半乳糖化重组人生长激素的制备及其肝靶向性

 目的:将重组人生长激素(rhGH)进行半乳糖化修饰,制得半乳糖化重组人生长激素(Gal-rhGH),并研究其在小鼠体内的分布特征。方法:以D-半乳糖为原料,制得双功能试剂 2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷(IME),利用IME与重组人生长激素的碱性氨基酸偶合,制得Gal-rhGH。以¹²⁵I标记Gal-rhGH和rhGH,iv,比较其在小鼠体内的组织分布。结果:差热分析(DTA)证实Gal-rhGH是共价偶联物,平均糖密度为5。Iv后,¹²⁵I-rhGH-Gal浓集于肝脏,最大分布量是¹²⁵I-rhGH的2.3倍;在胃脏,最大分布仅为¹²⁵I-rhGH的43%。Gal-rhGH在血、肝、肾、心、肺、脾、肠中全组织相对放射性分布的ACU分别是rhGH的60%,1.55倍,58%,31%,95%,43%,67%。结论：成功地制备了化学偶联物Gal-rhGH,小鼠体内分布表明其具有明显的肝靶向性。     

半乳糖化脂质体在小鼠体内肝靶向性评价

 目的以阿霉素为模型药物,研究半乳糖化脂质体在小鼠体内的肝靶向性和肝实质细胞靶向性。方法以新型半乳糖化胆固醇,(5-胆甾烯-3β-氧基)4-氧代-4-[2-乳糖酰胺基乙氨基]丁酸酯(CHS-ED-LA)为肝靶向辅料,采用硫酸铵梯度法制备阿霉素普通脂质体和半乳糖化脂质体。小鼠尾静脉注射阿霉素溶液、普通脂质体及半乳糖化脂质体(10 mg·kg^-1),采用荧光分光光度法测定阿霉素在小鼠体内各组织及肝细胞中的含量。用靶向效率(Te)评价阿霉素半乳糖化脂质体的肝靶向性。结果阿霉素脂质体包封率>95%,平均粒径约80 nm。与阿霉素溶液组比较,阿霉素普通脂质体及阿霉素半乳糖化脂质体组的体内循环时间明显延长,而在心和肾两组织中的量显著降低。普通脂质体和CHS-ED-LA分别占脂质总量2%,5%,10%的半乳糖化脂质体的阿霉素肝靶向效率(T_e)(%)分别为15.41,18.21,32.16,50.07,肝实质细胞与非实质细胞的分布比分别为52∶48,58∶42,78∶22,88∶12。结论半乳糖化脂质体可显著提高阿霉素的肝靶向性及肝实质细胞靶向性。     

HPLC - 荧光检测法研究半乳糖化阿霉素白蛋白纳米粒在小鼠体内的药动学分布

 目的 建立反相高效液相色谱 - 荧光检测法研究 半乳糖化阿霉素白蛋白纳米粒在小鼠体内的药动学 。 方法 α - 萘酚为内标，采用 C₁₈ 色谱柱，流动相为甲醇 - 乙腈 -0.02 mol·L^-1 磷酸二氢铵 - 冰醋酸（ 52 ∶ 5 ∶ 43 ∶ 0.6 ），流速： 0.9 mL · min^-1 ；荧光检测器 <> λ (Ex)=246 nm ； <> λ (Em)=555 nm 。 结果 小鼠尾静脉给药后，在规定时间取样，测定阿霉素在小鼠血浆、心、肝、脾、肺、肾中的浓度。与普通阿霉素注射剂相比， 半乳糖化 阿霉素白蛋白纳米粒对肝的靶向性明显提高。 结论 所建 HPLC 用于阿霉素体内分布研究结果良好， 阿霉素白蛋白纳米粒 和 半乳糖化阿霉素白蛋白纳米粒 具有良好的肝脏靶向性；与白蛋白纳米粒相比，半乳糖化白蛋白纳米粒的肝脏靶向性进一步提高，具有自身被动靶向和受体介导的主动靶向的“双靶向”特征。     

