益肾软坚散含药血清拮抗马兜铃酸对人肾间质成纤维细胞的作用

目的研究益肾软坚散含药血清能否干预马兜铃酸(aristolochic acid,AA)对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)的致细胞外基质(excellular matrix,ECM)蓄积效应。方法用马兜铃酸钠盐(AA-Na,40μ-／ml)加或不加10％大鼠含药血清与hRIFs孵育,而后检测hRIFs对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)、金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)和Ⅰ型胶原(type Ⅰ Colla-en,Col Ⅰ)的mRNA(RT-PCR方法)和蛋白质表达(ELISA或Western blot方法)。结果大鼠含药血清能显著下调AA-Na刺激后hRIFs对TGF-β1、CTGF、TIMP-1和Col ⅠmRNA及蛋白质高表达(P<0．05),但不影响PAI-1 mRNA及蛋白质高表达(P>0．05)。结论益肾软坚散含药血清可通过下调hRIFs促ECM合成因子及抗ECM降解因子的表达,而拮抗从导致的ColⅠ等ECM蓄积。     

益肾灵对抗马兜铃酸肾病肾组织TGF-β1 TIMP-1 CTGFmRNA表达的研究

目的：探讨益肾灵对马兜铃酸肾病肾组织TGF-β1、CTGF、TIMP-1mRNA表达的影响。方法：采用RT-PCR方法分析肾组织中TGF-β1、TIMP-1、CTGFmRNA表达。结果：本研究的大鼠肾组织RT-PCR检查显示，模型组大鼠组织TGF-β1、CTGF和TIMP-1mRNA表达明显上调，而益肾灵干预后上述上调指标均显著下降。这些结果提示益肾灵可能通过下调促细胞外基质（ECM）合成因子TGF-β1和CTGF及抑制ECM降解因子TIMP-1在肾脏内的表达，而减轻肾间质ECM的蓄积及纤维化。结论：马兜铃酸具有慢性肾毒性作用，本研究结果已初步证实应用益肾灵早期干预CAAN动物模型，能显著减轻肾间质ECM蓄积及纤维化，改善肾功能。该实验结果为今后临床使用中药治疗CAAN提供了初步依据。     

益肾活血汤抗单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化作用及机制的研究

目的 探讨益肾活血汤对大鼠肾间质纤维化的拮抗作用及机制.方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾活血汤治疗组、贝那普利治疗组.制备单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型,在术后第21日处死大鼠留取梗阻侧肾组织观察肾间质病理变化,并用免疫组化法测定肾组织中纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI-1）、转化生长因子-β（TGF-β）及结缔组织生长因子（CTGF）的表达,处死前留取24 h尿测定尿蛋白,心腔穿刺取血测定血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）.结果 益肾活血汤组24h尿蛋白、BUN、Scr水平、肾间质纤维化程度及PAI-1、TGF-β、CTGF的表达量均明显低于模型组（P＜0.05）,但与贝那普利组差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 益肾活血汤对肾间质纤维化具有拮抗作用,其机制可能为通过减少PAI-1、TGF-β、CTGF等致纤维化因子在肾组织中的过度表达来抑制肾间质纤维化.     

肾康注射液对慢性马兜铃酸肾病模型大鼠肾间质纤维化的拮抗作用

目的 研究肾康注射液对慢性马兜铃酸肾病(CAAN)模型大鼠肾间质纤维化的拮抗效应.方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,每组6只.于0、1、4、8、12周末分别检测体质量、尿糖、24 h尿蛋白定量和肌酐清除率(Ccr);第12周末处死大鼠留取肾组织,行Masson染色观察肾间质纤维化程度;并用逆转录实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)和Ⅰ型胶原(Col 1)mRNA及蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组和干预组大鼠体质量明显减轻(P<0.01),但干预组大鼠体质量明显高于模型组,12周末时存在显著差异(P<0.05).与对照组相比,模型组大鼠24 h尿蛋白定量显著上升(P<0.01),Ccr显著下降(P<0.01);12周时肾间质纤维化面积显著增加(P<0.01);肾组织内上述各检测指标的mRNA及蛋白表达均显著上调(P<0.01).与模型组相比,干预组大鼠各时间点Ccr均显著升高(P<0.01);第12周时24 h尿蛋白定量及肾间质纤维化面积均显著降低(P<0.05、0.01);上述高表达的mRNA及蛋白指标均被显著抑制(P<0.05).结论 肾康注射液可能通过抑制肾组织促细胞外基质(ECM)合成因子(TFG-β1、CTGF)及抗ECM降解因子(TIMP-1、PAI-1)生成,而改善CAAN的肾间质纤维化及肾功能.     

