环氧橙皮油素对平滑肌肌球蛋白功能及肠平滑肌收缩性的影响

目的:探讨环氧橙皮油素对平滑肌肌球蛋白功能及肠平滑肌收缩性的影响.方法:在纯化的蛋白体系中进行平滑肌肌球蛋白Ca2+依赖性磷酸化反应,采用甘油聚丙烯酰胺凝胶电泳测定肌球蛋白轻链磷酸化程度,孔雀绿法测定肌球蛋白Mg2+-ATPase活性.以平滑肌肌球蛋白Mg2+-ATPase活性、肌球蛋白磷酸化以及在克氏液中孵育的肠平滑肌收缩振幅为指标,考察环氧橙皮油素对平滑肌肌球蛋白Mg2+-ATPase活性和肌球蛋白磷酸化程度的调节作用,以及环氧橙皮油素对大鼠离体小肠平滑肌收缩性的影响.结果:在肌球蛋白轻链的Ca2+依赖性磷酸化反应中,在40～320 μmol·L-1浓度内环氧橙皮油素能抑制磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATPase活性及其轻链磷酸化程度(P＜0.01),这种抑制作用与1-(5-氯-1-萘-磺酰)-六氢-1,4-二氮杂卓(ML-9)具有协同作用;40 - 320μmol·L-1浓度内环氧橙皮油素可剂量依赖性抑制大鼠离体小肠平滑肌收缩,且可拮抗新斯的明、乙酰胆碱引起的促进收缩作用,相加阿托品引起的抑制收缩作用(P＜0.01).结论:环氧橙皮油素可通过抑制平滑肌肌球蛋白的功能,抑制胃肠平滑肌的收缩性.     

枳实中活性单体环氧橙皮油素抗溃疡性结肠炎的作用

目的:观察环氧橙皮油素对溃疡性结肠炎小鼠治疗作用。方法:BALB/C小鼠分为6组,分别为环氧橙皮油素低、中、高剂量组(80,160,320μmol·L-1),正常组,柳氮磺砒啶肠溶片组(520 mg·kg-1)和葡聚糖硫酸钠(DSS)模型组。除模型组外均按0.01 m L·g-1体重剂量ig给药,正常组给予等体积的生理盐水。除正常组外各给药组在给药同时自由饮用4%DSS水溶液,连续造模10 d。观察各组药物对BALB/C小鼠疾病活动指数的影响;采用结肠损伤评分法,观察各组药物对病变肠组织的影响;ELISA法测结肠组织细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-10(IL-10)含量;Western blot法测定环氧橙皮油素对受损结肠平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达水平影响。结果:与模型组比较,环氧橙皮油素中、高剂量组疾病活动指数明显降低(P0.05),结肠损伤指数明显降低(P0.05),环氧橙皮油素各剂量组结肠组织TNF-α含量逐渐降低,其中高剂量组与模型组有显著差异(P0.05),环氧橙皮油素各剂量组结肠组织IL-10含量逐渐升高,其中中、高剂量组与模型组均有显著差异(P0.05),环氧橙皮油素各剂量组均能使受损结肠平滑肌细胞肌球蛋白轻链激酶表达量降低,中、高剂量组与模型组有显著性差异(P0.05)。结论:环氧橙皮油素通过不同作用机制对溃疡性结肠炎起到治疗作用。     