半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶偶合物的合成与表征

 目的 合成肝靶向大分子前药半乳糖化壳聚糖-氟尿嘧啶偶合物（GC-FUA）。方法 将乳糖酸以酰胺键偶合到壳聚糖（CS）上,得到半乳糖化壳聚糖（GC）,再将经溴乙酸修饰的氟尿嘧啶（FUA）键合到GC上,得到目标产物GC-FUA,通过NMR和FT-IR对结构进行表征,并用1H-NMR测定乳糖酰基取代度（DS_GC）和FUA取代度（DS_FUA）。结果 通过控制反应条件得到了乳糖酰基取代度不同的高分子载体GC,以及FUA取代度不同的偶合物GC-FUA。结论 成功地合成了肝靶向大分子前药GC-FUA。     

去唾液酸糖蛋白受体介导的肝靶向脂质体配体的酶促催化合成研究

目的 用酶促催化乳糖酸与十八胺合成一种可用于镶嵌脂质体表面的去唾液酸糖蛋白靶向配体修饰物。方法 通过红外光谱(IR)、质谱(ESI-MS)和核磁共振(H-NMR)对产物结构进行确证，并对酶种类、反应介质、酶的加入量、底物摩尔比、反应温度等影响因素进行考察。结果 二甲基亚砜作为反应介质；Novozym 435固定化脂肪酶作为催化剂、酶加入量为400 U·mL、乳糖酸和十八胺的摩尔比为2∶1、40 ℃下反应24 h，十八胺的转化率可达99%以上。结论 酶促催化法可用来合成肝靶向脂质体配体。     

半乳糖化白蛋白汉防己甲素纳米粒的合成

目的制备半乳糖化白蛋白汉防己甲素纳米粒（Galn-BSA-Tet-NPs），并考察合成半乳糖化白蛋白的最佳条件。方法以乳糖和牛血清白蛋白为原料，采用还原胺化法制备半乳糖化白蛋白（Gain-BSA）。采用苯酚-硫酸比色法测定糖化比率，以糖化比率作为指标考察反应的pH、时间、催化物剂量的多个水平，从中选出最优化组合。并采用去溶剂化法制备半乳糖化白蛋白汉防己甲素纳米粒（Galn-BSA-Tet-NPs）。结果制备半乳糖化白蛋白的最佳条件是磷酸缓冲液的pH值为7.4，反应时间为80h，氰基硼氢化钠的催化量为0.8mmol／L；成功合成了半乳糖化白蛋白汉防己甲素纳米粒（Gain-BSA-Tet-NPs）。结论汉防己甲素可以采用去溶剂化法制备成半乳糖化白蛋白纳米粒，此方法可提高汉防己甲素在水相中的浓度，并靶向肝细胞，从而增强汉防己甲素的抗肝纤维化药效。     

酶法合成Kupffer细胞靶向的半乳糖配体

目的:采用酶催化法在非水相介质中合成半乳糖配体.方法:通过IR,质谱,核磁共振(1H-NMR,1C-NMR)对产物结构进行表征;以底物转化率为指标,采用单因素试验考察酶种类、反应介质、酶加入量、底物摩尔比、反应温度等对配体合成的影响.结果:通过表征分析显示经酶的催化反应,半乳糖C1’位的羟基发生了酯化反应,所得产物为目标产物.优选的反应条件为反应介质四氢呋喃(THF)-二甲基亚砜(DMSO) (3:1),Novozym 435固定化脂肪酶为催化剂,酶加入量600 U· mL-1,半乳糖-硬脂酸乙烯酯的摩尔比1:4,于55℃反应8h,半乳糖的转化率达＞0％.结论:酶促催化法可用于合成肝靶向脂质体配体.     

肝靶向抗癌药半乳糖基拟糖白蛋白-米托蒽醌和米托蒽醌的药代动力学研究

 目的:研究肝靶向抗癌药物半乳糖基拟糖白蛋白-米托蒽醌(NGA-DHAQ)的小鼠体内分布,及对NGA-DHAQ和米托蒽醌(DHAQ)在小鼠体内的药代动力学进行比较?方法:利用放射性核索示踪法及HPLC进行测定?结果:体内分布结果表明NGA-DHAQ具有良好的趋肝性,5min时肝摄取率为65%左右,HPLC实验结果表明NGA-DHAQ在血中有较好的稳定性,不易解离出DHAQ?NGA-DHAQ和DHAQ在肝中的达峰时间分别为0.2和10min,两者在血中消除均较快,NGA-DHAQ的峰浓度是DHAQ的1.9倍,不同时间点NGA-DHAQ的肝药浓度/血药浓度均比DHAQ的大?结论:NGA-DHAQ浓集肝脏速度快,具肝靶向分布特征?     

