响应面法优化超声辅助法提取昆仑雪菊色素的工艺研究

以昆仑雪菊干燥头状花序为试验材料, 利用响应面法优化超声辅助提取昆仑雪菊色素的条件, 分别考察提取温度、超声时间、液料比及溶剂浓度对提取效率的影响。实验表明昆仑雪菊色素以黄酮类成分为主, 色素提取液在紫外-可见光区最大吸收波长为380 nm。在单因素实验基础上, 进行4因素3水平的响应面分析实验, 优化条件为提取温度70 ℃、超声时间60 min、液料比32.05: 1 mL·g、溶剂浓度为72.25%的乙醇, 在此条件下昆仑雪菊色素提取液的吸光度为0.936, 与模型预测值接近, 方程拟合良好, 适于对昆仑雪菊色素提取工艺进行回归分析和参数优化。     

响应面法优化淡竹叶总黄酮的大孔树脂纯化工艺

目的:探讨响应面法优化淡竹叶总黄酮大孔树脂纯化工艺。方法:比较四种大孔树脂对淡竹叶总黄酮的吸附和解吸性质,筛选合适的树脂,采用响应面法优化纯化工艺。结果:通过实验数据分析,较佳纯化工艺条件为上样液质量浓度0.12 g/m L,乙醇体积分数75%,洗脱液用量6BV。结论:通过响应面法优选的淡竹叶总黄酮大孔树脂纯化工艺稳定可行,预测性好。     

响应面法优化大孔树脂纯化菟丝子总黄酮工艺

目的 优化大孔树脂纯化菟丝子总黄酮工艺。方法 采用单因素实验,以总黄酮、金丝桃苷的吸附率和解析率为指标,筛选最佳大孔树脂型号。以总黄酮、金丝桃苷吸附量为指标,考察吸附时间、漏点浓度、上样液pH对纯化工艺的影响。以总黄酮、金丝桃苷洗脱率为指标,考察洗脱液流速、洗脱液体积、洗脱液浓度对纯化工艺的影响。在此基础上,以总黄酮与金丝桃苷含量的归一值为指标,利用Box-Behnken响应面法优化并确立最佳工艺。结果 菟丝子总黄酮纯化的最佳树脂型号为AB-8型,最佳工艺条件为:上样液pH 3.9、洗脱液体积19.6BV,洗脱液浓度74%,验证实验的总OD值为0.982 5,与模型预测值接近。纯化前后,总黄酮含量由18.95 mg·g^-1提高至85.68 mg·g^-1,金丝桃苷含量由4.12 mg·g^-1提高至16.85 mg·g^-1。结论 优选的纯化工艺方法稳定、可行,可用于菟丝子总黄酮的纯化。     

Box-Behnken响应面法优化昆仑雪菊总黄酮提取工艺及抗氧化研究

目的优化新疆昆仑雪菊总黄酮的提取工艺,并对其抗氧化活性进行研究。方法以单因素试验结果为依据,以雪菊总黄酮含量与浸膏得率为综合指标,采用响应面法,考察乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取温度的影响。通过测定总黄酮清除DPPH自由基能力、还原力及抑制自发性脂质过氧化的作用研究其抗氧化作用。结果雪菊总黄酮最佳提取工艺为:乙醇体积分数为60%,料液比为1∶67,提取温度为80℃,提取时间为21 min。雪菊总黄酮清除DPPH自由基的IC50为7.16μg/ml,雪菊总黄酮浓度为100μg/ml时吸光度为1.75,雪菊总黄酮浓度为200μg/ml时脂质过氧化抑制率为25.13%。结论优选的提取工艺稳定可行,可以用于雪菊总黄酮的提取,体外抗氧化试验证明雪菊总黄酮具有较好的抗氧化性。     

