下瘀血汤对进展期大鼠肝纤维化的抑制作用及其方证探讨

目的：探讨下瘀血汤对进展期四氯化碳（CCl4）大鼠肝纤维化的干预作用。方法；采用50％CCl4 2ml／kg体重皮下注射，每周2次;第9周开始随机分为模型对照组、下瘀血汤组及小柴胡汤组（灌胃给药）；用药的同时继续CCl4造模至12周末杀鼠取材。观测肝功能、肝组织病理学、肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量变化。结果：8周末模型大鼠肝功能显著异常，肝组织Hyp含量显著增加，肝纤维化明显；12周末模型对照组天冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-L-谷氨酰转肽酶（GGT）、总胆红素（TBil）、Hyp进一步增高，且ALP、GGT、TBil显著高于8周模型对照组（P〈0．05）。与12周模型对照组比较，下瘀血汤组丙氨酸氨基转移酶（ALT）、AST、ALP、GGT、TBil、Hyp显著降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论：下瘀血汤能显著抑制造模因素持续刺激条件下进展期肝纤维化的发展，疗效优于小柴胡汤，方证相关有其病理学基础。     

下瘀血汤组分配伍抗免疫性肝纤维化大鼠模型的实验研究

目的 观察下瘀血汤组分配伍抗免疫性肝纤维化大鼠模型的作用,为组分配伍的研究提供实验依据.方法 Wistar大鼠随机分为正常组、造模组,造模组大鼠腹腔注射猪血清复制肝纤维化模型,每次0.5 ml/只,每周2次,共12周.造模成功后造模组大鼠随机分为模型组、下瘀血汤组分配伍组,第8周末开始下瘀血汤组分配伍组大鼠造模同时灌胃给药,按10 ml·kg-1容积,每日0.648 g·kg-1,连续4周.正常组、模型组大鼠给予同体积生理盐水.12周末,处死动物,获取标本,测定血清肝功能、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量;reahime-PCR检测肝组织TGF-β1mRNA表达.结果 与模型组比较,下瘀血汤组分配伍组大鼠血清总蛋白(TP)、球蛋白(Glb)含量明显降低(P＜0.05),白蛋白(Alb)含量升高,A/G比值明显改善(P＜0.05);与模型组相比,下瘀血汤组分配伍组TGF-β1mRNA的表达明显降低(P＜0.05).结论 下瘀血汤组分配伍对大鼠免疫性肝纤维化模型具有保护肝细胞功能,其机制可能是通过抑制TGF-β1mRNA表达而发挥抗肝纤维化作用.     

两头尖提取物抗猪血清诱导大鼠肝纤维化的作用研究

目的:观察两头尖提取物对猪血清免疫诱导大鼠肝纤维化模型的干预作用。方法:SD大鼠68只随机分为5组,即空白组、模型组、两头尖提取物组(以下简称提取组)、两头尖原药组(以下简称原药组)、扶正化瘀组(以下简称扶正组)。采用猪血清腹腔注射法制备大鼠肝纤维化模型,0.5 mL/只,每周2次,连续注射15周。第15周模型成功后,开始灌胃给药,扶正组给予扶正化瘀胶囊(0.525 g.kg-1),原药组给予两头尖煎液(0.7 g.kg-1),提取物组给予两头尖提取物(0.071 g.kg-1),模型组与空白组灌服等量生理盐水,日1次,疗程8周。大鼠于第23周末处死取材,分别测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),白蛋白(Alb),透明质酸(HA),层黏蛋白(LN),Ⅲ型前胶原(PCⅢ),Ⅳ型胶原(CⅣ)含量与肝组织中羟脯氨酸(Hyp)含量。HE染色与Masson法检测肝组织病理;免疫组化法(SABC法)测定肝组织中Ⅰ型胶原(col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(col-Ⅲ)表达。结果:提取组、原药组血清ALT,AST,Alb,HA,PCⅢ,CIV水平,肝组织Hyp含量分别为(79.77±14.68),(75.20±11.21),(168.22±19.46),(173.72±18.52)U.L-1,(27.40±1.78),(26.95±2.14)g.L-1,(52.36±5.12),(43.29±3.56),(51.63±6.41),(52.18±4.79),(14.92±2.26),(13.93±1.88)μg.L-1,(1.04±0.12),(1.15±0.06)mg.g-1。与模型组相比,提取组、原药组可显著降低血清ALT,AST,HA,PCⅢ,CIV水平与肝组织Hyp含量(P<0.05),升高血清Alb水平(P<0.05)。与模型组相比,提取组、原药组炎症活动度、纤维化程度显著减轻。Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达面积和强度明显为弱,纤维间隔染色淡,无典型假小叶形成。显色指数结果显示,提取组、扶正组肝组织中col-Ⅰ,col-Ⅲ表达均明显减少。结论:采用猪血清免疫法可成功制备肝纤维化大鼠模型,两头尖原药及其提取物具有良好的抗肝纤维化作用,且提取物抗肝纤维化作用基本等同于两头尖原药,推测其作用机制为抑制ECM合成并促进ECM降解有关。     