酶促合成3种半乳糖-胆固醇配体及其与肝靶向性的构效关系研究

目的酶促法构建3种不同类型的半乳糖-胆固醇配体修饰的阿霉素(doxorubicin,DOX)脂质体,研究其在小鼠体内的药动学及组织分布特征。方法利用脂肪酶在非水相中合成了3种不同结构的半乳糖-胆固醇配体:CHS-C8-Gal NAc、CHS-C8-GAL、CHS-C8-LA;利用MS、NMR鉴定产物结构;采用薄膜分散-梯度载药法制备DOX脂质体并对其理化性质进行表征;以小鼠为实验对象,采用尾iv给药,通过比较3种配体修饰的DOX脂质体在小鼠体内的药动学与组织分布特征来阐明配体中半乳糖基的结构与去唾液酸糖蛋白受体之间的构效关系。结果产物经MS、NMR鉴定均为目标产物,产率均90%;采用薄膜分散-梯度载药法制备的DOX脂质体粒径90 nm,PDI0.1,包封率99%,24 h渗漏率5%,Zeta电位接近于0;3种配体分子对肝脏亲和力大小依次为CHS-C8-Gal NAcCHS-C8-LACHS-C8-Gal;肝脏对CHS-C8-Gal NAc修饰的脂质体的摄取几乎完全被预注射的asialofetuin所抑制(P0.01),而对CHS-C8-Gal及CHS-C8-LA修饰的脂质体无显著的抑制效果(P0.05)。结论含有N-乙酰半乳糖胺基(N-acetylgalactosamine,Gal NAc)为末端的配体分子能被去唾液酸糖蛋白受体高效识别,而含有D-半乳糖基(D-galactose,Gal)或乳糖醇基(lactitol,LA)为末端的配体分子易被肝枯否细胞上的半乳糖粒子受体所竞争性结合。     

基于叶酸受体的靶向性钆造影剂的制备及弛豫性能的研究

 目的制备基于叶酸受体的靶向大分子磁共振造影剂——叶酸-壳聚糖-(Gd-DTPA)_n,并研究其体外弛豫性能。方法在EDC的催化下,将壳聚糖与DTPA反应,制得壳聚糖-DTPA偶联物,然后将该偶联物与叶酸活性酯反应所得产物与GdCl₃螯合得到叶酸-壳聚糖-(Gd-DTPA)_n。在磁共振仪上测定配合物的体外弛豫时间T₁,并分析其弛豫性能R₁。结果制得的叶酸-壳聚糖-(Gd-DTPA)_n配合物中叶酸的偶联率约为4,Gd-DTPA与壳聚糖的偶联率随着EDC的加入量增大而增大,体外弛豫性能R1约为6.2×10^-3 L·mmol^-1·ms^-1,比小分子Gd-DTPA的弛豫性能提高了2.3倍左右。结论成功地制备了叶酸介导的高弛豫效能的靶向性磁共振造影剂。     

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??OBJECTIVE To synthesize low molecular weight chitosan-acetylcysteine (LMWC-NAC) conjugate and investigate its renal targeting profile and the rapeutic effects in model mice with acute kidney injury (AKI).METHODS NAC was conjugated to LMWC by EDC/NHS reaction and the LMWC-NAC conjugate was identified by ¹H-NMR. The cellular uptake of LMWC-NAC conjugate and megalin receptor involved in this process was investigated in vitro. In addition, the tissue distribution of ICG-labelled LMWC-NAC conjugate was investigated in nude mice. AKI were induced by LPS intraperitoneal injection (20 mg??kg^-1).The parameters including Scr, BUN, inflammatory factors (TNF-?? and IL-1??),and oxidative stress (MDA) were determined and renal histology was observed.RESULTS LMWC-NAC conjugate was successfully synthesized by the amide interaction.The in vitro studies demonstrated that the uptake of LMWC-NAC conjugate was mediated by the megalin receptor on HK-2 cells, and the tissue distribution experiment indicated that LMWC-NAC conjugate was mainly accumulated in the kidney.LMWC-NAC conjugate significantly suppressed Scr, BUN, inflammatory factors and oxidative stress (P<0.01) and improved kidney injury. CONCLUSION LMWC-NAC conjugate showed good renal targeting profile and effect in recovering renal functions, which indicates the potential of LMWC-NAC conjugate as a safe and efficient drug delivery system for the treatment of AKI.     

