RP-HPLC同时测定苦黄注射液中4种大黄蒽醌类成分含量

目的 :建立同时测定苦黄注射液中大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚 4种大黄蒽醌类成分含量的反相高效液相色谱分析方法。方法 :采用汉邦LichrospherC₁₈柱 ,流动相组成为A :1%醋酸水溶液 ,B :含 1%醋酸的80%乙腈水溶液 ,梯度洗脱 ,流速 0.8mL·min^-1,柱温 35℃ ,检测波长 254nm ,以外标法定量。结果 :苦黄注射液中 4种蒽醌类成分的平均加样回收率分别为大黄酸 98.9%、大黄素 100.5 %、大黄酚 102.5 %和大黄素甲醚 99.0 % ,线性范围分别为大黄酸 0.0875～175 μg ,大黄素 0.0825～165μg ,大黄酚 0.15 9～ 3.17μg和大黄素甲醚 0.0525～1.05μg。 结论 :本法准确可靠 ,重现性好 ,结果稳定 ,适合于苦黄注射液中这 4种蒽醌含量的分析。     

QAMS测定一清颗粒中大黄蒽醌类成分含量

目的: 采用QAMS测定一清颗粒中4种蒽醌类成分的含量。 方法: 采用RP-HPLC,Accurasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相甲醇-0.4%磷酸水溶液(85:15),流速1 mL·min^-1,检测波长254 nm,柱温30℃。以大黄素为内参物,采用QAMS测定11批一清颗粒中大黄蒽醌类成分含量,并与外标法实测值进行比较。 结果: 大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的加样回收率分别为103.6%,98.8%,99.5%,99.4%,RSD分别为0.29%,1.8%,2.7%,3.8%。f_{大黄酸/大黄素}^{254 nm}=1.14,f_{大黄酚/大黄素}^{254 nm}=1.47 f_{大黄素甲醚/大黄素}^{254 nm}=1.04,r大黄酸/大黄素=0.64,r大黄酚/大黄素=1.38,r大黄素甲醚/大黄素=1.88,两种含量测定方法的结果无明显差异。 结论: 该方法简便、可靠,可用于控制一清颗粒中大黄蒽醌类成分含量。     

制备高效液相色谱法分离纯化大黄酚和大黄素甲醚

目的建立制备高效液相色谱分离纯化大黄酚和大黄素甲醚的方法。方法用稀硫酸将脱脂后的大黄中总蒽醌苷水解成苷元,再用热三氯甲烷提取苷元,依次用一定浓度的不同碱溶液将三氯甲烷提取液中的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素等杂质除去,氢氧化钠沉淀三氯甲烷溶液中的大黄酚和大黄素甲醚,盐酸调pH值,析出沉淀,沉淀物经真空干燥,得大黄酚和大黄素甲醚混合物粗品,所得粗品甲醇溶解,用制备高效液相色谱法,ZORBAX SB-C18色谱柱(21.2mm×250mm,7μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15),体积流量为20mL/min,检测波长为254 nm,柱温为28℃,进样量为8 mL,基于峰,分别收集大黄酚和大黄素甲醚馏分,馏分经真空冷冻干燥得大黄酚和大黄素甲醚单体。结果大黄酚和大黄素甲醚纯度用面积归一化法和外标法定量,大黄酚纯度达到98.8%,大黄素甲醚纯度98.7%。1H-NMR鉴定结构,与文献数据一致。结论制备高效液相色谱法制备高纯度大黄酚和大黄素甲醚,操作简单,适于实验室大规模制备。     

复方大黄腹膜透析液中5种游离蒽醌含量的HPLC测定

 目的建立复方大黄腹膜透析液中5种游离蒽醌的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法,LiChroCART HPLC-Kartusche RP-18e(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸(85:15),流速1.0mL·min^-1,检测波长225nm。结果方法中5种游离蒽醌平均回收率(n=6)分别为100.9%,RSD=2.21%(大黄素);99.8%,RSD=2.43%(大黄酸);97.3%,RSD=2.25%(芦荟大黄素);100.9%,RSD=1.94%(大黄酚);101.5%,RSD=1.78%(大黄素甲醚)。结论建立了一种操作简便、重现性良好的高效液相色谱法控制复方大黄腹膜透析液中有效成分含量。     

