千金苇茎汤调控人肺小细胞癌H446细胞凋亡的分子机制研究

目的:研究千金苇茎汤对人肺小细胞癌H446增殖与凋亡的影响。方法:将千金苇茎汤通过化学分离法制得水提部位;分为不同药物浓度,与H446共同培养,流式细胞仪细胞周期检测以及荧光显微镜线检测凋亡结果;AgNOR染色观察以及免疫组织化学检测PCNA、caspase-3蛋白的变化。结果:不同浓度的千金苇茎汤水提部位与H446培养后,细胞凋亡率明显升高、AgNOR数目减少以及PCNA、caspase-3蛋白明显的改变(P<0.01),并有一定的浓度依赖性。结论:千金苇茎汤水提部位可以有效抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

苇茎汤调控人肺腺癌A549细胞中EGFR、STAT3抗凋亡的机制研究

目的:研究苇茎汤对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:将苇茎汤培养液浓度稀释为0.25、2.5、25g/L,与A549细胞共同培养,AO∕EB荧光染色观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率;Real-time PCR检测EGFR、STAT3基因的表达。结果:0.25~25g/L苇茎汤能诱导A549细胞发生凋亡形态学改变,且细胞凋亡率随苇茎汤浓度增加而升高;苇茎汤可将A549细胞周期阻滞于G0/G1期;Real-time PCR结果表明,苇茎汤可以下调A549细胞中EGFR、STAT3基因的表达。结论:苇茎汤可能通过调控EGFR、STAT3信号通路诱导人肺腺癌A549细胞发生早期凋亡。     

千金苇茎汤促进撤血清舌鳞癌细胞凋亡机制的研究

目的: 探讨千金苇茎汤辅助治疗舌鳞癌的分子机制。方法: 体外培养SAS和TCA-8113舌鳞癌细胞,撤除血清模拟体内抗血管生成药物治疗环境,千金苇茎汤3个部位作用撤血清舌鳞癌细胞72 h,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡,ELISA检测细胞培养上清前列腺素E₂(PGE₂)含量。结果: 与撤血清对照相比,千金苇茎汤07部位能够降低撤血清舌鳞癌细胞的增殖活性(生长抑制率_max34.36%),促进SAS和TCA-8113细胞凋亡率升高(P<0.05),抑制细胞分泌PGE₂(P<0.05),且具有剂量和时间依赖性。结论: 千金苇茎汤07部位促进撤血清舌鳞癌细胞凋亡的机制与抑制PGE₂合成相关,为深入研究千金苇茎汤辅助治疗恶性肿瘤提供了新的思路和方法。     

黄芪多糖水提工艺的优化及其体外抗肿瘤活性

目的优化黄芪Astragali Radix多糖水提工艺,并评价其体外抗肿瘤活性。方法以提取温度、提取时间、料液比为影响因素,多糖提取率为评价指标,均匀设计优化提取工艺。MTT法检测多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖的影响,流式细胞仪检测NCI-H460细胞的凋亡率和细胞周期,Western blot法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达。结果最佳条件为提取温度100℃,提取时间1 h,料液比1∶35,多糖提取率3.62%。与对照组相比,多糖组中NCI-H460细胞的增殖被显著抑制(P0.01),并呈浓度依赖性;S期比例、早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率均显著增加(P0.01);Caspase-3表达、Bax/Bcl-2比例均明显提高(P0.01)。结论该优化水提黄芪多糖的方法快捷、稳定可靠;黄芪多糖能显著抑制NCI-H460细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA对NCI-H460肺癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的:本研究拟探讨丹参酮ⅡA对肺癌细胞株NCI-H460的增殖抑制作用及其作用机理.方法:应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对NCI-H460细胞的增殖抑制,应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对NCI-H460细胞周期的影响,应用RT-PCR法检测用药后bcl-2和C-myc基因mRNA表达水平.结果:丹参酮ⅡA对NCI-H460细胞增殖抑制作用成剂量依赖性.细胞周期分析显示:用0.5 μg/ml丹参酮ⅡA作用NCI-H460细胞24、48、72 h后,凋亡细胞分别占细胞总数1.2%、3.4%、7.7%;用1.0 μg/ml丹参酮ⅡA作用24、48、72 h,凋亡细胞分别占细胞总数2.6%、5.9%、13.4%;用2.0 μg/ml丹参酮ⅡA作用24、48、72 h,凋亡细胞分别占细胞总数4.1%、8.7%、37.6%,说明丹参酮ⅡA能促使NCI-H460细胞发生凋亡,且此作用呈剂量依赖性.用药48 h后bcl-2和C-myc基因mRNA表达明显降低.结论:丹参酮ⅡA对NCI-H460细胞的增殖具有明显的抑制作用及诱导凋亡的作用.     

