胆南星发酵菌种的分离鉴定与复合菌种发酵初探

目的 对胆南星发酵过程中的微生物进行分离与鉴定，筛选优势菌种并对胆南星复合菌种发酵进行探索，以解决胆南星杂菌发酵工艺产品质量及稳定性不易控制的问题。方法 取胆南星发酵过程中的深层培养物进行菌种分离与纯化，运用细菌、真菌多相鉴定检测方法及全自动微生物分析系统，比对DNA序列，鉴定微生物，将分离鉴定出的菌种分别进行纯种发酵并筛选优势菌种，将筛选出的优势菌种进行复合菌种发酵探索，比较复合菌种发酵胆南星与传统发酵胆南星的指标成分含量差异。采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法（UPLC-QqQ-MS/MS）对传统发酵胆南星和复合菌种发酵胆南星中的指标成分进行含量测定，流动相0.1%甲酸乙腈溶液（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~2 min，35%~45%A；2~10 min，45%~48%A；10~12 min，48%~100%A；12~12.01 min，100%~35%A；12.01~15 min，35%~65%A），流速0.35 mL·min^-1，采用电喷雾电离源（ESI），负离子采集模式，扫描方式为多反应监测（MRM）模式，采集范围m/z 50~1 000。结果 从胆南星深层培养物中共分离鉴定了8种微生物，筛选出肠球菌属Enterococcus sp.（厌氧）和铅黄肠球菌E. casseliflavus是胆南星发酵过程中的优势菌种，以二者作为复合菌种发酵制得的胆南星与传统发酵法样品比较，游离型胆酸中的鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸和猪胆酸质量分数分别增加1.76、0.06、0.19 mg·g^-1，结合型胆酸中的甘氨鹅去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、牛磺猪去氧胆酸、甘氨猪胆酸、牛磺猪胆酸含量较传统发酵胆南星分别降低0.63、0.23、0.26、0.16、0.03、0.04 mg·g^-1。结论 复合菌种（肠球菌属和铅黄肠球菌）发酵能够使胆南星发酵更加完全，缩短发酵周期，并能够提高产品的质量及其稳定性。     

不同发酵方式对神曲消化酶活力及化学成分的影响

目的:优化神曲发酵工艺,比较不同发酵方式对神曲消化酶活性及化学成分的影响。方法:以淀粉酶、蛋白酶活力和HPLC特征图谱为评价指标,对未发酵、恒温恒湿发酵及自然室温发酵神曲进行对比研究,并与市售神曲进行比较;以淀粉酶、蛋白酶活力为指标,通过单因素试验考察发酵相对湿度及药汁加入量。结果:神曲最佳发酵方式以恒温恒湿发酵效果较优,其淀粉酶、蛋白酶活力分别为14.768 mg·min-1·g-1和79.467μg·min-1·g-1,化学成分与自然发酵和Z生品差别不大。与参照图谱相比,相似度除未发酵组0.9外,其余各组均0.9;最佳发酵相对湿度80%,麸面中药汁加入量0.65 m L·g-1。结论:恒温恒湿发酵神曲产生的消化酶活力较高,较自然室温发酵快速、质量可控,为神曲的质量标准制定提供参考依据。     

探析原生质体融合技术在微生物菌种选育中的运用

文章以原生质体融合技术为研究对象,从原生质体融合技术的一般步骤,能够对原生质体融合及分离动作产生影响的因素分析入手,结合原生质体融合技术与微生物菌种选育的共性特征,对其在微生物菌种选育中的四方面应用问题（①.菌种遗传特性的改良;②.菌种发酵特性的优化;③.菌种质粒的有效转移;）进行了较为详细的分析与阐述,并据此论证了将原生质体融合技术合理运用于微生物菌种选育工作在进一步提高微生物菌种选育工作质量与工作效率的过程中所起到的至关重要的作用与意义.     