大孔吸附树脂纯化刺梨多酚工艺的优化

目的优化大孔吸附树脂纯化刺梨多酚工艺。方法以吸附率、解吸率为评价指标,考察4种大孔吸附树脂(ADS-17、HPD-600、AB-8、NKA-9)的吸附、解吸性能。然后,响应面法优化上样液质量浓度、pH、体积流量,以及解吸液(乙醇)体积分数、pH、体积流量。结果 AB-8型大孔吸附树脂的吸附、解吸性能最佳,最大静态吸附量、解吸率分别达8. 11 mg/g、94. 39%。最佳吸附条件为上样液质量浓度0. 7 mg/mL,pH 5. 9,体积流量2. 6 mL/min;最佳解吸条件为解吸液体积分数69%,pH 6. 3,体积流量2. 7 mL/min,多酚回收率20. 37%,含有量36. 33%,是纯化前的4. 9倍。结论该方法稳定可靠,可用于大孔吸附树脂纯化刺梨多酚工艺,也能为该类成分后续开发利用提供技术保证。     

星点设计-响应面法优选枳实总黄酮的大孔吸附树脂纯化工艺

目的：优选枳实总黄酮的大孔树脂纯化工艺。方法：选择吸附时间、乙醇体积分数、洗脱用量为自变量,总黄酮吸附-洗脱率为因变量,在单因素试验基础上,采用星点设计-响应面法优选大孔树脂纯化工艺。结果：选择AB-8型大孔树脂,最佳纯化工艺为上样液质量浓度3.5 g·L^-1,pH 6.0,上样量0.6 BV,上样速率1 BV·h^-1,水洗用量1 BV,洗脱速率2 BV·h^-1,吸附时间77 min,乙醇体积分数88%,洗脱剂用量2.4 BV;枳实总黄酮吸附-洗脱率达93.0%,与预测值（92.4%）偏差较小。结论：采用星点设计-响应面法优选的大孔树脂纯化工艺条件稳定可行,预测性好。     

泥胡菜总黄酮大孔树脂纯化工艺优化

目的:优选大孔树脂纯化泥胡菜总黄酮的工艺条件.方法:采用静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号,动态吸附法优化大孔树脂纯化泥胡菜总黄酮工艺参数.结果:优选的纯化工艺为选用D101型树脂,上样液质量浓度1.5 g·L-1,上样速率3 BV·h-1,上样体积4 BV,上样液pH 5,加50％乙醇5 BV以2 BV·h-1流速洗脱,泥胡菜总黄酮纯度达47.8％.结论:D101型大孔树脂对泥胡菜总黄酮具有良好的纯化效果.     

枇杷叶总黄酮大孔树脂纯化工艺优化

目的:优选大孔树脂吸附法富集枇杷叶总黄酮的工艺条件.方法:以芦丁为对照品,硝酸铝显色法检测枇杷叶总黄酮的含量.以静态吸附容量、静态解吸率为考察指标,比较6种大孔树脂对枇杷叶总黄酮的吸附和解吸效果,筛选最佳大孔树脂型号,并对其吸附和解吸条件进行探讨.结果:HPD100型大孔树脂最适合于枇杷叶总黄酮的纯化,其纯化工艺为上样液质量浓度3 g·L-1,上样速率2 BV·h-1,上样液体积2.5 BV,2 BV去离子水冲洗,5 BV 70％乙醇以1 BV·h-1流速洗脱,收集洗脱液.在此工艺条件下,总黄酮得率78.7％,总黄酮纯度47.3％.结论:HPD100型大孔树脂对枇杷叶总黄酮具有良好的纯化效果,优选工艺合理、稳定可行.     

大孔吸附树脂纯化红花黄色素研究

目的:确定大孔吸附树脂纯化红花黄色素的最佳工艺条件.方法:采用分光光度法测定总黄酮的含量,优选大孔吸附树脂,评价各种工艺.结果:HPD100型大孔吸附树脂对红花黄色素有较好的吸附和解吸附能力,其静态饱和吸附量为109.35 mg/g,静态吸附-洗脱率为90.12%,上样体积为6 BV,清洗剂为pH=3的蒸馏水10 BV,洗脱剂为70%乙醇4BV,按照上述工艺纯化,红花黄色素含量可达到38.35%.结论:HPD100型大孔吸附树脂可以用于红花黄色素的纯化.     