五味子甲素对大鼠及小鼠肠平滑肌功能的抑制作用

目的:考察五味子甲素对大鼠及小鼠小肠平滑肌功能的调节作用,为揭示五味子"收敛固涩"功效的机制及物质基础提供药理学依据。方法:取昆明种小鼠50只,按均衡随机分组法分为5组,分别为正常组,五味子甲素高、中、低剂量组(20,40,80 mg·kg-1),莨菪阳性组(20 mg·kg-1);另取昆明种小鼠60只,按均衡随机分组法分为6组,分别为正常组,模型组(ip,新斯的明),五味子甲素高、中、低剂量组(80,40,20 mg·kg-1),莨菪阳性组(20 mg·kg-1),ig给予相应药物,正常组及模型组给予等体积蒸馏水,每日1次,连续5 d,分别用炭末推进法分别观察五味子甲素对正常小鼠和新斯的明肠功能亢进模型小鼠肠推进的影响。以孵育在克氏液中大鼠离体小肠为模型,观察五味子甲素对大鼠离体肠平滑肌收缩性的影响。取SD大鼠30只,随机分为正常组,五味子甲素高、中、低剂量组(80,40,20 mg·kg-1),除正常组外,其余各组用番泻叶制备大鼠腹泻模型,造模成功后ig给予相应药物,每日1次,连续7 d,观察五味子甲素对腹泻模型大鼠肠平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响。结果:与正常组和新斯的明模型组比较,五味子甲素高、中剂量组均能显著降低正常小鼠和新斯的明肠功能亢进小鼠的小肠炭末推进率(P0.05,P0.01)。五味子甲素在10~80μmol·L-1可显著抑制大鼠离体小肠平滑肌的收缩;与番泻叶模型组比较,五味子甲素高、中、低剂量组均能显著抑制腹泻模型大鼠小肠MLCK蛋白的表达(P0.01)。结论:五味子甲素可显著抑制小鼠在体和大鼠离体小肠运动,该作用可能与其抑制小肠收缩运动相关的肠平滑肌肌球蛋白轻链激酶表达相关。     

肌球蛋白轻链在血管平滑肌舒缩中的机制研究进展

血管舒缩在人体局部生理活动中有重要的意义,对于局部血压的形成和控制起着重要的作用,并可影响组织的血供。肌球蛋白是血管平滑肌（vascular smooth muscle,VSM）的一种收缩蛋白,其轻链的磷酸化与去磷酸化是血管舒缩调控的终末路径,也是血管舒缩调节机制中信号转导的重要介质。     

风湿性心脏病心肌肌球蛋白轻链的变化及其对心功能的影响

国产降纤酶是在国内近20年广泛应用蛇毒制荆治疗缺血性脑卒中获得较满意临床疗效的基础上，按国家卫生部部颁标准提取的高纯度、单组分的蛇毒制剂。我们使用沈阳药科大学制药厂生产的注射用降纤酶对230例已确诊为高血压、高血脂以及脑卒中患者进行降低血凝四项中纤维蛋白原、血浆D—D二聚体二种指标的观察，由此达到预防治疗脑血管病的目的，取得了临床较好的疗效，特报告如下。     

柚皮素和橙皮素对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基的影响

目的:研究柚皮素和橙皮素对重组人肌醇磷脂3-激酶(PI3-K)p110β催化亚基酶活性的影响。方法:通过基因工程技术的方法获得PI3-Kp110β催化亚基。用PtdIns(4,5)P2,[γ-32P]ATP与重组PI3-Kp110β催化亚基一起保温的方法测定PI3-K的活性;32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提,加闪烁液于液闪计数仪计数。结果:柚皮素对重组人PI3-Kp110β催化亚基有抑制作用,IC50为10.57μmol/L;但橙皮素对重组人PI3-K没有抑制作用。结论:柚皮素是PI3-K的抑制剂。重组人PI3-Kp110β催化亚基可作为一种较为简便地筛选和开发有效的PI3-K抑制剂的分子靶点。     

