黄秋葵毛状根的诱导及培养

目的 利用4种发根农杆菌15834,R1601,1025,1000诱导黄秋葵产生毛状根,建立黄秋葵的毛状根培养体系.方法 利用共培养法研究不同外植体、菌株、预培养时间和侵染时间等对黄秋葵毛状根诱导率的影响和不同液体培养基对毛状根生长的影响筛选出最佳培养基,并研究了不同蔗糖浓度和外源激素对毛状根生长的影响.结果 利用发根农杆菌R1601,预培养48 h的叶片为转化材料,感染8 min的诱导率最高,最佳培养基为MS液体培养基.结论 黄秋葵毛状根离体培养体系的建立,为研究黄秋葵的有效药用成分的大规模生产奠定了基础.     

甘草毛状根的研究

本文详细报道了乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis)等五种廿草毛状根诱导和培养的研究情况,并通过Opine的检出和GUS活性的测定检查了PRi 15834和pGSGlucl的导入情况。不同培养基试验表明,W.P培养基最有利于毛状根S.a-s-4株的生长。高压液相测定和甜味试验证明,甘草毛状根中不含有甘草酸。     

Ri质粒人参转化系统的建立及鉴定

目的 :建立人参毛状根转化体系。方法 :利用含有Ri质粒的发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes感染人参Panax ginseng进行毛状根诱导 ,利用PCR技术及TLC分析方法对毛状根进行鉴定。 结果 :首次从人参带叶幼茎处诱导出毛状根 ,用激素和AS(乙酰丁香酮 )处理可提高转化率并缩短转化时间。毛状根在无激素B5培养基上生长并失去向地性 ,月增长倍数可达 50倍 (鲜重 )。PCR分析证实农杆菌Ri质粒含有rolC序列 (564bp)的T DNA已整合到人参转化株的染色体组中 ,TLC分析证明T DNA特异的表达产物冠瘿碱在转化细胞中合成。人参毛状根中人参总皂苷含量为 2.486% (干重 ) ,而人参原药材总皂苷含量为 1.403% (干重 )。结论 :人参毛状根生长迅速 ,皂苷含量高于原药材 ,该体系的建立为利用生物技术工业化生产人参活性成分奠定了基础。     

金铁锁毛状根诱导及培养体系的建立

目的:研究金铁锁毛状根制备方法及液体培养条件,为规模化生产金铁锁提供技术支持.方法:利用发根农杆菌ACCC10060菌株侵染金铁锁幼叶及茎段.结果:将外植体与菌液(A6000.8)在含有20mg·L-1乙酰丁香酮的B5培养基上共培养48h,可以有效地诱导金铁锁毛状根;叶片比茎段的诱导率高.转化的毛状根具有激素自养和抗卡那霉素的特性,并且组织中含有冠瘿碱,证明该菌对金铁锁组织成功地进行了转化.在无激素的1/2Ms液体培养基中培养35d后,金铁锁毛状根生物量增加了14.11倍(鲜重)和8.39倍(干重),其总皂苷为0.857%(干重),愈伤组织和原植物中分别为0.388%,0.217%.结论:金铁锁毛状根离体培养系统的成功建立,对进一步规模化培养金铁锁毛状根具有重要意义.     

王不留行毛状根的诱导及培养

目的:利用4种发根农杆菌R15834,R1601,R1000,A4诱导药用植物王不留行产生毛状根,建立王不留行的毛状根培养体系。方法:采用共培养法研究不同外植体、菌株、外源激素、侵染时间、预培养时间和共培养时间对王不留行毛状根诱导率的影响。结果:用王不留行叶片作为外植体,外植体预培养60 h,共培养48 h,发根农杆菌R1601侵染10 min,培养基中添加0.1 mg.L-1吲哚丁酸(IBA)转化率最高。结论:王不留行毛状根诱导成功,为其遗传转化提供了依据。     

圆叶牵牛毛状根的诱导及培养

目的:利用发根农杆菌,R1601,1000,1025,15834诱导药用植物圆叶牵牛产生毛状根。方法:采用共培养方法,通过对外植体、菌种、浸染时间、预培养、共培养、外源激素等因素对转化率的影响。结果:利用发根农杆菌1601,预培养60h的叶片、叶柄为转化材料,感染6～8min,加入1mg.L-1NAA转化率最高。结论:圆叶牵牛毛状根的诱导成功,为其遗传转化提供了依据。     

