N′-取代-4-{3-(喹啉-6-基)脲基}苯甲酰肼衍生物的合成及活性研究

目的 设计合成N′-取代-4-{3-(喹啉-6-基)脲基}苯甲酰肼衍生物,并对其抗乳腺癌活性进行研究。方法 6-氨基喹啉为起始原料,通过3步反应合成了一系列目标化合物4a～4p,并通过¹H NMR、¹³C NMR和HRMS对所有目标化合物进行了结构确证。采用MTT法检测了合成化合物对于乳腺癌细胞的抑制作用。结果 表明目标化合物对于乳腺癌细胞的生长具有一定的抑制活性,其中化合物4e活性最优,表现出明显的抑制作用,抑制乳腺癌细胞系MCF-7的IC₅₀为(2.30±0.34)μmol·L^-1,且4e对正常乳腺上皮细胞的毒性较小(IC₅₀>100μmol·L^-1),优于阳性药Cisplatin。此外4e能够明显上调孤儿核受体Nur77的蛋白表达水平,并且能够使MCF-7出现S期阻滞。结论 该系列化合物具有较好的抗乳腺癌的活性,有进一步研究的价值。     

鹿仙散结汤调控LRH-1/MMP-2通路抑制人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭及迁移

目的：研究鹿仙散结汤通过调控LRH-1/MMP-2信号通路对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭和迁移能力的影响。方法：培养人乳腺癌细胞株MCF-7,以1.2×10⁶/孔接种在6孔板中。将细胞分为5组,每组设置3个重复孔,分别为空白对照组、顺铂(1μg/mL)组及鹿仙散结汤高(1 mg/mL)、中(0.5 mg/mL)、低(0.25 mg/mL)浓度组。在光镜下观察各组细胞形态变化;Transwell小室检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL检测细胞凋亡水平;RT-qPCR检测细胞中LRH-1、MMP-2 mRNA表达;Western Blot检测细胞中LRH-1、MMP-2蛋白表达。结果：空白对照组细胞为梭形或多角形,贴壁正常生长,顺铂组及鹿仙散结汤中、高浓度组均出现细胞皱缩稀疏和死亡。与空白对照组比较,各给药组穿膜细胞数和细胞迁移率显著降低,凋亡率显著升高,细胞中LRH-1、MMP-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),其中高浓度鹿仙散结汤的作用最强。结论：鹿仙散结汤可抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的侵袭和迁移能力,促进其凋亡,其机制...     

3,5-二咖啡酰奎宁酸体外透血脑屏障能力及抗大鼠脑缺血再灌注损伤作用研究

目的:研究灯盏细辛活性成分3,5-二咖啡酰奎宁酸的体外透血脑屏障(BBB)能力及其对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法:采用体外血脑屏障模型结合HPLC技术评价3,5-二咖啡酰奎宁酸的透血脑屏障能力。预给药3天后,采用线栓法阻塞大脑中动脉(MCA)致大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,继续给药2天后,对各组大鼠进行神经功能缺失评分,并测定大鼠的脑梗死比率及其血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)含量。结果:3,5-二咖啡酰奎宁酸0.2 mg/ml对血脑屏障的透过率可达79%;与模型对照组比较,该药18.25mg/kg、9.13 mg/kg均能不同程度提高SOD、GSH-Px、NOS的活性,降低MDA活性及大鼠脑梗死比率与其神经行为学评分水平。结论:3,5-二咖啡酰奎宁酸能很好的透过血脑屏障,可通过降低大鼠脑梗死比率,增加脑缺血再灌注损伤大鼠血清SOD、GSH-Px、NOS活性,降低MDA含量,并改善其神经行为学体征,产生脑缺血保护作用。     

