脱水淫羊藿素与金雀异黄酮对MCF-7、MDA-MB231细胞株增殖的影响研究

目的比较脱水淫羊藿素与金雀异黄酮对受体状态不同的人乳腺癌细胞株增殖的影响。方法运用MTT法研究不同浓度的脱水淫羊藿素与金雀异黄酮对MCF-7、MDAMB231细胞增殖的影响,并以雌激素受体阻断剂ICI182,780和雌激素受体激动剂DPN、PPT为工具药来评价脱水淫羊藿素和金雀异黄酮雌激素样作用与雌激素受体(ERs)的关系。结果脱水淫羊藿素和金雀异黄酮终浓度为10~(-13)~10~(-7)mol/L时,MCF-7细胞株增殖均随浓度升高而增加,呈一定的剂量相关性;而各受试药物任何浓度对MDA-MB231细胞株均无显著增殖效果。加入终浓度为10~(-8)mol/L的ICI182,780时,MCF-7细胞增殖作用被拮抗,MDA-MB231细胞增殖无明显变化。加入终浓度为10~(-8)mol/L的ERα受体通路激动剂PPT时,MCF-7细胞增殖率明显增高(P<0.05),MDA-MB231细胞增殖无明显变化。加入终浓度为10~(-8)mol/L的ERβ受体通路激动剂DPN时,MCF-7和MDA-MB231细胞增殖均无明显变化。结论脱水淫羊藿素与金雀异黄酮在一定剂量范围内均有雌激素样作用,两者作用相当,体外实验促进MCF-7细胞增殖作用可能主要是由ERα介导,而非ERβ介导。     

淫羊藿苷及其拟代谢物的雌激素样作用研究

目的:用雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)表达阳性细胞株人乳腺癌细胞MCF-7检测淫羊藿苷及其拟代谢物的雌激素样活性[1]及构效关系。方法:用MTT法,增殖细胞核抗原(Proliferating CellNuclear Antigen,PCNA)免疫组化法检测其对体外培养MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响;Real-timeRT-PCR法检测ERα、ERβ和PS2 mRNA表达水平变化。结果:淫羊藿素促进MCF-7增殖,而淫羊藿苷、淫羊藿次苷I和脱水淫羊藿素促增殖效应不明显;淫羊藿素10-9mol.L-1组PCNA阳性表达强于其它三组;淫羊藿素极显著增加ERα和PS2 mRNA的表达水平。所有受试物均不促进ERβmRNA表达。淫羊藿素促进ERα蛋白表达强于其它三组。结论:淫羊藿素有明显的雌激素样作用,而淫羊藿苷及其它两种受试物雌激素样作用不明显。四种受试物均不促进ERβmRNA表达。     

β-谷甾醇对T47D细胞雌激素受体表达及其下游基因PS2的影响

目的:观察β-谷甾醇对T47D细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)及下游基因PS2的影响,探讨其植物雌激素样作用机制。方法:以ER拮抗剂ICI182 780为工具药,应用实时荧光定量PCR技术检测ERα、ERβ及PS2mRNA表达变化,western-blot技术检测ERα、ERβ蛋白表达变化。结果:β-谷甾醇可诱导ERα、ERβ及PS2 mRNA表达,且上调ERβ更显著,对PS2 mRNA的诱导作用可以被ICI182 780抑制,能够上调ERα和ERβ蛋白表达,且可以被ICI182 780抑制。结论:β-谷甾醇可以通过ER途径调节下游靶基因的表达而发挥植物雌激素样作用。     

淫羊藿苷促成骨细胞分化成熟主要不依赖其雌激素活性

目的：利用人乳腺癌细胞MCF-7检测淫羊藿苷（icariin,I）与染料木黄酮（genistein,G）雌激素样活性的大小。方法：MCF-7细胞系采用无酚红DMEM培养基（含5%活性炭吸附处理血清CS-FBS）培养48 h后,利用CCK-8试剂盒检测不同浓度的I和G对体外培养MCF-7增殖的影响,筛选出最佳药物浓度;以最佳浓度的I和G处理细胞12,24,36,48 h后提取总RNA,Real-time RT-PCR检测I和G对MCF-7细胞雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、雌激素调节蛋白（PS2）、孕激素受体（PR）mRNA表达水平的影响;以最佳浓度的I和G处理MCF-7细胞48 h后,Western blot检测G和I对MCF-7细胞ERα,ERβ,PS2,PR蛋白表达量的影响。结果：I和G均能显著促进MCF-7的增殖,其中最佳的I和G作用浓度为10 μmol·L^-1,并且在该浓度下G促MCF-7增殖的能力明显高于I;I和G作用MCF-7 细胞24,36 h后,10 μmol·L^-1的 I和G均能显著促进ERα,ERβ,PS2,PR mRNA表达水平,其中G促进ERα,PS2,PR mRNA表达的能力明显强于I,对于ERβ mRNA的表达两者没有显著性差异;Western blo检测结果表明,10 μmol·L^-1的 I和G均能促进ERα,ERβ,PS2,PR 蛋白的表达,其中G促进ERα,PS2,PR蛋白表达的能力明显强于I,对于ERβ蛋白的表达两者没有显著性差异。结论：10 μmol·L^-1的G和I都具有较强的雌激素活性,但是该浓度下G的雌激素活性明显高于I,而本课题组前期研究表明,I在促进成骨细胞分化成熟及生物矿化的药理学活性明显强于G,因此I促成骨细胞分化成熟主要不是依赖其雌激素活性。     

