荷瘤小鼠常见证候在神经-内分泌-免疫网络组织基因转录的特征

目的:揭示邪毒壅盛证、气虚证、阳气虚证、气阴阳虚证等4个同病异证荷瘤小鼠在神经-内分泌-免疫网络组织差异转录基因的总体特征。方法:对2006和2009年2批实验所检测以上4个证候及正常对照小鼠下丘脑、垂体、肾上腺、睾丸、胸腺、脾脏等60张芯片,近100万个核心基因进行分析,观察其一致性上调或下调的基因数与量的特征。结果:肿瘤发生后脾脏、胸腺、睾丸等组织基因一致性差异表达的数量大,其次是垂体和肾上腺,与疾病的关系密切;早期气虚证荷瘤小鼠突出表现为下丘脑基因表达趋于活跃;而同期的邪毒壅盛证荷瘤小鼠则突出表现为肾上腺基因表达趋于抑制,这可能与该证候荷瘤小鼠预后差有关。结论:荷瘤小鼠同病异证在神经-内分泌-免疫网络组织转录组方面有其特征性的物质基础。     

荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸下调的基因

目的:观察H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸组织一致下调的基因。方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊和辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和早期气虚证睾丸组织基因表达谱的差异,重点关注早期阶段2个证候一致下调且表达量较大的基因。结果:筛选出早期邪毒壅盛和气虚证一致下调的基因共150个,其中有11类可以简单归类的基因;气虚与邪毒壅盛证这些基因的表达量差异不大,前者略高于后者;中晚期荷瘤小鼠这些基因表达接近正常对照组,甚至上调。结论:肿瘤发生的早期睾丸基因改变以下调为主,一些基因涉及精子发生,提示荷瘤小鼠生殖受到影响;鉴于两个证候这些基因表达的差异不大,及中晚期表达有增加趋势,提示这些基因下调可能与肿瘤早期应激有关;多数基因在睾丸组织中的功能还不清楚,提示有大量探索工作。     

邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征研究

目的揭示H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证肿瘤组织基因表达的特征。方法采用GeneChipMouseExon1．0STArray等技术及芯片分析方法，观察H22荷瘤小鼠邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果筛选到邪毒壅盛证独特性高表达的基因32个，其中包括Tete3、Phf7、Ldhc等参与睾丸发育、精子或卵子发生的基因22个，Adipoq、Nream、Tnfaip6等与肿瘤有关的基因4个，以及Atp8b3、Pnpla3、Retn等其他功能的基因6个。筛选到邪毒壅盛证独特性低表达的基因2个，有Cort和LOC668417。结论邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因，可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤ABC转运蛋白家族基因转录特征

目的:观察不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤组织ABC转运蛋白家族基因表达的特征。方法:对来源于早期邪毒壅盛和单纯气虚、中期阳气虚和中晚期气阴阳虚四种证候小鼠H22肿瘤组织4张Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 STArray数据标准化处理后,筛选其中的ABC转运蛋白基因进行差异分析。结果:从芯片中共筛选出与ABC转运蛋白有关的基因47个,以邪毒壅盛小鼠肿瘤基因转录最活跃,气虚次之,阳气虚最低;四种常见证候间共有25个基因转录具有明显差异;Abce1和Abcf1等7个基因中在四种常见证候肿瘤中转录水平最高。结论:Tap1(Abcb2)和Abcd2等6个高表达基因可能是邪毒壅盛型小鼠肿瘤增长快的重要因素;不同证候荷瘤小鼠肿瘤组织中的ABC转运蛋白基因转录既存在一定共性又存在很大差异,进一步证明了H22荷瘤小鼠证候客观存在的物质基础,为中医辨证论治提供分子依据。     

不同证候小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴基因表达的特征

目的：观察不同证候小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴（HPTA）相关主要已知基因表达的特征。方法：采用小鼠计量化四诊和辨证方法、及GeneChip Mouse Exon 1.0 STArray等技术,观察正常偏气虚证小鼠、早期邪毒壅盛证和早期气虚证荷瘤小鼠HPTA相关基因表达差异。结果：（1）正常小鼠气虚证者,甲状腺机能减退,Atp1a1、Atp1a2、Atp1a3、Atp1b1、Atp1b2、Pax8、Tg、Tpo、NIS等与甲状腺素合成有关基因的表达水平一致下降;而垂体、下丘脑处于积极的代偿之中,TRH、TSH等激素表达增加。（2）肿瘤发生后的早期,荷瘤小鼠亦出现甲状腺机能的减退,垂体、下丘脑亦处于积极的代偿之中,TRH、TSH等激素表达增加。但是,该阶段邪毒壅盛证小鼠,垂体已出现失代偿的征兆,TSHb的表达量已显著低于同期的气虚证以及正常气虚小鼠。结论：甲状腺机能减退可能是气虚证发生的重要基础,而非下丘脑和垂体。荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证垂体继发的失代偿表现,可能与该证候荷瘤小鼠带瘤生存期短、预后差有关。     

