扁蒴藤素抑制NCI-H1299细胞迁移侵袭的作用与机制研究

  目的：探讨扁蒴藤素对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞迁移侵袭的抑制作用及其分子机制。  方法：采用不同浓度(0～80 μmol/L)的扁蒴藤素处理NCI-H1299细胞,CCK-8法检测细胞增殖的情况,确定扁蒴藤素对NCI-H1299细胞的非毒剂量,并以此作为后续的药效与分子机制研究剂量。划痕实验评价扁蒴藤素对NCI-H1299细胞横向迁移能力的影响;transwell迁移与侵袭实验评价扁蒴藤素对NCI-H1299细胞纵向迁移能力与侵袭能力的影响;免疫印迹法与荧光定量PCR实验分别测定上皮-间充质相关标记物蛋白与mRNA的表达水平。  结果：扁蒴藤素浓度<2.5 μmol/L时,对NCI-H1299细胞无明显的细胞毒性。与空白对照组比较,非毒剂量的扁蒴藤素(0.5 μmol/L、1.0 μmol/L和2.0 μmol/L)可明显抑制NCI-H1299细胞的横向迁移以及纵向的迁移与侵袭能力(P<0.01)。扁蒴藤素处理后,上皮细胞标记物E-cadherin与ZO1的表达水平明显升高,间充质细胞标记物N-caherin与Vimentin的表达水平明显降低(P<0.01)。  结论：扁蒴藤素具有抑制NCI-H1299细胞迁移与侵袭的能力,且这一作用可能与其调控NCI-H1299细胞的上皮-间充质转化相关。     

通关藤提取物通过线粒体途径诱导肝癌HepG2细胞凋亡研究

目的:探讨通关藤提取物(MTE)对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响及诱导凋亡的途径.方法:采用不同浓度MTE(15、20、30mg/mL)处理HepG2细胞,AnnexinV-FTTC/PI双染法检测MTE对HepG2细胞凋亡的影响,JC-1染色法检测HepG2细胞线粒体膜电位,蛋白质印迹(Western blottin...     

青蒿琥酯通过Akt/Snail信号通路逆转结直肠癌细胞上皮间充质转化

目的:探讨青蒿琥酯(ART)对结直肠癌HCT-8细胞上皮-间充质转化(EMT)的作用,并探讨ART对结直肠癌细胞迁移,侵袭,EMT能力和蛋白激酶B(Akt)/Snail信号通路的影响.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同药物浓度的ART对HCT-8细胞增殖的影响,采用伤口愈合实验和transwell实验,检测ART...     

通关藤提取物对HepG2肝癌细胞增殖抑制的影响

目的 研究通关藤提取物(Marsdenia tenacissima extract,MTE)对HepG2肝癌细胞的抑制作用及其机制.方法 用MTT法及克隆形成实验检测不同浓度的MTE对HepG2肝癌细胞的增殖抑制作用,并运用流式细胞仪检测不同浓度组24 h后细胞周期的影响.结果 不同浓度的MTE对HepG2肝癌细胞均有...     

千金子介导Akt信号通路抑制肺癌细胞A549迁移和侵袭及上皮间质转化的研究

目的:探讨千金子介导蛋白激酶B(Akt)信号通路对肺癌细胞A549迁移和侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响.方法:用浓度分别为2、6、18 mg/mL的千金子处理A549作为千金子各浓度组,以不添加千金子培养的细胞作为空白对照组;用100 μg/mL的IGF-1和18 mg/mL的千金子共同处理A549作为千金子+IG...     