胃癌不同中医证型雌激素与孕激素受体表达差异

目的 探讨胃癌不同中医证型雌激素受体(ER)α、β和孕激素受体(PR)蛋白与mRNA的表达差异.方法 60例胃癌患者术前按中医辨证分为6型(实证:肝胃不和、瘀毒内阻、痰湿凝结;虚证:脾胃虚寒、胃热伤阴、气血双亏),术后标本免疫组化EnVision法检测肿瘤组织ERα、ERβ、PR蛋白表达,Sybr green荧光定量PCR法检测ERα、ERβ、PR mRNA表达,观察不同证型表达差异.结果 ERα、ERβ阳性率分别为15%、48.33%,证型间差异无统计学意义(P＞0.05);PR阳性率26.67%,6种证型间差异存在统计学意义(P＝0.010 4).ERαmRNA、ERβmRNA、PR mRNA表达水平分别为1.910±2.461、1.559±1.452、5.592±7.896.ERαmRNA、ERβmRNA表达6种证型间差异有统计学意义(P＜0.05),PR mRNA差异未见统计学意义(P＞0.05).虚实证型比较,ERα、ERβ、PR蛋白表达和ERβmRNA表达差异未见统计学意义(P＞0.05),ERαmRNA、PR mRNA表达差异存在统计学意义(P＝0.001,P＝0.028).结论 胃癌证型ERα、ERβ与PR在蛋白与基因上存在部分表达差异,可能为胃癌证型差异的物质基础之一.     

杜仲雌激素样作用实验研究

目的用体外实验检测杜仲的雌激素样作用,并对其可能的作用机制进行探讨。方法采用MCF-7细胞增殖实验对杜仲进行雌激素样活性筛选,稳定转染ERα-ERE、ERβ-ERE荧光素酶报告基因的HEK293细胞荧光表达实验、蛋白质免疫印迹法探讨其作用机制。结果杜仲在0.5 ～1 mg/ml时可诱导MCF-7细胞增殖,1 mg/ml杜仲能显著促进ERE报告基因荧光素酶表达,差异有统计学意义(P 0.05、P 0.01 或P 0.001),1 mg/ml可上调雌激素受体ERα、ERβ的蛋白表达,0.5 ～1 mg/ml可上调雌激素膜受体GPR30的表达。结论杜仲具有雌激素样作用,其作用机制在于能与雌激素受体结合发挥作用。     

淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞作用的影响

目的:探讨淫羊藿素(ICT)对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞的作用.方法::以在37℃、5％ CO2培养箱培养的人乳腺癌MCF-7为研究对象,用不同浓度的淫羊藿素单独作用及与雌二醇联合作用,测定人乳腺癌MCF-7细胞的增殖率,并检测该过程中雌激素受体ERα的表达情况.结果:当ICT浓度大于1×10-10mol·L-1时单独使用能促进ERα阳性人乳腺癌MCF-7细胞增殖,能诱导ERα基因的表达;淫羊藿素与雌二醇联合作用抑制MCF-7细胞增殖,抑制ERα的表达.结论:淫羊藿素与雌二醇联合作用具有抑制E2诱导的人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用;淫羊藿素与雌二醇联合作用可抑制ERα基因的表达.     