益肾活血汤对5/6肾切除大鼠PCNA表达及细胞外基质的影响

目的探讨益肾活血汤对5／6肾切除肾衰竭大鼠的防治效果及其作用机制。方法采用5／6肾切除大鼠模型,设立正常组、模型组、中药益肾活血汤组与西药苯那普利组。检测各组术后6周、12周末24h尿蛋白,12周末血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（SCr）、血清白蛋白（Alb）、血红蛋白（HB）水平,12周末光镜观察肾组织病理变化,免疫组化检测肾增殖细胞核抗原（PCNA）,纤维连接蛋白（FN）表达,RT—PCR检测肾结缔组织生长因子（CTGF）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）表达。结果（1）模型组较正常组24h尿蛋白,血清BUN、SCr,肾小球系膜区面积、FN聚积、肾小球和小管间质PCNA表达,CTGFmRNA,PAI—1mRNA表达均显著升高（P〈0．05）,中药组较模型组各指标均显著下降（P〈0．05）;（2）正常组、模型组、中药和西药组肾小球PCNA阳性细胞数分别为7．00±2．24,34．78±6．96,15．75±2．61,15．50±2．57。且各组肾小球PCNA表达与CTGF、PAI-1、FN、SCr均呈正相关。结论中药益肾活血汤能够延缓5／6肾切除大鼠慢性肾功能衰竭进展,其机制主要与抑制肾脏细胞增殖及其诱导的细胞因子过度表达和细胞外基质聚积有关。     

益肾灵对抗马兜铃酸肾病的实验研究

目的:观察马兜铃酸慢性肾毒性,并探讨益肾灵对抗马兜铃酸肾病的作用。方法:将雌性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、中药组和西药组。模型组、中药组和西药组腹腔注射马兜铃酸5mg.kg-1.d-1,共16周,空白组大鼠6只腹腔注射蒸馏水2mL.d-1,共16周,空白组和模型组大鼠用蒸馏水灌胃、西药组和中药组分别给予牛磺酸和益肾灵灌胃。用药后空白组16周处死6只大鼠。模型组、西药组和中药组8、16周大鼠分别处死6只,处时分别留取血、尿、肾的标本,分别作血生化、病理(光镜、免疫组化、电镜)等方面的检查。结果:在用药12周中药组体重高于模型组。与正常组、西药组比较无明显差异。用药8周后西药和中药能降低大鼠24 h尿蛋白定量,BUN和Scr均显著下降(P<0.05)。免疫组化显示益肾灵能使大鼠肾小管及间质TGF-β1和TIMP-1致纤维化因子的表达明显减弱。结论:马兜铃酸可引起大鼠慢性肾间质纤维化,益肾灵有改善马兜铃酸对肾小管及间质的损害,延缓肾纤维化的进程的作用,疗效优于牛磺酸组。     

益肾活血法对慢性肾衰竭大鼠TGF-β_1、CTGF的影响

目的探讨益肾活血法对慢性肾衰竭大鼠肾组织转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）的作用。方法采用腺嘌呤制备慢性肾衰竭动物模型,对模型大鼠灌胃益肾活血复方中药或尿毒清颗粒;运用免疫组化法观察肾组织TGF-β1、CTGF蛋白表达。结果益肾活血复方中药能降低肾间质中TGF-β1、CTGF蛋白的表达。结论益肾活血复方中药可通过抑制TGF-β1、CTGF的表达,干预肾间质纤维化,进而延缓慢性肾衰竭。     