正常与不同证候H22荷瘤小鼠肾上腺高表达的基因

目的:揭示正常与不同证候昆明种荷瘤小鼠肾上腺高表达的基因.方法:采用昆明种正常小鼠与腋下接种H22腹水瘤细胞的小鼠,取接种肿瘤后第8天(早期)邪毒壅盛证与气虚证、第21天(中期)阳气虚证、第29天(中晚期)气阴阳虚证荷瘤小鼠与正常对照组小鼠肾上腺,抽提RNA、纯化及Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array检测.结果:筛选到402条高表达的基因,其中有1个及以上组别芯片读数计算值大于5 000的有88条.这些基因主要参与代谢和基因表达的调控,部分参与化学合成、化学加工修饰、运输和信号转导,以及部分参与免疫、细胞周期和细胞凋亡、发育:另有许多基因功能未知.结论:这些在正常与疾病小鼠肾上腺内持续且稳定表达的基因,可能对于维持肾上腺的正常生理功能具有重要的生物学意义;鉴于气虚证荷瘤小鼠这些基因大多表达量低于正常小鼠和同期的邪毒壅盛证小鼠,反映出气虚证候的本质及特征;再次,4个不同证候荷瘤小鼠肾上腺这些基因表达差异分别有集中的趋势,印证了中医学“同病异证“的理论及其本质,要求辨证论治.     

不同证候荷瘤小鼠睾丸差异表达基因的特征

目的：观察荷瘤小鼠肿瘤发生后不同阶段4个常见证候睾丸独特上、下调的基因。方法：采用荷瘤小鼠及其标准化四诊与辨证方法，及GeneChip Mouse Exon ST 1.0 Array等技术，检测早期邪毒壅盛证及气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证睾丸基因的差异表达，重点关注那些表达较高的基因。结果：共捡出独特上调和下调的基因28个，其中有5个基因在不同证候中上下调不一致。肿瘤发生后早期邪毒壅盛证上调的基因8个：Abpg、Pip、Muc10、Car6、2310057J18Rik、K1k1b3、K1k1、Wfdc12，下调的基因5个：Spcs1、Dtx3、Rasa3、Sec1113、F5；早期气虚证上调的基因4个：Gpx5、Wbp5、Lcn5、Ap1s2，下调的基因1个：K1k1b26；中期阳气虚证无上调基因，下调基因3个，分别为K1k1b27、Spag5、Gpx5（在早期气虚证上调）；中晚期气阴阳虚证上调基因2个，分别为Saa3、S100a8，下调基因5个；Abpg、Pip、Muc10、Car6、Cuzd1（前4个在邪毒壅盛证上调）。结论：荷瘤小鼠在早期阶段，邪毒壅盛证与睾丸基因表达的紊乱关系较为密切；中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证睾丸基因以下调为主，提示中、晚期虚实夹杂证的荷瘤小鼠其睾丸功能下降。     

雄激素合成酶在H22荷瘤小鼠不同证候表达差异

目的:研究睾丸雄激素合成酶与肿瘤状态下小鼠证候的关系。方法:采用实验小鼠及其标准化四诊与辨证方法筛选H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证、气虚证、阳气虚证、气阴阳虚证,并以Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array技术检测睾丸组织基因芯片表达谱,重点分析睾丸基因芯片中雄激素合成酶及其调节因子在不同证候小鼠中的差异表达。结果:与正常组比较,Star、Stard5、Cyp17a1、Hsd3b6、Hsd17b3、Sult1e1等基因在早期邪毒壅盛证和气虚证小鼠呈现下调趋势,且在中晚期阳气虚证和气阴阳虚证下调幅度更加显著,Cyp11a1、Hsd3b1、Hsd17b10、Hsd17b11、Hsd17b12、Fdx1、Fdxr、Por、Sult1a1等仅在中晚期阳气虚证和气阴阳虚证中显著下调,Cyp17a1仅在睾丸组织特异性中表达。结论:H22荷瘤小鼠肿瘤形成后,自发产生的虚证越严重,其睾丸雄激素合成酶基因转录活性越低。     