大黄类药材炮制前后蒽醌类化合物含量的变化

 目的采用高效液相色谱法比较大黄类药材炮制前后蒽醌类化合物含量的变化。方法以大黄素和大黄酚为对照品,采用Merck C₁₈色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),甲醇-水-磷酸(78.7:20.9:0.4)为流动相,检测波长254nm,外标法测定。结果大黄素的线性范围为0～44.7μg·mL^-1,r=1.0000,平均回收率为98.5%,RSD=1.20%;大黄酚的线性范围为0～42.7μg·mL^-1,r=1.0000,平均回收率为96.7%,RSD=1.48%。说明该方法用于大黄药材中大黄素和大黄酚含量的测定是合理可行的。结论大黄类药材炮制前后,大黄素和大黄酚的含量发生了变化。大多数样品(8/11)饮片中的含量高于药材,但少数样品(3/11)正好相反。     

HPLC测定益心康泰胶囊中大黄素大黄酚含量

目的:建立高效液相色谱法测定益心康泰胶囊中大黄素、大黄酚含量。方法:以Hypersil-ODS2 C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)为分析柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸(80∶20),检测波长为254 nm,流速为1 mL·min^-1,柱温20 ℃,进样量10 μL。结果:大黄素在0.04~0.80 mg·L^-1线性关系良好(r=1.000 0),平均回收率为99.5%(RSD 1.81%);大黄酚在0.110 2~2.204 mg·L^-1线性关系良好(r=1.000 0),平均回收率为99.1%(RSD 1.80%)。结论:样品处理方法简便,灵敏度高,结果准确。     

RP-HPLC同时测定三黄片中4种有效成分的含量

 目的利用梯度洗脱,建立了反相高效液相色谱法同时测定三黄片中大黄素、大黄酚、黄芩苷和盐酸小檗碱含量的方法。方法采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm);流动相组成为A:0.5%三乙胺水溶液(醋酸调pH 3.0,内含5mmol·L^-1十二烷基磺酸钠),B:甲醇,C:乙腈,梯度洗脱;检测波长254 nm;流速1.0 mL·min^-1。结果大黄素、大黄酚、黄芩苷和盐酸小檗碱含量测定方法的线性关系良好,线性范围和相关系数分别为0.26～32.88 mg·L^-1(r=0.999 9),0.54～68.88 mg·L^-1(r=0.999 9),9.83～1 258 mg·L^-1(r=0.999 7),3.07～392.8 mg·L^-1(r=0.999 8);回收率分别为99.7%,100.2%,100.2%和98.0%,方法精密度良好,RSD均小于2.0%,方法的重现性良好,RSD均小于1.3%。结论该方法专属性强,结果准确可靠,重现性好,可用于三黄片中大黄素、大黄酚、黄芩苷和盐酸小檗碱的含量测定,更好地控制三黄片的质量。     

RP-HPLC-DAD同时测定大黄中9种有效成分的含量

目的: 建立RP-HPLC-DAD同时测定大黄中5 种游离蒽醌类成分(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚),2种双蒽酮类成分(番泻苷A、番泻苷B),以及没食子酸、儿茶素合计9种成分含量的方法。方法: 采用Agilent Zorbax SB-C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm) 色谱柱,流动相0.05%磷酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长280 nm,柱温40 ℃,进样量10 μL。结果: 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、番泻苷A、番泻苷B、没食子酸和儿茶素9 种成分分别在4.56~45.6,16.3~163,7.38~73.8,7.44~74.4,1.82~18.2,57.6~576,28.2~282,3.27~32.7,118~1.18×10 mg·L^-1与峰面积呈良好的线性关系 (r≥0.999 5),平均加样回收率为96.4%~101.4%,RSD<3.15%。不同来源的6批大黄样品中9种有效成分的含量差别较大。结论: 该方法简单、重复性良好,准确可靠,可用于大黄药材的快速质量评价。     

