健脾软肝方对四氯化碳致肝纤维化大鼠α-SMA及其mRNA表达的影响

目的:明确健脾软肝方对肝纤维化大鼠α-SMA及其mRNA表达的影响,初步探讨健脾软肝方防治肝纤维化的作用机制,为肝纤维化的中医临床治疗提供实验依据。方法:选取Wistar雄性大鼠72只,随机分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊组、健脾软肝方高、中、低剂量组。模型组利用CCl4对大鼠进行腹腔注射,按0.2 m L/100 g腹腔注射30%CCl4与70%橄榄油混合溶液,正常组注射等量生理盐水,2次/周,4周后复制大鼠肝纤维化动物模型,该实验采用免疫组化ABC法检测肝纤维化大鼠α-SMA蛋白的表达水平,采用Real-time PCR法检测肝纤维化大鼠α-SMA mRNA的表达水平,采用H-E染色和Mallory染色观察大鼠肝纤维化的病变程度。结果:模型组α-SMA蛋白表达显著上升(P0.05);健脾软肝方高、中、低剂量组组与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05),其中高、中、低剂量组之间α-SMA蛋白阳性表达逐渐升高,可以呈一定的药物依赖关系。模型组α-SMA mRNA表达显著上升(P0.05);健脾软肝方高、中、低剂量组组与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05),且高、中、低剂量组之间α-SMA mRNA表达水平逐渐升高,呈一定的药物依赖关系。结论:健脾软肝方抗肝纤维化的作用机制可能与抑制大鼠肝脏内α-SMA及其mRNA的表达有关。     

加味桃核承气汤对四氯化碳肝纤维化大鼠治疗作用的实验研究

目的：观察加味桃核承气汤对四氯化碳肝纤维化大鼠的治疗作用。方法：用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型，随机分为6组，分别灌胃给药，疗程8周；检测血清ALT、AST水平；用苦味酸-天狼红胶原染色方法进行半定量肝纤维化计分（SSS）。结果：模型对照组血清ALT、AST水平及肝纤维化SSS计分显著高于正常对照组，经加味桃核承气汤治疗后血清ALT、AST水平及肝纤维化SSS计分显著下降。结论：加味桃核承气汤可使四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化程度显著减轻。     

复方黄芪颗粒对肝纤维化大鼠α-SMA蛋白表达的影响

肝纤维化为诸多慢性肝病发展至肝硬化过程中所共有的病理组织学改变，是影响慢性肝病预后的重要环节。近年来中医药，特别是复方抗肝纤维化的临床以及实验研究取得了另人瞩目的成果。复方黄芪颗粒是我科的科研制剂，由黄芪、丹参、制何首乌、虎杖等10味中药组成，具有健脾补肾、疏肝活血、清热利湿之功效，临床观察能有效地抑制乙；肝病毒复制，改善肝功能。     

肝乐颗粒对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的探讨肝乐颗粒对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法除正常组大鼠外,其余各组大鼠采用四氯化碳诱导肝纤维化模型。于造模第7周起,给药组分别灌胃给予相应的受试药物,疗程6周。实验结束后,采用分光光度法测定血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的含量;同时以免疫组化技术测定肝组织中α-SMA蛋白的表达,RT-PCR测定肝组织中α-SMAmRNA的表达。结果肝乐颗粒各剂量组能明显降低肝纤维化大鼠NO、NOS、iNOS的含量,抑制肝纤维化大鼠肝组织中α-SMA蛋白和α-SMAmRNA的表达。结论肝乐颗粒能有效抑制四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏中α-SMA的表达。     

膈下逐瘀汤对大鼠纤维化肝组织α-SMA和TGF-β1表达的影响

目的:观察膈下逐瘀汤抗猪血清诱导的大鼠肝纤维化作用及其可能的作用机制。方法:采用猪血清腹腔注射诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,VG染色法检测肝组织病理学改变,ELISA检测肝组织TGF-β1含量,定量RT-PCR检测肝组织TGF-β1和α-SMA mRNA表达。结果:与模型组大鼠比较,膈下逐瘀汤可显著降低猪血清诱导的肝纤维化程度,减少肝组织TGF-β1蛋白和mRNA表达,降低肝组织α-SMA mRNA表达。结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能与抑制肝星状细胞活化有关。     