莱菔硫烷抑制HepG-2细胞MMP-9的活性以及ERK1/2磷酸化

目的:探讨莱菔硫烷(su lforaphane,SFN)对肝癌细胞系HepG-2细胞基质金属蛋白酶(m atrix m etallo-prote inase,MMP)-9的活性及对细胞外信号调节激酶(extracelluar signal-regu lated k inase,ERK)1/2磷酸化的影响。方法:体外培养HepG-2细胞,用SFN预处理后,四氮唑盐酶还原法检测细胞的增殖情况,以及LDH的漏出率;明胶酶谱实验和实时荧光定量PCR检测MMP-9的酶活性和mRNA表达水平;W estern b lot检测ERK1/2的磷酸化情况;最后采用定量实时PCR法检测SFN对HepG-2细胞表达Raf激酶抑制蛋白(Raf k inase inh ib itorprote in,RK IP),Spred-1和Spred-2 mRNA的影响。结果:0,20,40,50μM SFN处理24~72h后,均能抑制HepG-2的生长,LHD漏出率实验显示SFN对细胞无明显的毒性;SFN能明显抑制MMP-9的活性和mRNA的表达水平,同时能抑制ERK1/2的磷酸化。另外,SFN能明显提高RK IP、Spred-1和Spred-2 mRNA的表达水平。结论:SFN对HepG-2细胞生长以及MMP-9的活性具有抑制作用,它可能通过抑制ERK1/2磷酸化,诱导RK IP,Spred-1和Spred-2表达而发挥抗肿瘤的作用。     

3-烟酰胺基-1，2，4-苯并三嗪-1，4-二氮氧化物的合成及体外抗肿瘤活性的测定

 目的 合成3-烟酰胺基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氮氧化物;测定3-烟酰胺基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氮氧化物体外抗肿瘤活性。方法 以苯并呋咱氮氧化物（BFO）和氨基氰为起始原料合成中间体3-氨基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氮氧化物,所得的中间体和烟酰氯反应得目标化合物。以人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌HepG2细胞为模型,采用MTT分析法,测定3-烟酰胺基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氮氧化物体外抗肿瘤活性。结果 所合成的目标化合物经氢谱（¹H-NMR）、质谱（MS）和红外光谱（IR）确证,纯度经HPLC检测达99.24%。结论 合成了3-烟酰胺基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氮氧化物;3-烟酰胺基-1,2,4-苯并三嗪-1,4-二氮氧化物对人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌HepG2细胞的活性大于替拉扎明。
     

天山雪莲悬浮培养细胞中紫丁香苷、绿原酸和1, 5-二咖啡酰奎尼酸的生物合成调控

紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸为野生天山雪莲中的3种活性化学成分,具多种药理活性,在药材中含量较低。研究在筛选得到天山雪莲上述3种化学成分高产细胞系的基础上,通过外源添加碳源和生物合成前体的方法调控紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸在天山雪莲培养细胞中的生物合成,极大地提高了其含量和产量。仅需培养16 d,紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸的质量浓度即可以分别达到339.0,225.3,512.7 mg·L^-1;三者的含量分别为野生药材的67.9,1.9,10.6倍。研究为最终实现通过天山雪莲细胞培养同时规模化生产以上3种活性成分打下了坚实基础,具有理论和实际应用意义。     

(E)-N′-芳基亚甲基-4-(4-苯基嘧啶-2-基氨基)苯甲酰肼衍生物作为CDK9抑制剂的设计合成及抗HIV-1活性研究

目的 设计合成(E)-N′-芳基亚甲基-4-(4-苯基嘧啶-2-基氨基)苯甲酰肼衍生物,并对其抗HIV-1的活性进行研究。方法 4-氨基苯甲酸乙酯为起始原料,通过5步反应合成了目标化合物,采用荧光素酶(luciferase)报告基因检测了合成化合物对于HIV-1转录抑制活性。结果 目标化合物对于HIV-1的转录具有一定的抑制活性。其中化合物7p活性最优,在2 μmol·L^-1浓度下HIV-1转录抑制率为(73±0.05)%,在20 μmol·L^-1浓度下HIV-1转录活性为(90±0.01)%。进一步研究表明,化合物7p以浓度依赖性在NH1和NH2细胞中抑制HIV-1的转录活性以及下调RNA聚合酶Ⅱ CTD二号位丝氨酸磷酸化。最后,分子对接表明化合物7p与CDK9有很强的结合作用。结论 该系列化合物具有较好的抗HIV-1的活性,具有进一步研究的意义。     

