复方鳖甲软肝方防治大鼠肾间质纤维化作用机理的实验研究

目的:采用单侧输尿管结扎（UUO）肾间质纤维化模型,探讨复方鳖甲软肝方对肾间质纤维化大鼠血生化及肾组织病理形态学的影响。方法:将大鼠随机分为7组,正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝方低、中、高剂量组。UUO术后4周处死大鼠,并应用HE、六胺银染色及Mallory染色,观察肾组织病理学改变。结果:模型组肾小管结构严重破坏,管腔塌陷,上皮细胞大量坏死;有些部位肾小管和间质的结构基本消失,间质中出现弥漫性细胞增殖,并广泛间质纤维化。复片鳖甲软肝方组和苯那普利组纤维化病理改变明显减轻,其中以复片鳖甲软肝方中剂量组作用明显。结论:复方鳖甲软肝方可减少炎细胞的浸润、减轻肾小管的损伤,进而延缓肾间质纤维化的病程进展。     

复方鳖甲软肝方对单侧输尿管结扎大鼠肾组织MMP-9/TIMP-1表达的影响

目的探讨基质金属蛋白酶9/基质金属蛋白酶组织抑制剂(1MMP-9/TIMP-1)在肾间质纤维化中的表达情况及其复方鳖甲软肝方的调节作用。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)动物模型。将大鼠随机分为7组,正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝方低、中、高剂量组。术后4周处死大鼠,观察肾组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织MMP-9/TIMP-1的表达。结果模型组肾组织表现为纤维化病理改变,正常组及假手术组肾小管上皮细胞、肾间质细胞胞浆有轻度MMP-9/TIMP-1表达;模型组MMP-9表达明显减少而TIMP-1则呈强阳性表达。复方鳖甲软肝方小、中、大剂量组与模型组比MMP-9强阳性表达(P!0.05),TIMP-1的表达较模型组明显减少(P!0.05)。结论复方鳖甲软肝方可通过对肾组织MMP-9/TIMP-1平衡的调节而发挥抗纤维化的作用。     

复方鳖甲软肝方对脂多糖诱导的肾小管上皮细胞增殖的影响

目的：探讨复方鳖甲软肝方对LPS诱导的人近端肾小管上皮细胞增殖的影响。方法：由UUO大鼠制备含药血清作为药源加入离体反应系统，MTF比色法检测各组血清对LPS诱导的肾小管上皮细胞增殖的影响。结果：于24h、48h及60h，阳性药物组及复方鳖甲软肝方各组OD值均低于模型组，而阳性药物组OD值与复方鳖甲软肝方各组相比无显著差异。结论：复方鳖甲软肝方可抑制LPS诱导的肾小管上皮细胞增殖。从而延缓肾间质纤维化进程。     

复方鳖甲软肝方对脂多糖诱导的肾小管上皮细胞增殖的影响

目的:探讨复方鳖甲软肝方对LPS诱导的人近端肾小管上皮细胞增殖的影响。方法:由 UUO大鼠制备含药血清作为药源加入离体反应系统,MTT比色法检测各组血清对LPS诱导的肾小管上皮细胞增殖的影响。结果:于24h、48h及60h,阳性药物组及复方鳖甲软肝方各组OD值均低于模型组,而阳性药物组OD值与复方鳖甲软肝方各组相比无显著差异。结论:复方鳖甲软肝方可抑制 LPS诱导的肾小管上皮细胞增殖,从而延缓肾间质纤维化进程。     

增损甘露消毒丹对肝纤维化大鼠血清透明质酸和层黏蛋白的影响

目的：观察增损甘露消毒丹对肝纤维化大鼠血清透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）以及肝组织病理的影响。方法：采用四氯化碳（CCL4）植物油溶液皮下注射加乙醇灌胃制备肝纤维化大鼠模型。设病理模型组、增损甘露消毒丹小、中、大剂量组及复方鳖甲软肝片组。造模成功后进行药物灌胃治疗，疗程结束后处死各组大鼠，检测肝纤维化血清学指标透明质酸、层黏蛋白的含量，并对其肝组织病理切片进行HE染色、胶原纤维染色及网状纤维染色，观察其肝纤维化的程度。结果：各治疗组较病理模型组血清HA、LN含量明显降低（P〈0.05）；增损甘露消毒丹大剂量组、中剂量组与复方鳖甲软肝片组相比，血清HA、LN含量差异无统计学意义。各治疗组（除增损甘露消毒丹小剂量组）较病理模型组网状纤维面积／肝组织面积百分比降低（P〈0.05）；增损甘露消毒丹大剂量组与复方鳖甲软肝片组相比，其网状纤维面积／肝组织面积百分比无明显差异。结论：增损甘露消毒丹在降低肝纤维化大鼠血清HA、LN含量方面，与复方鳖甲软肝片基本相当。     