加味鳖甲煎丸对四氯化碳所致肝纤维化大鼠肝组织的保护作用

目的：观察加味鳖甲煎丸对四氯化碳（CCl4）所致肝纤维化大鼠肝组织的保护作用。方法：由皮下注射40％CCl4溶液首次5mL／kg，以后每周2次，每次3mL／kg，连续注射6周，在病理检查证明造模大鼠肝组织出现肝纤维化后，分组给药，连续给药8周后处死大鼠，病理切片，HE和Masson染色，观察加味鳖甲煎丸对CCl4所致肝纤维化大鼠肝组织病变程度的影响，并对脂质空泡和胶原含量进行定量分析。结果：加味鳖甲煎丸大、中剂量组大鼠肝组织炎性细胞浸润程度、脂质空泡和胶原含量、肝假小叶形成的数量均较模型组大鼠明显减少，肝纤维化病变程度明显减轻。结论：加味鳖甲煎丸对CCl4所致肝纤维化大鼠肝组织有较好的保护作用，可明显减轻其病变程度。     

佛甲草对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响

目的:观察佛甲草提取液(SLT)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化形成的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱(Col,0.1mg/kg)、SLT低剂量组(SLT,4g/kg)、SLT高剂量组(8g/kg)。采用50%的CCl4花生油溶液灌服制备大鼠肝纤维化模型,期间灌服SLT(4,8g/kg)、Col(0.1mg/kg)进行干预,正常组和模型组灌服等体积生理盐水,连续9周。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性,透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、一氧化氮(NO)含量以及抗超氧阴离子自由基(O2.-)活力;取固定部位肝组织做病理组织学检查,光镜下观察肝细胞结构和肝纤维化程度。结果:SLT预防给药能明显降低CCl4诱导肝纤维化大鼠血清ALT、AST活性和HA、LN、PCⅢ、CⅣ含量,升高NO含量及增强抗O2.-活力;病理组织学检查结果显示SLT组肝细胞结构明显改善,肝纤维化程度减轻。结论:SLT预防给药可抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化形成。     

四逆散加味抗大鼠肝纤维化作用机制

目的:探讨四逆散加味对肝纤维化的防治作用机制.方法:80只Wister大鼠随机分为8组:正常对照组、病理模型组、四逆散组、四逆散加味高、中、低剂量组、四逆散预防组.除正常对照组外,其余各组均采用猪血清ip诱发肝纤维化,0.5 mL/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成肝纤维化.预防组于造模同时给药(以四逆散加味7 g·kg-1),各治疗组于造模第6周给药,连续4周.四逆散组4 g·kg-1,四逆散加味高、中、低剂量组(14,7,3.5 g·kg-1).采用酸性水解法检测肝组织羟脯氨酸(HYP)含量;放射免疫法(RIA)检测肝组织白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;原位杂交、免疫组化法分别检测肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA与蛋白表达.结果:与模型组比较,四逆散加味中剂量组大鼠肝组织羟脯氨酸( 478.32±42.35)vs(327.09±39.41)μg·L-1,P＜0.01;IL-1(0.58±0.89) vs(0.35±0.47) μg· L-1(P＜0.05);TNF-α (4.82±0.49) vs (4.21±0.45)μg·L-1(P＜ 0.05),含量均显著降低,TGF-β1mRNA(9.92±2.57)vs(5.27±1.39),(P＜0.01)和α-SMA mRNA(12.87±0.39)vs(6.33±0.72),(P＜0.01)及其蛋白表达显著减弱(均P＜0.01).结论:四逆散加味有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制TGF-β11和α-SMA基因表达有关.     

补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织病理学以及α-SMA蛋白表达的影响

目的观察补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织病理学的影响。方法 SD大鼠随机分为空白对照组8只、模型组15只、秋水仙碱组15只、补肾柔肝方组15只。均以标准鼠食饲养,自由饮水,除空白对照组外,其余各组大鼠采用CCl4造模8周制备肝纤维化模型。从第9周开始,秋水仙碱组、补肾柔肝方组灌胃相应药物,空白对照组、模型组灌胃等体积生理盐水,均连续灌胃8周。末次给药后2 h,取肝组织进行HE、天狼猩红染色,评价肝细胞变性与胶原纤维增生程度。分别采用RT-PCR法和蛋白印迹法检测肝组织α-SMA表达情况。结果补肾柔肝方组大鼠肝脏的纤维化程度明显低于模型组;与空白对照组相比,模型组大鼠的α-SMA蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组相比,秋水仙碱组及补肾柔肝方组α-SMA蛋白表达水平有所降低(P均0.05)。结论补肾柔肝方能够降低大鼠肝脏内α-SMA蛋白的表达水平,具有明确的抗肝纤维化作用。     

加味桃核承气汤对糖尿病大鼠脂质代谢的影响

本研究通过加味桃核承气汤对糖尿病大鼠降搪、降脂作用的观察,发现本方具有纠正脂质代谢紊乱,预防动脉粥样硬化的作用。降脂机理是由于糖尿病病情的控制和糖尿病的“血瘀”证的改善,脂质在胃肠道转运加快所致。     