蜜环菌多糖的分离纯化及组成分析

 蜜环菌粗多糖经溴代十六烷基三甲铵处理后分为可溶性部分和不溶性部分。不溶性部分经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５柱层析得酸性纯多糖。可溶性部分经ＤＥＡＥ纤维素柱，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６８柱层析得中性多糖。它们的分子量分别为１４０００，１８０００。中性多糖组成是甘露糖，葡萄糖，半乳糖，比例为１．７：５：１。酸性多糖组成是半乳糖，木糖，阿拉伯糖，岩藻糖，鼠李糖，比例为２．８：２．７１１：１．７：１；２，另外还含有半乳糖醛酸。     

pH敏感右旋糖酐微凝胶偶联羟基喜树碱的制备与性能

 目的 制备新型右旋糖酐微凝胶偶联羟基喜树碱（HCPT）结合物，研究其体外释放及体内抗肿瘤活性。方法 以大分子右旋糖酐为载体，己二酰肼为交联剂，同步接枝mPEG己二酰肼单腙、偶联羟基喜树碱丁二酸单酯，制备出以酰腙结构为连接键的纳米凝胶偶联HCPT。结果 载药凝胶形成了内疏水外亲水的胶束结构，粒径约为100 nm，可实现对肿瘤组织的被动靶向；载药量达5.63%，药物释放符合Rc=Atn1/(B+Ctn2)动力学方程，在pH 5.4缓冲溶液中的释放速率比在pH 4.5和pH 7.4缓冲液中的快；相同时间内纳米凝胶偶联药物的在小鼠体内的抑瘤率与羟基喜树碱相比优势不明显，但生存率明显提高。结论 该纳米凝胶偶联物具有pH敏感性，可实验肿瘤组织的被动靶向释药，在小鼠体内毒性降低，呈现显著缓释特性，可望开发成新型高分子前药。
     

Alpha-hederin potentiates 5-FU antitumor activity in human colon adenocarcinoma cells

The aim of this study was to investigate the ability of alpha-hederin to improve the efficacy of widely prescribed 5-fluorouracil (5-FU) in a human colon adenocarcinoma model. Drug combinations of alpha-hederin and 5-FU using both fixed-concentration and combination index methods were performed in vitro in HT-29 cells. The results showed that alpha-hederin at sub-IC(50) cytotoxic concentrations enhanced 5-FU cytotoxicity about 3.3-fold (p < 0.001). Simultaneous combination of alpha-hederin and 5-FU at their IC(50) ratio showed either a synergistic effect at a moderate cytotoxic range (25% of cell growth inhibition) or an antagonistic effect at a high level of growth inhibition. The data indicate therefore that it is possible to optimize colorectal cancer cell sensitivity to 5-FU with alpha-hederin.     

血红蛋白与人血清白蛋白偶联物作为血液代用品的大鼠换血试验研究

 目的考察以血红蛋白与人血清白蛋白偶联物(Hb-HSA)及其他复苏液为大鼠换血后,大鼠血压变化及其长期存活率情况,研究此新型血液代用品的有效性。方法采用大鼠30%和60%换血两种模型,在线监测动脉血压,对比用Hb-HSA偶联产品、无基质血红蛋白、5%HSA溶液、Ringer乳酸盐溶液和原血换血以及失血不补液后大鼠血压变化,考察14d内大鼠的存活情况。结果大鼠30%换血,以扩容剂HSA和乳酸盐换血后,大鼠最终平均动脉血压(MAP)略低于初始值,无基质血红蛋白使MAP有所升高,Hb-HSA偶联产品与原血回输类似,基本维持原MAP。无基质血红蛋白,Hb-HSA偶联物和原血回输组大鼠存活率达100%,高于其他扩容剂换血实验组。大鼠60%换血,无基质血红蛋白及扩容剂HSA和乳酸盐换血后大鼠MAP仍然较低,Hb-HSA偶联产品基本能够维持MAP,类似于原血回输的对照,只有Hb-HSA偶联物换血和原血回输的大鼠100%存活。结论Hb-HSA偶联物为大鼠换血未引起血压升高,30%和60%换血后存活率均达100%,明显优于其他对照,体现出本偶联物对于紧急输血是一种具有优势的血液代用品。30%换血大鼠模型能够较好的体现出MAP因换血引起的波动,相对更适合于研究不同复苏液对血压的影响。     