蜘蛛香总黄酮大孔树脂纯化工艺

目的:研究蜘蛛香总黄酮的大孔树脂纯化工艺条件。方法:采用静态吸附-解吸方法,以吸附量和解吸率为指标,筛选最佳树脂;以总黄酮收率为指标,考察最佳树脂纯化蜘蛛香总黄酮的工艺参数。结果:5种树脂中,HPD600大孔树脂对蜘蛛香总黄酮纯化效果较好,其总黄酮的静态饱和吸附容量为131.11 mg.g-1干树脂,解吸率为91.69%;最佳动态吸附、洗脱条件为蜘蛛香总黄酮提取液质量浓度3.42 g.L-1,吸附流速2.4 BV.h-1,上样量25.64 mg.g-1干树脂;吸附后的树脂柱先以3BV水洗脱,再用4 BV 80%乙醇以2.4 BV.h-1流速洗脱,总黄酮质量分数为41.20%,收率为80.36%。结论:HPD600大孔树脂在所确定的工艺条件下,可较好的分离纯化蜘蛛香总黄酮。     

两色金鸡菊中1个新的没药烷型倍半萜类化合物

研究两色金鸡菊Coreopsis tinctoria头状花序的化学成分。采用柱色谱技术从采自新疆的两色金鸡菊中分离得到14个化合物,包括1个新的没药烷型倍半萜类化合物。通过理化性质和波谱数据鉴定其结构分别为coretinterpenoid A(1),coretinphenol(2),槲皮素(3),槲皮素-3-O-β-葡萄糖苷(4),木犀草素(5),花旗松素(6),7,3',5'-三羟基二氢黄酮(7),异奥卡宁(8),异奥卡宁-7-O-β-葡萄糖苷(9),5,7,3',5'-四羟基二氢黄酮-7-O-β-葡萄糖苷(10),紫铆因(11),奥卡宁(12),硫黄菊素(13),linocinnamarin(14)。其中化合物1为新化合物,化合物4,10,13首次从该植物中分离得到。     

HPLC同时测定雪菊中4种黄酮类成分

目的:建立雪菊中4种主要黄酮类成分的同时含量测定方法。方法:采用Cosmosil-5C18-AR-Ⅱ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%乙酸溶液梯度洗脱,流速1.0 m L·min~(-1),检测波长280 nm(黄诺玛苷、异奥卡宁)和378 nm(马里苷、奥卡宁),测定雪菊中黄诺玛苷、异奥卡宁、马里苷、奥卡宁的含量。结果:4种黄酮类成分色谱分离良好,黄诺玛苷、异奥卡宁、马里苷、奥卡宁线性范围分别为0.503 5~5.035μg,0.502 5~5.025μg,0.505 5~5.055μg,0.506 5~5.065μg,r值均0.999,加样回收率在95.4%~98.4%。结论:该测定方法快速、准确,可为雪菊的质量控制方法提供参考。     

两色金鸡菊头状花序中聚炔类化学成分的研究

目的研究两色金鸡菊Coreopsis tinctoria头状花序的聚炔类化学成分。方法利用AB-8大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20、ODS及制备液相等色谱方法进行分离纯化,根据理化性质、波谱及旋光数据鉴定化合物的结构;采用脂多糖(LPS)诱导的BV-2细胞NO生成模型对分离得到的新化合物进行抗炎活性筛选。结果从两色金鸡菊干燥头状花序的50%乙醇提取物中分离得到5个聚炔类化合物,分别鉴定为(3S)-(6E,12E)-二烯-8,10-二炔-1-十四烷醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(1)、(2S)-(3Z,11E)-二烯-5,7,9-三炔-1,2-十三碳二醇(2)、(2R)-(3E,5E,11E)-三烯-7,9-二炔-1,2-十三碳二醇(3)、(E)-7-苯基-2-烯-4,6-二炔-1-庚醇(4)、(Z)-7-苯基-2-烯-4,6-二炔-1-庚醇(5)。结论化合物1为新的炔苷类化合物,命名为金鸡菊炔苷E,显示微弱的抗炎活性;化合物3、5为首次从该植物中分离得到。     