通关藤提取物诱导BGC-823细胞凋亡及对MTDH基因表达的作用研究

目的:通过观察不同浓度通关藤提取物对人胃腺癌BGC-823细胞增殖、凋亡及MTDH基因表达的影响,为胃癌的临床治疗提供实验基础及潜在治疗靶点。方法:(1)MTT法检测通关藤提取物对BGC-823细胞增殖影响。(2)Annexin V/PI双染法检测通关藤提取物对BGC-823细胞凋亡影响。(3)反转录多聚酶链反应(RTPCR)检测通关藤提取物对BGC-823细胞MTDH mRNA表达影响。(4)Western Blot法检测通关藤提取物对BGC-823细胞凋亡相关蛋白表达影响。结果:(1)通关藤提取物作用于BGC-823细胞,细胞生长抑制率随药物浓度增大而升高,加药各组与对照组相比,差异有统计学意义。(2)通关藤提取物0 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L、2mmol/L诱导BGC-823细胞凋亡率为(2.98±1.01)%、(6.79±0.68)、(12.512±1.27)%、(16.97±1.09),与对照组相比差异有统计学意义。(3)通关藤提取物可下调BGC-823细胞MTDH mRNA表达,这种作用具有浓度依赖性。(4)通关藤提取物能够下调Bcl-2家族中的抑凋亡因子Bcl-2、Bcl-xl的表达尤其是Bcl-xl的表达,上调凋亡执行者Caspase-3的表达。结论:通关藤提取物可下调BGC-823细胞MTDH mRNA表达,并通过下调Bcl-2、Bcl-xl,上调Caspase-3的表达而诱导BGC-823细胞凋亡,从而抑制了BGC-823细胞的生长增殖。     

姜黄素对结直肠癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响及作用机制

目的：探究姜黄素对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭以及上皮间质转化的影响。方法：取结直肠癌HCT116细胞系,随机分为对照组和观察组,观察组细胞使用姜黄素50 μg/mL处理,对照组给予等量二甲基亚砜处理;采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹法（Western Blotting）检测细胞中上皮性钙黏蛋白（E-cadherin）、神经性钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、磷酸化Jagged 1蛋白（p-JAG1）、磷酸化Notch受体1蛋白（p-Notch1）以及磷酸化Notch受体2蛋白（p-Notch2）表达水平。结果：MTT法检测显示,姜黄素可显著抑制HCT116细胞增殖。划痕愈合实验以及Transwell实验显示姜黄素可显著抑制HCT116细胞迁移及侵袭。Western Blotting实验显示姜黄素可增加E-cadherin蛋白表达水平,降低N-cadherin和Vimentin蛋白以及p-JAG1、p-Notch1、p-Notch2等蛋白的表达水平（均P<0.05）。结论：姜黄素可显著抑制结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、侵袭以及上皮间质转化,其机制可能与JAG1/Notch2通路失活有关。     

半枝莲提取物逆转上皮间质转化抑制肝癌细胞迁移侵袭的研究

目的:探讨半枝莲提取物(Extracts from Scutellaria barbata,ESB)对肝癌HepG2细胞迁移、侵袭的抑制作用及分子机制。方法:利用转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)诱导肝癌HepG2细胞上皮间质转化模型,通过MTT法、Transwell实验测定细胞增殖、迁移及侵袭能力,Western blot检测各组细胞相关蛋白表达情况。结果:MTT结果显示ESB抑制HepG2细胞增殖,且呈浓度及时间依赖性,24 h及48 h IC_(50)分别为317.3μg/mL,243.8μg/mL。Transwell实验显示,与对照组比较,TGF-β组细胞迁移与侵袭能力增强(P 0.05);与TGF-β组比较,TGF-β+5μg/mL ESB组,TGF-β+10μg/mL ESB组细胞迁移及侵袭能力减弱(P 0.05)。Western blot实验显示,在建立上皮间质转化模型后,与TGF-β组比较,TGF-β+ESB (5μg/mL、10μg/mL)组E钙黏蛋白(E-cadherin)表达上调(P 0.05),N钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达下调(P 0.05),同时磷酸化的Smad2蛋白(Phosphorylated Smad2,p-Smad2)、磷酸化的Smad3蛋白(Phosphorylated Smad3,p-Smad3)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(Phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNk)、磷酸化的p38蛋白(Phosphorylated p-38,pp38)、磷酸化的胞外信号调节激酶(Phosphorylated extracellular regulated protein kinases,p-ERK)、整合素αV亚单位(IntegrinαV)、整合素β3亚单位(Integrinβ3)、基质金属蛋白酶2 (matrix metalloprotein2, MMP2)、基质金属蛋白酶9 (matrix metalloprotein9,MMP9)表达显著下调(P 0.05)。结论:ESB可能通过阻断TGF-β/Smad/AMPK信号通路,下调IntegrinαV、Integrinβ3、MMP2及MMP9逆转TGF-β诱导的上皮间质转化,抑制肝癌HepG2细胞迁移及侵袭。     