软肾散对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β1及α—SMA的影响

目的：观察软肾散对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型肾间质纤维化（RIF）的影响及可能的作用机制。方法：将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利治疗组和软肾散治疗组,后3组建立UUO大鼠模型。治疗结束后测定大鼠肾功能、行HE染色观察肾组织病理变化,计算肾小管间质病理积分,用免疫组化方法测定肾TGF—β1、α-SMA的表达情况。结果：两治疗组大鼠BUN、SCr低于模型组（P〈0．01）,两治疗组组间差异无统计学意义（P〉0．05）;肾间质病理积分显示两治疗组显著低于模型组（P〈0．01）,两治疗组组间差异无统计学意义（P〉0．05）;免疫组化结果表明,两治疗组TGF—β1和α—SMA的表达均低于模型组（P〈0．01）,两治疗组组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：软肾散能一定程度上减轻UUO大鼠RIF程度,其作用机制可能与下调TGF—β1和α-SMA表达有关。     

苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响

目的探讨苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响及可能机制。方法大鼠行单侧输尿管结扎（UUO）建立肾小管间质纤维化模型。实验分为假手术、UUO及苦参素治疗组。治疗组在UUO的基础上每天以苦参素100mg/kg腹腔注射。各组于术后第7、14、21天分别处死5只大鼠,分别检测大鼠血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）及24h尿蛋白定量。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法观察转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达。用RT-PCR法测定肾组织TGF-β1及α-SMA mRNA水平。结果与UUO组比较,苦参素治疗组肾脏TGF-β1、Smad3、α-SMA及ColⅠ的表达明显减少,肾小管损害和肾间质纤维化的程度也明显减轻。治疗组TGF-β1 mRNA及α-SMA mRNA表达显著低于对应时间点的UUO组。结论苦参素可下调TGF-β1、ColⅠ的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化及肌成纤维细胞的活化与增殖,其作用途径可能是通过下调Smad3的表达,从而干预Smad3介导的细胞内信号转导,最终减轻肾间质纤维化。     

百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠模型肾小管损伤的保护作用

目的：观察百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠模型肾小管损伤的保护作用。方法：雄性3月龄SD大鼠90只，随机分为：对照组（30只），模型组（30只），预防组（30只）。以2％腺嘌呤淀粉混悬液150mg·kg^-1·d^-1灌胃，连续17周，制作大鼠肾小管间质纤维化模型；预防组加以1．5gkg^-1·d^-1百令胶囊溶于生理盐水灌胃以预防肾小管间质纤维化；对照组以等体积的2％淀粉溶液和生理盐水灌胃。分别于实验第7周、12周、17周时随机处死10只大鼠，进行血肌酐Cr、尿素氮BUN，24小时尿蛋白定量和尿NAG酶检测，光镜下观察肾组织的病理变化，计算肾小管间质纤维化指数。结果：①功能学变化：与对照组比较，各时相点模型组、预防组大鼠尿蛋白、尿NAG酶、血Cr及血BUN均升高（P〈0．01），但预防组低于模型组（P〈0．01）；模型组、预防组自身对照各指标均较前一时相点升高（P〈0．01）。②病理学变化：7周时模型组、预防组即有肾小管间质损害；模型组、预防组自身对照肾小管间质损害均较前一时相点加重（P〈0．01），但7周、12周时预防组肾小管间质损害均较模型组为轻（P〈0．01），17周时两组间无显著差异（P=0．670）。     

虫草菌粉对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织TGF-β1及Snail表达和TEMT的影响

目的 研究虫草菌粉对慢性马兜铃酸肾病（CAAN）模型大鼠肾小管上皮－肌成纤维细胞转分化（TEMT）的拮抗作用。     

柴苓汤对慢性环孢素A肾损伤的防护作用及其机制研究

目的 观察柴苓汤对慢性环孢素A肾病(chronic cyclosporine A nephropathy,CCN)大鼠肾脏转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）表达及细胞凋亡、增殖的影响,探讨其拮抗肾纤维化的可能作用机制。方法 采用经口灌服环孢素A［cyclosporine A, CsA,30mg/(kg·d）］的方法复制慢性环孢素A肾病大鼠模型,同时灌胃给予中药柴苓汤［3g／（kg·d）］治疗。测定大鼠肾功能指标血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（SCr）及肌酐清除率（CCr）;Masson染色观察肾小管间质纤维化程度;免疫组化、RT PCR观察TGF-β1、CTGF蛋白及基因表达;流式细胞术检测肾脏细胞凋亡率、增殖指数。结果与对照组［BUN（mmol/L）：6.123±0.588;SCr(μmol/L)：75.654±8.196;CCr(mL/min)：0.539±0.169］比较,模型组大鼠肾功能（BUN：11.600±1.437;SCr：101.985±10.809;CCr：0.272±0.060）明显降低（P<0.01）;肾间质区胶原成分明显增多;肾小管上皮细胞及间质细胞TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA表达显著增强（P<0.01）;肾脏细胞增殖指数及凋亡率均有所上升,但凋亡/增殖的比值（0.317±0.059）较对照组（0.680±0.150）下降（P<0.01）。经中药柴苓汤治疗,大鼠肾功能（BUN：7.340±0.857;SCr：84.923±10.627;CCr：0.405±0.081）显著提高（P<0.05,P<0.01）,间质区胶原成分沉积减少;TGF-β1、CTGF蛋白及mRNA高表达下调（P<0.01）,肾脏细胞凋亡/增殖的比值（0.650±0.092）提高（P<0.01）。结论 柴苓汤能够改善CCN模型大鼠肾功能,抑制TGF-β1、CTGF表达,并通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,恢复细胞凋亡与增殖的平衡,从而延缓肾间质纤维化进程。     