下瘀血汤全药与组分处方抗猪血清肝纤维化的比较研究

目的:比较下瘀血汤全药与组分处方抗肝纤维化的作用差异.方法:Wistar大鼠随机分为正常组、造模组.造模组大鼠ip猪血清复制肝纤维化模型,每次0.5 mL/只,每周2次,共12周.造模成功后造模组大鼠随机分为模型组、下瘀血汤组、组分处方组,第8周开始下瘀血汤组、组分处方组大鼠造模同时ig给药,按10 mL·kg-1容积,下瘀血汤组每日2.34 g·kg -1,组分处方组每日0.648 g·kg-1.连续4周.正常组、模型组大鼠ig同体积生理盐水.12周末,处死动物,获取标本,检测血清肝功能、肝脏病理.结果:与模型组相比,下瘀血汤组、组分处方组大鼠肝质量明显减少(P＜0.05);肝体比、脾质量、脾体比均有下降趋势;总蛋白(TP),球蛋白( Glb)含量明显减少(P＜0.05),A/G比值倒置情况明显改善(P＜0.05);白蛋白(Alb)含量均有升高趋势.下瘀血汤组与组分处方组相比较,大鼠肝质量、肝体比、脾质量、脾体比均有好转趋势;Alb含量有升高趋势,TP,Glb含量有下降趋势,A/G比值倒置情况有改善趋势.与正常组相比,模型组、下瘀血汤组、组分处方组纤维化分级差异有显著性(P＜0.05);与模型组相比,下瘀血汤组、组分处方组纤维化分级差异有显著性(P＜0.05).提示二者均有一定改善肝功能、改善肝脏病理作用,且下瘀血汤组有优于组分处方组的趋势.结论:降低免疫反应和保护肝细胞是下瘀血汤全药和组分处方抗肝纤维化的主要作用机制,且下瘀血汤全药处方作用优于组分处方.     

下瘀血汤抗肝纤维化作用及其机制研究进展

肝纤维化是机体对多种慢性损伤的一种复杂修复应答,是诸多慢性肝病共有的病理变化,细胞外基质过度沉积和肝星状细胞活化被认为是其主要的发病机制,抗肝纤维化治疗已成为当前慢性肝脏疾病研究的焦点之一。下瘀血汤出自《金匮要略》,由大黄、桃仁、土鳖虫3味中药组成,现代中医临床用其治疗肝纤维化与肝硬化,取得了较好的临床疗效。本文拟对近年来下瘀血汤抗肝纤维化作用及其机制的研究进行总结,发现该经典名方通过抑制肝星状细胞活化和诱导活化的肝星状细胞凋亡、调控巨噬细胞功能、抑制肝窦毛细血管化及抗脂质过氧化等途径发挥抗肝纤维化作用,对该方在肝纤维化方面的新药研发及临床应用具有参考意义。     

消瘢方预防猪血清免疫性肝纤维化的实验研究

目的：探讨消瘢方对猪血清免疫性肝纤维化的预防作用。方法：60只SD雄性大鼠被随机分为4组：正常对照组、模型组、消瘢方高、低剂量预防组。除正常对照组外，所有大鼠均腹腔注射猪血清（1次／3d，共12周），实验结束后处死大鼠，收取血清及肝组织标本，测定谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）、血清Ⅲ型前胶原（PCⅢ）及透明质酸（HA），利用HE及Masson染色对肝组织纤维化程度进行评价，并观察肝组织胶原的分布及α平滑肌肌动蛋白（α—smooth muscleactin，α—SMA）的表达。结果：消瘢方能显著降低肝纤维化大鼠血清ALT、AST、PCⅢ及HA水平，减少肝组织胶原的分布及α—SMA的表达，能显著改善肝纤维化程度。结论：消瘢方能有效预防肝纤维化的发生、发展，其作用可能与保护肝细胞，抑制细胞外基质合成及HSC活化有关。     