人参毛状根合成人参皂苷培养条件的优化

目的：对影响人参(Panax ginseng)状根生长及人参皂苷合成的培养条件进行了研究。方法：比较了不同培养基上人参毛状根和人参皂苷的含量变化。结果：人参毛状根在MS IBA0．5mg／l的培养液里预培养72h后，再转入MS基本培养液培养，经过6周的培养，人参总皂苷含量达到5．190％，人参皂苷(Re Rg)含量达到了0．3271％，人参毛状根干重增加98．74倍。结论：确定了最佳的培养基和培养条件，为工业化再生产提供了基础。     

圆叶牵牛毛状根的诱导及培养

目的：利用发根农杆菌,R1601,1000,1025,15834诱导约用植物圆叶牵牛产生毛状根。方法：采用共培养方法,通过对外植体、菌种、浸染时间、预培养、共培养、外源激素等因素对转化率的影响。结果：利川发根农杆菌1601,预培养60h的叶片、叶柄为转化材料,感染6～8min,加入1mg·L^-1 NAA转化率最高。结论：圆叶牵牛毛状根的诱导成功,为其遗传转化提供了依据。     

毛状根培养技术在中草药中的应用

阐述了发根农杆菌中Ri质粒诱导毛状根形成的机制;分析了毛状根培养技术在中草药有效成分生产、转基因研究、种质保存和良种繁育等方面的应用;探讨了影响毛状根形成的因素;最后预测了毛状根培养技术在中草药中的应用前景.     

药用植物毛状根研究体系及应用方向

药用植物富含次生代谢产物,是天然药物和保健品的重要来源。然而药用植物本身的次生代谢产物存在含量低、合成不稳定且周期长等问题。利用发根农杆菌Ri质粒诱导药用植物产生的毛状根具有操作简单、生长迅速、可提高次生代谢产物含量等优点,已成为药用植物次生代谢产物生产的一种新手段。本文详细介绍了毛状根的诱导方法、鉴定以及影响其形成的因素,总结了毛状根研究体系在药用植物次生代谢产物生产、基因功能验证、种质资源改良与繁育等方面的应用,并展望了毛状根研究体系在药用植物基因功能研究与药用活性成分生产方面的发展前景。     

乌拉尔甘草化学成分研究

目的 研究乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis根的化学成分.方法 利用硅胶、聚酰胺、MCI、ODS、Sephadex LH-20柱色谱,RP-HPLC等技术对乌拉尔甘草70％乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据进行结构鉴定.结果 分离得到14个化合物,分别鉴定为3,7-二甲基甘草黄酮醇(1)、甘草宁Ⅰ(2)、甘草香豆酮(3)、8-甲雷杜辛(4)、2'-hydroxyisolupalbigenin(5)、异驴食草酚(6)、去氢粗毛甘草素D(7)、glycyrin (8)、甘草酚(9)、刺甘草查耳酮(10)、甘草查耳酮B (11)、isoangustoneA(12)、甘草宁G(13)、5,7,4’-三羟基-6,8-二异戊烯基异黄酮(14).结论 化合物1为新化合物,化合物2～7首次从该植物中分离得到.     

掌叶大黄毛状根的诱导及其蒽醌类化合物产生的研究

目的:研究掌叶大黄毛状根的诱导及蒽醌类化合物的生产。方法:用发根农杆菌Agrobacterium rhizo-genesLBA9402和R1601感染掌叶大黄外植体。结果:2种发根农杆菌均能诱导掌叶大黄产生毛状根,LBA9402比R1601表现出较强的对掌叶大黄的感染能力。毛状根单克隆DH7 a(由R1601诱导)生长速度高于DH5 a,DH5 c(由LBA9402诱导),且明显比非转化根(NOR)快。DH5 a中蒽醌类化合物以大黄素为主,DH5 c则以大黄素甲醚含量最高,DH7 a中4种蒽醌———大黄酸、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚含量相近,非转化根中大黄酚含量最高,而芦荟大黄素的含量在4种根中均较低。结论:本实验所建立的掌叶大黄毛状根培养系统,为研究大黄毛状根大量培养生产蒽醌类化合物奠定了基础。     

干旱胁迫对甘草生长的影响

目的 :研究干旱胁迫对甘草生长的影响及其抗旱性。方法 :采用土壤干旱胁迫处理二年生甘草 60d ,测定地上茎叶和地下根及根茎各生长指标以及生物量。结果 :随干旱胁迫程度的增强 ,甘草地上地下各器官生长均受到抑制 ,但对地上器官的生长抑制更加明显。结论 :干旱胁迫对甘草生长的抑制作用具有明显的器官特异性 ,在土壤相对含水量为 50%的干旱条件下 ,人工种植甘草的产量和质量可兼顾。     