两色金鸡菊提取物大剂量给药致小鼠死亡化学成分的研究

目的比较两色金鸡菊各种提取物对小鼠的急性毒性作用,分析对大剂量给药致小鼠死亡贡献最大的成分,为后期研究提供安全性数据并优化提取工艺。方法分别测定各提取物对小鼠的最大给药量或最大耐受量(MTD),用Bliss法测定半数致死量(LD50),记录小鼠死亡情况和体质量变化情况;高效液相色谱(HPLC)法测定各提取物指纹图谱,根据各物质吸收峰,结合多元线性回归,分析对大剂量给药致小鼠死亡贡献最大的成分。结果两色金鸡菊喷雾干燥水提物(SD)、醋酸乙酯萃余组分(AR)最大给药量均为36 g/kg,真空干燥水提物(VD)MTD为26 g/kg,乙醇提取物(ETE)LD50(95%可信限)为19.565(17.558~21.734)g/kg,醋酸乙酯萃取组分(AC)LD50(95%可信限)为16.414(13.987~34.725)g/kg;3,5-二咖啡酰奎宁酸可能是对大剂量给药致小鼠死亡贡献最大的成分。结论 ETE和AC大剂量给药会致小鼠死亡,3,5-二咖啡酰奎宁酸可能是对两色金鸡菊提取物大剂量给药致小鼠死亡贡献最大的成分。     

自发性高血压大鼠尿液氨基酸代谢谱改变及两色金鸡菊提取物调节作用初探

在确证自发性高血压大鼠(SHR)模型成功后比较其与正常大鼠(Wistar)尿液氨基酸代谢谱的差异,在此基础上初步研究两色金鸡菊提取物对SHR血压及氨基酸代谢谱的调节作用。选取经过适应性饲养后的适龄雄性SHR大鼠和同龄Wistar大鼠测量大鼠收缩压(SBP),舒张压(DBP),同时收集大鼠尿液,运用AQC柱前衍生高效液相色谱(HPLC)-荧光法测定尿液中氨基酸代谢谱,利用多元统计分析中的偏最小二乘方判别分析(PLS-DA)研究2组动物的氨基酸代谢差异物。将所有饲养的SHR大鼠随机分成5组,即模型组,两色金鸡菊提取物高、中、低剂量组(3.2,1.6,0.8 g·kg~(-1)),西药卡托普利组(4mg·kg~(-1)),连续灌胃给药4周后收集大鼠尿液,测定各组氨基酸代谢谱。药物干预4周后,与Wistar组相比,SHR组的氨基酸代谢谱中丝氨酸、丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸对分组的贡献较大,均显著高于Wistar组;与SHR组相比,卡托普利组的苏氨酸、蛋氨酸较模型组显著降低(P0.01);新疆两色金鸡菊醇提物低、中、高剂量组氨基酸代谢均有不同程度改变,其中低剂量苏氨酸较模型组显著降低(P0.01);中剂量组的丝氨酸、苏氨酸较模型组降低(P0.05),缬氨酸、蛋氨酸、赖氨酸显著降低(P0.01);大剂量组的苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、赖氨酸显著降低(P0.01)。研究结果显示,中、高剂量提取物能明显改善氨基酸代谢异常,帮助进一步阐释两色金鸡菊的药性研究,为高血压病存在氨基酸代谢通路异常提供数据支持。     

两色金鸡菊提取物对大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维化因子表达的影响

目的:本研究通过高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞建立糖尿病肾病的体外模型,观察两色金鸡菊乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Coreopsis tinctoria,AC)对模型中细胞增殖及纤维化因子表达的影响。方法:采用AC对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞进行干预,将细胞分为正常组,模组组,AC不同质量浓度(25,50,100,150 mg·L~(-1))组。采用噻唑蓝(MTT)比色法,细胞增殖与活性检测(CCK8)法检测AC不同质量浓度对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步观察AC不同质量浓度对肾脏纤维化蛋白转化生长因子-β_1(TGF-β_1),胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ),纤维连接蛋白(FN)表达的影响。结果:AC 50,100,150 mg·L~(-1)组均能抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的增殖(P0.01);AC 25,100,150 mg·L~(-1)质量浓度组显著降低细胞中TGF-β_1的mRNA与蛋白表达水平(P0.01);AC 100,150 mg·L~(-1)质量浓度组显著抑制细胞中CollagenⅣmRNA与蛋白的表达水平(P0.01);AC 50,100,150 mg·L~(-1)质量浓度组显著抑制细胞中FN mRNA与蛋白的表达水平(P0.01)。结论:两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维化因子表达发挥其对糖尿病肾病肾脏保护作用。     