薏苡仁水煎液雌激素样活性筛选研究

目的：对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选,探讨其作用机制。方法：首先通过小鼠子宫增重实验和人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖实验对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选;以质粒pERE-TAL-luc、pβgal-Control、pCXN2-hERα或pCXN2-hERβ共转染的HEK293细胞株为模型,采用以ERE调控的报告基因luc瞬时表达检测技术,评价薏苡仁水煎液雌激素样作用的信号通路。结果：薏苡仁水煎液可显著的诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加（P<0.01）,且在去雌激素的培养基中能够显著促进MCF-7细胞的增殖（P<0.01）; ERE调控的报告基因瞬时表达结果显示,分别由ERα和ERβ介导时,与正常组相比,薏苡仁水煎液的标准化荧光素酶活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：薏苡仁水煎液可诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加,在去雌激素的培养基中诱导MCF-7人乳腺癌细胞的增殖,首次发现薏苡仁具有雌激素样作用,且主要是通过ERβ介导发挥雌激素样作用。     

泡桐花提取物的雌激素活性筛选及其对OVA致过敏性哮喘小鼠的保护作用

目的:探讨泡桐花提取物雌激素活性及其对卵清白蛋白(OVA)致过敏性哮喘小鼠的保护作用。方法:体外采用MCF-7细胞模型筛选出泡桐花提取物具有雌激素样活性，采用雌激素受体拮抗剂(ICI182,780)、雌激素受体α拮抗剂(MPP)、雌激素受体β拮抗剂(THC)与雌激素膜受体GPR30拮抗剂(G15)干预雌激素活性有效剂量下的MCF-7细胞增殖，探讨其雌激素受体作用途径;采用小鼠子宫增重试验，计算性未成熟小鼠的子宫指数，以ELISA法检测血清雌二醇(E₂)、促卵泡生成素(FSH)与黄体生成素(LH)含量;采用Westren blot法测定小鼠子宫中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)和雌激素膜受体(GPR30)表达水平，进一步体内验证泡桐花提取物雌激素活性;OVA致过敏性哮喘小鼠模型，分为正常对照组、模型对照组、地塞米松0.5 mg/kg组、泡桐花提取物155、310、620 mg/kg组，每组8只，同时设置雌激素受体拮抗剂ICI182,780组，雾化激发前30 min共同作用小鼠，连续7 d，末次给药24 h后，小鼠脱颈处死，计算免疫器官脾脏和胸腺指数，E...     

赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响

目的：评价赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响。方法：采用富含雌激素受体的雌激素依赖性人乳腺癌细胞株MCF-7细胞，分别以E-SCREEN法观察赤豆提取物对其增殖的影响，以RT-PCR法、Western blot法观察赤豆对孕激素受体mRNA和蛋白表达的影响，并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价赤豆提取物发挥雌激素样作用的机制。结果：与溶剂对照组比较，赤豆（10～200 μg·mL^-1）能显著促进MCF-7细胞的增殖，100 μg·mL^-1时作用达到最大；赤豆提取物能明显诱导MCF-7细胞孕激素受体(PR)基因mRNA和蛋白的表达，以上作用均能被雌激素受体拮抗剂所完全拮抗。结论：赤豆提取物具有雌激素活性，此作用是通过雌激素受体(ER)介导的。     

宁心红杞胶囊对去势雌性大鼠的雌激素样作用

目的:研究宁心红杞胶囊对去势雌性大鼠的雌激素样作用机制。方法:采用去势雌性大鼠模型(OVX),以雌二醇(17β-estradiol,E2)作为阳性对照,给予宁心红杞胶囊2周后,测定其子宫系数、血清E2含量;以免疫组化法观察子宫上血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、水通道蛋白(aquaporin,AQP)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和原癌基因c-jun,c-fos的表达;以酵母双杂交法检测宁心红杞胶囊中是否含有与ERα或ERβ结合的成分。结果:宁心红杞胶囊与E2均能显著增加OVX大鼠子宫系数,提高血清E2水平,上调子宫上VEGF,AQP2和AQP5的表达;但与E2不同,未见宁心红杞胶囊有促进OVX大鼠子宫上ERα,PR,c-jun,c-fos表达的作用。酵母双杂交实验未检测到宁心红杞胶囊中含有与ERα或ERβ结合的成分。结论:宁心红杞胶囊具有雌激素样作用,能治疗围绝经期综合征,但作用机制不同于雌激素类物质,较少发生雌激素介导的子宫内膜癌的风险。     

补肾调冲方对去卵巢大鼠性激素水平及下丘脑雌激素受体α、雌激素受体β mRNA表达的影响

[目的]探讨补肾调冲方对去卵巢大鼠血清性激素水平及下丘脑雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)mRNA表达的影响。[方法]以假手术组为对照,将去卵巢大鼠随机分为去卵巢空白组,补肾调冲方高、中、低剂量组,已烯雌酚组。采用放射免疫分析法测定血清雌二醇(E2)、促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)水平,采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测下丘脑ERα、ERβmRNA表达。[结果]去卵巢大鼠血清FSH、LH水平升高,E2及下丘脑ERα、ERβmRNA水平降低,补肾调冲方大鼠血清E2有升高趋势,FSH有降低趋势,补肾调冲方能降低去卵巢大鼠血清LH水平,升高下丘脑ERα、βmRNA的表达。[结论]补肾调冲方在改善去卵巢大鼠性激素水平同时,可能通过影响ERα、ERβmRNA的表达,提高ER的生物效应,从而降低更年期综合征的发生。     