神曲对小鼠消化功能的影响

目的:比较不同炮制和发酵方式的神曲对实验动物消化功能的影响,为神曲生产工艺的改进及合理应用提供依据。方法:取用实验室自制自然发酵、未发酵、协同发酵神曲以及同仁堂购买的生神曲、炒神曲和焦神曲,研究不同神曲对大鼠体重、肠推进、胃排空和胃酸分泌的影响。结果:不同发酵和炮制方式的神曲对小鼠消化功能的影响不尽相同,实验室自制的协同发酵神曲药效最显著。结论:神曲可以显著改善小鼠的消化功能,优化发酵工艺后的协同发酵神曲综合药效最好,规范化原料来源和炮制工艺,对提高神曲质量有重要的意义。     

神曲的研究进展

对神曲的研究现状作一综述，为进一步研究奠定基础。方法：通过查阅近二十年的文献，从神曲的 发酵工艺、炮制、质量标准以及临床应用等方面进行概述。结果：目前，神曲的发酵工艺还不成熟，是否炮制也有争议，质量标准尚不完善。结论：在今后工作中，应重点解决神曲的发酵工艺，阐明其炮制原理，建立神曲的质量标准。     

半夏曲炮制过程中优势微生物的鉴定

研究半夏曲不同发酵时间点的微生物种类、数量变化以及优势菌种的分离鉴定,为探讨半夏曲炮制机制奠定基础。用选择性培养基对半夏曲发酵过程中5个时间点(0,18,36,54,72 h)样品中的细菌、霉菌、酵母菌分别进行培养、菌落计数、分离纯化优势菌种;采用16S rDNA,26S rDNA序列分别对优势细菌、优势真菌进行鉴定。结果表明,半夏曲发酵过程中细菌数量少、变化平缓,而酵母菌和霉菌数量发酵至54 h时迅速增加,至发酵结束时达1×10~7CFU·mL~(-1)以上;通过NCBI同源性比对及构建系统发育树,鉴定出半夏曲炮制过程中的优势细菌为Streptomyces sp.,Bacillus pumilus,B.subtilis,B.aryabhattai,Bacillus sp.;优势酵母菌为Meyerozyma guilliermondii;优势霉菌为Paecilomyces variotii,Byssochlamys spectabilis,Aspergillus niger。提示半夏曲的发酵过程涉及多种微生物共同参与,其中以酵母菌和霉菌为主。M.guilliermondii,P.variotii,P.variotii,A.niger和Bacillus sp.等优势菌种可能在半夏曲炮制中起重要作用。     

茯苓菌种质量标准及检验规程

目的规范茯苓菌种分离、培育方法，制定茯苓菌种质量标准及检验规程。方法在传统产区选择2～3代，体重2．5kg以上的优质鲜菌种作为种苓，进行（母种、原种、栽培种）的分离与培养。结果制定了茯苓菌种质量标准及检验规程。结论标准及规程的建立保证了茯苓菌种的质量。     

传统中药发酵研究的思路与方法

发酵是最独特的中药炮制方法,但其相关原理研究十分薄弱,主要面临优势菌种及其活性成分鉴定两个难题,而与其一脉相传的传统食品发酵目前已经从复杂多菌种发酵过渡到纯菌种发酵模式,生产规模也达到了工业化程度,并且很多食品发酵过程的生化机理也比较明确。鉴于中药发酵研究可从食品发酵研究中得到一些启示,理清研究思路,本文从发酵模式、菌种、产物等方面深入分析了食品发酵与中药发酵的关联性,以促进食品发酵的相关研究成果在中药发酵研究中得以借鉴和应用,提高研究层次。     

基于定量核磁共振氢谱的神曲加工炮制过程中葡萄糖量变规律研究

建立基于定量核磁共振氢谱(quantitative proton nuclear magnetic resonance, qHNMR)的神曲中葡萄糖含量的测定方法，对市售神曲中葡萄糖的含量进行分析，并探究神曲加工炮制过程中葡萄糖含量的变化规律。以重水为溶剂，2,2,2,3-d₄-3-(三甲基硅基)丙酸钠盐为内标，以化学位移δ 4.65、5.24处葡萄糖端基质子双峰信号作为定量峰，对神曲中葡萄糖含量进行定量。经方法学评价，葡萄糖在0.10～6.44 mg·mL^-1呈现良好的线性关系，精密度、稳定性、重复性和加样回收率试验的RSD均小于2.3%。市售神曲中葡萄糖含量波动明显，推测与神曲的发酵天数、麸面比及炮制方式等有关。神曲中葡萄糖含量随发酵天数增加呈先增加后降低的趋势；全麦麸或全面粉发酵的神曲中葡萄糖含量明显低于麦麸和面粉混合发酵的神曲；麸炒神曲较生神曲葡萄糖含量略有降低，而焦神曲中葡萄糖含量显著降低。该实验建立的qHNMR方法简单快捷，准确度高，为神曲中葡萄糖含量测定提供了新的方法。此外，该研究阐明了神曲加工炮制过程中葡萄糖的量变规律，对判断...     