荷瘤小鼠气阴阳诸虚证垂体独特上调和下调基因的表达及特征

目的：筛选荷瘤小鼠中晚期气阴阳诸虚证垂体独特上调和下调的基因并描述其特征。方法：采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法，及Gene Chip Mouse Exonl．0ST Array等技术，检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表达的差异，重点关注那些表达量大、差异显著的基因，筛选气阴阳虚证独特上调和下调的基因。结果：筛选到气阴阳虚证独特上调的基因13个：Apoe、S100a8、Anxal、LOC383949、Iq2-Ea、S100a6、Vim、Tjnf2、Ngp、Gbp5、Myc、Cls、Ltf；独特下调的基因5个：Klklb5、A1bl、Scdl、Bglap2、Gc。结论：①存活到中晚期的气阴阳虚证荷瘤小鼠，垂体细胞的增殖与代谢十分活跃；②这些基因的表达变化可能是肿瘤小鼠气阴阳诸虚证的标志之一。     

早期气虚证H_(22)荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征

目的:揭示H22荷瘤小鼠早期气虚证肿瘤组织基因表达的特征。方法:利用实验中获得的外显子芯片数据分析H22荷瘤小鼠早期气虚证与邪毒壅盛、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证等3个证候肿瘤组织基因表达的差异。结果:与其它三种证候相比,在早期气虚证小鼠肿瘤组织中,1上调表达的基因有8个,其中包括H2-Eb2和Sla等4个TCR或BCR有关的基因,和P2ry1、Cobra1等4个其他功能类的基因。2下调表达的基因有18个,包括MMP8/9/10等3个MMPs家族基因,S100a8、S100a9等2个S100家族基因,Lcn2、Clec4d等5个细胞因子和粘附分子类基因,以及Slc6a9、Ddit4等其他功能类的基因8个。结论:早期气虚证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量差异性表达的基因,上调表达的数量少,下调表达的数量多,可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

不同补肾方剂对老年前期小鼠不同脏器细胞核体外RNA转录？…

目的：探讨补肾阴方左归饮和补肾阳方益肾宝对老年前期小鼠抗衰老的机制。方法：用１４月龄雄性小白鼠为肾虚模型，观察左归饮及益肾宝对其肝、脑、肾、睾丸的细胞核体外ＲＮＡ转录活性及无细胞提取液蛋白质合成活性的影响。结果：老年前期对照组小鼠４种脏器的细胞核体外ＲＮＡ转录活性及无细胞提取液蛋白质合成活性明显低于青年组（３月龄）小鼠。经灌服左归饮和益肾宝２个月后，两给药组小鼠４种脏器的细胞核体外ＲＮＡ转录活性及     

不同补肾方剂对老年前期小鼠不同脏器细胞核体外RNA转录和无细胞提取液蛋白质合成活性的影响

目的 :探讨补肾阴方左归饮和补肾阳方益肾宝对老年前期小鼠抗衰老的机制。方法 :用 1 4月龄雄性小白鼠为肾虚模型 ,观察左归饮及益肾宝对其肝、脑、肾、睾丸的细胞核体外RNA转录活性及无细胞提取液蛋白质合成活性的影响。结果 :老年前期对照组小鼠 4种脏器的细胞核体外RNA转录活性及无细胞提取液蛋白质合成活性明显低于青年组 (3月龄 )小鼠。经灌服左归饮和益肾宝 2个月后 ,两给药组小鼠 4种脏器的细胞核体外RNA转录活性及无细胞提取液蛋白质合成活性均明显高于老年前期对照组小鼠 ,而两给药组间无明显差异。结论 :补肾阴与补肾阳方剂均可提高老年前期肾虚小鼠的RNA转录活性及蛋白质合成活性     

同病异证H22肝癌小鼠甲状腺AC-cAMP信号通路基因差异表达的特征

目的 观察同病异证H22肝癌小鼠甲状腺AC-cAMP信号通路基因差异表达的特征.方法 采用小鼠计量化四诊和辨证方法及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,观察肿瘤邪毒证、气虚证甲状腺激素生成和释放相关AC-cAMP信号通路及相关基因表达特征.结果 ①一些基因相对关键,Tg和转录因子Pa...     

荷瘤小鼠后爪部分证的标志图谱

辨证论治寻求最佳个体化治疗是中医药的精髓,其前提是通过望闻问切进行辨证.对于小鼠这样小的动物实验,如何辨证一直是困扰中医药辨证论治实验研究的一大难题.本文报道了我们在既往探索荷瘤小鼠非创伤性辨证论治的基础上,进一步通过对小鼠后爪显微镜放大、数码相机拍摄的不同证的代表性图谱,并采用图像软件计算爪色的RGB分量值,进行初步望色的定量.结果表明放大后的小鼠爪有着丰富的变化,可以明显反映出不同的证,其色的变化可以通过其国际标准的RGB分量值定量,从而可以实现小鼠的辨证.     