染料木黄酮联合阿那曲唑对绝经后大鼠乳腺癌生长的影响

目的利用7,12－二甲基苯蒽（DMBA）诱导大鼠绝经后乳腺癌模型,探讨染料木黄酮（Genistein）联合阿那曲唑（Anastrozole）对乳腺癌组织的抑制作用及机制。方法建立DMBA诱导的绝经后乳腺癌大鼠模型,随机分为对照组、染料木黄酮组、阿那曲唑组、染料木黄酮与阿那曲唑联合治疗组（简称联合治疗组）,观察各组肿瘤生长情况,测定肿瘤增殖指数、凋亡指数;ELISA法检测雌二醇（E2）及RT-PCR法检测17β－羟甾脱氢酶1（17β-HSD1）mRNA的水平。结果染料木黄酮和阿那曲唑单独治疗组肿瘤生长均受到抑制,联合治疗组的抑瘤效果更显著（P〈0.05）。与对照组比较,联合治疗组的E2和17β-HSD1 mRNA水平下降更明显（P〈0.05）。结论染料木黄酮可抑制绝经后大鼠中乳腺肿瘤的生长,与阿那曲唑联合应用显示出降低E2和17β-HSD1水平的协同作用,可有效抑制乳腺肿瘤生长。     

金雀异黄素对人乳腺癌细胞体外生长的抑制作用

目的:研究金雀异黄素(genistein)对人乳腺癌细胞系的体外生长作用及其作用机理。方法:选用人乳腺癌细胞系MCF-7(雌激素受体阳性细胞,ER+)和MDA-MB-231(雌激素受体阴性细胞,ER-)体外培养、MTT比色法、生长曲线和雌激素受体(ER)免疫组化染色等。结果:genistein能明显地抑制MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的体外增殖,而且在一定浓度范围内均呈剂量依赖性,IC50分别是32.5,46.8μmol·L^-1。同时能拮抗外源性雌激素对MCF-7细胞的生长刺激作用,而对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用与雌激素的存在与否无关。ER免疫组化染色结果表明,经过30μmol·L^-1 genistein处理的MCF-7细胞,细胞核内的阳性颗粒与对照组相比明显减弱(P<0.001)。结论:genistein能明显抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的体外生长,且呈剂量依赖性;genistein对MCF-7细胞的生长抑制作用是通过ER途径来介导的,而对MDA-MB-231细胞是通过非ER途径来介导的。     

黑大豆乙醇提取物的雌激素样作用及其机制研究

目的:评价黑大豆乙醇提取物(black soybean ethanol extract,BSE)的雌激素样作用及其作用机制。方法:采用富含雌激素受体的雌激素依赖性人乳腺癌细胞株MCF-7细胞,分别以E-SCREEN法观察BSE对其增殖的影响、以RT-PCR法观察BSE对其雌激素效应基因mRNA表达的影响,并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价BSE发挥雌激素样作用的机制。结果:与溶剂对照组相比较,BSE(10～200μg.mL^-1)能显著促进MCF-7细胞的增殖,100μg.mL^-1时作用达到最大;BSE能明显诱导MCF-7细胞pS₂,孕激素受体(PR)基因mRNA的表达,并与药物浓度有一定相关性;以上作用均能被雌激素受体拮抗剂所完全拮抗。结论:BSE能促进MCF-7细胞的增殖,诱导雌激素效应基因mRNA的表达,即BSE能通过雌激素受体发挥雌激素样作用。     

Estrogen-like activity and prevention effect of bone loss in calcium deficient ovariectomized rats by the extract of Pleurotus eryngii

In the course of a search for natural estrogen-like materials from mushrooms, the proliferating effects of the methanol extracts of 14 edible mushrooms on the estrogen-dependent growth of MCF-7 cells were examined. Of the extracts, that from the fruiting body of Pleurotus eryngii showed the strongest estrogen-like activity, specifically on the proliferating effects of MCF-7 cells. This proliferation effect of the extract from the fruiting body of P. eryngii is related to its estrogenic activity, because this proliferation activity was inhibited by the addition of the antiestrogenic compound ICI 182 780. The ethanol extract of the fruiting body of P. eryngii prevented ovariectomy-induced bone loss. The present data provide evidence that the ethanol extract of P. eryngii helps to protect against the bone loss caused by estrogen deficiency, without having a substantial effect on the uterus.