针刺对四氯化碳致肝纤维化大鼠血小板衍生生长因子信号通路的影响

目的:观察针刺对肝纤维化模型大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)信号通路蛋白和mRNA表达的影响,探讨针刺抗肝纤维化的可能机制。方法:将46只SD大鼠分为空白组10只,模型组、非穴组、针刺组,每组12只。采用50%四氯化碳(CCl4)和橄榄油腹腔注射复制肝纤维化模型。针刺"太冲"期门"肝俞",电针"足三里"。采用Western blot和Real-time PCR方法检测各组大鼠PDGF信号通路蛋白及其mRNA表达。结果:与空白组相比较,模型组大鼠血清PDGF含量及肝脏PDGF信号通路相关蛋白、mRNA表达明显升高(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,针刺组则能够抑制PDGF-βR及其下游细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白与mRNA的表达(P<0.01,P<0.05);而针刺对Jun细胞核激酶(JNK)、P 38蛋白的表达无明显调节作用(P>0.05)。非穴组与模型组相比,各指标蛋白与mRNA的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺通过抑制CCl4致肝纤维化大鼠的PDGF信号通路,减少胶原沉积,促进细胞外基质的降解,从而起到治疗肝纤维化的作用。     

大黄素对肝纤维化大鼠肝脏组织Sm ad3表达的影响

目的:观察大黄素对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏组织Smad3 mRNA和蛋白表达的影响。方法:50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(10只)、CCl4组(20只)和大黄素+CCl4组(20只),共3组。CCl4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,同时大黄素灌胃干预,12周后处死大鼠。采用VG胶原染色法检测大鼠肝脏组织病理学改变,免疫组织化学法检测肝脏组织Smad3蛋白表达,实时定量RT-PCR检测肝脏组织Smad3 mRNA表达。结果:与CCl4组比较,大黄素可显著降低CCl4诱导的肝纤维化程度(P<0.05),减少肝脏组织Smad3蛋白和mRNA表达(P<0.05)。结论:大黄素可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能通过下调Smad3 mRNA和蛋白表达有关。     

Effects of armepavine against hepatic fibrosis induced by thioacetamide in rats

The aim of this study was to investigate if armepavine (Arm, C₁₉H₂₃O₃N) could exert inhibitory effects against hepatic fibrosis in rats. A cell line of rat hepatic stellate cells (HSC‐T6) was stimulated with tumour necrosis factor‐α (TNF‐α) to evaluate the inhibitory effects of Arm. Rats were injected with thioacetamide (TAA; 300 mg/kg, intraperitoneally) thrice a week for 4 weeks to induce hepatic fibrosis, with Arm (3 or 10 mg/kg) given by gavage twice a day. Liver sections were taken for western blotting, fibrosis scoring and immunofluorescence staining. Arm (1–10 µm ) concentration‐dependently attenuated TNF‐α‐stimulated: (i) protein expressions of α‐smooth muscle actin (α‐SMA), collagen type I and angiopoietin‐1; (ii) H₂O₂ production; and (iii) NF‐κB, JunD and C/EBPß (cytidine‐cytidine‐adenosine‐adenosine‐thymidine (CCAAT)/enhancer binding protein‐ß (EBPß)) nuclear translocations in HSC‐T6 cells. In vivo Arm treatment significantly reduced plasma aspartate transaminase and alanine transaminase levels, hepatic α‐SMA expression and collagen contents, and fibrosis scores of TAA‐injected rats. Moreover, Arm treatment decreased α‐SMA‐ and NF‐κB‐positive cells in immunohistochemical staining, and mRNA expression levels of IL‐6, TGF‐ß1, TIMP‐1, col1α2, iNOS and ICAM‐1 genes, but up‐regulated the metallothionein gene in the livers of TAA‐injected rats. Our results indicated that Arm exerted both in vitro and in vivo antifibrotic effects in rats, with inhibition of NF‐κB, JunD and C/EBPß pathways. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

Therapeutic effect of gypenoside on chronic liver injury and fibrosis induced by CCl4 in rats

Gypenoside is a saponins extract derived from the Gynostemma pentaphyllum. The purpose of this study was to evaluate the hepatoprotective and antifibrotic potential of Gypenoside on chronic liver injury induced by CCl4 for 8 wks. The results indicated that the increase of SGOT, SGPT activities in CCl4 liver injury were significantly reduced by treatment with Gypenoside. It also elevated the A/G ratio. For the study of anti-fibrotic potential, Gypenoside reduced the collagen content by 33%. These phenomena were confirmed by pathologic observation; thinner bands of liver collagen were found. The results suggest that Gypenoside has hepatoprotective and anti-fibrotic activities.     

