中的萜类成分研究

目的:研究狼毒大戟Euphorbia fischeriana根中的萜类成分。方法:利用硅胶、MCI、ODS、Sephadex LH-20柱色谱及半制备高效液相色谱法(HPLC)等分离手段对狼毒大戟根中的萜类成分进行分离纯化,根据理化性质、波谱学数据分析鉴定化合物结构。结果:从狼毒大戟根的80%丙酮提取物中分离鉴定了7个萜类化合物,包括5个二萜类化合物和2个三萜类化合物,分别鉴定为7-羰基脱氢松香酸(1)、trogopteroid F(2)、陶塔二酚(3)、18-羟基弥罗松酚(4)、19-羟基弥罗松酚(5)、环木波罗-22-烯-3β,25-二醇(6)和羽扇豆醇(7)。结论:除了化合物6和7,其余化合物均为首次从狼毒大戟中分离得到。     

铁皮石斛促生长内生真菌的筛选与鉴定

石斛生境中存在多种能够促进石斛生长的内生真菌,利用内生真菌与铁皮石斛组培苗共生培养,筛选对铁皮石斛组培苗有促生长活性的内生真菌,研究内生真菌对石斛根的侵染情况,采用形态鉴定和分子鉴定的方法对促生长活性内生真菌进行鉴定。结果表明,8株内生真菌对铁皮石斛苗有促生长作用,均能侵染铁皮石斛根,在铁皮石斛根的根被、外皮层、皮层中以菌丝或菌丝团的形式存在,不侵染内皮层和中柱,区别于有害真菌。8株活性内生真菌中,2株产孢真菌经形态鉴定,属于Pestalotiopsis,Eurotium属,6株不产孢真菌经分子鉴定,分别属于Pyrenochaeta,Coprinellus,Pholiota,Alternaria,Helotiales等5个属。促生长活性内生真菌与石斛组培苗共生培养,可促进石斛组培苗生长,对于缩短石斛生长周期,增加石斛中药材资源具有指导意义。     

不同生长年限霍山石斛内生菌的多样性与差异性

为探索霍山石斛内生菌的多样性与差异性,该文采用宏基因组学的方法对不同生长年限5组30份霍山石斛样品内生细菌及真菌的菌群进行了分析。研究结果显示,从霍山石斛中鉴定出3 540个细菌OTUs,5组样品共有OTUs为138个;鉴定出2 168个真菌OTUs,5组样品共有OTUs为143个。霍山石斛优势细菌菌群为Sphingomonas sp.,Acinetobacter sp.,Burkholderia sp.,Methylobacterium sp.,Enterococcus sp.,Bacillus sp.,差异菌群Oceanobacillusd sp.,Actinomycetospora sp.,Paenibacillus sp.,霍山石斛优势真菌群为Zasmidium sp.,Zymoseptoria sp.,Alternaria sp.,Cladosporium sp.,Fusarium sp.,差异菌群为Cyphellophore sp.,Fusarium sp.,聚类结果显示无论是内生细菌还是内生真菌,ⅢY2,ⅢY3均独立聚为一类,ⅡY1,ⅢY1也独立聚为一类。研究结果丰富了霍山石斛内生细菌和内生真菌的种类与资源,也为霍山石斛合理采收提供了理论参考。     

促进拟南芥生长的西红花内生真菌的筛选和研究

目的:以西红花内生真菌为研究对象,通过内生真菌与拟南芥共培养体系,分析其对拟南芥生长的影响,筛选具有促生作用的目标菌株,为揭示内生真菌影响植物生长及机制提供实验基础和科学依据。方法:分离西红花内生菌并与拟南芥共培养,统计拟南芥鲜重、干重、侧根数和主根长、根部显微结构等指标,筛选促生菌株;对其rDNA-ITS基因序列进行系统发育分析鉴定。结果:从西红花中分离32株内生菌,筛选得到5株促进拟南芥生长的内生菌;分别鉴定为Penicillium sp.、Hansfordia sp.、Chaetomium murorum、Aspergillus sp.、Phialocephala sp.。结论:西红花内生真菌通过改变拟南芥根部结构,促进侧根萌发,从而有效地促进生长,增加其生物量。     

