半边旗二萜化合物5F和大黄素影响HO-8910PM细胞中GDF15表达的研究

目的:研究半边旗二萜化合物5F(简称PsL5F)和大黄素对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中生长分化因子15(GDF15)表达的影响,探讨它们抗肿瘤的作用机制。方法:应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测PsL5F和大黄素对GDF15表达的影响。结果:PsL5F和大黄素都能明显上调GDF15表达。结论:PsL5F和大黄素的抗肿瘤作用与GDF15高表达有关。     

半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PMETS-1mRNA和VEGF蛋白表达的影响

目的:研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对HO-8910PM细胞内VEGF蛋白及ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制.方法:RT-PCR分析ETS-1mRNA的表达;Western blot分析VEGF蛋白的表达.结果:25～100 μmol/L 5F作用HO-8910PM细胞24 h后,明显下调ETS-1mRNA的表达;5F明显下调VEGF蛋白表达水平.结论:5F抗肿瘤侵袭转移能力与ETS-1mRNA和VEGF蛋白的表达有关.     

半边旗二萜类化合物5F对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PMNF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响

目的研究半边旗二萜类化合物5F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝克杉烷-19酸)对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞内核转录因子κBP65亚基[NF-κB(P65)]、Smad3蛋白及NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法MTT法检测5F对HO-8910PM细胞增殖的影响;Westernblot分析NF-κB(P65)及Smad3蛋白的表达;RT-PCR分析NF-κB(P65)及ETS-1mRNA的表达。结果5F能抑制HO-8910PM细胞的增殖,抑制率随剂量的增加而增加,具有剂量依赖性;25～100μmol/L5F作用HO-8910PM细胞24h后,NF-κB(P65)、Smad3蛋白表达水平明显下降,并呈剂量效应关系;5F明显下调NF-κB(P65)mRNA的表达,轻微下调ETS-1mRNA的表达。结论5F抗肿瘤活性与NF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA的表达有关。     

半边旗提取物5F影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的:探讨半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的影响及其作用机制.方法:以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO-8910PM细胞周期的影响;Western blot法分析NF-κB(P65)、FAK的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平.结果:不同浓度的5F分别处理细胞24 h后,对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞术分析表明5F使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;同时,5F可使NF-κB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并降低FAK酪氨酸磷酸化水平.结论:5F对HO-8910PM细胞周期的影响与NF-κB(P65)表达下调及FAK的表达上调有关.     

苦参碱对人卵巢癌细胞株HO-8910PM增殖及侵袭运动能力的影响

目的 研究苦参碱对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM增殖及转移相关能力的影响及其作用机制.方法 以MTT法和台盼蓝拒染法检测苦参碱对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖的影响;Transwell小室法检测其对HO-8910PM细胞侵袭运动能力的影响;考马斯亮蓝染色法检测不同质量浓度苦参碱对H0-8910PM细胞细胞骨架的改变及免疫细胞化学方法检测药物作用前后HO-8910PM细胞Ezrin蛋白的表达.结果 苦参碱对HO-8910PM细胞增殖抑制呈明显剂量和时间效应;1.5 g/L苦参碱能明显抑制细胞的增殖,作用6 h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基底膜和运动能力,抑制率分别为(41.52±10.76)%和(39.73±10.67)%;1.0、1.5g/L苦参碱作用HO-8910PM细胞24 h后使细胞骨架明显改变,并上调Ezrin蛋白的表达.结论 苦参碱能抑制高转移性人卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖能力和侵袭运动能力,其抗肿瘤侵袭运动的机制与细胞骨架和Ezrin蛋白表达的改变有关.     

大黄素对人高转移卵巢癌细胞中癌相关基因表达的影响

目的探讨大黄素对人高转移卵巢癌抗肿瘤的可能作用机制。方法应用肿瘤基因芯片检测大黄素(40μmol/L)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中癌相关基因表达的影响,并且实时定量PCR和Western blotting进行验证。结果共筛选出表达差异基因69个,其中33个基因表达水平上调,36个基因表达水平下调,涉及细胞凋亡、细胞周期、细胞生长与分化、细胞运动、信号转导、基因转录和细胞代谢等7大类相关基因。结论基因芯片结果提示大黄素抗肿瘤作用可能与转化生长因子-β(TGF-β)信号转导通路密切相关。     

18β-甘草次酸对HO-8910PM细胞Fas/FasL表达的影响

目的研究18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetinic acid,18β-GA)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中Fas,FasL表达的影响,探讨Fas,FasL对卵巢癌细胞凋亡的作用机制。方法不同浓度药物作用HO-8910PM细胞,MTT法检测细胞的生长增殖,流式细胞仪检测细胞周期,FITC法检测Fas,FasL的蛋白表达情况。结果 18β-GA对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的生长和增殖具有显著的抑制作用;药物使8910PM细胞周期阻滞于G1期,凋亡增加。FITC检测发现Fas,FasL蛋白表达上调(P<0.05)。结论 18β-GA通过上调HO-8910PM中Fas,FasL蛋白表达,促使细胞凋亡,抑制细胞增殖,提示18β-GA可能成为治疗卵巢癌的潜在药物。     