积雪草酸对前列腺癌细胞增殖及转化生长因子 β1 诱导的上皮间质转化的影响

目的观察积雪草酸对前列腺癌细胞DU145 和PC-3 增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其对上皮间质转 化（EMT）的影响和潜在调控机制。方法体外培养DU145 和PC-3 细胞,以不同浓度积雪草酸干预后,采用 MTT 法检测其对细胞活力的影响;通过克隆形成实验检测其对细胞克隆形成能力的影响;通过细胞划痕实 验、Transwell 迁移及侵袭实验观察低浓度积雪草酸（10、20 μmol·L-1）对转化生长因子β1（TGF-β1,5 ng·mL-1） 诱导后DU145 和PC-3 细胞迁移、侵袭的影响;采用Western Blot 法检测DU145 细胞的血管内皮生长因子A （VEGFA）和EMT 相关纤维连接蛋白（Fibronectin）、波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏蛋白（N-Cadherin）、Snail 及 E-钙黏蛋白（E-Cadherin）的表达情况。结果积雪草酸可浓度及时间依赖性地抑制DU145 和PC-3 细胞增殖, 干预24、48、72 h 后的IC50 值分别为29.10、17.52、11.53 μmol·L-1 和27.91、21.43、14.82 μmol·L-1。积雪草 酸（10、20 μmol·L-1）能够明显抑制DU145 及PC-3 细胞克隆形成能力。与空白组比较,TGF-β1 能够明显促进 DU145 和PC-3 细胞的划痕愈合（P＜0.01）,促进DU145 细胞的侵袭（P＜0.05）,上调DU145 细胞内VEGFA 蛋 白和间质指标Fibronectin、Vimentin、N-Cadherin、Snail 蛋白的表达（P＜0.05,P＜0.01）,下调上皮指标 E-Cadherin 蛋白表达（P＜0.05）,进而诱导细胞EMT 进程。与TGF-β1 组比较,10、20 μmol·L-1 浓度的积雪草 酸能明显抑制TGF-β1 诱导后的DU145、PC-3 细胞划痕愈合及Transwell 细胞迁移、侵袭（P＜0.05,P＜ 0.01）,且呈现浓度依赖性;10 μmol·L- 1 浓度的积雪草酸能明显下调TGF-β1 诱导的DU145 细胞内的 VEGFA、Fibronectin、Vimentin、N-Cadherin、Snail 蛋白表达（P＜0.05）, 上调E-Cadherin 蛋白表达（P＜ 0.05）,进而逆转TGF-β1 诱导的EMT 进程。结论积雪草酸可抑制前列腺癌细胞DU145 和PC-3 增殖,并逆 转TGF-β1 诱导的前列腺癌细胞DU145 的EMT 进程,从而发挥其抗前列腺癌细胞侵袭、转移的作用。     

通关藤苷H抑制低分化鼻咽癌细胞增殖及转移的作用机制研究

[目的]研究通关藤苷H对低分化鼻咽癌(NPC)细胞增殖和转移抑制作用及其机制.[方法]以人低分化NPC细胞株CNE-2为病理模型,采用细胞计数试剂CCK-8检测通关藤苷H对细胞存活率的影响.摸索适宜的药效浓度范围,流式细胞法检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测磷酸化蛋白激酶B、磷酸化糖原合成酶...     

启膈散乙酸乙酯部位提取物通过抑制TGF-β1信号通路干预食管癌细胞的迁移和侵袭

目的：探讨启膈散(QGS)对食管癌细胞TE-1迁移和侵袭能力的影响机制。方法：利用基因芯片技术筛选正常组和启膈散组差异表达基因,分析差异基因的本体功能和信号通路。噻唑蓝(MTT)比色法检测QGS对TE-1细胞活性的影响。后续验证实验分为空白组、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)组、TGF-β₁+QGS组、TGF-β₁+SB431542组。显微镜观察各实验组细胞形态,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、果蝇母本抗生存因子2(Smad2)和果蝇母本抗生存因子7(Smad7) m RNA的表达水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞E-Cadherin、Vimentin、p-Smad2/3、Smad2/3和Smad7蛋白的表达。结果：QGS组与空白组之间有1 487个差异基因,其中1 080个下调,407个上调,下调基因占差异基因的72.63...     