猫眼草的抗肿瘤活性成分研究

目的 以猫眼草Euphorbia lunulata全草为研究对象,对其有效成分进行分离纯化,并对分离得到的化合物进行活性测定.方法 运用硅胶柱色谱、羟丙基葡聚糖凝胶柱色谱、ODS柱色谱以及制备高效液相色谱等方法进行分离,根据理化性质和谱学技术分析确定化合物的化学结构.采用细胞毒活性(MTT)法对提取物、各流分及分离得到的化合物进行抗肿瘤活性评价.结果 从猫眼草60％乙醇提取物的醋酸乙酯萃取层中分离得到6个化合物,分别鉴定为大戟素M(1)、泽泻醇A(2)、大戟苷A(3)、甘遂大戟萜酯D(4)、18-羟基泽漆内酯A(5)和β-胡萝卜苷(6).结论 其中化合物1为新化合物,为假白榄烷型骨架二萜类化合物;化合物2～4为首次从该植物中分离得到.经MTT细胞毒活性测试后发现化合物1～4具有较强的肿瘤细胞抑制活性,尤其对人肝癌细胞HepG2有很强的抑制活性.     

茅苍术悬浮细胞系建立及内生真菌诱导子对其挥发油积累的影响

目的 建立茅苍术悬浮细胞系,研究2种内生真菌诱导子对茅苍术悬浮细胞产挥发油的影响.方法 用内生真菌诱导子对茅苍术悬浮细胞进行诱导处理后超声提取茅苍术细胞中的挥发油,利用气相色谱法测定挥发油中苍术酮、苍术醇、β-桉叶醇和苍术素的量.结果 获得的茅苍术悬浮细胞生长较快,于第21天生物量达到最大,为6.95 g/L.未经诱导处理的茅苍术悬浮细胞中仅检出β-桉叶醇,其在培养21 d的细胞中的量达到最大,为17.469μg/g.添加2种内生真菌(分别属于小克银汉霉属和孔球孢霉属,编号为AL4和AL12)的粗诱导子对茅苍术悬浮细胞生物量及挥发油积累均有影响,其中AL4粗诱导子综合效果更好.添加AL4粗诱导子到14 d的茅苍术悬浮细胞培养基中,诱导子质量浓度为每升培养基含糖20 mg,诱导处理7 d后收集细胞,发现其干质量比同期对照提高3.31%,且检出细胞中苍术酮、苍术醇、β-桉叶醇和苍术素的干质量分别达到14.715、28.395、38.794、8.310μg/g.其中β-桉叶醇的量是对照的2.22倍.结论 添加内生真菌诱导子对茅苍术悬浮细胞的生长及挥发油积累均有促进作用.     

狼毒大戟中二萜和三萜类成分

目的：对狼毒大戟的萜类成分进行研究。方法：采用硅胶柱层析色谱技术分离并纯化化合物,根据理化性质及波谱技术鉴定其结构。结果：从狼毒大戟的乙酸乙酯部位中分离得到8个二萜化合物和3个三萜化合物,分别鉴定为岩大戟内酯A（1）,岩大戟内酯B（2）,prostratin（3）,ent-kaurane-3-oxo-16α,17-diol（4）,antiquorin（5）,neriifolene（6）,ent-ati-sane-3β,16α,17-triol（7）,kauranoic acid（8）,乙酰木油树酸（9）,24-亚甲基环木菠萝烷醇（10）,乙酰羽扇豆醇（11）。结论：化合物4-10为首次从该植物中分得。     

华泽兰内生真菌的分离及其抑菌、抗肿瘤活性

目的研究华泽兰内生真菌的分离及其抑菌、抗肿瘤活性。方法采用组织分离法分离内生真菌,通过形态学观察和其ITS(5.8S)序列的分子生物学方法鉴定内生真菌,KB纸片法和MTT法分别对内生真菌代谢产物的乙酸乙酯提取物进行抑菌实验和体外抗肿瘤实验,PCR法分析和检测内生真菌PKS和NRPS基因。结果从中分离得到8株内生真菌,分别鉴定为禾谷镰刀菌、间座壳属、链格孢属、层生镰刀菌、葡萄座腔菌属小新壳梭孢、细极链格孢、首都叶点霉。菌株EC102、EC103、EC107、EC108、EC111对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、面包酵母都具有很好的抑菌活性,EC102、EC107、EC108、EC109对人乳腺癌细胞株有较好的抗肿瘤活性。从华泽兰内生菌株中发现4个NRPS基因片段和1个PKS基因片段。结论分离得到的内生真菌具有潜在的抑菌和抗肿瘤活性,且能产生NRPS基因和PKS基因。     