下瘀血汤全药与组分处方对免疫性肝纤维化大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、PDGF-βRmRNA表达影响的比较研究

目的：比较下瘀血汤全药与组分处方对免疫性肝纤维化大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、PDGF-βRmRNA表达的作用差异,探讨下瘀血汤全药与组分处方抗肝纤维化的作用机制。方法：Wistar大鼠随机分为正常组、造模组,造模组大鼠腹腔注射猪血清复制肝纤维化模型,每次0.5mL/只,每周2次,共12周。造模成功后造模组大鼠随机分为模型组、下瘀血汤组、组分处方组,第8周开始下瘀血汤组、组分处方组大鼠造模同时口服给药,按10mL.kg-1容积,下瘀血汤组每日2.34g.kg-1,组分处方组每日0.648g.kg-1,连续4周。正常组、模型组大鼠给与同体积生理盐水。12周末,处死动物,获取标本,realtime-PCR检测肝组织α-SMA、TGF-β1、PDGF-βRmRNA表达。结果：与正常组相比,模型组α-SMA、TGF-β1、PDGF-βRmRNA的表达均显著升高（P〈0.05）;与模型组相比,下瘀血汤组、组分处方组α-SMA、TGF-β1、PDGF-βRmRNA的表达明显降低（P〈0.05）;与组分处方组比较,下瘀血汤组α-SMA、TGF-β1、PDGF-βRmRNA表达明显降低（P〈0.05）。相关性分析表明α-SMA、TGF-β1、PDGF-βRmRNA表达呈正相关。结论：下瘀血汤全药与组分处方可通过抑制α-SMA、TGF-β1、PDGF-βRmRNA表达而发挥抗肝纤维化作用,且下瘀血汤全药处方作用优于组分处方。     

清肝胶囊对猪血清所致大鼠慢性肝损伤肝纤维化的保护作用

清肝胶囊(Qing Gan Jiao Nang,QGJN)为一中药复方制剂。属临床经验方,由龙胆、茵陈、黄芩、栀子、大黄等中药组成。具有清热解毒,疏肝理气等作用。经初步临床验证对各型急慢性肝炎、肝纤维化等肝病具有较好疗效。本研究采用由猪血清所致大鼠慢性肝损伤、肝纤维化模型观察其疗效及其作用机制报道如下。1试验材料1.1受试药物QGJN,由本室研制提供。为中药复方制剂,规格为0.4 g/粒,批号20021205,室温存放。试验时用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)为溶剂配成所需浓度的混悬液,供试验用。1.2猪血清作为造成大鼠慢性肝损伤模型用。由郑州市肉联厂提…     

五莲益肝汤抗肝纤维化的实验研究

采用自制的中草药方剂──五莲益肝汤，以肝纤维化大鼠为动物模型，观察其抗纤维化作用，结果表明：经五莲益肝汤处理的大鼠，肝脏纤维化的程度较轻，假小叶形成不典型，血清ＰＣⅢ、ＨＡ、ＬＮ水平分别为３５．９±１４．２９，１２４．１±３９．６８，９７．７±１４．８（ｎｇ／ｍｌ），明显低于对照组，证实五莲益肝汤有阻断或改善肝纤维化的作用     

雄芍汤抗大鼠免疫性肝纤维化作用研究

目的研究雄芍汤抗大鼠免疫性肝纤维化的作用。方法 84只SD大鼠随机分为对照组、模型组、扶正化瘀胶囊阳性对照组、雄芍汤预防组和雄芍汤高、低剂量(生药15.8、7.9 g/kg)组(造模后给药)。采用ip猪血清法制备大鼠肝纤维化模型,观察雄芍汤对肝纤维化大鼠血清肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、白蛋白与球蛋白比值(A/G)和肝纤维化血清标志物透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、III型前胶原(PCIII)、IV型胶原(CIV)水平,以及肝组织病理学的影响。结果与模型组比较,雄芍汤各给药组血清ALT、AST、HA、LN、PCIII水平明显降低(P<0.05、0.01),血清ALB水平和A/G值明显升高(P<0.01);雄芍汤预防组血清CIV水平明显降低(P<0.05);所有给药组肝细胞变性和坏死程度轻微,肝组织纤维增生较少,雄芍汤高剂量组和预防组的作用尤为明显。结论雄芍汤能减轻免疫性肝纤维化大鼠的肝细胞损伤,改善肝功能,调节细胞外基质的代谢,阻止或逆转肝纤维化。     