复方鳖甲软肝片对5/6肾切除大鼠肾组织 ET-1mRNA表达的影响

探讨复方鳖甲软肝片对5/6肾切除(5/6NT)大鼠肾组织内皮素(ET-1)mRNA表达的影响.120只SD大鼠随机均分为正常组,假手术组,5/6NT模型组,苯那普利组,尿毒清组和复方弊甲软肝片大、中、小剂量组.连续用药28周后,处死大鼠,无菌取肾,制作肾组织冰冻制片,用原位杂交方法检测各组ET-1mRNA的表达.结果正常组、假手术组,仅见少量ET-1mRNA阳性反应物;5/6NT模型组,肾小球系膜细胞浆、肾小管上皮细胞浆均见ET-1mRNA强阳性蓝色反应物;苯那普利组、尿毒清组ET-1mRNA阳性反应物减少,与5/6NT组比,P＜0.05;复方鳖甲软肝片ET-1mRNA阳性反应物明显减少,并呈剂量依赖关系;与5/6NT组比,P＜0.05.结论复方鳖甲软肝片能抑制5/6NT大鼠肾组织ET-1mRNA的表达,这可能是该方防治肾小球硬化的作用机制之一.     

真武汤对 UUO模型大鼠肾小管损伤和肾间质纤维化影响的研究

目的：通过肾脏肾小管损伤和肾间质纤维化程度研究真武汤对UUO大鼠模型肾间质纤维化（ RIF）的干预及疗效。方法：采用单侧输尿管结扎法制作肾间质纤维化模型,将所有大鼠随机分为假手术组和造模组,后将造模组随机分为模型组、真武汤低剂量组、中剂量组、高剂量组和尿毒清组;分别给予相应药物灌服,术后2、3和4周分批取材,收集肾脏组织,采用HE法检测梗阻侧大鼠肾脏形态学变化及肾小管损伤和肾间质纤维化的评定。结果：假手术组染色均匀,肾小管结构正常、清晰,模型组2、3、4周时肾脏形态和结构逐渐加重,炎性细胞浸润,纤维细胞增殖增生,肾小管萎缩、消失,各药物干预组较模型组明显减轻。结论：真武汤能够减轻大鼠肾组织病理损伤,降低肾小管病变,阻断或延缓大鼠肾间质纤维化的进程,中剂量效果最佳。     

肾复康Ⅱ号胶囊对大鼠肾间质纤维化的影响

目的:观察肾复康Ⅱ号胶囊对UUO大鼠肾间质纤维化的影响。方法:采用单侧输尿管结扎的方法制造大鼠肾间质纤维化模型。90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、小剂量组、中剂量组及大剂量组,小剂量组予肾复康Ⅱ号胶囊2250mg/kg.d灌胃、中剂量组4500mg/kg.d灌胃、大剂量组9000mg/kg.d灌胃,假手术组及模型组每天同时间以等体积的生理盐水灌胃。给药7、14、21天后分别将造模大鼠的肾脏进行Masson染色观察肾间质纤维化的面积的变化。结果:模型组和治疗组均出现明显的肾间质纤维化病理改变(P<0.05);各治疗组病变程度与模型组相比明显较轻,具有显著性差异(P<0.05)。大、中、小剂量治疗组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:肾复康Ⅱ号胶囊可以减轻肾间质纤维化和肾小管损伤的程度。     

益肾抗纤中药复方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中巨噬细胞及核转录因子表达的影响

目的:益肾抗纤复方对单侧输尿管梗阻模型(UUO)大鼠的肾间质中ED1及NF-κB表达的影响.方法:造模大鼠随机分组:假手术组、模型组、益肾抗纤组、中药高剂量组、苯那普利组;制备UUO大鼠模型;观察术后21 d肾间质巨噬细胞(ED1)及核转录因子(NF-κB)表达.结果:中药各组较模型组大鼠肾间质ED1及NF-κB的表达均有显著性差异;苯那普利组对ED1的表达与模型组比较差异有显著性.结论:益肾抗纤复方对肾间质纤维化过程中ED1及NF-κB表达具有良好的防治作用,苯那普利组可以抑制UUO大鼠肾间质ED1的表达.     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠TGF-β1表达的影响