大黄中4种蒽醌类化合物抑幽门螺杆菌效果比较

 目的:对4种大黄蒽醌化合物抑制幽门螺杆菌( Helicobacter pylori )进行实验研究。方法:用梯度碱提取法，将大黄中的4种蒽醌类化合物提取，然后用试管稀释法和纸片扩散法，分别观察其对幽门螺杆菌的抑菌效果。结果:4种大黄蒽醌，最低抑菌浓度及抑制幽门螺杆菌环分别为:大黄素(emodin) 0.40μg· ml^{-1(30mm,强)、大黄酸(rhein)0.60μg·ml-1(28mm,强)、大黄酚(chrysophanol ) 0.78μg·ml-1(24mm,强)、芦荟大黄素(aloe-emodin)0.85μg·ml-1(23mm,强)。衬照品大黄提取物(Rheum officinale extracts)仅为17.24μg·ml-1(15mm，中)。空白对照为灭菌注射用水，无抑菌环，幽门螺杆菌生长正常。结论:4种大黄蒽醌类化合物对幽门螺杆菌均有较强的抑制生长作用。}     

HPLC法测定清热解毒方芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定清热解毒方中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:KromasilC₁₈(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.2%磷酸(85∶15)为流动相,流速:1.0mL·min^-1,检测波长:254nm,柱温:35℃。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在1.0125～16.2μg、1.025～16.4μg、1.025～16.4μg、1.025～16.4μg、0.625～10μg范围内呈良好线性关系,相关系数分别为0.9991,0.9998,0.9997,0.9994,0.9996,平均回收率分别为101.4%,102.0%,101.7%,102.1%,100.8%。结论:该方法操作简单、准确,且重复性好,可作为清热解毒方质量的控制指标之一。     

制首乌4种炮制过程中物质基础共性变化规律分析

为了规范制首乌的炮制工艺,稳定制首乌饮片的质量,该研究基于物质基础内涵对不同炮制方法及不同炮制时间制首乌进行了共性变化规律分析,考察了黑豆汁炖、清蒸、黑豆汁蒸和黑豆汁黄酒蒸4种炮制方法制首乌,在炮制24,32,40,48 h时,二苯乙烯苷类、蒽醌类、多糖、寡糖类等9种主要化学成分的含量变化。采用HPLC-DAD测定二苯乙烯苷类及蒽醌类成分的含量;紫外-可见分光光度法测定多糖类成分含量;HPLC-ELSD测定D-果糖、D-无水葡萄糖与蔗糖含量,绘制含量测定结果比较图,结合聚类分析和熵权TOPSIS模型,寻找不同炮制方法制首乌炮制过程中物质基础共性变化规律时间区间。结果显示,炮制32 h左右,4种不同炮制方法制首乌各主要成分含量具有一定共性特点且具有较高的质量。因此,将不同炮制方法制首乌炮制过程中物质基础变化规律相似时区设置为32 h左右。该研究表明4种炮制方法具有"统一"的可能性,研究结果为不同炮制方法制首乌作为同名饮片使用的科学性提供了参考。     

不同产地何首乌的质量分析

采用ＨＰＬＣ法对不同产地何首乌中大黄素、大黄酸、大黄素甲醚进行定量测定。运用色谱指纹谱技术分别对何首乌的甲醇提取液和氯仿－甲醇提取液进行ＨＰＬＣ－ＦＰＳ分析。结果表明,因产地不同而造成的何首乌质量差异明显存在,四川、云南产何首乌质量上乘。本法快速、简便,一次进样即能同时测定３个蒽醌甙元的含量,利用ＨＰＬＣ－ＦＰＳ分析技术,对无标准品的中草药的质量提供较全面,可靠的科学评价。     

润肠通乐丸中何首乌的提取工艺研究

目的研究润肠通乐丸中何首乌的最佳提取工艺。方法采用正交试验设计,以乙醇浓度、溶剂用量、提取时间、提取次数为考察因素,以结合型蒽醌含量和80%乙醇浸出物为指标优选最佳提取工艺。结果最佳工艺为8倍量60%乙醇回流提取3次,每次1.5h。结论该工艺合理,稳定,可行,适合于润肠通乐丸中何首乌的提取。     