猪血清肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响

目的:研究免疫性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响,探讨下瘀血汤抗肝纤维化的机制。方法:猪血清腹腔复制大鼠肝纤维化模型,造模8周后ig下瘀血汤的流浸膏,用药4周后和在造模过程中的1、24、、8周动态处死大鼠,获取标本,检测指标。结果:MMP-2/9的高活性和TIMP-1的高表达贯穿于本模型的始终。MMP-9/13蛋白表达在肝纤维化发生发展过程中有先抑制后升高,再次抑制而后升高的反复过程,并受TIMP-1/2表达影响;下瘀血汤可以提高MMP-9活性,促进MMP-9/13而抑制TIMP-1,2表达。结论:该模型有MMP-9/13和TIMP-1/2表达的失衡;下瘀血汤可通过调控MMp-9/13和TIMP-1/2的表达,降解过度沉积的细胞外基质而发挥抗肝纤维化的作用。     

黄芪总皂苷提取物对牛血清白蛋白致大鼠肝纤维化作用的影响

目的:观察黄芪总皂苷提取物对牛血清白蛋白(BSA)致大鼠实验性肝纤维化作用的影响.方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、秋水仙碱组(C组)、黄芪总皂苷提取物低剂量组(D组)、黄芪总皂苷提取物中剂量组(E组)、黄芪总皂苷提取物高剂量组(F组),每组10只.采用皮下多点注射牛血清白蛋白(BSA)免疫性诱导大鼠肝纤维化进行造模.造模后,C～F组分别按0.1 mg·kg-1·d-1,15,30,60 mg·kg-1 ·d-1剂量ig给药.55 d后,分别检测血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)及Ⅳ型胶原(Ⅳ-c)的含量,并对肝组织进行病理学观察.结果:黄芪总皂苷提取物可使BSA免疫性诱导的肝组织纤维增生、变性和坏死明显减轻.黄芪总皂苷提取物各组大鼠血清ALT,AST,HA,LN,PC-Ⅲ,Ⅳ-C及肝组织羟脯氨酸含量与模型组比较均显著降低(P＜0.05,P＜0.01).病理组织学观测结果显示,黄芪总皂苷各剂量组与模型组比较均有不同程度改善.结论:黄芪总皂苷对BSA所致实验性大鼠肝纤维化具有良好的治疗作用.     

当归补血汤对大鼠肝纤维化与肝脏脂质过氧化的影响

目的观察当归补血汤对大鼠肝纤维化的作用及其影响肝脏脂质过氧化的抗肝纤维化作用机制。方法Wistar雄性大鼠采用四氯化碳（CCl4）皮下注射及高脂低蛋白饮食复合因素诱导复制大鼠肝纤维化模型。模型大鼠随机分为模型组(14只),当归补血汤组(14只);另设正常组(10只)。自造模之日起,当归补血汤组以6 g/kg的大鼠体重剂量灌胃,每日1次,共6周。正常组与模型组灌胃以等量生理盐水。HE染色观察肝组织炎症与脂肪变性,天狼猩红染色观察肝组织胶原沉积。试剂盒法测定血清肝功能指标,包括丙氨酸转氨酶(ALT)与天冬氨酸转氨酶(AST)水平、总胆红素(TBil)与白蛋白(Alb)含量。生化法测定肝组织甘油三脂(TG)与丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,Jamall氏法测定肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,Western印迹法分析肝组织Ⅰ型胶原蛋白表达。结果与正常大鼠比较,模型大鼠血清ALT、AST水平及TBil含量明显升高,Alb含量明显降低;肝组织脂肪变性与胶原沉积明显,TG与MDA含量增加,SOD活性降低（均P<005）。当归补血汤组大鼠肝组织脂肪变性与胶原病理沉积显著改善;血清ALT、AST水平及TBil含量降低,血清Alb含量升高;肝组织Hyp、TG与MDA含量降低,SOD活性提高（均P<005）。结论当归补血汤具有良好的抗实验性大鼠肝纤维化作用,其主要作用机制与抗肝脏脂质过氧化损伤有关。     

基于以方测证的四氯化碳所致大鼠肝纤维化模型的证型探讨

目的 在既往发现一贯煎和下瘀血汤对四氯化碳（CCl₄）诱导的大鼠肝纤维化和肝硬化模型有显著效应,并从以方测证角度提出该模型可能以“肝阴虚损、瘀血阻络”表现为特征基础上,进一步进行论证。     