秦皮总香豆素大孔树脂纯化工艺研究

目的优化大孔树脂对秦皮总香豆素的纯化工艺。方法以秦皮总香豆素及秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素4种香豆素的吸附率、解析率、转移率为考察指标,采用单因素方法,考察纯化秦皮总香豆素的树脂类型,树脂吸附、解吸附性能及纯化效果。结果所选择的7种大孔树脂中ADS-5最适合秦皮总香豆素的纯化。吸附参数:吸附容量为生药量-树脂0.8 g/g,上样药液质量浓度为生药0.75 g/m L,上样药液p H值为4.0~4.3(原药液),上样体积流量为2~4 BV/h;洗脱参数:水清洗杂质1 BV,洗脱溶剂25%乙醇,洗脱体积流量2 BV/h,洗脱体积3 BV。经纯化,秦皮总香豆素转移率达74.27%,4种香豆素成分转移率达83.06%,秦皮总香豆素提取物出膏率为7.35%,除杂率达14.00%,其中总香豆素的量为54.72%,4种香豆素成分的量之和为36.01%,总香豆素提取率为4.02%。结论 ADS-5对秦皮总香豆素纯化效果较好,该纯化工艺稳定,提取物量符合中药5类新药的要求。     

益智总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺研究

目的研究优化大孔吸附树脂纯化益智总黄酮的最佳工艺。方法以吸附率和解吸率为指标,利用静态吸附试验对15种大孔吸附树脂进行筛选,并通过与动态吸附相结合的方法,优选树脂的最佳分离纯化条件。结果 HP20大孔吸附树脂宜于FAOF的提纯,最佳纯化工艺为上样液黄酮质量浓度为1.518 mg/mL,上样体积流量为1.0 mL/min,上样量为50 mL,洗脱溶剂为30%乙醇,洗脱体积流量为1.0 mL/min,洗脱体积为6 BV,纯化后黄酮量高达51.68%。结论 HP20大孔吸附树脂能有效分离纯化益智中的总黄酮。     

新疆金鸡菊提取物对2型糖尿病小鼠氨基酸代谢谱的影响

目的:研究新疆金鸡菊(Xinjiang Coreopsis tinctoria)乙酸乙酯提取物对2型糖尿病小鼠血清氨基酸代谢谱的影响。方法:高脂高糖喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立2型糖尿病模型,造模成功后随机分组,灌胃给予新疆金鸡菊提取物8 g·kg-1·d-1,阳性药二甲双胍0.16 g·kg-1·d-1,每周测空腹血糖(FBG),给药4周后处死,收集小鼠血清,检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。采用柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)检测小鼠血清中氨基酸代谢谱的变化。结果:结合SIMCA-P软件的偏最小二乘法判别(PLS-DA)对氨基酸数据进行分析,结果显示新疆金鸡菊乙酸乙酯提物给药后对血清氨基酸代谢谱的改变较模型组有很大区别,有4种氨基酸对组间贡献较大(牛磺酸、天冬氨酸、苏氨酸、蛋氨酸)。小鼠成模后体内氨基酸发生了明显变化。与空白组、模型组、阳性组相比,新疆金鸡菊乙酸乙酯给药组小鼠血清氨基酸代谢谱发生了显著变化。结论:新疆金鸡菊乙酸乙酯提取物显著影响小鼠血清中与糖尿病相关的氨基酸代谢标志物,为进一步阐释新疆金鸡菊抗糖尿病药理作用的研究提供了依据。