针刺对胃肠平滑肌收缩粗肌丝调节机制的影响

目的观察针刺对胃肠平滑肌收缩粗肌丝调节机制的影响,并分析此影响与针刺调整胃肠动力的关系。方法将30~SD大鼠随机分为空白组、模型组（行结肠吻合术）和针刺组,每组10只。针刺组予每日针刺双侧足三针（足三里、三阴交、太冲）,连续3d。观察各组大鼠小肠推进率、核扫描胃液相排空实验,取结肠组织检测钙凋蛋白mRNA表达、肌球蛋白轻链激酶表达、平滑肌肌动蛋白表达的变化。结果针刺组小肠推进率、胃半排时间和排空率较模型组有所改善（P〈0．01,P〈0．05）。各组钙调蛋白mRNA表达未见显著性差异。结肠平滑肌肌球蛋白轻链激酶表达和平滑肌肌动蛋白表达空白组最高,模型组明显下降,而针刺组较模型组有所上升（P〈0．05）。结论针刺促进术后胃肠动力的恢复可能与提高平滑肌收缩粗肌丝调节机制中的平滑肌肌球蛋白轻链激酶表达和平滑肌肌动蛋白表达有关,与钙调蛋白mRNA表达无关。     

风池穴对偏头痛模型大鼠脑膜中动脉肌浆球蛋白轻链激酶表达的影响

目的：研究探讨针刺风池穴对偏头痛模型大鼠脑膜中动脉肌球蛋白轻链激酶（ myosin light chain kinase,MLCK）表达的影响。方法：通过电刺激诱发法复制偏头痛动物模型,观察肌浆球蛋白轻链激酶的结构蛋白表达。结果：成功建立偏头痛大鼠模型,经统计分析,空白对照组MLCK表达比正常对照组明显减少（P＜0．01）,针刺风池组与风池预防组比较,无明显差异（P＞0．05）,但针刺风池组与空白对照组比较,风池预防组与空白对照组,均有显著差异（ P＜0．05）。结论：偏头痛急性发作可能与降钙素基因相关肽（Calcitonin Gene Related Pepitde,CGRP）信号系统中的MLCK表达减少有关,针刺风池穴对脑膜中动脉MLCK的表达有干预增多作用,对偏头痛急性发作有预防和治疗作用。     

槲皮素对平滑肌收缩性及肌球蛋白Mg~（2＋）-ATPase活性的影响

目的：研究槲皮素对平滑肌收缩性及肌球蛋白Mg2＋-ATPase活性的影响。方法：以大鼠离体小肠及胃平滑肌条为研究模型,首先考察槲皮素在高钙、低钙及正常克氏液环境中对平滑肌条收缩性的影响。然后在正常克氏液中分别观察槲皮素对新斯的明、乙酰胆碱及阿托品存在下平滑肌收缩性的影响。用孔雀绿法测定槲皮素对肌球蛋白Mg2＋-ATPase活性的影响。结果：在高钙、正常钙及低钙不同条件下,槲皮素在4～64μmol/L范围内均剂量依赖性抑制小肠、胃平滑肌收缩;槲皮素（32μmol/L）拮抗新斯的明、乙酰胆碱引起的收缩作用（P〈0.01）,且相加性协同阿托品引起的抑制收缩作用（P〈0.01）;槲皮素（25μmol/L）对不同磷酸化程度的肌球蛋白的Mg2＋-ATPase活性均具有抑制作用（P〈0.01）。结论：槲皮素对胃、肠平滑肌收缩性及平滑肌肌球蛋白的Mg2＋-ATPase活性具有明显抑制作用。     

橙皮苷及橙皮素清除自由基活性的研究

目的:比较橙皮苷和橙皮素的抗氧化活性.方法:UV-Vis光谱测定橙皮苷和橙皮素对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的清除作用.结果:橙皮苷和橙皮素对两种自由基都有较好的清除作用,清除效果随浓度的增大而增大.橙皮素清除DPPH·的能力明显强于橙皮苷,橙皮素清除·OH的能力略强于橙皮苷.结论:橙皮素比橙皮苷的体外抗氧化活性强.     

茶多酚对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨茶多酚对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,应用不同剂量的茶多酚作用 2 4 h后 ,采用 MTS/ PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,茶多酚对血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P<0 .0 0 1)。流式细胞术检测结果表明 ,茶多酚可以使血管平滑肌细胞大部分处于 G0 / G1 期 ,与对照组相比有明显差异 (P<0 .0 5 ) ,并且可以诱导其凋亡。结论　茶多酚可明显抑制离体大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

Effects of Thymus species extracts on rat duodenum isolated smooth muscle contraction

The diethylether, ethylacetate and butanolic extracts from Thymus webbianus and Thymus leptophyllus were tested for spasmolytic activity. Pre-incubation of the isolated rat duodenum with these extracts for 10 min produced a concentration-dependent inhibition of acetylcholine-induced contractions. This effect was at least ten times greater with the apolar extracts than with the polar extracts.     