白鹤方对人胃癌裸小鼠原位移植瘤微血管密度、MMP-9表达的影响

目的观察白鹤方对人胃癌BGC-823裸鼠原位移植瘤生长和转移的抑制作用,以及对移植瘤组织微血管密度(MVD)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 60只裸鼠建立人胃癌BGC-823原位移植瘤模型,随机分为白鹤方组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、白鹤方与5-FU联合治疗组和模型组,每组15只。白鹤方组给予白鹤方(0.2 g/ml) 0.5 ml灌胃,1次/d; 5-FU组予5-FU稀释液(6 mg/ml) 0.2 ml腹腔注射,1次/周;白鹤方与5-FU联合治疗组,予白鹤方(0.2 g/ml) 0.5 ml灌胃,1次/d,同时予5-FU稀释液(6 mg/ml) 0.2 ml腹腔注射,1次/周。模型组予0.9%NaCl溶液0.5 ml/d灌胃,1次/d。用药6周后结束实验,观察各组裸鼠原位移植瘤生长和转移情况,测瘤体质量,计算抑瘤率;电镜下观察移植瘤超微结构;免疫组化检测各组裸鼠移植瘤组织MVD和MMP-9表达情况。结果白鹤方组、5-FU组、白鹤方与5-FU联合治疗组移植瘤体质量明显低于模型组,抑瘤率分别为48.65%、47.64%和54.39%;电镜下观察发现,白鹤方组、5-FU组、白鹤方与5-FU联合治疗组胃癌细胞均出现凋亡表现;白鹤方组、白鹤方与5-FU联合治疗组移植瘤组织MVD和MMP-9表达低于5-FU组和模型组(P0.05)。结论白鹤方对人胃癌BGC-823裸鼠原位移植瘤生长和转移具有抑制作用,能降低移植瘤组织MVD,抑制微血管生成;可能是通过下调MMP-9表达而发挥作用。     

蜂房对H_(22)肝癌荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

目的:观察蜂房对小鼠移植性肝癌H22肿瘤生长的抑制作用。方法:建立H22肝癌移植瘤小鼠模型,随机分为盐水对照组、氟尿嘧啶组、蜂房高剂量组和蜂房低剂量组共4组。治疗期间记录各组小鼠的体重变化并观察小鼠生存状态,用药14天后取瘤称重,计算抑瘤率、肝/体比、肾/体比、脾脏指数以及用药前后的体重变化等指标。结果:蜂房可抑制小鼠体内肿瘤的生长,蜂房高、低剂量组的抑瘤率分别为31.96%、27.84%,与盐水对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。经治疗后蜂房各组小鼠体重与盐水对照组及治疗前比较变化不明显(P0.05),蜂房高、低剂量组与氟尿嘧啶组比较,肝/体比、脾脏指数差异有统计学意义(P0.01)。结论:蜂房能够抑制小鼠H22肝癌的生长,同时对小鼠重要器官可能具有一定的保护作用。     

补肾健脾方及其拆方对移植性原发性肝癌小鼠肿瘤生长的影响及差异研究

目的 探讨补肾健脾方及其拆方对移植性原发性肝癌小鼠肿瘤生长的影响及差异。     

YPSMA-1单克隆抗体修饰的树突状高分子前列腺癌靶向基因递送载体

 目的 通过聚乙二醇（PEG）将YPSMA-1单克隆抗体（mAb）和聚酰胺-胺（PAMAM）连接，合成新型的前列腺癌靶向基因载体PAMAM-PEG-mAb，提高基因的转染效率和前列腺癌细胞靶向性。方法 运用NMR法鉴定合成的PAMAM-PEG-mAb载体的结构，在前列腺癌细胞（PC3和LNCaP）上进行摄取实验和基因转染实验考察载体的生物学性质。结果 通过结构鉴定确定PAMAM-PEG-mAb合成成功。细胞摄取实验表明，PAMAM-PEG-mAb的细胞摄取效率呈浓度依赖性。载基因后体外实验表明，PAMAM经PEG修饰后转染效率和前列腺癌靶向性无明显变化，再经mAb修饰后LNCaP细胞显著增加，而PC3细胞反而有下降。结论 PAMAM-PEG-mAb载体是一种有潜力的前列腺癌靶向基因转运载体。