紫花高乌头总碱对实验性吗啡戒断症状的影响

目的:观察紫花高乌头总碱对吗啡戒断症状的影响。方法:采用剂量递增法复制吗啡依赖小鼠和大鼠模型,注射纳洛酮催促产生戒断症状。结果:紫花高乌头总碱可减少小鼠的跳跃反应,降低大鼠的戒断反应症状分值,不同程度的控制小鼠和大鼠的体重下降。结论:紫花高乌头总碱可抑制吗啡依赖动物的戒断症状。     

乳酸脱氢酶C4在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)在邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织的表达水平及其意义。方法采用Affy-metrix Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array及其方法检测乳酸转运和氧化相关基因在H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异,芯片重复两次;并采用实时荧光定量PCR对两种高乳酸亲和力的脱氢酶基因Ldhb和Ldhc在各种证候中的表达量进行检测。结果乳酸转运相关基因的表达要高于氧化相关基因,尤其以H22接种后早期最明显;Ldhb基因的表达在H22接种后早期、中期和晚期变化不明显,而Ldhc基因在H22接种后早期气虚、中期和晚期的表达也不明显,且与Ldhb表达量相近,但它在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中表达量显著升高。结论在荷瘤小鼠肿瘤组织中,尤其是H22接种后早期,肿瘤细胞产生的乳酸作用不仅在于氧化产能;LDH-C4可能代替LDH-B4参与了早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织缺氧肿瘤细胞的代谢拯救途径。     

粉防己碱与可乐定对小鼠和大鼠吗啡躯体依赖的影响

目的:观察粉防己碱(Tet)与可乐定对吗啡依赖小鼠和大鼠催促戒断症状的影响。方法:采用剂量递增方式皮下注射酸吗啡,建立吗啡依赖小鼠和大鼠模型,用纳洛酮催瘾。结果:Tet 15,30或60 mg/kg,可明显抑制小鼠催促戒断后的体重下降及一些戒断体征,大鼠给予 Tet 15,30或60 mg/kg 预处理,可抑制1 h 体重下降,明显改善戒断时的行为表现,戒断症状评分随剂量增加而下降。Tet 15 mg/kg 与可乐定0.075 mg/kg 联用,对吗啡依赖小鼠和大鼠催促戒断症状有明显对抗作用。但以上处理对小鼠和大鼠的跳跃反应均无影响。结论:Tet 可缓解吗啡依赖小鼠和大鼠的戒断症状,小剂量 Tet 与可乐定联用可能是一种较好的用药方案。     

补肝养髓方对老年性痴呆模型皮质神经元RNA和Nissl体的定量研究

目的:探讨补肝养髓方对自发老年性痴呆模型皮质神经元RNA和Nissl体的影响。方法:从21月龄昆明种小鼠筛选出自发老年性痴呆(记忆障碍)鼠,随机分为4组即空白对照组(老年性痴呆组)、西药对照组、补肝养髓小剂量组、补肝养髓大剂量组、另设老年学习记忆正常组(老年正常组)。用跳台实验检测学习记忆成绩;脑组织冰冻切片,细胞化学方法显示大脑皮质神经元内RNA和Nissl体,全自动显微图像分析系统定量检测相关脑区RNA和Nissl体含量。结果:补肝养髓方能显著改善自发老年性痴呆模型小鼠的学习记忆障碍,并明显增高大脑皮质锥体细胞的RNA和Nissl体含量,而且其作用呈现出一定的量效关系。结论:补肝养髓方改善自发老年性痴呆模型学习记忆障碍的机理可能与促进调节其大脑皮质的RNA代谢,改善学习记忆关键脑区的神经元结构有关。     

鹿茸口服液促进RNA和蛋白质合成作用的研究

目的：研究鹿茸口服液对青年及老年小鼠RNA和蛋白质合成的作用。方法：观察口服鹿茸口服液对小鼠肝RNA和蛋白质含量及^3H-Uridine和^3H-Leucine掺入的影响。结果：鹿茸口服液可明显增加老年小鼠肝RNA和蛋白质含量及[^3H]Uridine和[^3H]Leucine掺入RNA和蛋白质，作用明显强于青年小鼠。结论：鹿茸口服液对老年小鼠RNA和蛋白质合成有明显促进作用。