胃肠舒对胃肠平滑肌细胞内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的:探讨胃肠舒促胃肠动力作用机制。方法:原代培养胃肠平滑肌细胞,分胃肠舒大、中、小剂量组,西沙必利组和正常对照组,各组用相应受试药物干扰胃肠平滑肌细胞24h。提取细胞总RNA,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法,半定量分析eNOS mRNA表达水平。结果:胃肠舒大、中剂量组与正常对照组比较,胃肠平滑肌细胞,eNOS mRNA表达水平显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:胃肠舒促胃肠动力的作用机制可能是通过抑制胃肠平滑肌细胞eNOS mRNA表达而抑制细胞内NO生成,进而抑制相关酶的活化,拮抗cGMP生成,使胞内Ca2+增多,Ca2+信号系统引发一系列生理功能而促进胃肠平滑肌收缩。     

远志皂苷H对离体平滑肌与心脏的作用

 目的:研究一种新的远志皂苷H对平滑肌和心肌的药理作用及其机制。方法:制备离体兔回肠,胸主动脉条,Langen-dorf心脏,豚鼠气管条和动情期未孕大鼠子宫标本,记录给药3min后的张力变化。结果:H对上述4种平滑肌均具兴奋作用,19和76μmol·L^-1分别使其张力提高64%和167%,30%和118%,20%和50%,以及100%和180%;对心脏则呈依剂量的抑制作用,19,38和76μmol·L^-1分别使心肌收缩力降低20%,23%和34%,使心率减少17%,20%和35%,但不影响冠脉流量。H对子宫的兴奋作用不受苯海拉明影响,但可被吲哚美辛部分抑制。结论:H对平滑肌具兴奋作用,对心肌具抑制作用,其中对子宫的作用可能部分地与前列腺素合成酶有关。     

淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞GRP78表达的影响

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对同型半胱氨酸(HCY)诱导的增殖血管平滑肌细胞(VSMC)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达的影响,探讨ICA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48 h后,用流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达;目的基因克隆、鉴定并测序.结果:0.2,0.4 mg·L~(-1)的IcA可显著促进兔VSMC凋亡,且存在剂量依赖性,与半胱氨酸组相比,差异显著(P＜0.01);RT-PCR结果显示:0.2,0.4 mg·L~(-1)的淫羊藿苷作用于VSMC 48 h后,GRP78 mRNA表达水平显著升高,与半胱氨酸组相比差异显著(P＜0.05);测序结果表明,来源于VSMC的全长648 bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白78基因高度同源.结论:ICA促进GRP78 mRNA表达,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

一氧化氮对培养的兔动脉平滑肌细胞c-fos及c-jun基因表达的影响

目的：研究一氧化氮对动脉平滑肌细胞ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达的影响及其机制。方法：①用贴块法培养兔动脉平滑肌细胞。②细胞计数判定一氧化氮,ＦｅＳＯ４,亚甲蓝有无细胞毒作用。③用异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ。④用地高辛标记检测试剂盒进行ＲＮＡＤＮＡ斑点杂交。结果：在没有细胞毒作用的前提下,一氧化氮明显抑制兔动脉平滑肌细胞的ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达,而ＦｅＳＯ４和亚甲蓝均对抗这种作用。结论：一氧化氮通过ｃＧＭＰ途径抑制动脉平滑肌细胞ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达,很可能是它抑制动脉平滑肌细胞增殖的重要机制之一。     