凤尾草提取物通过调控lncRNA PGM5-AS1抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭

目的探讨凤尾草提取物通过调控lncRNA PGM5-AS1抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭。方法凤尾草提取物(20、40、80μg/mL)处理肝癌细胞HCC9204 48 h,将si-NC、si-PGM5-AS1分别转染至细胞HCC9204中再用20μg/mL凤尾草提取物处理48 h。Western blot检测Cyclin D1、p21、E-cadherin、MMP-2蛋白表达; MTT检测细胞存活率;Transwell检测细胞迁移和侵袭;RT-PCR检测PGM5-AS1表达。结果凤尾草提取物(20、40、80μg/mL)抑制肝癌细胞HCC9204中Cyclin D1、MMP-2表达,促进p21、E-cadherin表达,细降低胞存活率,降低细胞迁移和侵袭数量,促进PGM5-AS1表达(P<0.05)。过表达PGM5-AS1抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。抑制PGM5-AS1逆转了凤尾草提取物对细胞HCC9204增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论凤尾草提取物可能通过上调PGM5-AS1抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

乙酰紫草素对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡及上皮间充质转化的影响

目的探讨乙酰紫草素对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡及上皮间充质转化(EMT)的影响。方法 HCT116细胞经终浓度为0、3、6、12、24μmol/L的乙酰紫草素处理后,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖抑制率,流式细胞术检测凋亡率,Hoechst染色法检测凋亡指数,实时定量PCR法检测E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白及波形蛋白mRNA表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测纤维连接蛋白表达。结果乙酰紫草素可呈剂量和时间依赖的方式提高HCT116细胞增殖抑制率;乙酰紫草素也可使HCT116细胞早、晚期凋亡率及总凋亡率,细胞凋亡指数升高;同时,乙酰紫草素可以增加E-钙黏蛋白mRNA的表达,降低N-钙黏蛋白和波形蛋白mRNA及纤维连接蛋白的表达。结论乙酰紫草素具有抑制人结肠癌HCT116细胞增殖、诱导其凋亡及抑制EMT进程的作用。     

芪贞汤对脂多糖诱导人结肠癌细胞上皮间充质转化的影响

目的研究芪贞汤对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导结肠癌细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的机制,为其发挥抗癌作用提供实验依据。方法将人结肠癌Lo Vo细胞分为4组,空白组不予干预,模型组、实验组和对照组分别予1μg/m L LPS、1μg/m L LPS+800μg/m L芪贞汤、1μg/m L LPS+100μg/m L 5-氟尿嘧啶(5-Fu)干预48小时。采用MTT实验计算芪贞汤诱导肿瘤细胞凋亡50%的浓度,即IC50 (half maximal inhibitory concentration);划痕实验观察细胞迁移能力;免疫荧光法检测NF-κB p65核转位情况; Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)和N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)蛋白的表达。结果芪贞汤在48小时诱导肿瘤细胞凋亡的IC50值为980. 855μg/m L。空白组、模型组、实验组和对照组划痕缩小面积分别为(46.38±5.15)(80.81±3.18)(17.78±9.87)和(16.95±3.45);与模型组相比,各组划痕缩小面积皆有极显著统计差异(P 0. 01)。空白组NF-κB p65多于细胞浆中表达;模型组可以明显看到NF-κB p65入核,核转位明显;对照组NF-κB p65在包浆和细胞核中都有表达;实验组NF-κB p65在细胞核中表达相对较少,核转移情况下降。相对于空白组,实验组E-cadherin表达量(1. 266±0.065)和对照组E-cadherin表达量(0.979±0.183)比模型组(0. 420±0. 071)显著升高,有极显著统计学差异(P 0. 01);实验组N-cadherin表达量(0. 518±0. 115)和对照组N-cadherin表达量(1. 275±0. 567)比模型组(2. 287±0. 257)显著降低,有极显著统计学差异(P 0. 01)。结论芪贞汤可通过抑制NF-κB p65活化而抑制结肠癌细胞EMT的发生,从而达到控制肿瘤细胞迁移的效果。     