基于肠道菌群理论探讨千金苇茎汤治疗呼吸系统疾病的潜在靶点

研究表明,肠道菌群对呼吸系统疾病具有一定的调节作用。千金苇茎汤为中医学治疗肺系疾病的经典方,具有清肺化痰、逐瘀排脓之效,目前常用于治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)、重症肺炎、支气管哮喘、肺脓肿等呼吸系统疾病。根据文献报道,千金苇茎汤与肠道菌群存在密切关联。据此推测,千金苇茎汤可能是通过调节肠道菌群的平衡治疗呼吸系统疾病,肠道菌群可能是千金苇茎汤治疗呼吸系统疾病的潜在靶点。     

鱼腥草生物碱抑制人大细胞肺癌细胞生长研究

目的研究鱼腥草生物碱对人大细胞肺癌细胞株H460生长的抑制作用。方法用20倍95%乙醇回流提取,大孔树脂分离纯化鱼腥草生物碱;MTS实验观察鱼腥草生物碱对H460细胞体外增殖的作用,计算IC50;观察鱼腥草生物碱对H460细胞形态及细胞核的影响,流式细胞仪检测鱼腥草生物碱抑制H460细胞周期及诱导H460凋亡的情况。结果鱼腥草生物碱可抑制H460细胞增殖,IC50为130.17μg/m L。鱼腥草生物碱可致H460细胞萎缩、死亡、细胞核碎裂及出现凋亡小体,能使H460细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导H460凋亡。结论鱼腥草生物碱能抑制H460细胞的生长,具有诱导其发生凋亡的作用。     

刺果紫玉盘素J的体内外抗肿瘤作用

目的观察刺果紫玉盘素J(calamistrin J,Cal-J)的体内外抗肿瘤活性及其选择性。方法MTT法观察不同质量浓度的Cal-J对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞、人肝癌HepG2细胞、人宫颈癌HeLa细胞、人结肠癌Lovo细胞、肉瘤S180细胞5种肿瘤细胞系和正常人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖的影响,Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察Lovo细胞凋亡的形态变化。在S180荷瘤小鼠进行整体抑瘤实验,计算Cal-J的抑瘤率。结果Cal-J对NCI-H460、HepG2、HeLa、HELF、S180、Lovo等6种细胞的增殖均有不同程度的抑制作用,其IC50依次为>100、(91±4)、(60.5±2.4)、(39.3±1.7)、(38±4)、(25±4)μg/mL。其中对Lovo细胞株抑制作用最强,且呈剂量、时间双重依赖性。Cal-J作用48h后,荧光显微镜下可见Lovo细胞核固缩,染色质凝聚等典型凋亡形态学特征。Cal-J对荷瘤小鼠S180移植瘤的生长有明显的抑制作用,Cal-J高、中、低(90、30、10mg/kg)剂量组的抑瘤率分别为51%、30%、17%,作用呈剂量依赖性。结论Cal-J对体外培养的多种人类肿瘤细胞和人胚肺成纤维细胞具有不同程度的细胞毒性作用,其中对人结肠癌Lovo细胞作用最强,并具有诱导细胞凋亡的作用。Cal-J还可抑制荷瘤小鼠S180移植瘤的生长。     

玉金方对人胚肺成纤维细胞的传代与微细结构的影响

目的 测定玉金方对人胚肺成纤维细胞的传代与微细胞结构的影响.方法 用含玉金方的血清培养人胚肺成纤维细胞,同时设空白对照组和福康乐阳性对照组,比较细胞传代情况和微细结构.结果 玉金方组与阳性对照组细胞传代数均比空白对照组多,且细胞衰老现象比空白对照组出现的迟缓.结论 玉金方胶囊有显著的体外抗衰老作用,也为其临床应用提供了血清药理学的依据.     

半边旗活性物质5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞IκKβ、IκB、p65及p50 mRNA表达的影响

目的从NF-κB信号通路着手探讨半边旗活性物质5F诱导非小细胞肺癌NCI-H460细胞凋亡发生的机制。方法MTT法检测5F对NCI-H460细胞的生长抑制作用;用半定量RT-PCR方法检测NCI-H460细胞IκKβ、IκB、p65及p50mRNA表达水平的变化。结果5F抑制NCI-H460细胞的生长,其效果与5F的质量浓度和作用时间相关,24、48、72h的IC50分别为:21.40、4.52、1.02μg/mL;100μg/mL5F作用NCI-H460细胞6h后能引起IκKβ和IκBmRNA表达水平显著降低(P0.05);p65和p50mRNA水平在作用3h就发生明显减少(P0.05)。结论5F诱导NCI-H460细胞凋亡的机制可能是通过抑制核因子-κB(NF-κB)信号通路来实现的。     