N-羟基-5-(3-取代脲)-1H-吲哚-2-酰胺衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的设计合成N-羟基-5-(3-取代脲)-1H-吲哚-2-酰胺衍生物,并对其体外抗肿瘤活性进行研究。方法以对硝基苯肼和丙酮酸乙酯为起始原料采用缩合、Fischer吲哚合成法等方法合成了一系列新型的N-羟基-5-(3-取代脲)-1H-吲哚-2-酰胺衍生物(7a～7n),并通过¹H-NMR、¹³C-NMR和HRMS对所有目标化合物进行了结构鉴定。采用溴化噻唑蓝四氮唑比色(MTT)法考察了目标化合物对宫颈癌细胞(Hela)、乳腺癌细胞(MCF-7)及人肝癌细胞(HepG-2)等细胞系的细胞毒进行了活性测试。结果设计合成的目标化合物对所选癌细胞的增值活性具有一定抑制作用,其中化合物7j、7l和7m对Hela的抑制活性优于顺铂。结论该系列化合物对Hela、MCF-7和HepG-2具有较好的抑制作用,具有进一步研究的意义。     

非小细胞肺癌组织中Kiss-1、MMP-2和VEGF的表达与微血管密度相关性研究

目的探讨肿瘤转移抑制基因蛋白(Kiss-1)、金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达与微血管密度(MVD)的相关性。方法收集NSCLC组织标本68例,采用免疫组化SP法检测Kiss-1、MMP-2和VEGF的表达情况,观察MVD(CD34标记)。结果 NSCLC组中Kiss-1、MMP-2和VEGF阳性率和MVD值均高于正常对照组(P均0.05);Kiss-1、MMP-2和VEGF阳性表达均与NSCLC的临床分期、有无淋巴结转移相关;在NSCLC组织中Kiss-1和MMP-2,Kiss-1和VEGF表达呈负相关;NSCLC组中Kiss-1、MMP-2和VEGF阳性者的MVD值与其阴性者存在显著性差异(P0.05),在有无淋巴结转移者中Kiss-1、MMP-2和VEGF阳性者的MVD值有显著性差异(P0.05),Kiss-1和MMP-2的表达与MVD值存在显著相关性(P0.05)。结论 Kiss-1、MMP-2和VEGF在NSCLC发生和转移中可能起重要作用,Kiss-1、MMP-2和VEGF与NSCLC的浸润转移密切相关,可作为预后的判断指标。     

T1-3N0-2M0近端胃癌采用胃裸区清扫联合D2根治术治疗的临床分析

目的:探讨T1-3N0-2M0近端胃癌患者的治疗过程中,应用胃裸区清扫联合D2根治术治疗的临床效果。方法:选取大邑县人民医院2013年6月-2014年8月收治的80例T1-3N0-2M0近端胃癌患者作为研究对象,随机分为观察组与对照组各40例。观察组应用胃裸区清扫联合D2根治术治疗,对照组仅应用D2根治术进行治疗,观察对比两组患者临床治疗效果。结果:观察组治疗总有效率为95.0%,对照组治疗总有效率为70.0%,治疗效果明显低于观察组,组间比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:T1-3N0-2M0近端胃癌患者的治疗过程中,应用胃裸区清扫联合D2根治术治疗具有较好效果。     

急性ST段抬高型心肌梗死患者中医证型与基质金属蛋白酶-3、基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶抑制剂-1表达的关系研究

目的:观察急性ST段抬高型心肌梗死患者中医证型与MMP-3、MMP-9、TIMP-1水平的关系。方法:纳入急性ST段抬高型心肌梗死患者65例作为试验组,确定中医证型,另外选择健康体检者30例为对照组,试验组和对照组均采集静脉血检测MMP-3、MMP-9、TIMP-1表达水平。结果:试验组患者血清MMP-3为(30.63±25.14)μg·L~(-1),明显高于对照组的(13.45±6.88)μg·L~(-1)(P0.05);试验组患者血清MMP-9为(349.21±125.78)μg·L~(-1),明显高于对照组的(207.88±53.52)μg·L~(-1)(P0.05);试验组患者血清TIMP-1为(3 528.64±1 120.97)μg·L~(-1),明显高于对照组的(1749.03±803.86)μg·L~(-1)(P0.05)。心血瘀阻证患者血清MMP-3(42.51±19.61)μg·L~(-1)、MMP-9(400.17±114.80)μg·L~(-1)、TIMP-1(3902.36±1052.64)μg·L~(-1),水平明显高于其他证型患者,差异有统计学意义(P0.05)。MMP-3/TIMP-1与MMP-9/TIMP-1呈正相关(r=0.779,P=0.01 P0.05)。结论:急性ST段抬高型心肌梗死患者血清MMP-3、MMP-9、TIMP-1明显升高,且心血瘀阻证中医证候与血清MMP-3、MMP-9、TIMP-1密切相关。     