《中华人民共和国药典》2020年版收载何首乌和制何首乌质量标准【鉴别】项的商榷

目的 讨论完善《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）2020年版何首乌及制何首乌的薄层色谱鉴别项。方法 考察超声及加热回流2种不同的样品制备方式,以及用二氯甲烷-甲醇-甲酸、乙酸乙酯-石油醚-甲酸展开系统代替原标准中三氯甲烷-甲醇展开系统的可行性,同时比较了不同显色条件。结果 2种制备方式制得的样品在相同的展开条件下展开结果并没有明显差异,超声提取操作更加简便;以二氯甲烷-甲醇-甲酸（5∶1∶0.3）和石油醚-乙酸乙酯-甲酸（5.0∶1.0∶0.3）代替三氯甲烷-甲醇展开系统后,喷10%硫酸乙醇显色剂并在紫外灯365 nm下检视,薄层色谱板上斑点明显增多且分离效果好,较《中国药典》2020年版何首乌和制何首乌薄层色谱鉴别条件更理想。结论 改进后的方法毒性低、简便易行、可行性良好,为进一步完善《中国药典》2020年版何首乌和制何首乌质量标准提供参考。     

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??OBJECTIVE To establish a micellar electrokinetic chromatography with diode array detection (MEKC-DAD) method for simultaneous determination of seven components including stilbene glucoside, emodin, aloe-emodin, rhein, chrysophanol, physcion, and catechin in Polygoni Multiflori Radix. of different origins and commercial herbs. METHODS Based on the mode of MEKC, an uncoated fused silica capillary (75 ??m ?? 64.5 cm, 56 cm of effective length ) was adopted, and 25 mmol??L^-1 borax-30 mmol??L^-1 SDS-10% acetonitrile (pH 9.60) was selected for the running buffer. The detection wavelength was set at 254 nm. The separation voltage was 25 kV and the column temperature was maintained at 24 ??. The sample was injected at 5 kPa for 5 s. RESULTS The calibration curves of the seven components in Polygoni Multiflori Radix showed good linearity (r??0.999 4). The average recoveries of the method were between 99.164%-101.504%. CONCLUSION The established method is reliable and accurate, and can be used for the quality control of Polygoni Multiflori Radix.
     

不同采集地制何首乌薄层色谱指纹图谱研究

目的：建立制何首乌薄层色潜指纹图谱。方法：黑豆汁蒸10份不同采集地何首乌样品,用甲醇提取其有效成分并以两种展开系统进行薄层色谱分离分析建立薄层色谱指纹图谱。薄层扫描法对色谱图进行定量扫描,以峰高进行主成分分析和聚类分析。结果：获得的11个共有指纹峰构成了制何首乌葸醌类和二苯乙烯苷类成分薄层色谱指纹图谱。结论：薄层色谱指纹图谱可快速有效地鉴别制何首乌,并评价其质量。     

何首乌对肿瘤脂代谢的影响＊

何首乌是常见补益类中药，也是道教医药常用补益方药。药用为其干燥块根生晒（何首乌）或炮制品（制何首乌）。本文试结合本课题组近年来建立的基于肿瘤生物学特征的抗肿瘤中药药理学筛选技术平台，对何首乌抗肿瘤脂代谢研究进行回顾。何首乌与制何首乌药理活性近似。我们发现，制何首乌醇提物可通过依赖地和非依赖地抑制脂代谢关键转录因子SREBP1而诱导肿瘤的内源性凋亡，通过对蒽醌类化合物筛选，发现主要活性成分有大黄素、大黄酸和大黄素甲醚。为进一步开发何首乌的抗癌活性和临床应用提供参考。     