复方中药白龙对人胃癌BGC82-3细胞恶性增殖表型的影响

目的：观察复方中药白龙（简称白龙）对人胃癌ＢＧＣ８２－３细胞恶性增殖表型的逆转作用方法：通过测定生长曲线、软玉脂集落及裸鼠致瘤实验，观察人胃癌ＢＧＣ８２－３细胞增殖的变化。结果：（１）生长曲线表明白龙明显３了ＢＧＣ８２－３细胞的增殖到第５天抑制率达８６％。（２）经白龙处理的ＢＧＣ８２－３细胞在软玉脂中形成的集落小且少，与对照组比交集落形成率仅为５２％。（３）白龙明显抑制接种ＢＧＣ８２－３细胞的裸鼠     

龟板组份及配伍对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察龟板组份及配伍对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响,筛选龟板组份中进MSC增殖的药效成分方法:从龟板提取物分离出10个组份,以不同浓度(2μl,5μl,10μl,20μl)组份及配伍加入体外培养的MSC中,培养3 d后,MTT法测定细胞活性。结果:与对照组比较,A、B、H、I 20μl浓度组和C、F(10μl～20μl)浓度组和J(5μl～0μl)浓度组细胞活性显著提高,与J组份配伍细胞活性提高(P<0．05);E(2μl-20μl)浓度组细胞活性显著降低,与E组份配伍组细胞活性显著降低;D和G组细胞活性没有影响。结论:7个组分均促进MSC增殖,以J组份最强,与J组份配伍作用提高;E组份抑制MSC增殖,与E组份配伍作用降低;D和G组份无效。     

温阳通络方治疗浆细胞性乳腺炎183例

目的探讨温阳通络方治疗浆细胞性乳腺炎的效果。方法回顾性分析温阳通络方治疗的183例浆细胞性乳腺炎的临床资料和治疗效果。结果随访3月~5年,痊愈无复发178例,治愈率97.3%;3例患者一侧乳腺治愈后另一侧又发,间隔时间6月~1年,经治疗后痊愈;2例患者经治疗3月后无好转改为手术治疗。本组病例治疗平均时间为91天,平均住院天数为11天。结论温阳通络方治疗浆细胞性乳腺炎疗效显著,缩短了住院天数、避免了切开扩创等手术治疗。     

化瘀祛痰方药对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1、CD36表达的影响

目的:观察化瘀祛痰方药及其拆方对THP-1源性泡沫细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、CD36表达的影响,探讨该方药的作用机制,并比较方药全方及各拆方的疗效及调控作用。方法:体外培养THP-1细胞,佛波酯(PMA)使之巨噬化,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)使巨噬细胞泡沫化。细胞随机分为空白对照组、模型组、补气组、化瘀组、祛痰组和全方组。油红O染色观察细胞浆脂滴变化,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量分析ABCA1、CD36 mRNA水平。结果:模型组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.01);与模型组相比,全方组和祛痰组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低。RT-PCR结果提示模型组细胞ABCA1、CD36 mRNA水平显著升高;而化瘀祛痰方药及祛痰拆方含药血清可显著升高ABCA1 mRNA,显著降低CD36 mRNA水平。结论:化瘀祛痰方药及祛痰方可抑制ox-LDL诱导的THP-1细胞泡沫化,该作用可能与其上调ABCA1基因、下调CD36基因表达,从而减弱THP-1细胞对ox-LDL摄取有关。     

补肾解毒活血法与益气补血法对骨髓抑制小鼠造血功能影响的比较研究

目的:比较补肾解毒活血法与益气补血法对环磷酰胺(CTX)所致骨髓抑制小鼠造血功能的影响及其作用机制的不同特点.方法:昆明种小鼠80只,随机分为4组,正常对照组、模型组、补肾解毒活血组(20.55 g·kg -1·d-1)和益气补血组(17.47 g·kg-1·d-1).采用CTX 100 mg·kg-1 ip,连续3d,制成骨髓抑制小鼠模型.各组于造模完成后次日开始ig连续10d.分别于造模前及造模后1,3,5,7,10,14 d动态检测外周血象;于末次给药次日后进行骨髓有核细胞计数(BMNC)及粒-单核系集落形成单位( CFU-GM)、红系集落形成单位(CFU-E)、和红系爆式集落形成单位(BFU-E)集落计数.结果:补肾解毒活血方和益气补血方均可明显升高模型小鼠的WBC,PLT,BMNC,可促进造血祖细胞(HPC)增殖,CFU-GM,CFU-E,BFU-E集落数均显著高于模型组(P＜0.01);补肾解毒活血方对血小板的恢复优于益气补血方.结论:补肾解毒活血方和益气补血方均可促进骨髓造血祖细胞集落生成,具有减轻和改善化疗后骨髓抑制的效果,而前者尤可减轻血小板减少、促进其恢复;其作用机制可能在骨髓细胞分化过程或造血微环境等途径上有不同.     