健脾化瘀方体外通过外泌体影响肝癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化

目的探讨健脾化瘀方（JHD）通过外泌体对肝癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 利用转化生长因子β1（TGF-β1）刺激MHCC97H 细胞,构建肝癌细胞EMT 模型。根据处理条件,将细胞分为 4 组,①对照组：不进行干预;②模型组：TGF-β1（10 ng·mL-1）;③JHD 低浓度组：TGF-β1（10 ng·mL-1）+健 脾化瘀方（2 mg·mL-1）;④JHD 高浓度组：TGF-β1（10 ng·mL-1）+健脾化瘀方（4 mg·mL-1）。干预48 h 后,采用 超速离心法提取各组细胞培养上清液的外泌体,通过透射电镜（TEM）、纳米颗粒追踪分析（NTA）、Western Blot 法检测外泌体标志蛋白（CD63、CD81、HsP70、CD9）,以及外泌体内吞实验对外泌体进行鉴定。将提取的 4 组外泌体分别与MHCC97H 细胞共培养24 h/48 h 后,分离MHCC97H 细胞,进行划细胞划痕实验、Transwell 细胞侵袭实验及Western Blot 法检测EMT 相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）。结果透射电镜下观 察到外泌体的形态呈囊泡状,分布不一,有单个分布,也有聚集成组,背景清晰,无明显污染物,各组外泌体 形态相近,无明显差异,直径在30~140 nm 之间;纳米颗粒追踪分析仪检测到4 组外泌体粒径的峰值在130~ 150 nm 之间,与电镜观察结果基本一致;各组均可检测到外泌体标志蛋白CD63、CD81、HsP70、CD9 表达。 被PKH26 标记的外泌体可被MHCC97H 细胞重新吸收内化。与对照组比较,模型组的MHCC97H 细胞迁移能 力（24、48 h）及侵袭能力均显著增强（P＜0.01）, E-cadherin 蛋白表达显著下调（P＜0.01）, Vimentin、 N-cadherin 蛋白表达显著上调（P＜0.01）。与模型组比较,JHD 高、低浓度组的MHCC97H 细胞迁移能力（24、 48 h）及侵袭能力显著减弱（P＜0.01）,E-cadherin 蛋白表达显著上调（P＜0.01）,Vimentin、N-cadherin 蛋白表 达显著下调（P＜0.01）。结论健脾化瘀方体外可通过外泌体抑制MHCC97H 细胞的迁移、侵袭及上皮间质 转化。     

原花青素对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化的抑制作用

目的 观察原花青素抑制宫颈癌HeLa细胞的上皮间质转化的作用,为临床新的治疗宫颈癌方案奠定基础.方法 采用MTT法检测原花青素对HeLa细胞的IC5o,划痕和Transwell实验观察药物抑制宫颈癌细胞侵袭和迁移的作用,免疫荧光观察宫颈癌细胞EMT(上皮间质转化)生成相关蛋白在药物作用后改变情况,Western blo...     