肾安冲剂对阿霉素肾病大鼠肾组织TGF-β1、α-SMΑ、CTGF及Col-Ⅰ表达的影响

目的：探讨肾安冲剂对阿霉素肾病大鼠肾间质纤维化的影响。方法：将150只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、肾安冲剂小剂量组和肾安冲剂大剂量组、泼尼松加缬沙坦组。对除正常组外的其余组大鼠尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病模型。各组大鼠分别于造模后8、12、16周末分批处死,免疫组化法检测肾组织中TGF-β1、α-SMA、CTGF和Col-Ⅰ的表达。结果：各治疗组大鼠肾组织中TGF-β1、Col-Ⅰ、CTGF和α-SMA的表达均较模型组明显减少（P〈0.05）,且以肾安冲剂大剂量组最显著。结论：肾安冲剂可能通过下调肾组织TGF-β1、Col-Ⅰ、CTGF和α-SMΑ的表达而抑制ECM的合成,从而达到延缓阿霉素肾病大鼠肾小管间质纤维化的目的。     

补益脾肾方对阿霉素肾病大鼠肾间质转化生长因子-β1和结缔组织生长因子表达的影响

目的:探讨补益脾肾方对阿霉素肾病大鼠肾间质转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CT-GF)表达的影响。方法:将32只雄SD大鼠随机分为空白组、阿霉素肾病模型组、贝那普利治疗组、补益脾肾中药治疗组。采用一次性尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病模型,于造模后第2周对阿霉素肾病大鼠分别用贝那普利和中药治疗。于造模后第6周处死所有大鼠,切片做Masson染色观察肾小管及间质的病理变化;应用免疫组织化学方法检测肾组织中TGF-β1、CTGF的蛋白质表达。结果:补益脾肾法可以下调阿霉素肾病大鼠肾间质TGF-β1及CTGF的表达(P<0.05),延缓间质纤维化的进展。结论:中医补益脾肾方可以通过下调肾间质TGF-β1及CTGF的表达,延缓阿霉素肾病大鼠肾小管间质纤维化的进展。     

同种异体骨髓间充质干细胞对肾小管周毛细血管丛修复影响的研究

目的 探讨同种异体Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)是否具修复肾小管周毛细血管丛（PTC）潜能,同时观察其对肾小管-间质低氧状态的改善。方法 从骨髓中提纯单核细胞,体外扩增、鉴定为 MSCs。将30只雌性大鼠随机分为非移植组、 MSCs移植组及正常对照组。非移植组和MSCs移植组经关木通水煎剂灌胃12周,制成慢性马兜铃酸肾病（CAAN）大鼠模型。第12周,MSCs移植组经尾静脉输入1mL MSCs悬液;非移植组和正常对照组经尾静脉输入1 mL生理盐水。第16周留取血、尿及肾组织标本。肾组织连续切片,检测Y染色体和CD34双阳性细胞的分布,并作病理、免疫组织化学、Western blotting、RT-PCR等检查。结果 MSCs移植组肾组织中可见Y染色体和CD34双阳性细胞。第16周,非移植组与MSCs移植组结果：PTC密度分别为(5.26±0.78)/0.13 mm²、(26.47±1.56)/0.13 mm²（P<0.01）;低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α,IOD值)分别为(6.74±0.67)×10³、(25.27±1.46)×10³(P<0.01);MSCs移植组较非移植组CD34显著增强（P<0.01）。结论 同种异体MSCs可向肾小管周毛细血管丛内皮细胞分化修复PTC,从而改善肾小管-间质低氧状态。     