乌拉尔甘草中的化学成分

目的：分析乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis的化学成分。方法：采用正、反相硅胶柱层析分离，应用液谱方法进行结构鉴定。结果：从甘草中共分离出3个三萜皂苷、2个香豆素和8个黄酮类化合物，其中一个三萜皂苷为新化合物。结论：通过ESI－MS，^1HNMR,^13CNMR,HMQC和HMBC分析，将新三萜皂苷的结构鉴定为3－O－[β-D-葡萄糖醛酸甲酯－（1→2）－β－D－葡萄糖醛酸]-24－羟基－甘草内酯。     

甘草及其炮制品中甘草酸含量的测定

以甘草酸单铵盐标准品为对照,应用反相高效液相色谱法测定了甘草及其炮制品中甘草酸的含量。方法准确度高,重现性好,操作快速、简便。     

不同定植密度下甘草生长规律的研究

目的:研究甘草在不同定植密度下的生长规律,以期为甘草合理密植提供理论依据。方法:采用单因素随机区组法。结果:在不同定植密度下,甘草有随密度的增大而株高降低、芦径减小、主根长缩短、主茎分枝数减小的趋势。甘草根、地上部分及根茎干物质积累均有随定植密度增大而减小的趋势。结论:综合分析得出甘草以27万株/hm²为适宜定植密度。     

甘草的耐阴性研究

目的 :明确甘草的耐阴性 ,为甘草的林药间作提供理论依据。方法 :采用遮荫棚遮荫 ,设置了 5种遮荫处理 ,透光率分别为CK(10 0 % ) ,T₁(75 % ) ,T₂ (6 5 % ) ,T₃ (5 0 % ) ,T₄(2 5 % )。从生长特性、生理生态特性、生物量和有效成分含量等多个角度对甘草的耐阴性进行了系统的研究。结果与结论 :甘草为喜阳植物 ,其株高、地径、叶片数、芦头直径等生长指标 ,日平均光合速率 (P_n)和各项生物量指标均以CK最高 ,并随着遮荫程度的增加 ,呈不同程度的降低趋势。但甘草对遮荫也产生了一定的适应性反应 ,主要表现为增加单叶叶面积和叶绿素含量。遮荫对甘草绝对光能利用率 (E_u)和F_v/F_m 值没有产生显著影响 ,而对甘草酸含量影响显著 ,但遮荫与甘草酸含量之间未表现出明显的相关性。     

乌拉尔甘草中虎耳草甙的分离和鉴定

目的：研究乌拉尔甘草药用部位（根及根茎）的黄酮类化合物。方法：３０％乙醇提取,聚酰胺柱层析、硅胶柱层析分离,理化性质及光谱学鉴定。结果：从其药用部位中分得虎耳草甙。结论：为首次从甘草属植物中获得。     

乌拉尔甘草转鲨烯合成酶基因毛状根系研究

目的:为了研究甘草酸的合成调控途径及提高甘草酸合成水平.方法:将已克隆的乌拉尔甘草鲨烯合成酶基因(GuSQS1,GenBank登录号为:AM182329)通过发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes A4的介导,转化甘草下胚轴并诱导毛状根的形成.建立的毛状根系经0.8 mg·L~(-1)的除草剂(PPT)抗性筛选、PCR和Southern blotting检测分析后,得到的转基因毛状根系经HPLC检测甘草酸(GA)含量.结果与结论:转基因毛状根中甘草酸的最高含量约为野生型毛状根的3.6倍.     

甘草根cDNA文库构建与分析

目的：构建甘草cDNA文库，为甘草功能基因的研究以及筛选、克隆与甘草次生代谢产物合成途径相关基因奠定基础。方法：以LiCl沉淀法提取根组织总RNA，置换合成法合成双链cDNA，末端补平，连接EcoR I并磷酸化，以pBlueScriptⅡ为载体并电转化感受态细胞E.coli DH10 β，测定文库的克隆数、重组率，PCR 测定插入片断大小。同时，对文库进行随机测序并在GenBank中进行同源性检索和功能预测。结果：经鉴定文库的库容量为1.15×10⁷，重组率为98.2％，插入片段在0.5～4.8 kb，平均片段长度大于1.0 kb；经随机测序，获得126条EST，BLAST分析表明，大多数EST与豆科植物以及拟南芥、水稻等植物基因序列具有较高的同源性，在86条已知功能基因中，主要为细胞代谢、抗逆性、生长抑制及休眠相关的基因，其余40条EST为未知功能基因。结论：构建的甘草根cDNA文库库容量大、重组率高且插入的cDNA片段较长，能够满足甘草功能基因的研究。