人工培育北虫草培养基的筛选及优化

目的：为工厂化培育北虫草提供优质液体发酵菌种,保证并提高人工培育北虫草的质量。方法：以生物转化率、虫草素和腺苷含量为指标,从碳源、氮源、C/N比、微量元素硒的影响等因素,通过正交实验确定优化培养基的组成成分。结果：优化培养基的组成成分为：土豆汁20%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、蚕蛹粉0.5%、KH2P04 0.1%、MgS04·7H2O 0.05%、FeSO4·7H2O 0.002%、VB18mg·L-1,发酵初始pH7.0。结论：采用优化后的培养基,提高了北虫草子实体培育的生物转化率和子实体中的有效成分含量。     

中药“神曲”发酵工艺及质量标准研究进展

神曲是由面粉和/或麦麸、苦杏仁、赤小豆、青蒿、苍耳、辣蓼按照一定比例混匀后发酵而成的复方中药。性温,味甘、辛;归脾、胃、大肠经,具有健脾消食,理气化湿的功效。作为传统曲剂,神曲的发酵工艺直接影响产品的质量。本文就神曲的发酵工艺和质量标准进行系统的综述。     

六神曲的发酵菌种分离及纯种发酵考察

目的:筛选优势菌种,探索纯种发酵对六神曲发酵炮制品质量的影响.方法:采用微生物菌种分离方法,从实验室自制和同仁堂购买的六神曲中筛选菌种,采用部分霉菌进行六神曲纯种发酵后淀粉酶及蛋白酶活力测定.淀粉酶活力测定依据碘-淀粉比色法,蛋白酶活力测定采用Folin试剂法.结果:筛选出12株霉菌,黄曲霉能显著提高六神曲淀粉酶和蛋白酶的活力,自制六神曲中分离的杂色曲霉产蛋白酶活力最高,其次为同仁堂分离的肉色曲霉和伞枝犁头霉,其余各组产蛋白酶活力明显低于传统自然发酵组.结论:六神曲原材料中不含淀粉酶、蛋白酶,纯种发酵能稳定提高六神曲发酵炮制品的质量.     

神曲消食口服液联合枸橼酸莫沙必利治疗儿童功能性消化不良疗效研究

目的:观察神曲消食口服液联合枸橼酸莫沙必利治疗小儿功能性消化不良的疗效。方法:100例功能性消化不良儿童随机分为对照组(n=42)口服枸橼酸莫沙必利,与观察组(n=58)口服神曲消食口服液和枸橼酸莫沙必利,治疗14 d。对治疗前后患者临床症状、疗效、胃肠激素水平、胃排空情况进行评价。结果:治疗后,观察组主症总积分和次症总积分下降明显(P<0.05)。观察组总有效率为91.3%,高于对照组的76.19%(P<0.05)。观察组GAS、MOT升高显著,SST水平下降显著(P<0.05)。餐后不同时间点,观察组胃排空优于对照组(P<0.05)。结论:神曲消食口服液联合枸橼酸莫沙必利在治疗儿童功能性消化不良中临床疗效显著。     

中药内的菌物药

现代生命科学已确证真菌独立成为真菌界,又以其为主出现了“菌物”(fungi)的概念和名词.因此,以往归属于中药“植物药”内的“真菌类中药”应冠名为“菌物药”,仍归属于中药,这将有助于对其所研发的新药进行合理定位.菌物药具有“药用真菌”和“真菌药物”二类药用方式,前者以真菌自身组织入药(如灵芝、茯苓等),后者是中药所独创也是唯一的一类生物制药工艺(如古代中药神曲和现代槐耳菌质).新创立的基于药性基质的“双向固体发酵”工程取得了良好进展,如具抗病毒作用的“槐芪菌质”及对雷公藤进行解毒持效的“灵雷菌质”等;利用中药药渣作为药性基质,进行中药二次开发并涉及环境保护等研究已引起业内各方的高度重视,对此取得的新进展进行简要概述.     