糖克煎剂对糖尿病大鼠肾保护作用及TGF-β1/Smad4表达的影响

目的观察糖克煎剂对早期糖尿病大鼠TGF-β1/Smad4表达的影响,探讨糖克煎剂防治早期糖尿病肾保护作用的效果及机制。方法SD大鼠随机分为正常对照组（12只）、模型组（10只）、中药预防组（10只）、中药治疗组（10只）、西药对照组（10只）。中药预防组造模成功后立即给予灌服糖克煎剂（18 g/kg）;其余各组均在造模成功4周后灌胃给药。模型组和正常对照组予等量生理盐水,西药对照组予灌服贝那普利混悬液（1 mg/kg）,中药治疗组给予灌服糖克煎剂（18 g/kg）。中药预防组共给药12周,中药治疗组及西药对照组给药8周,均每日1次。实验结束检测各组大鼠体重、肾重、肾重指数、空腹血糖和24 h尿微量白蛋白排泄率; HE染色、Masson染色及电镜观察各组大鼠肾组织病理形态学变化;采用免疫组化法检测肾组织转化生长因子（TGF-β1）及其内部传导分子Smad4的表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠体重明显降低,肾重、肾重指数、血糖、24 h尿蛋白定量、尿蛋白排泄率、肾脏TGF-β1和Smad4的表达均明显增加,差异均有统计学意义（P〈0.01）;各用药组上述指标与模型组比较均有所改善,差异均有统计学意义（P〈0.05, P〈0.01）;与西药对照组比较,中药预防组肾重、肾重指数、血糖、24 h尿蛋白定量及尿蛋白排泄率明显改善,差异有统计学意义（P〈0.01）。肾脏病理变化以模型组最为明显,各用药组均有不同程度改善。结论糖克煎剂可明显改善糖尿病症状,并且下调早期糖尿病大鼠肾脏TGF-β1和Smad4的表达。说明糖克煎剂对早期糖尿病肾病有一定的防治作用。     

三七总皂苷对阿霉素肾病大鼠肾组织CTGF蛋白及其mRNA表达的影响

目的:分析阿霉素肾病大鼠肾组织结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白及其mRNA的变化,研究三七总皂苷对其干预作用及机制。方法:采用单侧肾切除阿霉素肾病模型。将45只大鼠随机分为5组,正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和三七总皂苷治疗组。术后10周处死大鼠,观察肾组织病理改变,应用免疫组织化学方法和原位杂交法检测肾组织CTGF及其mRNA的表达。结果:正常组及假手术组肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞以及肾间质细胞胞浆内有少量CTGF蛋白及其mRNA的黄色颗粒状阳性反应物,模型组上述部位的CTGF蛋白及其mRNA呈强阳性表达,三七总皂苷组上述指标表达较模型组显著减少,有统计学差异(P<0.05),与阳性药物组比较差异不显著。结论:三七总皂苷可能通过抑制CTGF蛋白及其mRNA的过度表达而减缓肾纤维化病程进展。     

怡肾汤对肾间质纤维化大鼠TGF-β1及Ⅲ型胶原纤维表达的影响

目的研究怡肾汤对肾间质纤维化大鼠TGF-β1和ColⅢ表达的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法 32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、怡肾汤组和依那普利组,每组8只。适应性饲养1周后,除正常对照组外其余均采用腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾间质纤维化动物模型。第1、2、3周末采血分离血清测定肌酐、尿素氮含量。第21天处死大鼠,分离肾脏,应用HE及Masson染色,观察肾脏组织病理学改变,免疫组化方法检测肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）和Ⅲ型胶原（ColⅢ）的表达,结果应用图像分析系统进行半定量分析。结果模型组、怡肾汤组及依那普利组与正常组比较均呈现程度不同的病理损害。免疫组化半定量分析显示怡肾汤组肾间质TGF-β1、ColⅢ的表达量均少于模型组（P〈0.05）。此外,怡肾汤还能降低血BUN、Scr水平。结论怡肾汤可能通过下调TGF-β1、ColⅢ水平,减少ECM沉积,从而达到防止肾间质纤维化的作用。