大戟科4种药用植物及其内生真菌脂肪酸组分研究

目的 :研究大戟科药用植物和其内生真菌相互关系 ,为探索大戟科植物生物活性物质来源 ,开发新药资源奠定基础。方法 :用气相色谱分析了大戟科乌桕、大戟、泽漆、重阳木 4种药用植物新鲜叶、茎及其 28株内生真菌的脂肪酸组分 ,并比较它们的差异。结果 :植物脂肪酸主要为α-亚麻酸、棕榈酸、亚油酸、油酸 ;内生真菌脂肪酸主要为亚油酸、油酸和棕榈酸。结论 :内生菌可以自主合成脂肪酸 ,因此可以作为分类鉴定的参考依据之一。植物及内生菌脂肪酸在α-亚麻酸含量上表现出极大的差异 ,推测可能和内生菌营养吸收及内生菌和宿主植物相互作用有关。     

2株内生真菌对菊花抗旱特性的影响

目的:以PEG6000模拟干旱条件,研究接种内生真菌(葡萄孢属C1菌Botrytis sp.、球毛壳菌G4菌Chaetomium globosum对药用菊花Ch.morifolium抗旱性的影响.方法:分别用0%,10%,20%,30%,40%PEG6000胁迫菊花组培苗4 d,测定各处理组菊花生物量,叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性及叶片丙二醛(MDA)、可溶性蛋白含量.结果:模拟干旱胁迫后,接种内生真菌的菊花长势好于对照(未接菌),PEG6000胁迫4 d后,随着胁迫浓度的增加,菊花总生物量不断减少,接菌组生物量显著高于对照,C4组高于C1组;各处理组MDA含量随着胁迫浓度的增加而不断增加;各处理组POD活性、可溶性蛋白含量随着胁迫浓度的增加均呈现先增加后减小的趋势;对照SOD活性随着胁迫浓度的增加而逐渐增加,接菌组SOD活性基本保持不变;对照PAL活性随着胁迫浓度的增加而逐渐增加.不同浓度PEG胁迫后,接菌组MDA含量始终低于对照,SOD活性、POD活性、可溶性蛋白含量、PAL活性均始终高于对照.结论:接种内生真菌提高菊花的抗旱能力.     

大戟科大戟属根类中药的毒性研究进展

对大戟科大戟属根类有毒中药的毒性方面研究进行文献整理和分析。利用CNKI,PubMed,维普资讯等数据库,对近30年以内的关于京大戟、甘遂、狼毒的研究文献进行整理,共引用47篇文献。发现3种大戟属根类有毒中药其毒性成分均为萜类成分,且含有大量酯键;京大戟、甘遂中均存在巨大戟二萜醇型化合物,京大戟、狼毒中均发现松香烷内酯型化合物;临床上均可泻下逐水,治疗各类水肿;因有毒均常用醋制法对其炮制解毒。同科同属的根类有毒中药存在很多共同点,从共性毒性成分出发研究炮制解毒机制,可同时解决整个大戟科大戟属的毒性难题。     

肉苁蓉内生真菌多样性研究

目的:研究肉苁蓉内生真菌菌群的多样性.方法:分别于春、秋季在宁夏和内蒙古两地采集健康的肉苁蓉进行内生真菌的分离,对分离的内生真菌采用玻片法和胶带粘贴法进行分类鉴定.结果与结论:共分离得到618株内生真菌菌株,其中453株为产孢菌株,鉴定为22个属,占分离菌株总数的73.30%,以镰孢属Fusarium(25.89%)和枝顶孢霉属Ammonium(16.99%)为优势种群.肉苁蓉内生真菌在数量和种类上存在极其丰富的多样性,同时在部位、地区以及季节存在一定的差异性.     