蒽醌类中药的致泻强度与化学含量相关性研究

目的:对含蒽醌类中药的致泻强度与化学含量之间的相关性进行初步研究。方法:采用生物效价检测的方法,即以小鼠泻下半数有效量(ED₅₀)为评价指标,考察大黄的3个正品品种,以及虎杖、决明子、何首乌等含有蒽醌类成分中药的致泻强度差异;并采用反相高效液相色谱方法进行蒽醌的含量测定,探讨致泻强度与蒽醌含量之间的关系。结果:含蒽醌类中药的ED₅₀分别为(生药)0.458,0.686,0.925,1.004,1.047,1.986g.kg^-1(体重),致泻强度顺序为唐古特大黄>虎杖>掌叶大黄>药用大黄>决明子>何首乌。供试品中结合蒽醌含量测定结果分别为2.82%,1.64%,1.44%,0.82%,0.15%,0.019%,结合蒽醌含量高低顺序为唐古特大黄>虎杖>掌叶大黄>药用大黄>决明子>何首乌。结论:结果表明含蒽醌类成分不同中药间的致泻强度,存在较大的差异;致泻强度与结合蒽醌含量之间具有一定的相关性;将生物效价检测方法与常规理化检测方法联系起来,从而更全面的保证中药质量。     

Hepatoxicity of major constituents and extractions of Radix Polygoni Multiflori and Radix Polygoni Multiflori Praeparata

Ethnopharmacological relevance

Radix Polygoni Multiflori (RPM) and Radix Polygoni Multiflori Praeparata (RPMP) were traditionally widely used as Chinese herbal medicine. However, liver adverse reactions caused by RPM or RPMP were frequently reported all around the world recent years. The aim of this study was to study the cytotoxicities of RPM, RPMP and their major constituents on human liver cell L-02 simultaneously.

Materials and methods

Multi-assays, including MTT assay, neutral red uptake (NRU) assay, LDH leakage percentage and liver enzyme secretion (AST, ALT and ALP) were used. Cytotoxicities of major chemical constituents of RPM, 2, 3, 5, 4′-tetrahydroxy-stilbene-2-O-β-D-glucoside (TSG), physcion and emodin, were tested. The cytotoxicities of water, 50% ethanol and 95% ethanol extractions of RPM and RPMP were tested. HPLC-DAD analysis was carried to reveal the content change of TSG, physcion and emodin after the processing procedure.

Results

The TD₅₀ of TSG, physcion and emodin in MTT assay were >10,000 μM, 2853.61 μM and 520.37 μM. In the NRU assay, the TD₅₀ of TSG, physcion and emodin were much smaller (1401.53 μM, 1140.00 μM, and 3.80 μM). Emodin induced much severe liver enzyme secretion than TSG and physcion. Cell proliferation and LDH leakage rate showed no difference between RPM and RPMP extractions, but ALP, AST and ALT secretions in RPMP extractions were significant lower than that of PMR groups. Water extractions of RPM and RPMP were less toxic than any other solvent in most of the assays. Positive correlation was found between the TSG/emodin ratio and MTT survival rate. The emodin/physcion ratio also showed positive correlation with the LDH leakage percentage.

Conclusions

In conclusion, Radix Polygonum multiflorum and Radix Polygonum multiflorum Praeparata were not liver injure inducing in our in vitro assays. However, the processing produce of RPM could reduce its effect on both cell proliferation and enzyme secretion of liver cell. Judging from cell proliferation, integrity of cell membrane and enzyme secretion, three major chemical constituents of RPM: TSG, physcion and emodin showed no, moderate and severe cytotoxicity against human liver cell line L-02 respectively. Chemical constituents-cytotoxicity relationship investigation revealed that TSG and physcion probably had attenuating effect to emodin. The attenuating mechanisms were still under investigation.     

何首乌和夜交藤药材指纹图谱研究与评价

目的 建立何首乌、夜交藤药材指纹图谱分析方法,并依据指纹图谱对两种药材进行比较,为科学评价与有效控制何首乌、夜交藤药材质量提供新方法.方法 何首乌和夜交藤分别用甲醇和醋酸乙酯超声处理,提取液用HPLC进行测定.HPLC法采用C18色谱柱,乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,检测波长分别为265和290 nm,体积流量1mL/min,柱温30℃.结果 建立了何首乌、夜交藤药材HPLC指纹图谱,并对不同产地何首乌、夜交藤药材进行了相似度比较.测定结果显示不同产地药材存在较大差异,化学成分组成及质量分数存在一定差异.结论 所建立的方法简便、可靠,可用于不同产地何首乌、夜交藤药材的指纹图谱测定和质量评价,为全面有效控制何首乌药材的内在质量提供了依据.