雷公藤内酯醇半合成衍生物对人结肠癌细胞系荷瘤小鼠肿瘤抑制作用的研究

目的:观察和评价雷公藤内酯醇的半合成衍生物(MC002)对人结肠癌HCT-8小鼠模型的肿瘤抑制作用。方法:用BALB/C裸小鼠接种人结肠癌HCT-8瘤株造成小鼠肿瘤模型,以MC002对荷瘤小鼠的相对肿瘤增殖率、瘤重、抑瘤率为指标评价MC002对小鼠的抑瘤作用。结果:MC002各剂量组瘤体积明显小于模型对照组,瘤重均显著降低,在1.5mg.kg^-1、1.0mg·kg^-1给药10次后T/C%均小于40%(P<0.05),且具有量效关系。结论:MC002能有效抑制人结肠癌HCT-8荷瘤小鼠体内肿瘤生长。通过深入研究MC002有可能发展成为一种新型抗癌药。     

愈肾颗粒不同药对配伍对肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2及其抑制剂-2的影响

目的:考察黄芪、太子参(益气摄血组),牡丹皮、丹参(凉血化瘀组),紫草、益母草(解毒化瘀组)3组药对对大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)m-RNA表达的影响.方法:应用血清药理学方法,制取中药药对的含药血清.以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作为刺激因子,培养大鼠肾小球系膜细胞,使其发生增殖.应用反转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察各组间MMP-2,TIMP-2的基因表达情况.结果:益气摄血组对TIMP-2抑制作用显著,与模型组比较有显著性差异;其他2组虽有抑制趋势,但无统计学意义.3组药对对MMP-2的影响均无统计学意义.结论:黄芪、太子参可通过抑制TIMP-2的基因表达,发挥防治肾小球硬化的作用.     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷抑制人喉癌细胞生长机制的研究

 目的观察5-杂氮-2’-脱氧胞苷对Hep-2人喉癌细胞系生长增殖的影响,探讨其抗肿瘤效应及可能的机制。方法用5- 杂氮-2’-脱氧胞苷对Hep-2人喉癌细胞系处理后,甲基化特异性PCR(MSP),T-A克隆测序分析死亡相关蛋白激酶(death-associ- ated protein kinase,DAPK)基因甲基化状态,逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学、流式细胞仪检测用药前后DAPK mRNA和蛋白的表达情况及细胞凋亡和周期的变化。结果未经5-杂氮-2’-脱氧胞苷处理的Hep-2细胞中DAPK基因CpG岛甲基化,且 DAPK mRNA不表达。经5-杂氮-2’-脱氧胞苷处理后,甲基化的DAPK基因部分去甲基化,大于或等于10^-7 mol·L^-1组的细胞中有DAPK mRNA表达,且表达随浓度增高而增强。免疫细胞化学染色显示,经处理后的肿瘤细胞DAPK蛋白表达呈阳性,而对照组不表达。流式分析结果为处理后凋亡率明显增加,且G₁期细胞增加,G₂/M期减少。结论 5-杂氮-2’-脱氧胞苷能抑制喉癌细胞的生长和增殖,可能的机制是其能使因甲基化而失活的DAPK基因再转录,诱导该基因的重新表达。     

亚麻木酚素对肺癌A549细胞的抑制作用及其机制

目的观察亚麻木酚素(SDG)对肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的SDG(5、10、20、40μmol/L),MTT观察细胞增殖情况;Transwell小室评价细胞侵袭能力;Hochest染色观察细胞凋亡情况;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性;Real Time PCR、Western Blotting检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA和蛋白表达。结果 SDG呈时间-浓度依赖性抑制A549细胞的增殖(P<0.05)。细胞侵袭能力明显下降、凋亡比率和Caspase-3活性明显升高、MMP-2 mRNA和蛋白的表达显著下降(P<0.05)。结论 SDG呈时间和剂量依赖性抑制A549细胞的增殖和侵袭,其机制可能与其促凋亡、抑制MMP-2的表达有关。     