Effects of crinum glaucum aqueous extract on intestinal smooth muscle activity

Crinum glaucum aqueous extract (1–8 mg/mL) produced a concentration dependent, non-competitive inhibition of contractions induced by acetylcholine (1.1 × 10⁻⁸–3.3 × 10⁻⁷M ) and calcium chloride (CaCl₂, 0.05–2 mM ) on the rat duodenum. Contractions of the guinea-pig ileum induced by acetylcholine (1.1 × 10⁻⁸–3.3 × 10⁻⁷M ) and histamine (1.1 × 10⁻⁸–3.3 × 10⁻⁷M ) were inhibited by the extract (1–4 mg/mL). The extract (0.125–2.0 mg/mL) also, produced a concentration dependent relaxation of the guinea-pig taenia coli, precontracted with potassium chloride (40 mM ). It is concluded that the extract is a non-specific relaxant of the gastrointestinal smooth muscles used. © 1998 John Wiley & Sons, Ltd.     

Effects of Panax notoginseng saponins on proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cells

Aim of the study

Atherosclerosis is a common cardiovascular disease, and linked with the development of many cardiovascular complications, such as myocardial ischemia and stroke. Although pathogenesis of atherosclerosis is not completely elucidated, increasing evidence has demonstrated that abnormal proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) plays an important role in formation of atherosclerosis. Previous studies showed that saponins from Panax notoginseng (PNS) possess anti-atherosclerotic properties. However, the mechanism of PNS against atherosclerosis is not well understood. Therefore, the present study observed the effects of PNS on proliferation and apoptosis of VSMCs.

Materials and methods

Rat VSMCs were cultured, and platelet-derived growth factor (PDGF) was used to stimulate cell proliferation. The viability of VSMCs was assessed with the MTT method. VSMCs apoptosis was detected by flow cytometry. Expressions of apoptosis related protein p53, Bax, caspase-3 and Bcl-2 were determined using Western blot.

Results

Pretreatment of the cells with PNS (200, 400, 800 μg/mL) significantly inhibited proliferation of PDGF-stimulated VSMCs, and induced apoptosis of the proliferated VSMCs in a concentration-dependent way. Western blot analysis showed that PNS upregulated expressions of pro-apoptotic protein p53, Bax and caspase-3, downregulated expression of anti-apoptotic protein Bcl-2, and enlarged Bax/Bcl-2 ratio in the proliferated VSMCs induced by PDGF.

Conclusions

This study demonstrates that PNS both inhibits VSMCs proliferation and induces VSMCs apoptosis through upregulating p53, Bax, caspase-3 expressions and downregulating Bcl-2 expression, which constitute the pharmacological basis of its anti-atherosclerotic action.     

川芎嗪对视网膜缺血电生理及视网膜小动脉平滑肌细胞cAMP表达的影响

目的探讨川芎嗪对正常兔眼视网膜急性缺血模型视网膜电图（ERG）最大反应、振荡电位（OPs）的影响及对兔视网膜小动脉平滑肌细胞环腺苷酸（cAMP）表达的影响。方法新西兰大白兔20只,随机分为川芎嗪组和模型组,每组10只,均予结扎右眼视神经lh制作兔视网膜急性缺血模型．造模前记录右眼ERG最大反应和OPs。川芎嗪组于视网膜缺血造模后0h、24h、48h及72h给予耳缘静脉注射川芎嗪注射液,复查ERG指标,模型组同期进行ERG检查,不予其他处理。视网膜缺血造模后72h处死动物,取右眼,免疫荧光技术观察cAMP在视网膜小动脉平滑肌细胞上的表达情况。结果视网膜缺血造模后24～72h,2组实验兔的最大反应振幅同期比较无明显差异（P〉0．05）,川芎嗪组OPs振幅在缺血造模后24h、72h时明显高于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）。川芎嗪组缺血造模后72h时血管平滑肌细胞的cAMP表达强于模型组。结论川芎嗪对缺血视网膜的Ops振幅有改善作用,可能与促进视网膜小动脉平滑肌细胞cAMP表达,改善视网膜血循环有关。