44种生物碱类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制活性的筛选

目的：从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法：应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果：西萝芙木碱、伊波加因、骆驼蓬碱、哈尔明碱、黄连碱、延胡索碱、白屈菜碱、小檗胺、吐根碱、4-甲氧基-1-甲基-2-喹诺酮、贝母碱N-氧化物、去氢贝母碱N-氧化物、倒千里光碱、9-去甲基小檗碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱、金鸡宁、罂粟碱、喜树碱和酒石酸麦角胺对人鼻咽癌细胞株KB细胞的增殖有一定程度的抑制作用，且呈浓度-效应关系；最强者为吐根碱、番茄碱苷和喜树碱，其次为黄连碱、白屈菜碱、哈尔明碱、澳洲茄次碱和延胡索碱。西萝芙木碱、白屈菜碱、哈尔明碱、小檗胺、吐根碱、贝母碱N-氧化物、番茄碱苷、罂粟碱、利血胺和喜树碱对人白血病细胞株HL-60细胞的增殖亦有一定程度的抑制作用，且呈浓度-效应关系；最强者为吐根碱，其次为西萝芙木碱、小檗胺、番茄碱苷和喜树碱。结论：上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱的、有抗肿瘤活性中药的有效成分，亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。     

甘草苷对T24细胞增殖和凋亡影响

目的:探讨甘草苷(Liquiritin,LQ)对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的影响及其可能作用机制。方法:实验分为对照组、LQ20、50、100μg/mL组。MTT观察LQ对T24细胞增殖的影响,Annexin V/PI染色,流式细胞术检测LQ对T24细胞细胞凋亡的诱导作用,Western blot检测Caspase 3蛋白表达。结果:与对照组比较,LQ20、50、100μg/mL在24、48、72h均对T24有明显的细胞增殖抑制作用,LQ作用72h后细胞凋亡率增高,Casepase3蛋白含量明显增高。结论:LQ能抑制T24细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其机制与Csaepase3蛋白表达增高有关。     

消痰散结方对胃癌组织细胞粘附分子CD44、CD49的影响

目的:探讨消痰散结方对胃癌的抑制作用及其可能的作用机制。方法:用流式细胞仪检测消痰散结方和化疗药环磷酰胺(CTX)对胃癌组织细胞粘附分子表达的影响。结果:消痰散结方的抑瘤率达45.2%,且消痰散结方能降低 CD44、CD49 d 的表达。结论:消痰散结方可能通过影响肿瘤组织间质中某些粘附分子的表达而起到阻滞肿瘤生长转移的作用。     

棉酚对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用

目的研究棉酚(gossypol)对胃癌细胞的增殖抑制作用。方法将不同浓度棉酚与胃癌细胞株SGC-7901作用,采用MTT法检测凋亡情况。结果经棉酚处理后增殖能力降低,细胞显示明显凋亡征象,并随药物浓度增加和作用时间延长而增加。结论棉酚在体外能诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡,抑制细胞增殖,是一种具有潜在抗肿瘤作用的药物,值得进一步临床试验。     

志苓胶囊对人小细胞肺癌细胞系NCI-H446增殖抑制和诱导凋亡的影响

目的研究志苓胶囊（ZLJN）对人小细胞肺癌细胞系NCI-H446增殖影响及诱导凋亡作用。方法将志苓胶囊按其不同的中西药成分配制成不同浓度的中药组、西药组和复方组,与NCI-H446共培养后,采用MTT比色法、集落形成试验,分别检测细胞存活率和集落形成率。通过流式细胞仪进行DNA倍体分析、Bcl-2蛋白表达、线粒体跨膜电位及Caspase-3活性检测;DNA片段化分析法、Annexin V-FITC标记法、TdT酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞。结果不同浓度的药物组与NCI-H446共培养后,细胞生长明显受抑制,细胞集落形成率明显降低,呈浓度依赖性;各药物组处理后的细胞线粒体跨膜电位和Bcl-2蛋白表达水平下降,Caspase-3活性增强;琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA梯形带;各药物组均检测到明显的亚二倍体G1峰（凋亡峰）;Annexin V-FITC法检测到早期凋亡细胞;TUNEL法检测到晚期凋亡细胞。复方组诱导细胞凋亡作用强于中药组和西药组。结论志苓胶囊可以有效抑制NCI-H446细胞增殖,诱导其凋亡,细胞线粒体跨膜电位水平降低,Caspase-3活性增强和Bcl-2表达下调可能参与了该过程。