疏肝健脾方对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠尿液代谢组学的影响

目的观察疏肝健脾方(茵陈、柴胡、黄芪、白芍、枳壳、白术、猪苓、茯苓、泽兰)对肝纤维化大鼠尿液代谢谱的影响并推测其作用机制。方法皮下注射50%CCl4橄榄油溶液诱导肝纤维化的SD大鼠随机分为模型组和疏肝健脾方组,并设正常组,连续给药12周后,收集大鼠尿液,用GC-TOF/MS技术结合主成分分析、偏最小二乘方-判别模式、正交偏最小二乘方-判别模式法鉴定其代谢谱化合物变化。结果模型组中的2-羟基丁酸、异亮氨酸、beta-丙氨酸、氨基丙二酸、胞嘧啶、赖氨酸与正常组相比含有量显著升高,疏肝健脾方能够使6个生物标志物向正常水平靠近。结论疏肝健脾方对化学性肝纤维化大鼠有一定的保护作用,其机制可能与调节能量代谢、嘧啶合成代谢、氨基酸代谢有关。     

通腑泄浊汤对肾间质纤维化大鼠α-SMA、LN、ColⅢ表达的影响

目的:研究通腑泄浊汤(黄芪、大黄、石菖蒲、牵牛子、附子、人参、白术、丹参、王不留行、橘皮)对肾间质纤维化大鼠α-SMA、LN、ColⅢ表达的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)诱导大鼠肾间质纤维化的动物模型,以依那普利为阳性对照,将大鼠随机分为假手术组,模型组,依那普利组,通腑泄浊汤高剂量组,中剂量组,低剂量组。术后第12天处死大鼠,收集血清测定肌酐、尿素氮水平、免疫组化半定量检测各组大鼠肾间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、层连接蛋白(LN)的表达。肾组织用HE、VG染色评定肾小管间质损伤及胶原沉积程度。结果:模型组α-SMA、LN、ColⅢ表达、BUN、Scr及肾小管间质损伤指数、胶原沉积程度高于假手术组(P<0.01),通腑泄浊汤与依那普利组比较α-SMA、LN、ColⅢ、BUN、Scr的表达均明显降低(P<0.05),肾小管间质损伤指数及胶原纤维沉积减轻。结论:通腑泄浊汤可能是通过下调α-SMA、LN、ColⅢ的表达而减轻肾间质纤维化。     

漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠SOD,MDA及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的观察漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法50只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、给药组和秋水仙碱组,并以灌胃的方式给药,比色分析法测血清SOD活性和MDA含量,同步。观察漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠肝病理组织学的影响。结果漏芦给药组肝纤维化指标SOD活性明显高于模型组(P<0.05),血清MDA含量较模型组明显降低;α-SMA表达明显低于模型组。结论漏芦提取物对四氯化碳致肝纤维化大鼠有一定的保护作用。     

软肝和脾丸对肝纤维化模型大鼠的影响

目的:探讨软肝和脾丸对肝纤维化的治疗作用。方法:用四氯化碳建立大鼠肝纤维化模型,给予软肝和脾丸混悬液治疗8周。测定血清和肝脏匀浆丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的表达,VG染色检测肝脏组织中胶原纤维的表达,免疫组化检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)和血小板源性生长因子(PDGF)的表达。结果:软肝和脾丸能减轻肝纤维化的组织病理改变,降低肝纤维化大鼠肝组织胶原纤维的表达。软肝和脾丸可显著抑制MDA、NO、NOS、TGF-β1和PDGF的表达(P<0.01)。结论:软肝和脾丸对肝纤维化有治疗作用,其作用机制可能与影响MDA、NO、NOS、TGF-β1和PDGF的表达水平相关。     

贝母辛抗大鼠肝纤维化的作用研究

目的 观察贝母辛对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化的保护作用.方法 实验设对照组,模型组,贝母辛低、中、高剂量(2.5、5、10 mg/kg)组.除对照组外,其他组大鼠每隔3天ip给予CCl4 1次,连续8周,贝母辛各组于造模第4周开始给药,每天1次,给药至造模结束后4周.通过观察肝纤维化大鼠肝组织病理学变化,血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰氨基转移酶(GGT)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)水平,以及肝组织中羟脯氨酸(Hyp)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)量的变化,考察贝母辛对肝纤维化大鼠的影响.结果 与模型组相比,贝母辛组肝纤维化大鼠肝病理组织学改变得到明显改善,血清中ALT、AST、ALP、GGT、HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C水平显著降低(P＜0.05、0.01);肝组织中Hyp、MDA的量显著减少(P＜0.01),SOD的量增加(P＜0.01).结论 贝母辛对CCl4致大鼠肝纤维有较好的保护作用,其机制可能与抑制肝内胶原合成、降低自由基生成、减轻脂质过氧化有关.