呼吸道合胞病毒对Hep-2细胞增殖的影响

目的研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染对细胞增殖活性的影响。方法培养RSV感染Hep-2细胞,观察细胞形态,在感染后不同时间点用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Hep-2细胞增殖情况。结果RSV感染Hep-2细胞后48 h细胞开始出现病变,72~96 h病变最明显,120 h细胞全部死亡,不存在正常细胞。感染后24 h4、8 h、72 h9、6 h1、20 h Hep-2细胞的增殖指数分别为0.85,1.2,1.08,0.90,0.74。结论呼吸道合胞病毒感染早期促进宿主Hep-2细胞增殖,晚期抑制增殖。     

槲皮素对U937细胞迁移和侵袭能力及MMP-2,MMP-9表达的影响

目的:观察槲皮素(quercetin)对人急性髓系白血病(human acute myeloid leukemia)U937细胞增殖、凋亡、黏附力、迁移和侵袭能力及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法:体外培养U937细胞,分别以0,10,20,40μmol·L-1槲皮素处理24,48,72 h,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测槲皮素对U937细胞增殖的抑制作用。实验随机分为空白组,槲皮素10,20,40μmol·L-1组。末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测U937细胞凋亡情况;细胞黏附实验检测U937细胞黏附力;划痕修复实验检测U937细胞迁移能力;transwell小室体外侵袭实验检测U937细胞侵袭能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测U937细胞MMP-2,MMP-9蛋白表达。结果:槲皮素可抑制U937细胞的增殖。与空白组比较,槲皮素10,20,40μmol·L-1组明显升高U937细胞凋亡指数(P0.05,P0.01)。与空白组比较,槲皮素10,20,40μmol·L-1组明显降低U937细胞黏附率,迁移率,侵袭细胞数及MMP-2,MMP-9蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:槲皮素可显著抑制U937细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与其抑制MMP-2和MMP-9表达有关。     

人参蛋白对Hep-细胞增殖影响的比较

目的：比较人参蛋白对人喉癌细胞（Hep-2）增殖的影响。方法：采用中性缓冲液浸提法制备人参蛋白I,蛋白I经沸水浴处理、等电点沉淀,分别制备得到蛋白Ⅱ、Ⅲ、IV;采用MTT法检测细胞活性。结果：人参蛋白I及人参蛋白Ⅲ对Hep-2细胞增殖具有明显抑制作用（P〈0．01）,人参蛋白Ⅱ及人参蛋白Ⅳ对Hep-2细胞增殖无明显影响。结论：人参蛋白是人参的主要活性成分之一,其对Hep-2细胞增殖的影响与蛋白制备方法密切相关。     

氧化苦参碱对慢性乙肝和肝硬化患者血清MMP-2和TIMP-2的影响

目的 观察氧化苦参碱对慢性乙型病毒性肝炎（简称慢乙肝）和乙型肝炎后肝硬化（简称肝硬化）患者血清基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-2组织抑制因子（TIMP-2）以及肝纤维化指标[透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）和Ⅳ型胶原（ⅣC）]的影响.方法 慢乙肝（36例）和肝硬化（36例）患者用氧化苦参碱治疗前后采用ELISA方法检测血清MMP-2、TIMP-2,采用放射免疫法检测HA、LN、ⅣC的变化,并分析MMP-2、TIMP-2和肝纤维化指标之间相关性.结果 氧化苦参碱能降低慢乙肝中、重度和肝硬化Child-pugh A、B、C级血清HA、LN、ⅣC水平及血清MMP-2水平（与本组治疗前比较,P＜0.05）.血清MMP-2、TIMP-2水平分别与HA、LN、ⅣC均有良好相关性（P＜0.01）.结论 MMP-2、TIMP-2可用来评价纤维化情况,氧化苦参碱有一定抗肝纤维化作用.