目的：观察银杏叶提取物（GbE）的抗大鼠肝纤维化作用及其作用机理。方法：采用CCl4诱导大鼠肝纤维化，同时分别以3个剂量的GbE进行干预，并设复方鳖甲软肝片为对照组，6周后取肝组织进行HE及Masson染色，观察肝组织炎症活动度及肝纤维化程度，采用免疫组化法测定肝组织α-SMA、TGF-β1蛋白表达，采用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达。结果：GbE各剂量组及复方鳖甲软肝片组肝组织炎症活动度及肝纤维化程度较模型组明显改善，α-SMA蛋白表达及TGF-β1 mRNA和蛋白表达也较模型组显著下降。结论：GbE可能通过抑制肝星状细胞的激活和转化，降低α-SMA蛋白表达及TGF-β1的转录及表达，抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生及发展。     

益肾活血清利方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的探讨依据益肾活血清利法组方对进展性肾间质纤维化的防治作用。方法制备单侧输尿管梗阻大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、益肾活血清利方低剂量组、益肾活血清利方高剂量组、苯那普利组。观察用药21d对大鼠血肌酐、尿素氮,大鼠肾间质病理变化及大鼠肾组织羟脯氨酸含量的影响。结果用药组较模型组对血肌酐、尿素氮,大鼠肾间质病理变化及大鼠肾组织羟脯氨酸含量的作用均有显著差异,其中中药高剂量组优于苯那普利组。结论益肾活血清利方对肾间质纤维化具有良好的防治作用。     

和解聚散方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织α-SMA表达的影响

目的:观察和解聚散方对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白表达的影响,初步探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型,将雄性SD大鼠120只随机分为4组:假手术组,模型组,洛丁新组,和解聚散方组,每组30只,从造模后第2天开始灌胃,洛丁新组为1.0mg/kg/d,和解聚散方组为9.8g/kg/d,假手术组、模型组灌胃生理盐水3ml/只。分别于造模后7,14,21天取梗阻侧肾脏进行HE、Masson染色,观察肾组织病理结构变化;采用免疫组化方法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:模型组、洛丁新组、和解聚散方组中α-SMA在术后7天、14天、21天表达均明显高于假手术组,两个治疗组的表达水平明显低于模型组,和解聚散方组14天与洛丁新组14天组比较有显著性差异。结论:和解聚散方可以降低肾组织中α-SMA的表达,这可能是和解聚散方抗肾纤维化的作用机制之一。     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织NF-κB表达的影响

目的:探讨温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型,将雄性SD大鼠80只随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组20只;于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予等量生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦[10 mg/(kg·d)],温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方汤剂[9.8 mg/(kg·d)]。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织NF-κB的表达。结果:第7、14、21天UUO组中NF-κB表达较假手术组高(P0.05),治疗组在第7天较UUO组低(P0.05)。结论:温肾活血化湿方可能通过抑制NF-κB的过度表达从而延缓肾间质纤维化的进程。     

抗纤灵抗大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的探讨中药复方抗纤灵治疗大鼠单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）所致肾纤维化的作用及机理。方法雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗2周后检测血肌酐、尿素氮含量等指标;HE染色和六胺银染色观察肾组织病变;采用RT-PCR和Western印迹分别检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）mRNA和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1受体（TβRⅠ及TβRⅡ）及肝细胞生长因子受体（C-Met）蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;肾小球毛细血管基底膜明显增厚;肾组织TGF-β1 mRNA及α-SMA、TβRI、TβRⅡ、C-Met蛋白袁达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药干预后,血尿素氮含量显著降低,肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚;肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。结论抗纤灵可抑制肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达并增加肾纤维化保护性因子HGF mRNA的表达,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化及肾功能。     

Effect of yishen huayu fang on kidney tissue E-cadherin expression in unilateral ureter ligation in rats

[OBJECTIVE]:To observe E-calcium sticky protein (E-cadherin) expression in kidney tissues in a rat model of unilateral ureter ligation and the effect of Yishen Huayu Fang (formula oftonifying the kidney and dissolving accumulated blood stasis) on the expression.[METHODS]:A total of 150 clean grade male rats were randomly divided into a control group,model group,low-dose Yishen Huayu Fang group (low-dose group),high-dose Yishen Huayu Fang group (high-dose group),and Lotensin group.A renal fibrosis model was established with unilateral ureteral obstruction (UUO).Pathological changes of rat renal tissue were observed with light microscopy on days 3,7,14,21,and 28 after UUO.Changes in kidney tissue E-cadherin expression were observed with immunohistochemistry.[RESULTS]:Three days after modeling,kidney edema appeared followed by gradual inflammatory cell infiltration,and part of the small tubules disappeared while the renal cortex thinned.Meanwhile,the E-cadherin expression level dropped,which was negatively correlated with the obstruction time.After intervention,E-cadherin expression was increased in all treatment groups (P＜0.01 or P＜0.05),while there were no significant differences between the high-dose and Lotensin groups.[CONCLUSION]:Yishen Huayu Fang delays the renal fibrosis process by promoting E-cadherin expression in renal tissues and reducing extracellular matrix deposition.     