中药发酵技术传承与创新的探索

发酵作为一门极具特色和重要的中药炮制技术,其传承与发展应受到行业内的高度重视。传统中药发酵为自然发酵,因发酵过程靠经验掌控、易受到环境和季节变化的影响,质量难于控制且难以传承。而现代中药发酵技术在传统发酵技术的基础上结合发酵工程等现代生物技术,已逐渐发展起来,业内学者也对其进行了大量相关研究。但科学阐释中药发酵机制、规范中药发酵技术工艺及建立适合中药发酵特点的质量标准等是中药发酵技术研究面临的共性问题。本文在综述传统中药发酵技术概况及中药发酵技术现代研究情况的基础上,分析总结影响发酵技术传承与发展的关键技术问题,并从中药发酵技术的传承与创新两方面进行了探讨。提出中药发酵技术的传承需要正确认识中药发酵理论、挖掘中药发酵技术精髓和建立中药发酵数据库等建议;发酵技术的创新需要科学阐释中药发酵机制、客观化传承中药发酵经验、规范与创新发酵工艺、完善中药发酵质量标准和拓展中药发酵新品种等,为中药发酵技术的发展提供思路与借鉴。     

中药发酵的现代研究进展与展望

发酵作为常用的中药炮制技术之一,是指在一定条件下,借助微生物和酶的催化分解作用,改变原有药性、药效的方法。在此基础上,通过与微生物技术的融合又发展出现代发酵技术,因微生物在发酵过程中发挥出强大的生物转化能力,并能产生丰富的次生代谢产物,具有一般炮制方法所无法比拟的优势,进而成为中药研究的热点之一。文章系统综述了中药发酵的技术现状、发酵菌种、发酵产物的分析技术以及发酵对中药性味、物质基础和药理作用的影响,并对中药发酵的发展方向提出了方向和建议,可为后续深入研究和开发利用中药发酵技术提供科学思路与指导性参考。     

细辛叶枯病生防细菌的筛选、鉴定及其防效测定

叶枯病是细辛的主要病害,目前主要依靠化学防治,尚未有生物防治的相关报道,为实现细辛叶枯病的生物防治,筛选对细辛叶枯病具有拮抗作用的生防菌株。通过土壤稀释法对细辛健康植株根际土壤菌群进行分离,以细辛叶枯病为靶标菌,利用拮抗菌抑菌和发酵液抑菌的方法分别对分离得到的菌株进行筛选,然后对筛选出的菌株其进行菌种鉴定和活体防效的测定。最终从分离到的100余株菌落中筛选出1株对叶枯病具有较强拮抗作用的生防细菌(编号为S2-31)。抑菌结果表明,拮抗菌抑菌和发酵液抑菌试验的抑菌率分别为92.47%,60.56%;经形态学和16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为侧孢短芽孢杆菌Brevibacillus laterosporus。室内盆栽防效测定结果表明,接种后3,5,7 d该菌株对细辛叶枯病的活体防效分别为79.87%,71.44%,66.82%,说明拮抗细菌S2-31可以降低叶枯病的病情指数,控制细辛叶枯病病情的发展。     

神曲消食口服液临床应用指导意见（2021-08-30）

神曲消食口服液具有消食健胃、健脾理气的功效,临床主要用于儿童消化功能紊乱症的治疗,其安全性和有效性得到高度认可。现代药理学研究表明,神曲消食口服液具有促进胃排空及消化液分泌、调节胃肠平滑肌收缩、增加肠道蠕动及小肠吸收、调节平衡肠道菌群、镇痛等作用,可缓解上腹部疼痛或烧灼感、餐后上腹饱胀和早饱感、嗳气、恶心或呕吐等症状。临床研究显示,神曲消食口服液对于厌食症、功能性消化不良、功能性腹痛均具有疗效。结合文献证据和临床专家用药经验,对神曲消食口服液的药理药效研究、临床应用研究及药物安全性进行归纳总结,形成临床应用指导意见,旨在规范临床用药。     

当归苦参丸方药固体发酵前后2种水提取液的成分比较

目的:探讨固体发酵技术对中药成分提取的影响。方法:以当归苦参丸为例,对该方药作固体发酵前后2种水提取液的阿魏酸、苦参碱、苦参总碱、干浸膏4个指标成分的综合比较。结果:综合评价Y值的顺序为Y发酵Y未发酵。结论:当归苦参丸方药经固体发酵后有利于药物成分的提取。     

杂色曲霉产生的新生物活性物质——SIPI-1-2,3和4的研究

 目的:筛选和分离微生物产生的胆固醇生物合成酶抑制剂?方法:应用体外酶反应系统筛选具有抑制胆固醇生物合成活性的阳性菌株,通过发酵、溶媒萃取、硅胶柱分离和纯化获得活性化合物的单体;测定理化性质和MS,IR,UV,NMR等图谱,确定化合物的化学结构?结果:从杂色曲霉菌株中分离出3个结构类似的醌类化合物,确定其化学结构和总结其生物活性?结论:化合物SIPI-1-3和4为首次报道的新结构化合物,抑制胆固醇生物合成活性也为新发现?