抗纤保肝汤治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床研究

目的：研究抗纤保肝汤的临床疗效及作用机理。方法：慢性乙型肝炎患者81例，随机分为治疗组（54例）和对照组（27例），分别给予抗纤保肝汤及一般保肝药物治疗6个月，观察两组患者治疗前后血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（C－Ⅳ）、层粘蛋白（LN）、转化生长因子β1（TGFβ1）、肿瘤坏死因子α（TNF－α）水平，肝功能变化及肝脏病理组织改变。结果：治疗组临床各症状缓解率明显优于对照组（P＜0．05），治疗后治疗组患者血清HA、PCⅢ、C－Ⅳ、LN、TGFβ1、TNF－α显著下降，肝功能明显改善，与对照组比较差异均有显著性（P＜0．01或P＜0．01），肝脏活组织病理检查证实肝纤维组织减少。结论：抗纤保肝汤具有显著抗肝纤维化作用。     

从肝纤维化大鼠肝组织蛋白质组变化探讨肝与他脏关系的蛋白质基础

目的:以CCl_4大鼠肝纤维化为模型,研究肝与他脏在生理、病理之间的相互联系,为中医理论对“以象测脏”认识脏象的方法论提供科学依据,探讨中医整体观念的物质基础。方法:将 Wistar大鼠,随机分正常组、模型组。模型大鼠皮下注谢40％CCl_4-橄榄油溶液每周2次,共2周; 停止剌激后再观察4周,正常组以生理盐水替代CCl_4皮下注射。分别于第4、8、12、16周末分批处死大鼠。留取肝组织分别做病理、羟脯氨酸、蛋白质的分步提取。蛋白质定量后进行二维电泳,凝胶银染,运用PDQUEST 2-DE图象分析软件对获得的蛋白质图谱进行分析,运用MALDI-TOF-MS 鉴定了30多个差异表达的蛋白质。结果:①CCl_4肝纤维化大鼠出现生命活动整体反应,如体重、活动度等下降;②肝纤维化过程中存在蛋白质合成和物质代谢碍障;③蛋白质组改变的质谱鉴定。结果显示:肝纤维化大鼠与正常大鼠肝组织差异表达的蛋白质与物质代谢相关的蛋白质有过氯酸可溶性蛋白质、磷脂酰肌醇转移酶、磷酸甘油酸激酶;与神经内分泌相关的蛋白质分子有儿茶酚-邻 -甲基转移酶、雌激素转磺酶亚型6、转录起始因子、非粘附性细胞蛋白质。结论:肝与他脏功能相关、病理相连是以蛋白质分子为物质基础,肝纤维化是一个涉及多个功能的整体病变过程,而引起机体整体功能改变的物质基础是蛋白质分子。     

从肝纤维化大鼠肝组织蛋白质组变化探讨肝与他脏关系的蛋白质基础

目的：以CCl4大鼠肝纤维化为模型，研究肝与他脏在生理、病理之间的相互联系，为中医理论对“以象测脏”认识脏象的方法论提供科学依据，探讨中医整体观念的物质基础。方法：将Wistar大鼠，随机分正常组、模型组。模型大鼠皮下注谢40％CCl4-橄榄油溶液每周2次，共2周；停止刺激后再观察4周，正常组以生理盐水替代CCl4皮下注射。分别于第4、8、12、16周末分批处死大鼠。留取肝组织分别做病理、羟脯氨酸、蛋白质的分步提取。蛋白质定量后进行二维电泳，凝胶银染，运用PDQUEST 2-DE图象分析软件对获得的蛋白质图谱进行分析，运用MALDI-TOF-MS鉴定了30多个差异表达的蛋白质。结果：①CCl4肝纤维化大鼠出现生命活动整体反应，如体重、活动度等下降；②肝纤维化过程中存在蛋白质合成和物质代谢碍障；③蛋白质组改变的质谱鉴定。结果显示：肝纤维化大鼠与正常大鼠肝组织差异表达的蛋白质与物质代谢相关的蛋白质有过氯酸可溶性蛋白质、磷脂酰肌醇转移酶、磷酸甘油酸激酶；与神经内分泌相关的蛋白质分子有儿茶酚-邻-甲基转移酶、雌激素转磺酶亚型6、转录起始因子、非粘附性细胞蛋白质。结论：肝与他脏功能相关、病理相连是以蛋白质分子为物质基础，肝纤维化是一个涉及多个功能的整体病变过程。而引起机体整体功能改变的物质基础是蛋白质分子。