尿毒康通过抑制p38/ERK MAPK通路改善UUO大鼠肾小管细胞上皮-间质转化

[目的]研究尿毒康对肾纤维化大鼠肾功能及肾组织病理改变的影响,初步探讨尿毒康抗纤维化的作用机制。[方法]采用单侧输尿管结扎法(UUO)复制大鼠肾间质纤维化模型。将大鼠按体质量分为假手术组,模型组,阳性药对照组(氯沙坦30 mg/kg,10 mL/kg),尿毒康20 mL/kg、10 mL/kg和5 mL/kg组。手术第2天即开始灌胃给予相应受试药物,1次/d,连续21 d。末次给药后测定24 h尿蛋白含量;检测血清肌酐(SCr)水平;剖取结扎侧肾脏(左肾),苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肾组织的病理改变情况;Masson染色观察纤维化程度并评分;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾脏重组人转化生长因子-β(TGF-β)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SAM)mRNA的表达水平;Western blot检测肾脏p38,细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)蛋白表达水平。[结果]尿毒康能明显降低UUO模型大鼠SCr水平(P<0.01)和24 h尿蛋白定量水平(P<0.01)。尿毒康组病理表现较模型组有不同程度减轻,其中10 mL/kg组改善相对明显,并能明显抑制肾脏p38,ERK1/2蛋白的表达。[结论]尿毒康能明显改善UUO模型大鼠的肾功能,改善结扎侧肾小管细胞上皮-间质转化,且与抑制了p38/ERK丝裂原治化蛋白激酶(MAPK)相关。     

益肾活血汤抗单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化作用及机制的研究

目的 探讨益肾活血汤对大鼠肾间质纤维化的拮抗作用及机制.方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾活血汤治疗组、贝那普利治疗组.制备单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型,在术后第21日处死大鼠留取梗阻侧肾组织观察肾间质病理变化,并用免疫组化法测定肾组织中纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI-1）、转化生长因子-β（TGF-β）及结缔组织生长因子（CTGF）的表达,处死前留取24 h尿测定尿蛋白,心腔穿刺取血测定血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）.结果 益肾活血汤组24h尿蛋白、BUN、Scr水平、肾间质纤维化程度及PAI-1、TGF-β、CTGF的表达量均明显低于模型组（P＜0.05）,但与贝那普利组差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 益肾活血汤对肾间质纤维化具有拮抗作用,其机制可能为通过减少PAI-1、TGF-β、CTGF等致纤维化因子在肾组织中的过度表达来抑制肾间质纤维化.     

扶肾方对UUO大鼠肾脏病理及CTGF、FN、Vimentin表达的影响

[目的]研究扶肾方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)、纤连蛋白(FN)、波形蛋白(Vimentin)表达的影响。[方法]健康雄性SD大鼠50只,适应性饲养1周后,按照随机原则将大鼠分为假手术组(12只)与造模组(38只),造模组在手术后7 d随机选取大鼠2只以验证造模是否成功,余造模组大鼠随机分为模型组(12只)、中药低、高剂量组(各12只)。除假手术组外,其余各组均以单侧输尿管结扎的方法制作肾间质纤维化模型,假手术组仅游离输尿管。各组大鼠在术后7 d开始灌胃给药,所有大鼠均按照每只每天2 mL进行灌胃,假手术组与模型组灌服生理盐水,中药低剂量组和高剂量组分别按照扶肾方溶度2.52和5.04 g/mL进行灌胃。用苏木精-伊红(HE)染色及电镜观察肾脏病理形态变化;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测肾组织CTGF、FN、Vimentin的表达。[结果]光镜下观察,HE染色示假手术组肾小球形态完整,肾小管结构正常,肾间质正常;模型组术后28 d,肾小球数量减少,肾皮质显著变薄,肾小管萎缩、坏死、消失明显,肾间质纤维化程度严重;中药低、高剂量组肾组织病变较模型组轻。电镜示对比假手术组,模型组肾组织病变明显,中药低、高剂量组肾组织病变较模型组轻。Western Blot检测显示,在术后14、28 d时,与假手术组比较,模型组、中药各剂量组CTGF、FN、Vimentin表达明显增多(P<0.05);中药低、高剂量组与模型组比较,在术后14 d CTGF、FN、Vimentin表达明显下降(P<0.05);与低剂量组比较,在术后28 d高剂量组CTGF、FN、Vimentin表达明显下降(P<0.05)。[结论]扶肾方可以降低UUO大鼠CTGF、FN、Vimentin的表达,随着梗阻时间的延长,高剂量效果更好。