白藜芦醇影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的实验研究

目的:研究白藜芦醇对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响。方法:以MTT法检测白藜芦醇对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的细胞毒作用;用Transwell小室法检测白藜芦醇对HO-8910PM细胞侵袭能力和趋化运动能力的影响;以细胞粘附人工重组基底膜实验检测白藜芦醇对HO-8910PM细胞粘附能力的影响。结果:白藜芦醇作用细胞6 h后能抑制HO-8910PM细胞体外趋化运动和粘附能力,其中100μmol/L抑制率分别为(30.1±10.8)%,(34.27±1.28)%,但白藜芦醇并不影响HO-8910PM细胞侵袭人工基底膜能力。结论:白藜芦醇能抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的运动和粘附能力,是潜在的抗肿瘤转移药物。     

清肝降脂方对脂肪变性LO2细胞HO-1、Egr-1基因及蛋白表达的影响

目的:通过建立游离脂肪酸体外诱导的LO2细胞非酒精脂肪肝模型,探讨不同剂量的清肝降脂方对肝脏脂肪变LO2细胞HO-1、Egr-1基因及蛋白表达水平的影响。方法:建立游离脂肪酸诱导脂肪变性LO2肝细胞体外模型。人肝LO2细胞采用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养,待细胞均匀分布,随机分为6组:正常对照组、模型组、清肝降脂方高剂量组、中剂量组、低剂量组、水林佳对照组,每组6瓶。除正常对照组外,其余5组细胞均以0.5 mmol/L的游离脂肪酸诱导LO2非酒精脂肪肝细胞模型,诱导24 h后,各组随机抽取1瓶进行油红O染色,观察LO2细胞的脂肪化程度。确定模型诱导成功后,正常对照组和模型组分别加入10%正常大鼠血清,低、中、高剂量清肝降脂方药物血清组及水林佳药物血清组添加10%含相对应药物的大鼠血清,培养24h后,收集细胞;采用RT-PCR及Western blot法检测血红素氧化酶-1(HO-1)、早期生长反应因子-1(Egr-1)的基因及蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组LO2细胞HO-1、Egr-1 mRNA和蛋白表达有所增加;与模型对照组比较,自拟清肝降脂方三剂量组和对照药物组HO-1 mRNA及蛋白表达有所增高,Egr-1mRNA和蛋白表达明显降低;与对照药物组比较,清肝降脂方高剂量组HO-1 mRNA表达有所增高,Egr-1 mRNA表达有所降低。结论:Egr-1高表达可能会导致肝损伤机制之一;HO-1高表达可能是保护肝损伤机制之一;两者可能都是通过调节TNF-α表达来调节NAFLD细胞的损伤进展。清肝降脂方可明显改善LO2细胞Egr-1、HO-1 mRNA及蛋白的表达,可能为其治疗机制、临床诊断和判断进展参考指标。     

紫草素诱导卵巢癌细胞表达钙网织蛋白促进DC成熟的研究

目的探讨经紫草素诱导凋亡的卵巢癌细胞促进树突状细胞(DC)成熟的作用及其机制。方法分别用不同浓度紫草素以及不含紫草素的培养基处理卵巢癌HO-8910细胞系。48 h后检测各组HO-8910细胞的凋亡率和膜表面钙网织蛋白的表达(流式细胞技术);同时将各组HO-8910细胞,在加入和未加入钙网织蛋白抑制性结合肽的条件下分别与人外周血来源的树突状细胞混合培养(未经过紫草素处理的HO-8910细胞与树突状细胞的混合培养设为对照组),48 h后检测各组与树突状细胞成熟相关的膜分子CD86的表达情况(流式细胞技术)。结果与未经药物处理的HO-8910细胞相比,经紫草素处理的HO-8910细胞凋亡率和膜表面钙网织蛋白的表达显著增加,并且凋亡率和钙网织蛋白水平呈紫草素浓度依赖性。经与紫草素处理过的HO-8910细胞混合培养后,树突状细胞表达CD86较对照组显著上调,同时钙网织蛋白抑制性结合肽能显著抑制CD86的上调。结论经紫草素诱导凋亡的卵巢癌HO-8910细胞能促进树突状细胞的成熟,其机制与诱导凋亡细胞膜表面暴露钙网织蛋白有关。提示在卵巢癌的化疗中使用紫草素,能加强凋亡肿瘤细胞的免疫原性,从而刺激机体产生特异性的抗肿瘤免疫。     