三七总皂苷对A549细胞上皮-间充质转化的影响＊

目的 本研究旨在观察三七总皂苷（Panax notoginseng saponins，PNS）对A549细胞上皮-间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition， EMT）的影响及其机制。方法 将A549细胞随机分为5组：正常对照组、TGF-β1诱导组（5 ng·mL^-1，诱导24h）、PNS干预组（低、中、高浓度组分别加入TGF-β1 5 ng·mL^-1和50、100、200 μg·mL^-1 PNS）；倒置显微镜下观察各组细胞的形态变化；Elisa法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原蛋白（COL Ⅰ）的表达；Western blot检测各组E-cadherin、Vimentin、磷酸化p38MAPK（P-p38MAPK）蛋白的表达。结果 倒置显微镜下TGF-β1诱导的A549细胞由圆形变为长梭形、纺锤形，细胞圆形度降低（P < 0.01），PNS干预后细胞圆形度增高（P < 0.05）；Elisa法检测显示，与正常对照组相比TGF-β1诱导组细胞上清液COL Ⅰ表达增高（P < 0.05），与TGF-β1诱导组比较PNS干预后COL Ⅰ表达降低（P < 0.05）；Western blot检测与与TGF-β1诱导组比较，PNS干预后E-cadherin蛋白表达增加（P < 0.05），Vimentin蛋白表达降低（P < 0.05），磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶（P-p38 MAPK）表达降低（P < 0.05）。结论 三七总皂苷可能通过调控TGF-β1/p38MAPK信号通路可以抑制TGF-β1诱导A549细胞发生EMT现象。     

姜黄素对缺氧诱导的人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响

目的 探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响及其可能机制。方法 将HepG2细胞分3组：正常对照组、氯化钴（CoCl2）组和CoCl2加10 μmol/L姜黄素组。采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Real-time RT-PCR检测缺氧诱导因子－1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白、E-钙黏蛋白（epithelial-cadherin,E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。结果 HepG2细胞被CoCl2诱导缺氧后,细胞增殖及迁移能力增强,HIF-1α蛋白表达上调,上皮标志蛋白E-cadherin表达下降而间质标志蛋白Vimentin表达上调,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。姜黄素干预缺氧HepG2细胞后,其增殖与迁移能力被明显抑制,同时HIF-1α蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下降,与CoCl2组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。3组HIF-1α mRNA表达比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 缺氧诱导肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力的增强可被姜黄素逆转,可能与姜黄素抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白上调和上皮细胞间充质转化有关。     

贝母素乙调控PI3K/Akt/mTOR通路减缓上皮-间质转化进程抑制人肺癌A549细胞侵袭及迁移的研究

目的探讨贝母素乙对人肺癌A549细胞侵袭及迁移的影响。方法采用终浓度为0、50、100、200μmol/L贝母素乙处理A549细胞,通过细胞侵袭实验、细胞划痕实验、实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法、ELISA法及Western blotting实验检测贝母素乙对A549细胞侵袭、迁移的影响及潜在机制。结果与对照组比较,贝母素乙各浓度组的A549细胞穿膜数、细胞间划痕的愈合率及MMP-9、MMP-2表达显著下降(P0.01);与对照组比较,贝母素乙各浓度组的A549细胞E-cadherin m RNA表达明显增加(P0.01),而N-cadherin和vimentin mRNA表达均显著降低(P0.01);与对照组比较,除50μmol/L贝母素乙处理A549细胞24h后的FN蛋白表达无显著性变化外(P0.05),其余贝母素乙各浓度组在各时间点上的FN蛋白表达均显著下降(P0.05、0.01);与对照组比较,贝母素乙各浓度组的p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR值及100、200μmol/L贝母素乙组的p-Akt/Akt值显著下降(P0.05、0.01)。结论贝母素乙具有抑制A549细胞侵袭及迁移能力的作用,该作用与贝母素乙调控PI3K/Akt/mTOR通路活性进而减缓上皮-间质转化(EMT)进程有关。     

龟板提取物调控骨髓间充质干细胞中Id1表达的研究

目的观察龟板提取物在不同的时间点对骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1的影响。方法将构建成功的PGL3-Id1启动子用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞,龟板提取物分别作用于转染后的骨髓间充质干细胞36小时、3天、7天,每个时间点分别加入0,1,3,30,100μg/ml的龟板提取物,药物作用一定时间后收集细胞分别应用萤光素酶报告基因系统、RT-PCR检测Id1蛋白的表达。结果 36小时和3天时,小剂量的龟板提取物对分化抑制蛋白1的影响不大,随着时间和剂量的增加,龟板提取物量效依赖性地促进了Id1的表达;7天时,龟板提取物对Id1的促进作用逐渐减弱。结论龟板提取物促进了骨髓间充质干细胞中分化抑制蛋白1的表达,且其促进作用呈现增高-最强-减弱的特点。