内生真菌对福建金线莲栽培及酶活性的影响

 目的研究在野外盆栽条件下内生真菌AR-18对福建金线莲(Anoectochilus roxburghii)生长发育的影响。方法福建金线莲组培苗接菌移栽于草炭土或蛭石基质中,1年后收获,观察苗的生长势,统计成活率,称鲜重和干重,同时测定β-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶活性。结果在草炭土和蛭石基质上,接菌的福建金线莲苗成活率均达100%;真菌对福建金线莲鲜重的增加有极显著促进作用(P<0.01),分别为对照组的1.77和1.83倍;真菌对福建金线莲干重的增加有显著促进作用(P<0.05),分别为对照组的1.13和1.28倍。接菌后4种酶活性均高于对照组。结论在福建金线莲的家栽过程中可利用内生真菌提高成活率和产量。     

4种内生真菌对金钗石斛无菌苗生长及其多糖和总生物碱含量的影响

目的 :研究离体培养时 4种菌根真菌对金钗石斛生长及化学成分含量的影响。方法 :利用纯培养的菌根真菌分别与金钗石斛无菌苗共生培养 ,观测它们对金钗石斛生长及其多糖和总生物碱含量的影响。结果 :与对照相比 ,Mycena sp. (MF2 3 )极显著降低了金钗石斛鲜重的 2 4.9% (P<0 .0 1) ;所有实验菌株对金钗石斛干重均无显著性影响 ;Epulorhiza sp. (MF18)和MF2 3显著提高了金钗石斛的折干率 (P<0.0 5) ,Mycena sp. (MF2 4)极显著提高了金钗石斛的折干率 (P<0. 0 1) ,分别最多提高了 51.3 % ,43 8%和 63. 3 % ;Epulorhizasp (MF15)和MF2 4比对照极显著增加了金钗石斛气生根数量的 4.25倍和 4.13倍 (P<0 .0 1) ;MF2 3极显著减少了金钗石斛基生根数量的46.5% (P<0. 0 1) ;MF15,MF18,MF2 3和MF2 4分别可使金钗石斛多糖含量提高 153 .4% ,52. 1% ,18.5% ,76.7% ;MF2 3使金钗石斛总生物碱含量提高 18.3 %。结论 :在离体培养条件下 ,内生真菌与金钗石斛共生培养能影响金钗石斛的生长和总生物碱的含量 ,提高多糖的含量。     

不同内生真菌对菊花产量和品质的影响

目的:探讨利用内生真菌促进菊花生产的措施。方法:以内生真菌球毛壳菌(编号C4)、葡萄孢真菌(编号C1)共生培养菊花,检测其产量和品质。结果:与对照相比,C4菌处理组鲜菊花和干菊花产量分别增加24.81%、7.59%,C1菌处理组鲜和干产量分别增加17.08%、6.87%。C4、C1菌处理组菊花中总黄酮含量比对照组分别增加31.79%、8.55%,且C4菌处理组与对照组相比达到显著水平。菊花中粗挥发油含量比对照组分别增加13.21%、18.19%。经气相色谱检测发现内生真菌C4、C1菌处理组样品中占总挥发油含量大于1%各组分含量总和分别比对照增加10.42%、8.90%,且内生真菌处理组与对照组之间各组分含量存在差异。结论:内生真菌与菊花建立共生关系后,可以提高菊花产量和品质。     

内生真菌对台湾金线莲栽培及酶活性的影响

目的 :研究在野外盆栽条件下内生真菌对台湾金线莲的影响。方法 :组培苗移栽 1年后收获 ,统计成活率 ,称鲜重和干重 ,同时测定几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶活性。 结果 :接菌的台湾金线莲成活率达 100 %。对台湾金线莲鲜重的增加有极显著差异 ,对干重的增加有显著差异 ,且接菌后 4种酶活性均高于对照组。结论 :在台湾金线莲的家栽过程中可利用内生真菌提高成活率。     

基于高通量测序和组织分离法的虎耳草内生真菌多样性分析及其抗氧化活性研究

目的 结合高通量测序技术和传统可培养技术对虎耳草Saxifraga stolonifera内生真菌类群及多样性进行系统分析,并对其抗氧化活性进行初筛,为虎耳草内生真菌资源的开发与利用奠定基础,也为天然抗氧剂的筛选提供了菌种资源。方法 虎耳草内生真菌多样性的分析采用Illumina Miseq高通量测序技术和组织分离法,利用化学法检测虎耳草内生真菌对1,1-二苯基-2-苦基肼自由基（2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical,DPPH）、羟基自由基（hydroxyl radical,OH）和2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABT]等自由基的清除率,进而筛选出具有抗氧化活性的菌株。结果 高通量测序分析发现虎耳草内生真菌隶属于347属,其中Dactylonectria(15.68%)为根部优势菌属,茎部的优势菌属为Humicola(9.57%),而叶部优势菌属为炭疽菌属Colletotrichum(5.33%)。利用组织分离法从虎耳草...