P38MAPK信号转导通路在大蒜素诱导THP-1细胞凋亡中的作用

目的:探讨大蒜素诱导THP-1细胞凋亡中P38MAPK及Fas基因表达的变化.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度大蒜素对THP-1细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测凋亡率的变化;免疫细胞化学法观察大蒜素处理后细胞内磷酸化P38MAPK(P-p38MAPK)表达及分布变化;Western blot检测大蒜素处理前后细胞内P-p38MAPK和Fas蛋白表达量的变化.结果:MTT显示大蒜素能抑制THP-1细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性.其72h中效浓度(IC_(50))为12.8 mg·L~(-1).Annexin V-FITC/PI检测凋亡率随大蒜素浓度增加而增加.免疫细胞化学法检测药物处理后P-p38MAPK表达增加,主要分布于细胞核与细胞浆,而阴性对照组仅弱表达.Western blot结果分析P-p38MAPK,Fas蛋白表达量随大蒜素浓度的增加而增加,呈剂量依赖性.其阴性组、72 h的1/2 IC_(50)组、IC_(50)组P-p38MAPK蛋白表达水平(相对灰度值)分别为0.259 8±0.013 2,0.361 2±0.008 3,0.505 6±0.005 5;Fas蛋白表达水平分别为0.287 4±0.008 9,0.426 8±0.007 9和0.597 1±0.010 9,差别均有显著性意义(P<0.01).结论:大蒜素可诱导THP-1细胞凋亡,其诱导凋亡机制可能是通过激活P-p38MAPK/Fas途径实现.     

血竭素高氯酸盐抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子的表达

目的:研究血竭素高氯酸盐抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达,探讨其防治糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾纤维化的机制.方法:将培养的HMC分为低糖组(LG组,5.5 mmol·L~(-1)D-葡萄糖)、高糖组(HG组,25 mmol·L~(-1) D-葡萄糖),每组均设血竭素高氯酸盐浓度7.5 μmol·L~(-1)对照,作用24,48 h后,采用RT-PCR方法和Western blot方法检测CTGF mRNA和蛋白水平的表达.结果:与高糖组比较,低糖组中CTGF mRNA和蛋白表达均显著性减少(P＜0.01),高糖组加血竭素高氯酸盐干预后,CTGF mRNA和蛋白表达显著性减少(P＜0.01).结论:血竭素高氯酸盐可以抑制CTGF的表达,这可能是其防治DN肾纤维化的部分机制.     

健脾解毒复方中药对裸鼠肝癌模型PTEN/ERK1的影响

目的:探讨肝癌裸鼠不同肝组织PTEN/ERK1的表达及健脾解毒复方中药对其的影响.方法:采用人肝细胞癌细胞株Bel-7402间接原位移植,造雄性肝癌裸鼠模型90只,造模24 h后随机分9组,即不同浓度复方中药A～G组,FT207化疗组,生理盐水组,10只裸鼠不造模作为正常对照组,给药每天1次,8周后处死裸鼠,免疫组化二步法检测肝组织、癌旁组织和癌组织PT]EN/ERKI的表达情况.结果:荷瘤裸鼠肝脏PFEN蛋白表达强度正常肝组织>癌旁组织>癌组织.中药组B,D,E组眦N在正常肝组织的表达高于生理盐水组、化疗组、正常照组,(P<0.05).中药组D组PTEN在癌旁组织的表达高于生理盐水组,(P<0.05),中药组在癌组织中PTEN的表达高于生理盐水组和化疗组,(P<0.05).荷瘤裸鼠肝脏ERK1蛋白表达强度癌组织>癌旁组织>肝组织,癌旁组织ERK1表达强度化疗组高于中药组和生理盐水组,癌组织ERK1表达强度生理盐水组和化疗组均高于中药C,D,E,G,F组.在癌组织中,PTEN和ERKl的表达呈负相关,(P<0.01).结论:在肝癌的发生发展过程中PTEN的缺失或突变可能导致了ERK1的过度活化,健脾解毒复方中药可能对PTEN/ERK1有良性调节作用.     

Genistein影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的：探讨三羟异黄酮（genistein）对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的影响及其作用机制。方法：以台盼蓝拒染法检测genistein对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响；流式细胞术分析genistein对HO-8910PM细胞周期的影响；Westemblot法分析NF-KB（P65）、VEGF的表达。结果：不同浓度的genistein分别处理细胞24h后，对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用；流式细胞术分析表明各浓度genistein组G，期细胞明显升高，50i,xmol／L组和100μmol／L组与对照组相比差异显著（P〈0．05），而25μmol／L组与对照组比较无显著差异（P〉0．05）；同时genistein可使NF-κB（P65）和VEGF的表达下调。结论：Genistein对HO-8910PM细胞增殖有抑制作用，其作用机制可能与NF-κB（P65）和VEGF表达下调有关。